姜黄素对大鼠糖尿病神经病理性痛的效应

目的 评价姜黄素对大鼠糖尿病神经病理性痛(DNP)的效应.方法 雄性SD大鼠48只,随机分为6组(n=8):正常对照组(C组)、DNP组(D组)、DNP+二甲基亚砜组(DD组)和DNP+姜黄素50、100、200 mg/kg组(DC50组、DC100组和DC200组).D组、DD组、DC50组、DC100组和DC200组采用腹腔注射链唑霉素75 mg/kg的方法 制备糖尿病神经病理性痛模型,注射链唑霉素后14 d开始腹腔注射二甲基亚砜(姜黄素的溶媒)或相应剂量姜黄素,1次/d,连续2周.分别造模前2 d、注射链唑霉素后14 d、姜黄素给药1、3、7、14 d时测定机械缩足痛阚(MWT)和热缩足潜伏期(TWL),最后一次测定痛阈后处死大鼠,测定脊髓背角和背根神经节细胞核磷酸化JNK(p-JNK)和NF-кB p65的表达水平.结果 与C组相比,D组各时点MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和背根神经节细胞核p-JNK和NF-кB p65表达上调(P<0.05).与D组相比,DC50组、DC100组和DC200组姜黄素给药期间MWT升高,TWL延长,且与剂量有关,脊髓背角和背根神经节细胞核p-JNK和NF-кB p65表达下调(P<0.05).结论 姜黄素可减轻大鼠糖尿病神经病理性痛,其机制可能与抑制脊髓背角和背根神经节JNK和NF-кB的激活有关.     

鞘内注射加巴喷丁对切口痛大鼠吗啡镇痛效应的影响

目的 探讨鞘内注射加巴喷丁对切口痛大鼠吗啡镇痛效应的影响.方法 雄性SD大鼠,体重250g～280 g,取鞘内置管成功的大鼠48只,随机分为6组(n=8):假手术组(S组)鞘内注射人工脑脊液(ACSF)10μl后,吸人1.4%异氟烷5 min,不制备模型;切口痛组(IP组)、加巴喷丁50μg组(G组)、吗啡2.5μg组(M1组)和吗啡5μg组(M2组)于制备切口痛模型前30 min分别鞘内注射ACSF10μl、加巴喷丁50μg、吗啡2.5μg和5μg;加巴喷丁50μg+吗啡2.5μg组(G+M1组)于制备模型前30 min鞘内注射加巴喷丁50μg和吗啡2.5μg.模型制备后2 h时测定术侧机械缩爪反射阈值(MWT)和热刺激缩爪反应潜伏期(TWL).结果 与S组比较,IP组、G组、M1组MWT降低,TWL缩短(P＜0.05),G+M1组和M2组MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05);与IP组比较,G+M1组和M2组大鼠MWT升高,TWL延长(P＜0.05),G组和M1组MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05);与G+M1组比较,G组和M1组MWT降低,TWL缩短(P＜0.05).结论 鞘内注射加巴喷丁可增强吗啡对切口痛大鼠的镇痛效应.     

加巴喷丁对奥沙利铂诱发神经病理性痛小鼠背根神经节神经元高电压激活钙通道的影响

目的 评价加巴喷丁对奥沙利铂诱发神经病理性痛小鼠背根神经节(DRG)神经元高电压激活钙通道的影响.方法 清洁级雄性昆明小鼠,体重20～25 g,6周龄.采用腹腔注射奥沙利铂3mg/kg的方法制备神经病理性痛模型.取模型制备成功的小鼠41只,采用随机数字表法,将小鼠随机分为神经病理性痛组(NP组,n=20)和加巴喷丁组(G组,n=21),另取10只正常小鼠为正常对照组(C组).G组于奥沙利铂给药后第3天腹腔注射加巴喷丁100mg/kg,NP组及C组给予等容量的生理盐水,每天1次,连续3 d.于加巴喷丁给药前即刻、给药后1～3 d(T1-4)时测定小鼠双后肢机械缩足阈值(MWT).于最后一次MWT测定后,取两侧L4,5节段DRG,分离DRG神经元,采用全细胞膜片钳记录峰电流密度,拟合DRG神经元高电压激活钙通道激活曲线和稳态失活曲线,计算半数激活电位(Va1/2)和半数失活电位(Vi1/2).结果 与C组比较,NP组T1～4时、G组T1时MWT降低,NP组峰电流密度和Vi1/2升高(P＜0.05),Va1/2差异无统计学意义,G组峰电流密度、Vi1/2和Va1/2差异无统计学意义(P＞0.05);与NP组比较,G组T2-4时MWT升高,峰电流密度和Vi1/2降低(P＜0.05).结论 加巴喷丁减轻小鼠奥沙利铂诱发神经病理性痛的机制可能与抑制DRG神经元高电压激活钙通道电流,促进通道失活有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of gabapentin on high-voltage-activated calcium currents in dorsal root ganglion (DRG) neurons in mice with oxaliplatin-induced neuropathic pain (NP). Methods Pathogen-free male Kunming mice aged 6 weeks weighing 20-25 g were used in this study. NP was induced by injection of intraperitoneal oxaliplatin 3 mg/kg. Successful induction of NP was defined as the mechanical paw withdrawal threshold (MWT) measured at 3 d after oxaliplatin administration decreased to 40% of the baseline ( before administration of oxaliplatin). Forty-one mice in which NP was successfully induced were randomly divided into 2 groups: NP group ( n = 20) and gabapentin group (group G, n = 21 ). Another 10 normal mice served as control group (group C). At 3 days after oxaliplatin administration, gabapentin 100 mg/kg was injected intraperitoneally once a day for 3 consecutive days in group G, while C and NP groups received the equal volume of normal saline.MWT to von Fray filament stimulation was measured immediately before and 1-3 days after gabapentin administration (T1-4). After the last measurement of MWT, bilateral L4.5 DRG was collected and neurons were isolated. The high-voltage-activated calcium currents were recorded using whole-cell patch-clamp technique. The peak current density and the voltage where half of the current was activated ( Va1/2 ) or inactivated ( Vi 1/2 ) were calculated. Results Compared with group C, MWT at T1-4 was decreased, the peak current density and Vi1/2 were significantly increased in group NP, and MWT at T1 was decreased in group G ( P ＜ 0.05). There was no significant difference in the peak current density, Vi1/2 and Va1/2 between C and G groups ( P ＞ 0.05). MWT at T2-4 was significantly increased, while the peak current density and Vi1/2 were significantly decreased in group G compared with group NP (P ＜ 0.05). Conclusion Gabapentin can reduce oxaliplatin-induced NP in mice through inhibiting high-voltage-activated calcium currents and promoting the inactivation of the channels in DRG neurons.     

加巴喷丁对神经病理性痛大鼠脊髓胶质细胞活化的影响

目的 评价加巴喷丁对神经病理性痛大鼠脊髓胶质细胞活化的影响.方法 雄性SD大鼠24只,体重180～220 g,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)、坐骨神经慢性压迫性损伤组(CCI组)和加巴喷丁组(G组).CCI组和G组采用坐骨神经慢性压迫性损伤法建立大鼠神经病理性痛模型;S组只暴露坐骨神经,不结扎.G组于术后8 d时开始胃内灌注加巴喷丁50mg/kg(溶于5 ml生理盐水中),2次/d,持续5 d;CCI组胃内灌注0.9%生理盐水5 ml,2次/d,持续5 d;S组不给予任何药物.分别于术前1 d、术后7、15 d时测定机械痛阈,并于术后15 d时断头处死大鼠,取L4.5脊髓组织,采用免疫组化法检测星形胶质细胞和小胶质细胞的活化水平.结果 与S组比较,CCI组术后7、15 d时机械痛阈降低,脊髓星型胶质细胞和小胶质细胞活化水平升高,G组术后7 d时机械痛阈降低(P＜0.05);与CCI组比较,G组术后15 d时机械痛阈升高,脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞活化水平降低(P＜0.05).结论 加巴喷丁可抑制大鼠脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活化,从而减轻神经病理性痛.     

加巴喷丁对神经病理性痛大鼠背根神经节神经元高电压激活钙电流的影响

目的 评价加巴喷丁对神经病理性痛大鼠背根神经节神经元高电压激活钙电流的影响.方法 雄性SD大鼠,周龄4～6周,采用结扎L_5脊神经的方法建立神经病理性痛模型.于术后14 d时采用酶消化法急性分离损伤侧L_5背根神经节神经元,采用全细胞膜片钳技术记录神经元高电压激活钙电流,记录加巴喷丁0.1、1、10、100、300 μmol/L(G_(1～5)组)作用下的钙电流,计算电流抑制率;并绘制100 μmol/L加巴喷丁作用下钙电流-电压曲线、钙通道激活曲线和稳态失活曲线.结果 与给药前比较,G_(1～5)组给药后钙电流均降低(P<0.05).给予100 μmol/L加巴喷丁后钙电流-电压曲线左移.与给药前比较,给予100 μmol/L加巴喷丁后钙通道激活曲线的半数激活电压和稳态失活曲线的半数失活电压降低(P<0.05),激活曲线向超级化方向移动3.47 mV,稳态失活曲线向超极化方向移动9.32 mV.结论 加巴喷丁可抑制神经病理性痛大鼠背根神经节神经元高电压激活钙电流,可能与其抑制钙通道的失活特性有关.     

人神经生长因子β基因转染对糖尿病大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨皮下转染重组腺病毒介导的人神经生长因子β(Ad-hNGFβ)基因对糖尿病大鼠神经病理性痛的影响及其可能机制.方法 采用腹腔注射佐脲霉菌素(STZ)75 mg/kg的方法制备大鼠糖尿病模型.健康雄性SD大鼠,体重180～220 g,随机取10只大鼠作为对照组(C组)不制备糖尿病模型;取模型制备成功的大鼠75只随机分为3组(n=25):糖尿病神经病理性痛组(DNP组)、Ad-hNGFβ基因治疗组(NGF组)和Ad-LacZ基因治疗组(LacZ组).NGF组和LacZ组分别于STZ注射后21d且痛阈测定结束后双侧腹股沟皮下脂肪接种1.12×1011 PFU Ad-hNGFβ 10 μl和1.12 x 1011 PFUAd-LacZ 10 μl,C组和DNP组不作任何处理.于STZ注射前(基础状态)、注射后21、35、49 d时测定机械痛阈和热痛阈.于注射后49 d且痛阈测定结束后测定血清hNGFβ浓度和背根神经节降钙素基因相关肽(CGRP)的表达.结果 与基础值和C组比较,DNP组、NGF组和LacZ组STZ注射后机械痛阈和热痛阚均降低.DNP组和LacZ组血清hNGFβ浓度和背根神经节CGRP表达下降,NGF组血清hNGFβ浓度和背根神经节CGRP表达升高(P＜0.05);与DPN组比较,NGF组STZ注射后49 d时热痛阈升高,血清hNGFβ浓度和背根神经节CGRP表达升高(P＜0.01),LacZ组各项指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Ad-hNGFβ基因转染可在一定程度上减轻糖尿病大鼠神经病理性痛,其机制与上调背根神经节CGRP表达有关.     

丹参酮ⅡA对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响

目的研究丹参酮IIA对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制。方法18只成年雄性SD大鼠,随机分为3组：正常对照组(C组)、糖尿病组(B组)、糖尿病+IIA组(A组)(n=6)。以佐脲霉菌素(STZ)75mg·kg~(-1)一次性经腹腔注射建立糖尿病模型,分别于注射STZ前、注射后7、14、27d测定机械性痛阈。于A组机械性痛阈小于8g开始腹腔注射丹参酮IIA 25 mg·kg~(-1),每日1次,持续2周。于注射STZ后27d处死大鼠,取I_(?)脊髓,采用尼氏体染色法光镜下观察脊髓组织的形态学变化,应用免疫组化法测脊髓神经元降钙素基因相关肽(CGRP)表达。结果与C组比较,A组、B组机械性痛阈降低(P＜0．05)；与B组比较．A组在注射STZ后27 d机械性痛阈升高(P＜0．05)。B组脊髓背角萎缩．冲经元变性坏死,数量减少．背角神经元内尼氏体减少,溶解消失；与B组比较,A组脊髓背角萎缩减轻,神经元数量增多．可见少量尼氏体。C组脊髓背角神经元有较多CGRP表达；B组背角神经元有少量或者无CGRP表达；与B组比较,A组脊髓背角神经元有大量CGRP表达。结论丹参酮IIA减轻糖尿病大鼠神经病理性疼痛,对脊髓背角神经元有保护作用,其机制可能与丹参酮IIA上调脊髓背角神经元CGRP的表达有关。     

环孢霉素A对大鼠神经病理性痛的效应

目的 评价环孢霉素A对大鼠神经病理性痛的效应.方法 清洁级雄性SD大鼠40只,8周龄,体重250～300 g.随机分为4组(n=10):C1组、C2组、CsA1组和CsA2组.采用坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)的方法制备大鼠神经病理性痛模型.C1组和CsA1组测定基础热痛阈和机械痛阈后,分别腹腔注射生理盐水2 ml和环孢霉素A 6mg/kg,1次/d,连续给药18 d,于给药第6天时制备神经病理性痛模型,于CCI前1 d、CCI后第1、3、4、6、8、10和13天(T1～8)时测定热痛阈和机械痛阈;C2组和CsA2组于测定基础热痛阈和机械痛阈后制备神经病理性痛模型,于CCI后第4～24天分别腹腔注射生理盐水2 ml和环孢霉素A6 mg/kg,1次/d,于CCI后第3、4、6、8、10、13、17和24天(T9～16)测定热痛阈和机械痛阈.结果 与C1组比较,CsA1组T2-8时热痛阈升高(P<0.05),机械痛阈差异无统计学意义(P>0.05);与C2组比较,CsA2组T13～16时热痛阈升高,T16时机械痛阈升高(P<0.05).结论 环孢霉素A对大鼠神经病理性痛有一定程度的防治作用.     

川芎嗪对大鼠神经病理性痛的影响

目的 评价川芎嗪对大鼠神经病理性痛的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠54只,体重180～ 220 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=18):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和川芎嗪组(T组).S组仅分离坐骨神经但不结扎,NP组和T组采用坐骨神经慢性压迫损伤法建立神经病理性痛模型.T组于术毕开始腹腔注射川芎嗪100 mg/kg,1次/d,连续14 d;S组和NP组以等容量生理盐水替代.于术前1d、术后3、7、14 d时测定机械痛阈和热痛阈,并于术后3、7和14d时测定痛阈后各取6只大鼠处死,取L(4).5脊髓组织,用免疫组织化学法检测脊髓背角Bcl-2及caspase-3的表达,TUNEL法检测脊髓背角凋亡细胞,计算细胞凋亡率.结果 S组比较,NP组和T组热痛阈及机械痛阈降低,脊髓背角Bcl-2和caspase-3表达上调,细胞凋亡率升高(P＜0.05).与NP组比较,T组热痛阈及机械痛阈升高,脊髓背角Bcl-2表达上调,caspase-3表达下调,细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论 川芎嗪可减轻大鼠神经病理性痛,其机制与抑制脊髓背角细胞凋亡有关.     

姜黄素对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨姜黄素对大鼠神经病理性痛的影响.方法 健康雄性SD大鼠108只,体重220～250 g,随机分为6组(n=18):对照组(C组)、假手术组(S组)、慢性压迫性损伤组(CCI组)和不同剂量姜黄素组(Cur1组、Cur2组和Cur3组).C组腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续14 d;S组只分离坐骨神经,然后腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续至术后14 d;CCI组术后腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续至术后14 d;Cur1组、Cur2组或Cur3组术后分别腹腔注射姜黄素30、100、300 mg·kg-1·d-1,持续至术后14 d,姜黄素以二甲基亚砜溶解.于术前2 d和术后1、3、5、7、10、14d时测定热缩足反应潜伏期(TWL)和机械缩足反应阚值(MWT).各组于术后3、7、14 d时各处死6只大鼠,免疫组化法测定脊髓背角和背根神经节中磷酸化c-jun氨基末端蛋白激酶(p-JNK)和c-jun的表达.结果 与CCI组比较,Cur1组和Cur2组术后MWT升高,背根神经节和脊髓背角p-JNK和c-jun表达下调,Cur2组术后TWL升高(P<0.05);与Cur1组比较,Cur2组术后TWL升高,背根神经节和脊髓背角p-JNK和c-jun表达均下调(P<0.05),MWT差异无统计学意义(P0.05).结论 姜黄素30、100mg/kg可减轻大鼠神经病理性痛,100 mg/kg效果更明显,其机制可能与抑制脊髓背角和背根神经节p-JNK和c-jun表达上调有关.     

背根神经节Nav1.7在大鼠糖尿病神经病理性痛中的作用

目的 评价背根神经节(DRG) Nav1.7在大鼠糖尿病神经病理性痛中的作用.方法 雌性Wistar大鼠32只,月龄3个月,体重180～220 g.采用腹腔注射链脲菌素65 mg/kg的方法制备糖尿病神经病理性痛模型.模型制备成功后第10天鞘内置管.采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n＝8),正常对照组(C组):不做任何处理;假手术组(S组):仅鞘内置管;糖尿病神经病理性痛(DNP组):制备糖尿病神经病理性痛模型,并鞘内置管;Nav1.7阻断剂组(E组):制备糖尿病神经病理性痛模型,鞘内置管后第4天鞘内注射Nav1.7阻断剂ProTx-Ⅱ10 μg/kg,DNP组和S组注射等容量生理盐水.于鞘内注射后1h测定机械缩足阈值(MWT)和神经传导速度(NCV),随后处死大鼠,取L4-6 DRG,采用免疫组化法和Western blot法测定DRG Nav1.7蛋白的表达水平,采用RT-PCR法测定Nav1.7mRNA的表达水平.结果 与C组比较,DNP组和E组MWT和NCV明显下降,DRGNav1.7 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05),S组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与DNP组比较,E组MWT升高(P<0.05),NCV、DRG Nav1.7 mRNA及其蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DRG Nav1.7参与了大鼠糖尿病神经病理性痛的维持.     

人神经生长因子β基因转染对糖尿病神经病理性痛大鼠背根神经节P物质表达的影响

目的 评价皮下转染重组腺病毒介导的人神经生长因子β(Ad-hNGFβ)基因对糖尿病神经病理性痛大鼠背根神经节P物质表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠,体重180 ～ 220 g,采用腹腔注射链脲霉素(STZ) 75 mg/kg的方法制备大鼠糖尿病模型.取10只大鼠作为对照组(C组),不制备糖尿病模型;取75只糖尿病模型制备成功的大鼠,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=25):糖尿病神经病理性痛组(DNP组)、Ad-hNGFβ基因治疗组(Ad-NGF组)和LacZ重组复制缺陷性腺病毒基因治疗组(Ad-LacZ组).Ad-NGF组和Ad-LacZ组分别于STZ注射后21 d且痛阈测定结束后双侧腹股沟皮下脂肪接种1.12× 1010 PFU Ad-hNGFβ 10μl和1.12× 1010 PFU Ad-LacZ 10μl.分别于STZ注射前、注射后21、35和49d时测定机械痛阈和热痛阈.于注射后49d时痛阈测定结束后采用免疫组化法测定背根神经节P物质的表达.结果 与C组比较,DNP组、Ad-NGF组和Ad-LacZ组注射后各时点机械痛阈和热痛阈降低,DNP组和Ad-LacZ组背根神经节P物质表达下调(P＜0.05);与DNP组比较,Ad-NGF组注射后49d时热痛阈升高,背根神经节P物质表达上调(P＜0.01),Ad-LacZ组各时点机械痛阈、热痛阈和背根神经节P物质表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Ad-hNGF基因转染可能通过上调背根神经节P物质的表达在一定程度上减轻糖尿病大鼠神经病理性痛.     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对大鼠神经病理性痛的影响

目的 评价丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对大鼠神经病理性痛的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠108只,体重180 ～ 220 g,6～8周龄,采用随机数字表法,将其分为3组(n=36):假手术组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)和丹参酮ⅡA磺酸钠注射液组(SSI组).CCI组和SSI组采用坐骨神经慢性压迫损伤法制备大鼠神经病理性痛模型.SSI组于术毕即刻开始至处死前1d,腹腔注射丹参酮ⅡA磺酸钠注射液25 mg/kg,1次/d,S组和CCI组腹腔注射等容量(5 ml/kg)生理盐水.于术前1d、术后3、7、14 d时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于术后3、7、14 d时测定痛阈后处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫组化法测定脊髓背角Bcl-2和caspase-3的表达;采用分光光度法测定脊髓MDA含量及SOD活性.结果 与S组比较,CCI组和SSI组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角Bcl-2和caspase-3表达上调,脊髓MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05);与CCI组比较,SSI组MWT升高,TWL延长,脊髓背角Bcl-2表达上调,caspase-3表达下调,脊髓MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA磺酸钠注射液可减轻大鼠神经病理性痛,其机制与抑制脊髓组织氧化应激反应,减少脊髓背角神经元凋亡有关.