正常与脑缺血大鼠脑皮质线粒体的比较蛋白质组学研究

目的 采用比较蛋白质组学方法观察正常与脑缺血大鼠脑皮质线粒体蛋白表达差异.方法 SD大鼠按随机数字表法分为正常组和缺血组,采用改进的栓线法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral antery occlusion,MCAO)模型,分离大鼠缺血及正常大脑皮层,纯化线粒体蛋白进行二维电泳和凝胶图像分析,对差异蛋白质用HPLC-Chip/MS纳流液质联用技术进行序列分析,经Spectrum Mill搜索NCBInr数据库后鉴定蛋白质.结果 正常与脑缺血大鼠脑皮层线粒体蛋白表达存在显著差异,这些差异蛋白经鉴定,主要为TUC-4b、肌酸激酶同工酶、HS1结合蛋白、线粒体核糖体蛋白S27、异柠檬酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酸脱氢酶、泛醌-细胞色素C还原酶、琥珀酸辅酶A还原酶、细胞色素氧化酶、F1-ATP beta链、热休克蛋白70、热休克蛋白60、脂酰辅酶A脱氧酶等差异线粒体蛋白.结论 脑缺血可以导致皮层线粒体相关蛋白表达改变,提示其作用可能与线粒体能量代谢、凋亡有关.     

辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与多克隆抗体制备

目的：制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶（NRDR）多克隆抗体.方法：应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔.斑点杂交测定抗血清效价,HiTrap Protein G柱纯化兔IgG,免疫印迹鉴定抗体特异性.结果：BL21-AI对NRDR进行了高效表达.回收的NRDR蛋白溶液的浓度为0.36mg/ml,回收率为48.5%.所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清,血清的效价是1：500,检测极限是8ng NRDR蛋白.纯化后的NRDR抗体具有较高的免疫活性和特异性.结论：建立了高效制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的方法.     

尿道下裂大鼠与正常大鼠睾丸蛋白质二维电泳图谱分析

目的:探讨二维电泳技术在尿道下裂大鼠与正常大鼠睾丸差异表达蛋白研究中的应用.方法:孕SD大鼠10只,随机分为2组,妊娠12～19天,实验组和对照组分别予邻苯二甲酸二丁酯(DBP)500mg/(kg·d)、大豆油5 ml/d灌胃,第2l天取出仔鼠睾丸,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析.结果:按照5倍的表达量计算,发现有差异表达的蛋白质点9个,5个点在尿道下裂大鼠睾丸中高表达,而在正常大鼠睾丸为低表达;相反,在正常大鼠睾丸中高表达的4个点,在尿道下裂者为低表达.结论:初步建立了正常和尿道下裂大鼠睾丸的二维电泳图谱,并发现两者之间存在一些差异表达蛋白,为进一步进行尿道下裂大鼠睾丸差异表达蛋白的分离及鉴定奠定了良好基础.     

高原鼠兔对绿脓杆菌敏感性的测定

本文采用Reed-Mtteach方法对高原鼠兔进行绿脓杆菌的敏感性LD50测定，同时与大鼠和小鼠比较。高原鼠兔对绿脓杆菌敏感性最高，LD50为1．74亿，小鼠LD50为3．05亿，大鼠对绿脓杆菌不敏感，接种4．76亿细菌无一只死亡。实验结果表明，高原鼠兔适合做绿脓杆菌的实验动物模型。     

BALB/c突变无毛小鼠特异性免疫功能的研究

选用9条随机引物，对Wistar,WKY,F344三个品系的近交系大鼠进行了随机扩增多态性DNA（RAPD）分析。结果显示同一品系大鼠不同个体之间的RAPD图谱都相同，表明所测的三个品系大鼠内部遗传背景均一，在不同品系大鼠之间的RAPD结果有差异。Wistar与WKY之间，Wistar与F344之间，WKY与F344之间的共享度分别为87.9%,98.5%和89.2%。RAPD方法可以作为一种检测近交系大鼠种群内的遗传变异及区分不同品系近交系鼠的遗传检测方法。     

hNav1.8通道蛋白在三叉神经痛痛支神经超微结构中的表达及意义

目的:利用蛋白组学技术,建立晕船易感及不晕大鼠脑干总蛋白的双向电泳图谱,分析并鉴定差异表达蛋白质.方法:据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减将大鼠分为晕船易感组和不晕组,应用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向电泳(two-dimensionaI electrophoresis,2-DE)技术,分离2组大鼠脑干总蛋白,分析并用肽指纹图谱(peptide massfingerprint,pMF)鉴定差异蛋白质.结果:鉴定5个晕船易感相关蛋白质,上调酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白、铁效应元件结合蛋白1,下调硫氧还蛋自过氧化物酶Ⅰ、磷酸甘油酸变位酶B、线粒体电压依赖型阴离子通道1.结论:成功建立分辨率和重复性高的晕船易感和不晕组大鼠2-DE图谱,研究表明差异蛋白质与神经递质合成、氧化损伤、能量代谢、细胞凋亡及铁代谢有关.     

低硒心肌损伤与硫氧还蛋白还原酶的关系研究

目的　研究长期低硒心肌硫氧还蛋白还原酶的活性和表达改变 ,探讨硫氧还蛋白还原酶与心肌损伤的关系。方法　用低硒饲料喂养Wistar大鼠 14周 ,通过透射电镜观察心肌的病理学改变 ,采用生物化学方法和Westernblot杂交检测心肌组织中硫氧还蛋白还原酶的活性及蛋白表达。结果　低硒导致大鼠心肌线粒体轻度损伤。低硒组大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶活性降低至对照组的 6 3.8% ,经t检验P <0 .0 1。蛋白杂交扫描结果显示 ,常硒组峰面积为 3438,低硒组峰面积为 2 0 6 7。结论　低硒降低硫氧还蛋白还原酶的活性和蛋白表达水平 ,使心肌抗氧化能力减低 ,引起心肌损伤。     

牛磺酸营养干预下缺氧大鼠视网膜中葡萄糖转运蛋白1的表达

目的 观察高原缺氧条件下大鼠视网膜中葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)的变化,探讨牛磺酸对视网膜缺氧适应的影响.方法 96只SD大鼠随机分为6组,对照组(C)、牛磺酸组(T)、4 500 m缺氧组(45H)、4 500 m缺氧 牛磺酸组(45HT)、5 500 m缺氧组(55H)和5 500 m缺氧 牛磺酸组(55HT),分别以基础饲料和添加了2.4%牛磺酸的饲料喂养1周,营养干预后C组、T组继续在平原饲养,45H组、45HT组和55H组、55HT组放入低压氧舱分别模拟4 500 m和5 500 m高度的高原缺氧条件.在处理0、1、2、3 d后取视网膜,提取总RNA和总蛋白,应用RT-PCR和Western blot方法检测视网膜GLUT-1 mRNA和蛋白表达.结果 缺氧第1天视网膜中GLUT-1 mRNA与蛋白的表达显著降低(P＜0.05).缺氧第2天 mRNA与蛋白的表达开始回升,第3天 mRNA的表达恢复正常水平,蛋白的表达高于对照,牛磺酸处理后表达量均比对应的缺氧组高.结论 高原缺氧条件下,牛磺酸能通过上调GLUT-1的表达促进视网膜缺氧适应性调节机制的建立.     

RASSF1A表达或缺失的两类早期肺腺癌组织差显蛋白的筛选与鉴定

目的:建立RASSFlA表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱.筛选并鉴定存在明显表达差异的蛋白质.方法:采用Western印迹技术,从RASSFlA转录缺失和RASSFIA转录正常的早期肺腺癌标本中筛选出RASSFlA表达和表达沉默的癌组织各5例.提取组织可溶性总蛋白,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白,建立两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱;PDQuest凝胶图像分析软件比较分析,筛选出差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱获得相应蛋白质点的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定差异表达的蛋白质.结果:建立了重复性较好的RASSFIA表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质双向电泳凝胶图谱;筛选出存在明显表达差异的蛋白质点17个,挖取其中的9个进行质谱分析,9个蛋白质点均得到了满意的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定出5种蛋白质,分别是:细胞色素b5(cytochrome b5),60S磷酸核楮体蛋白P2(60S acidic ribosomal protein P2),碳酸酐酶1(carbonic anhydrase-1),5-吡咯啉羧酸还原酶1(pyrroline-5-carboxylate reductase-1)和载脂蛋白A-I前体蛋白(apolipoprorein A-I precursor).结论:成功建立了RASSFlA表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱,从中鉴定出5种存在明显表达差异的蛋白质,为进一步研究RASSFIA作用的信号转导途径奠定了初步的基础.     

姜黄素干预非酒精性脂肪肝的差异蛋白质组学研究

目的:基于差异蛋白质组学研究姜黄素对高脂肪饮食诱导的非酒精性脂肪肝模型大鼠的作用机制。方法:雄性Wistar大鼠30只,随机分为正常组、模型组和姜黄素组;模型组和姜黄素组以高脂饮食12周诱导大鼠脂肪肝,同时姜黄素组予姜黄素灌胃,模型组予等体积助溶剂灌胃。至12周处死大鼠,收集血清及肝组织样本。分别检测血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)水平,肝组织γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)和三酰甘油(TG)含量。采用双向凝胶电泳技术分离肝组织总蛋白,运用串联飞行时间质谱鉴定差异蛋白质。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、TC水平和肝组织TG、γ-GT含量均明显升高,姜黄素干预后能明显降低各指标水平。双向凝胶电泳后各组蛋白质组图谱经PDQuest软件分析鉴定得到差异蛋白点30个,经串联飞行时间质谱鉴定共获得有意义蛋白质20个,主要是线粒体功能相关酶类蛋白和细胞骨架蛋白。结论:姜黄素能显著降低高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝血清学指标,其机制与调节线粒体功能和维持肝细胞正常结构有关。     

高分化胃腺癌组织表达缺失蛋白质分析

目的本研究应用蛋白质组学方法,分析胃癌(gastric carcinoma, GC)中表达缺失蛋白质分子.方法提取胃癌及配对正常胃黏膜组织总蛋白,采用双向电泳获得胃癌与配对正常胃黏膜组织蛋白质表达谱并进行分析,鉴定胃癌表达缺失的蛋白质分子.结果通过比较分析5对高分化胃腺癌及配对正常胃黏膜组织的蛋白表达谱,共发现差异表达蛋白点81个,其中7个蛋白点仅正常胃黏膜组织表达,而在胃癌组织中表达缺失,分别为:细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白12(P16)、细胞周期素依赖激酶抑制蛋白1(P21)、抗氧化蛋白2、二硫化蛋白异构酶A2、C-1-四氢叶酸合成酶、Rho-GTPase-激活蛋白4、胰岛素样生长因子结合蛋白2.结论胃癌组织与正常胃黏膜组织之间存在蛋白质表达差异.寻找胃癌组织与正常胃黏膜组织之间表达差异蛋白质,为探讨胃癌发病分子机制提供有用依据.     

卵巢癌细胞株COC1、顺铂耐药细胞株COC1/DDP的蛋白质组学比较

目的:应用蛋白质组学技术比较人卵巢癌细胞株COC1及耐药细胞株COC1/DDP之间的蛋白质差异,寻找与顺铂耐药有关的相关蛋白质。方法:提取细胞株COC1、耐药细胞株COC1/DDP的总蛋白,用双向凝胶电泳(2-DE)的方法获得两细胞株的双向电泳图,选择差异倍数在3倍以上、边界清晰的蛋白质点胶内酶切后,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱(NanoUPLC-ESI-MS/MS)分析鉴定。结果:双向凝胶电泳图谱上检测到1 878个蛋白质点,匹配率为93.6%,差异倍数3倍以上的蛋白质点67个,其中COC1/DDP细胞株高表达有23个,低表达的有44个。选取差异蛋白斑点6个用两种质谱方法初步鉴定了6种蛋白质:dUTP焦磷酸酶、aarF域含蛋白激酶4(ADCK4)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、角蛋白1、角蛋白9、角蛋白10。结论:双向凝胶电泳结合质谱技术可用于肿瘤蛋白质差异的分析,有助于研究肿瘤耐药的机制。     

肠易激综合征大鼠结肠组织的蛋白质组学研究

目的 探讨肠易激综合征(IBS)的发病机制及差异蛋白质之间的网络调控关系.方法 16只雌性清洁级sD大鼠按随机数字表法分入IBS组和空白对照组,每组8只.以樟脑丸特殊气味作为条件刺激、结直肠扩张结合经典的肢体束缚作为非条件刺激建立大鼠IBS模型.分别提取IBS组和空白对照组大鼠结肠黏膜总蛋白,应用差异荧光双向凝胶电泳技术进行差异蛋白质筛选,对筛选出的差异蛋白质应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术进行鉴定,应用Gene Ontology软件对差异蛋白质进行功能分类.以蛋白质印迹法对个别有价值的差异蛋白质进行验证.结果 在1396个蛋白点中筛选出19个差异蛋白点,鉴定出13个特异蛋白质,其中8个蛋白质在IBS大鼠结肠黏膜组织中表达上调,5个下调.8个表达上调的蛋白质分别是角蛋白8、蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3)、过氧化物氧化还原酶6、半胱氨酸组织蛋白酶S、异质性胞核核糖核蛋白F、真核细胞翻译启始因子5A、羰基还原酶1和乙二醛还原酶I,5个表达下调的蛋白分别是α-烯醇化酶、Transgelin蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制因子B5、心脏α-肌动蛋白1和40S核糖体蛋白SA.蛋白质印迹检测结果证实,PDIA3在IBS大鼠结肠黏膜组织中高表达,与蛋白质组学研究结果一致.结论 IBS大鼠结肠黏膜组织中与肠道免疫、炎症、神经相关的某些蛋白分子的表达发生改变,提示IBS的发生与肠道免疫、炎症、神经内分泌网络调控变化有关.     

荧光差异双向凝胶电泳筛选肾透明细胞癌及癌旁组织中的差异表达蛋白

目的 寻找肾癌相关肿瘤标记物,用于肾癌临床诊断、药物治疗靶点的选择及预后监测.方法 采用荧光差异双向凝胶电泳技术筛选15例肾透明细胞癌及癌旁正常肾组织差异表达蛋白质点.统计学采用t检验进行定量比较,以两组蛋白含量比值在1.5倍及以上,P<0.05,被认为是差异表达蛋白质点.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或串联质谱技术进行差异表达蛋白质点鉴定.结果 共筛选分离出27个差异表达蛋白质点,经质谱技术共成功鉴定了26种蛋白质,11种蛋白质在肾癌组织中上调,15种蛋白质下调.其功能覆盖细胞活动的多个方面,其中线粒体短/支链特异性酰基辅酶A脱氢酶、醛糖1-表异构酶、PRDX4、CAPG、β-防御素107、微纤丝相关糖蛋白4等6种蛋白是我们首次采用蛋白质组学技术成功筛选的肾癌差异表达蛋白质,并发现了1个预测蛋白(UCRIL).结论 荧光差异双向凝胶电泳在肾癌组织中获得较好的筛选效果,新筛选的差异表达蛋白有望成为肾癌分子生物学标记物,为后续研究提供了实验依据.     

高转移和低转移人大细胞肺癌细胞株的比较蛋白组学研究

目的 探讨比较人高转移大细胞肺癌细胞株(L9981)和人低转移大细胞肺癌细胞株(NL9980))间蛋白质表达的差异.方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离L9981细胞株和NL9980细胞株的总蛋白,用图像分析软件比较分析细胞间的差异表达蛋白质.对13个差异表达的蛋白质点通过胶内酶解,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALD-TOF-MS/MS)和蛋白质数据库检索进行鉴定.结果 经Image Master软件分析后发现有8个蛋白质点仅在L9981中检测到有表达,8个蛋白质点仅在NL9980中检测到有表达,发现19个蛋白质点在两种肺癌细胞株中均存在,其中9个蛋白质点在L9981中表达量显著高于NL9980,10个蛋白质点在NL9980中表达量显著高于L9981 (P<0.05).通过对差异明显的蛋白质点进行质谱鉴定和蛋白质数据库查询,发现线粒体热休克蛋白和谷胱甘肽合成酶在L9981中的表达被上调,P47蛋白、免疫球蛋白重链可变区、烯醇化酶1和真核翻译起始因子3 在L9981中的表达被下调, 丙酮酸激酶仅在L9981中有表达,WD-40重复蛋白仅在NL9980中有表达.结论 人高、低转移大细胞肺癌细胞株蛋白质组的表达存在明显差异, 鉴定的差异蛋白质多与肿瘤的侵袭转移相关,这些差异蛋白质有可能为进一步发现与肺癌转移相关的分子标志物和阐明肺癌转移的分子机制提供线索.     

人参皂甙Rh2对人脑恶性胶质瘤SHG-44细胞抗肿瘤作用的蛋白质组学分析

目的：利用蛋白质组学研究技术分离、鉴定人脑恶性胶质瘤SHG-44细胞经人参皂甙Rh2（G-Rh2）作用后差异表达蛋白,探讨G-Rh2抗胶质瘤作用机制。方法：提取32 μmol?L-1 G-Rh2处理72 h后的SHG-44细胞及空白对照组细胞总蛋白;通过双向凝胶电泳分离蛋白质
,选取2D图谱中差异表达≥1.5倍且P<0.05的蛋白质斑点,使用基质辅助激光解析离子飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）进行肽指纹图谱（PMF）鉴定。结果：与空白对照组比较,SHG
-44细胞经G-Rh2作用后,双向电泳发现了20个差异蛋白质点,其中16个蛋白质点表达下调,4蛋白质点上调。质谱分析了前5个差异显著的下调蛋白质点,分别为丝切蛋白1（cofilin 1）、磷酸甘油酸激酶（phosphoglycerate kinase,PGK）、过氧化物氧化还原酶1（peroxiredoxin 1,Prx 1）、热休克蛋白（heat shock proteins,HSP）和增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen,PCNA）。结论：差异表达的蛋白质可能参与了G-Rh2对人脑恶性胶质瘤的抗肿瘤作用。     

大鼠栓塞肺组织的比较蛋白质组学研究

目的研究大鼠血栓栓塞肺组织和正常肺组织的蛋白差异表达。方法采用血栓颈静脉注入法制备大鼠急性肺栓塞模型，采用双向电泳技术（2-DE）找出差异蛋白，用MALDI-TOF技术和生物信息学技术鉴定差异蛋白，并对部分差异表达蛋白采用Westernblot技术作进一步验证。结果肺组织蛋白的2-DE胶银染可分离出2800多个点，考染可达到2400个点以上。经图像分析得到的46个差异表达蛋白中有32个蛋白得到鉴定。对部分差异蛋白采用Westernblot方法在蛋白水平的验证结果与2-DE结果基本相符。结论采用比较蛋白质组学的方法可以发现大量栓塞肺组织的差异表达蛋白，这些差异表达蛋白将为研究肺栓塞发病的分子机制和病理生理学研究提供重要的线索和依据。     

双向电泳分析失神经支配大鼠腓肠肌蛋白的表达变化

目的:建立骨骼肌蛋白分离的双向电泳(2-DE)技术体系,寻找失神经支配骨骼肌与正常骨骼肌蛋白的表达差异。方法:建立失神经腓肠肌模型,提取腓肠肌总蛋白,进行第一向等电聚焦(IEF)和第二向十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术分离总蛋白,使用PDQuest软件对凝胶图像进行分析,并测量了凝胶蛋白斑点在IEF和SDS-PAGE方向上的位置偏差。结果:失神经组和正常组腓肠肌组织3块凝胶的平均蛋白质点数分别为560±16和545±13,平均匹配点数分别为471±19和447±17,匹配率达84.1%和82.1%。对比分析了两种腓肠肌组织的双向电泳图谱发现,平均匹配点数为445±8;发现在失神经支配后有80个点发生了明显而稳定的质和量(大于10倍或小于0.1倍)的改变。不同凝胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为(1.203±0.763)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.062±0.529)mm。结论:失神经组和正常组腓肠肌的双向电泳图谱存在明显差异,失神经后表达下调的蛋白可能与维持肌肉正常功能相关,而表达上调的蛋白则可能与肌萎缩的发生过程相关。     

Effects of formaldehyde inhalation on lung of rats

To analyze protein changes in the lung of Wistar rats exposed to gaseous formaldehyde (FA) at 32-37 mg/m^3 for 4 h/day for 15 days using proteomics technique. Methods Lung samples were solubilized and separated by two-dimensional electrophoresis (2-DE), and gel patterns were scanned and analyzed for detection of differently expressed protein spots. These protein spots were identified by MALDI-TOF-MS and NCBInr protein database searching. Results Four proteins were altered significantly in 32-37 mg/m3 FA group, with 3 proteins up-regulated, 1 protein down-regulated. The 4 proteins were identified as aldose reductase, LIM protein, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, and chloride intracellular channel 3. Conclusion The four proteins are related to cell proliferation induced by FA and defense reaction of anti-oxidation. Proteomics is a powerful tool in research of environmental health, and has prospects in search for protein markers for disease diagnosis and monitoring.     

西维来司钠对脑缺血/再灌注大鼠全脑蛋白质组的影响

目的:研究西维来司钠(Sivelestat sodium hydrate,ONO-5046)对脑缺血/再灌注(Cerebral ischemia/reperfusion,CI/R)大鼠全脑蛋白质表达的影响.方法:大鼠随机分为假手术组、CUR组和CI/R+ONO-5046组(6 mg/kg).采用四血管阻断法制备CUR模型,缺血15 min,再灌注24 h.提取脑组织总蛋白进行双向电泳,对差异蛋白点用HPLC-Chip-MS/MS纳流液质联用技术进行序列分析,经Spectrum Mill搜索NCBInr数据库后鉴定蛋白质.结果:成功获得了分辨率和重复性好的大鼠脑组织蛋白2-DE图谱,经质谱鉴定最终获得了巨噬细胞炎性蛋白1-beta、白细胞弹性蛋白酶A、β2-巨球蛋白、谷胱甘肽S-转移酶omega-1、谷氨酸脱氢酶-1、细胞色素C还原酶铁硫亚单位、硫氧还蛋白过氧化物酶1等19个差异蛋白点相关信息.结论:大鼠脑缺血后脑组织蛋白质表达存在明显差异,西维来司钠可通过调节有关蛋白质的表达,参与大鼠脑缺血神经元保护作用.