baxα加强表达促进鼻咽癌细胞CNE2株凋亡

目的 研究凋亡基因加强表达对鼻咽癌细胞株程序性死亡的影响。方法 用脂质体染色法将已构建的ｐＳＦＦＶ－ｂａｘα－ｎｅｏ质粒导入ＣＮＥ２细胞中,ＲＴ－ＰＣＲ,间接免疫荧光检测转染后ＣＮＥ２中ｂａｘα表达水平,流式细胞术及电泳检测凋亡。结果 脂质体转染质粒ｐＳＦＦＶ－ｂａｘα－ｎｅｏ人ＣＮＥ２细胞,ＲＴ－ＰＣＲ随机检测６个阳性克隆中ｂａｘα的ｍＲＮＡ表达水平明显提高,间接免疫荧光检测ＣＮＥ２－ｂａｘα中     

高温诱导低分化鼻咽癌细胞系CNE—2Z凋亡及其b …

探讨高温诱导低分化鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ凋亡的作用。方法：用激光共聚焦显微技术，核酸电泳，免疫组化等方法分析了４２．５℃高温处理６，１２，２４ｈ后鼻咽癌细胞的变化。结果：激光共焦显微镜观察可见高温处理６ｈ肿瘤细胞出现空泡，有不同程度的固缩；１２ｈ染色质浓缩缘边化，呈“半月形”，细胞出芽，出现凋亡小体，２４ｈ后大部分细胞死亡。     

PKC—α、PKA—I反义核酸对鼻咽癌CNE—2Z细胞生长增殖的影响

目的：探讨PKC—α和PKA—I反义核酸(asODN)对鼻咽癌CNE—2Z细胞生长增殖的影响。方法：分别用脂质体(lipofectin,LP)介导asODN转染鼻咽癌CNE—2Z细胞。实验组：①0．01—1．00μmol/L PKC-α asODN；②0．01—1．00μmol/L PKA-I asODN；③0．50μmol/L PKC-α asODN。对照组：相应浓度的随机序列(rODN)。用免疫组化法检测CNE—2Z细胞PKC-α和PKA-I的表达，MTT法检测其生长指数(growth in-dex,GI)，软琼脂克隆形成串检测其体外增殖能力。结果：PKC-α asODN或/和PKA-I asODN均可阻断其相应PKC-α或PKA-I的表达(P＜0．05)。PKC-α asODN或PKA-I asODN均能显著降低CNE—2Z细胞GI和软琼脂克隆形成率(P＜0．05)，且具有量效依赖关系。PKC-α asODN PKA-I asODN共同作用可使其GI和软琼脂克隆形成率非常显著降低(P＜0．01)，无明显量效依赖关系，两者对CNE—2Z生长抑制作用强于PKC-α asODN或PKA-I a-sODN(P＜0．05)，对其软琼脂克隆形成率的抑制作用与PKC-α asODN或PKA-I asODN无显著差异(P＞0．05)。结论：PKC-α asODN和PKA-I asODN均可抑制CNE—2Z细胞体外生长和增殖，两者具有协同作用。     

鼻咽癌组织中bcl—2,bax和p53的表达及其与瘤细胞？…

目的;了解鼻咽癌细胞中瘤细胞ｂｃｌ－２、ｂａｘ和ｐ５３的表达及其与瘤细胞凋亡指数的关系。方法：对３８例未经治疗的鼻咽癌组织,应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测瘤ｂｃｌ－２、ｂａｘ和ｐ５３的表达;末端标记细胞死亡检测法（ＴＵＮＥＬ）计算癌细胞的凋亡指数。结果：（１）３７例（９７．４％）中有９０％左右的瘤细胞呈ｂｃｌ－２过表达;（２）３８例（１００％）中有７０％左右的瘤细胞过表达ｂａｘ;（３）２９例（７６．３     

四环素调控表达的反义bcl-2对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC生长和凋亡的作用

目的 研究由四环素调控的反义bcl-2的表达对人神经母细胞瘤细胞系SK－N－MC细胞的生长和凋亡的作用并初步探讨其相关机制。方法 非定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的由四环素调控表达的真核细胞表达载体PUCCOMB1^CMV/Asbcl-2;应用脂质体Lipofectamine^TM介导转染SK－N－MC细胞,同时以空载体转染细胞作为对照。MTT法研究细胞的生长和增殖状况,提取DNA梯带和应用流式细胞术检测凋亡细胞。逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）研究细胞凋亡中bcl-xL/bcl-xS基因在mRNA水平上表达的变化。Western杂交检测bcl-2及其上下游相关基因caspase-3、PARP的变化。结果 转染反义bcl-2的细胞生长增殖缓慢,在去血清培养的相同的时间内其凋亡细胞数也明显多于对照组细胞,提前出现DNA梯带。在细胞的凋亡过程中检测到非活性caspase-3酶原蛋白减少并检测到bcl-2、PARP蛋白的降解产物条带。但bcl-xL/bcl-xS基因在mRNA水平上表达无明显变化。结论 反义bcl-2 mRNA可抑制SK－N－MC细胞的生长和增殖,促进去血清培养所诱导的SK－N－MC细胞的凋亡。大细胞凋亡过程中caspase-3被激活,bcl-2和PARP蛋白被裂解,但bcl-xL/bcl-xS在反义bcl-2 mRNA诱导的SK－N－MC细胞的凋亡过程中无变化。     

IL-6表达增高及TNFα下调参与bcl-2反义寡脱氧核苷酸诱导的细胞凋亡的调控

目的 探讨bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,AS-PS-ODN)诱导细胞凋亡的调控机理。方法 合成bcl-2 AS－PS－ODN作用于小细胞肺癌细胞株NCI－H446，流式细胞仪DNA倍体分析和脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测细胞凋亡；多重半定量逆转录－聚合酶链反应检测bcl-2 AS－PS－ODN处理前后bcl-2，c-myc,survivin,bax,s100A2,TNFα，TGFβ1及IL－6等基因mRNA表达的变化。结果 bcl-2 AS－PS－ODN能够诱导NCI－H446细胞凋亡，随着bcl-2 mRNA水平的下降，IL－6表达增高72．71％（P＜0．05），TNFα表达下调65．90％（P＜0．05），而c-myc,survivin,bax,s100A2,TGFβ1等基因的表达无明显变化。结论 IL－6表达增高及TNFα下调参与bcl-2反义寡脱氧核苷酸所诱导的细胞凋亡的调控。     

抗凋亡基因bcl—2在EB病毒相关性鼻咽癌中的表达

目的：探讨抗凋亡基因ｂｃｌ－２与鼻咽癌发生及与ＥＢ病毒感染的关系。方法：应用ＰＣＲ技术和免疫组化ＳＰ法检测４６例鼻咽癌组织中ＥＢ病毒ＤＮＡ和抗凋亡基因ｂｃｌ－２的表达。结果：３７例ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性病例中３１例出现ｂｃｌ－２表达８３．８％，９例ＥＢ病毒ＤＮＡ阴性病例吸７例ｂｃｌ－２阳性反应，两组间无明显差异。结论：ｂｃｌ－２基因在鼻咽癌中的异常高表达与ＥＢ病毒的感染无明显关系。     

肝癌中bcl-2和bax基因的表达及其关系

目的：为了探讨巨细胞凋亡基因在肝癌发生中的作用。方法：利用免疫组化ＡＢＣ法,检测了肝癌中细胞凋亡抑制基因ｂｃｌ－２,促细胞凋亡基因ｂａｘ的表达。结果：ｂｃｌ－２以及ｂａｘ的个体阳性率均比正常对照组有显著性提高;肝癌组中ｂｃｌ－２和ｂａｘ的表达呈正相关,但无显著性。结论：ｂｃｌ－２表达抑制细胞凋亡,导致肝癌发生;ｂａｘ表达促进细胞凋亡,使肿瘤维持在高殖状态 。     

星形细胞肿瘤中bcl-2和bax蛋白的表达及bcl-2/bax比值的作用意义

一、材料与方法１材料：６０例星形细胞肿瘤的石蜡包埋组织全部取自本院神经外科１９９７年的手术切除标本。根据ＷＨＯ１９９３年及ＤａｗｍａｓＤｕｐｏｒｔ１９９１年分类重新分级：包括星形细胞瘤Ⅱ级２５例,星形细胞瘤Ⅲ级２３例及星形细胞瘤Ⅳ级（多形性胶质母...     

大肠腺瘤及癌中细胞凋亡和bcl—2,bax基因的表达

探讨细胞凋亡及其调控基因ｂｃｌ－２和ｂａｘ与大肠癌发生发展之间的关系。方法：采用Ｆｅｕｌｇｅｎ染色，ＴｄＴ酶介导的生物素化ｄＵＴＰ缺口末端标记技术和免疫组织Ｓ－Ｐ法，分别检测大肠正常粘膜、腺瘤、癌及癌旁非腺瘤性不典型增生中细胞凋亡率和ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因的表达。     

bcl—2／bax对不同乳腺癌细胞凋亡的调节作用

目的：了解bcl-2/bax在乳腺癌细胞的p53依赖性凋亡和p53非依赖性凋亡中的作用。方法：用原位杂交的方法检测化疗药物VM-26诱导入乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S凋亡前后bcl-2和bax的mRNA表达情况。结果：与MDA-MB-435S细胞相比,MCF-7细胞的bcl-2 mRNA水平较高。两株细胞均能在VM-26的作用下发生凋亡。药物诱导后,MCF-7细胞的bcl-2 mRNA表达下降,bax mRNA表达增加;MDA-MB-435S细胞bax mRNA表达增加,bcl-2、mRNA无明显变化。结论：wt p53可在转录水平调节bcl-2/bax的表达,从而介导凋亡作用;bax在p53非依赖性凋亡中也发挥一定作用;bcl-2的高表达可能与肿瘤耐药性有关。     

裸鼠荷人鼻咽癌细胞株后免疫状态的动态观察

本实验选用4～6周龄NC系裸鼠,原代用双侧颈背部皮下接种CNE-2细胞株,鼠间传代用套针双侧接种上代的新鲜瘤块,共传8代,成功率100%。动态观测裸鼠荷瘤后免疫状态变化的结果如下:(1)净体重显著减轻;(2)脾系数增大,瘤重增加,两者间高度正相关(r=0.8395);(3)脾NK活性在第5天时轻度升高,10天时开始下降,15天后显著下降;NK活性与瘤重及脾系数均呈高度负相关(r_1=-0.7132,r_2=-0.8237);(4)第5天时,脾NK细胞体外对人干扰素反应性良好,10天时仍有一定的反应性,15天后失去反应性;(5)荷瘤裸鼠牌细胞自然转化率高于对照组,而对ConA刺激的反应性低于对照组;(6)“癌克星”通过降低血清MDA、提高NK活性及增加瘤组织中单核细胞浸润而起抑瘤生长的作用。揭示在T细胞缺陷的裸鼠,其脾NK细胞是抗移植瘤生长的重要免疫活性细胞。     

高温诱导低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z凋亡及其bcl-2表达

目的：探讨高温诱导低分化鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ凋亡的作用。方法：用激光共聚焦显微技术、核酸电泳、免疫组化等方法分析了４２．５℃高温处理６、１２、２４ｈ后鼻咽癌细胞的变化。结果：激光共焦显微镜观察可见高温处理６ｈ肿瘤细胞出现空泡，有不同程度的固缩；１２ｈ染色质浓缩缘边化，呈“半月形”、细胞出芽，出现凋亡小体，２４ｈ后大部分细胞死亡。ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳可见高温处理６ｈ和１２ｈ后有断裂成小分子片段，呈典型梯状图谱；２４ｈ后为不规则的图谱。ｂｃｌ－２免疫组化显示高温处理后的鼻咽癌细胞ｂｃｌ－２蛋白表达逐渐减弱。结论：高温可诱导鼻咽癌细胞的凋亡，特别是４２．５℃处理１２ｈ后明显。ｂｃｌ－２蛋白与细胞凋亡之间关系密切。     

PKC-α反义核酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及c-myc和c-fos表达的影响

为探讨PKC α反义核酸对CNE 2Z细胞增殖及c myc、c fos表达的影响 ,采用脂质体 (LP)介导法 ,用 0 0 1～1 0 0 μmol/L各浓度PKC α反义核酸 (asODN)转染CNE 2Z ;MTT法及软琼脂克隆形成法分别检测CNE 2Z生长指数(growthindex ,GI)及其体外增殖能力 ;免疫组化法检测PKC α、及c myc、c fos的表达。结果表明 :PKC αasODN 0 0 5～ 1 0 0 μmol/L各浓度组CNE 2ZGI显著降低 (P <0 0 5 ) ,且呈量效依耐关系 ;其中 1 0 0 μmol/L和 0 5 0 μmol/LPKC αasODN对CNE 2Z生长有非常显著抑制作用 (P <0 0 1) ;0 5 0 μmol/LPKC αasODN组CNE 2Z软琼脂克隆形成率均低于对照组 (P <0 0 5 ) ,并可下调其PKC α、c Myc、c Fos的表达 (P <0 0 5 )。结果提示 :LP介导PKC αasODN转染CNE 2Z细胞 ,可有效阻断CNE 2ZPKC α的表达 ,抑制其体外增殖能力 ,下调c myc、c fos蛋白表达 ;PKC αasODN可能通过下调c myc、c fos表达发挥作用     

高温对神经细胞凋亡及bcl—2及bax表达的影响

通过神经细胞原代培养并给予高温刺激,应用ＴＵＮＥＬ检测、免疫细胞化学和图像分析技术,研究了高温对神经神经调亡及凋亡相关基因ｂｃｌ－２、ｂａｘ表达状况的影响。结果方法可在原位检测单个凋亡细胞,且较敏感,高温处使细胞凋亡数明显增加,ｂｃｌ－２、ｂａｘ出现异常表达。表明高温可诱发圾代培养神经细胞凋亡,ｂｃｌ－２、ｂａｘ发挥作用。     

Scid小鼠免疫重建及T,B和NK细胞CNE—2Z—H5移植瘤生长…

采用近系淋巴细胞输入或移植胸腺重建Ｓｃｉｄ小鼠免疫功能，以环磷酰胺抑ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠ＮＫ功能，然后移植ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５。移植瘤生长速率及瘤重依次为：Ｓｃｉｄ小鼠组－ＮＫ功能抑制组－ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠组－免疫重建组；淋巴细胞输入组６／６、胸腺移植组１／３例于荷瘤２２天内移植瘤完全消退。表明免疫重建成功，有较强抗瘤效应。     

自发性高血压大鼠心肌bcl-2、bax蛋白表达的研究

目的：探讨遗传性高血压及左室肥厚过程中心肌组织凋亡调节蛋白bcl-2、bax表达的变化及AT1受体拮抗剂缬沙坦的影响。方法：实验动物为8周龄自发性高血压大鼠（SHR），分为缬沙坦治疗组（SHR＋缬沙坦组）和非治疗组（SHR无药组），以Wistar鼠作为正常血压对照组，观察期限为8w。采用免疫组化、Western印迹等方法检测凋亡调节蛋白bcl-2、bax表达。结果：SHR心肌中存在bax高表达，缬沙坦治疗8w后，SHR心肌组织bax蛋白表达显著降低至接近Wistar组。bcl-2蛋白在SHR＋缬沙坦组及Wistar组表达较SHR无药组有增高趋势（P＞0．05）。前两组bcl-2/bax比值较后者显著增高（P＜0．05）。结论：心肌细胞凋亡是代偿性心肌肥厚发展为心力衰竭的可能机制之一。高血压病早期缬沙坦在降压同时有效抑制心肌细胞凋亡。     

鼻咽癌组织中bcl-2、bax和p53的表达及其与瘤细胞凋亡的关系

目的：了解鼻咽癌组织中瘤细胞ｂｃｌ２、ｂａｘ和ｐ５３的表达及其与瘤细胞凋亡指数（ａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｅｘ,ＡＩ）的关系。方法：对３８例未经治疗的鼻咽癌组织,应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测瘤细胞ｂｃｌ２、ｂａｘ和ｐ５３的表达;末端标记细胞死亡检测法（ＴＵＮＥＬ）计算癌细胞的凋亡指数。结果：（１）３７例（９７４％）中有９０％左右的瘤细胞呈ｂｃｌ２过表达;（２）３８例（１００％）中有７０％左右的瘤细胞过表达ｂａｘ;（３）２９例（７６３％）呈ｐ５３过表达;（４）３８例活检组织的平均ＡＩ为２６０２±２６４２／ＨＰＦ;（５）ＡＩ与ｂｃｌ２、ｂａｘ和ｐ５３的表达无相关性。结论：（１）本组大多数鼻咽癌组织的绝大部分瘤细胞均呈ｂｃｌ２和ｂａｘ高表达;（２）由于ｂｃｌ２和ｂａｘ的表达已在高水平达到相对平衡,因此在大多数人体鼻咽癌中它们可能并不起到介导瘤细胞凋亡的主导作用;（３）鼻咽癌组织中过表达的ｐ５３蛋白可能已失去了调节ｂｃｌ２和ｂａｘ的表达进而影响细胞凋亡的功能。     

人肺癌细胞凋亡与p53、bcl-2、Bax的表达

目的：探讨人肺癌组织细胞自发凋亡的发生,ｐ５３基因及凋亡相关基因ｂｃｌ－２、Ｂａｘ在肺癌组织中的表达及与肺癌细胞凋亡和生物学行为的关系。方法：用甲基绿－派诺宁染色检测５０例肺癌组织切片中凋亡细胞,ＬＳＡＢ免疫组化法检测ｐ５３和Ｂａｘ的蛋白表达,原位杂交方法检测ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的表达。结果：１００％小细胞肺癌凋亡发生数１０个／ＨＰＦ,２１％的肺鳞癌和１５％的肺腺癌凋亡发生数〉１０个／ＨＰＦ。ｐ５