局部缺血“预处理”诱导家兔相邻非缺血心肌热休克蛋白70基 …

目的：研究兔心局局部缺血“预处理”后，局部缺血和相邻非血心肌热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）ｍＲＮＡ的水平变化。方法：提取心肌组织总ＲＮＡ，用ＨＳＰ７０探针进行斑点杂交。结果：缺血预处理组的缺血区和非缺血区ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ表达水平均显著高于对照组相应部位（Ｐ〈０．０５），而每组内的缺血区及非缺血区间无显著差异（Ｐ〉０．０５），结论：局部缺血“预处理”后，缺血和非缺血区两处心肌的内反应呈“一致性”；     

局部缺血"预处理"诱导家兔相邻非缺血心肌热休克蛋白70基因表达

目的：研究兔心局部缺血“预处理”后,局部缺血和相邻非缺血心肌热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）ｍＲＮＡ的水平变化。方法：提取心肌组织总ＲＮＡ,用ＨＳＰ７０探针进行斑点杂交。结果：缺血预处理组的缺血区和非缺血区ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达水平均显著高于对照组相应部位（Ｐ＜００５）,而每组内的缺血区及非缺血区间无显著差异（Ｐ＞００５）。结论：局部缺血“预处理”后,缺血和非缺血区两处心肌的内反应呈“一致性”;缺血预处理对心肌的保护作用可能与ＨＳＰ７０的合成增多有关。     

缺血预处理诱导大鼠海马CA_1区神经元HSP_(70)提前表达

目的前脑缺血再灌注可引起大鼠海马迟发性神经元死亡。但若在致死性缺血前，预先给于短暂的非致死性缺血刺激，即缺血坝处理（ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ，ＩＰＣ），则可对其后的长时间致死性缺血产生耐受，此现象称为缺血耐受。ＨＳＰ_７０基因的转录被认为是细胞应激反应的基因标志。其基因产物ＨＳＰ_７０。具有细胞保护作用。本研究旨在探讨缺血预处理引起的缺血耐受中 ＨＳＰ_７０表达的变化。方法（１）建立动物模型：选用健康成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，参照Ｐｕｌｓｉｎｅｌｌｉ的四血管阻断法建立前脑缺血模型。动物分三组：单纯缺血再灌注组（ＩＲ组），给予假手术３ｄ后行８ｍｉｎ致死性缺血；缺血预处理组（ＩＰＣ组），先给予３ｍｉｎ非致死性缺血．３ｄ后再给予８ｍｉｎ缺血：对照组，只给于假手术，不给予缺血刺激，（２）免疫投化检测；十缺血再灌注２ｈ，取脑制备冰冻切片，用ＳＡＢＣ 法检测各组海马ＣＡ_１区神经元ＨＳＰ_７０的表达。（３）流氏细胞术检测：于缺血再灌庄２４ｈ，迅速取而背侧新鲜海马组织，用流氏细胞仪检测海马ＣＡ_１区神经元ＨＳＰ_７０的阳性表达率。（４）病理学检查：再灌注７ｄ时取脑制备石蜡切片，行尼氏染色，光镜下观察海马ＣＡ     

热休克蛋白70的分布,调节及功能

各种有机体在经受热应激及其它应激如缺血、缺氧、重金属等作用之后，都能诱导生成热休克蛋白（ＨＳＰ）。按分子量大小可分为四组。研究得较多的是ＨＳＰ７０，因为它在细胞应激后生成最为显著。ＨＳＰ７０在应激细胞中主要与细胞核结合，其基因表达受转录和转录后双重调节。对ＨＳＰ７０的热耐受性、“分子伴侣”和“细胞温度计”作用及抗感染、抗肿瘤免疫等方面的研究已取得进展。     

热应激诱导兔脑热休克蛋白70的合成研究

目的探讨热应激与热休克诱导的脑组织不同细胞热休克蛋白（ＨＳＰ）７０合成。方法用免疫组织化学ＡＢＣ方法，对８只新西兰兔在不同温度热应激中诱导脑组织ＨＳＰ７０合成进行了观察。结果发现热刺激组对兔脑组织ＨＳＰ７０合成刺激较弱，而热休克组大量诱导ＨＳＰ７０的合成。在脑不同区域ＨＳＰ７０合成并不相同，在皮质ＨＳＰ７０主要分布于颗粒Ⅱ层，在海马ＣＡ１和ＣＡ２区阳性细胞较多，而下丘脑阳性神经元主要分布于室周区，阳性物质主要分布在胞浆中，少数细胞可见核深染。结论ＨＳＰ７０的合成与热刺激强度及脑组织热敏感区有关，并且ＨＳＰ７０的合成可能反应了体温调节中枢与神经内分泌功能的损伤     

低剂量过氧化氢预处理导致牛肺血管内皮细胞耐受过氧化氢损伤

小量过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）预处理，能诱导牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ增多，同时使ＢＰＡＥＣｓ获得了对大量Ｈ２Ｏ２损伤的耐受性，表现为大量Ｈ２Ｏ２所致乳酸脱氢酶释放和硫代巴比妥酸反应物含量增加及过氧化氢酶、超氧化歧化酶活性降低等变化减轻。用放线菌酮和放线菌素Ｄ分别抑制ＨＳＰ７０和ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的增多后，此种耐受性消失，说明小量Ｈ２Ｏ２预处理使Ｂ     

热应激蛋白70及其抗体在中暑病人血浆中水平改变的观察研究

探讨中暑发生的病理过程中热应激蛋白７０（ＨＳＰ７０）水平及其抗体滴度水平的变化和相互关系。应用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法测定血浆ＨＳＰ７０水平；应用免包被的酶联免疫吸附分析法经倍比稀释测定血浆ＨＳＰ７０抗体滴度。     

杜氏利什曼原虫热休克蛋白70的DNA疫苗表达载体构建及体内应答研究

以多聚酶链反应技术扩增获得了杜氏利什曼原虫（Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｉ）热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）全长基因序列，构建ＤＮＡ疫苗表达载体ｐＶＲ１０２０－ＨＳＰ７０。以脂质体法体外转染小鼠成纤维细胞系ＳＶＴ２，应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法证实构建的表达载体具有表达ＨＳＰ７０的能力。以１０μｇ的ＤＮＡ疫苗表达载体质粒经肌肉、皮下注射进行免疫，２周后即可出现抗－ＨＳＰ７０的抗体应答。建立了ＤＮＡ疫苗免疫应答的模型。     

加热及感染诱导热休克蛋白70表达及分布改变的观察

目的：了解加热和病毒感染状态下细胞中热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的表达及分布情况。方法：分别对体外培养的Ｖｅｒｏ Ｅ６细胞进行加热或病毒感染,然后用免疫组化、免疫印迹杂交和ＲＮＡ斑点杂交检测。结果：加热和感染均可使培养细胞高表达ＨＳＰ７０,但其分布定位的改变则有差异。结论：高热和病毒感染可导致ＨＳＰ７０表达增强及分布的改变。     

不同类型热休克蛋白在食管癌中的表达及其意义

目的;研究食管癌组织中不同类型热休克蛋白的表达,并探讨其与食管癌的发生,发展及生物学行为的关系。方法：应用免疫组织化学ＳＡＢＣ法,观察５１例食管癌组织和１０例切缘食管粘膜中ＨＳＰ２５,ＨＳＰ６０,ＨＳＰ７０蛋白的表达,并比较其阳性率;结果：癌旁食管粘膜和癌组织中ＨＳＰ２５,ＨＳＰ６０和ＨＳＰ７０蛋白的阳性率分别为５０．０％,９２．３％,６１．５％和１１．８％,９４．１％,６０．８％;     

小鼠不完全脑缺血再灌期前脑损伤及热休克蛋白的表达

目的：研究小鼠不完全脑缺血再灌用损伤的特点及热休克蛋白（ＨＳＰ）７０的表达。方法：暂时阻断小鼠双侧颈总动脉,再灌后２４或４８小时取材作光镜、电镜、ＴＵＮＥＬ染色及ＨＳＯ７０免疫细胞化学观察。结果：再灌２４小时海马ＣＡ１区见大量大缩的锥体细胞,电镜下可见核染色质聚积于核膜边和线粒体肿胀或空泡化等改变。皮层ＩＬ－ＶＩ层、扣带回、齿状回、尾壳核、海马ＣＡ３等处也见程度不同的受损细胞,外侧侧核细胞明显减少     

结核杆菌HSP70在耻垢分枝杆菌中的表达及其免疫原性研究

目的在重组分枝杆菌中表达编码人结核杆菌（ＴＢ）热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的ＤｎａＫ基因，并观察其对小鼠的免疫效应。方法采用基因工程和免疫学技术将ＤｎａＫ基因及其两侧的表达调控区一起从质粒ｐＭＴ－７０中切出，经末端修饰后装入大肠杆菌－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中，构建成新的重组质粒ｐＢＣＧ－ＴＢ７０，并用以转化耻垢分枝杆菌及大肠杆菌，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达的ＨＳＰ７０；以重组耻垢分枝杆菌分别经皮下及腹腔免疫小鼠，用淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反映细胞增殖能力，以ＮＯ法检测巨噬细胞吞噬活性，并检测血清中特异性抗ＴＢＨＳＰ７０的抗体。结果ＴＢＨＳＰ７０能在分枝杆菌中表达，表达量占菌体总蛋白量的１０％，不能在大肠杆菌中表达；重组耻垢分枝杆菌以１０６ＣＦＵ的剂量经皮下免疫小鼠后，可使小鼠脾淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）和腹腔巨噬细胞吞噬活性增高（Ｐ＜０．０５），并能刺激机体产生特异性抗ＴＢＨＳＰ７０的抗体，腹腔免疫激发的抗体滴度较皮下免疫为低，而ＳＩ无明显改变。结论构建的表达质粒ｐＢＣＧ－ＴＢ７０能在耻垢分枝杆菌中表达ＨＳＰ７０，该重组菌具有较强的免疫原性。     

热休克蛋白60KD与动脉粥样硬化

热休克蛋白（ＨｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎＨＳＰ）是一种应激蛋白。原核细胞和真核细胞在各种应激刺激和许多其它损伤因素包括物理因素、化学因子、缺血、缺氧、氧自由基、中毒及创伤作用下均可产生ＨＳＰ。科学家们迄今对许多进化程度不同的物种的ＨＳＰ家族成员进行了基因和序列分析，发现ＨＳＰ属生物界分布最广泛、结构最保守的蛋白质之列．从大肠杆菌到人的ＨＳＰ氨基酸序列有５０％以上同源性。ＨＳＰ广泛存在于各种病原微生物中，而且是优势免疫原。这对免疫系统无疑是一种挑战。下面将对与免疫反应有关的热休克蛋白及其动脉粥…     

热休克基因表达对抗过氧化氢所致肺内皮细胞损伤的保护作用

本研究探讨热休克反应（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｒｅｓｐｏｎｓｅ，ＨｓＲ）对抗过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）所致牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）损伤的保护作用及机制。实验发现，预先热休克处理（４２℃，２ｈ）可使ＢＰＡＥＣｓ中热休克蛋白７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ明显增多，同时显著减轻Ｈ２Ｏ２所致的ＢＰＡＥＣｓ中乳酸脱氢酶释放和硫代巴比妥酸反应物含量增加及过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性的降低等变化。进一步实验证明放线菌酮和放线菌素Ｄ能分别抑制热休克诱导的Ｈ８Ｐ７０和ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的增多，同时均能取消ＨＳＲ对抗Ｈ２Ｏ２所致ＢＰＡＥＣｓ损伤的保护作用。结果提示，ＨＳＲ具有对抗Ｈ２Ｏ２所致ＢＰＡＥＣｓ损伤的保护作用；此种保护作用与细胞经热休克处理后细胞中热休克基因在转录和翻译两个水平的表达增强及抗氧化能力增加有关。     

家族性热性惊厥与热休克蛋白70基因关联性的初步探讨

为了解热性惊厥（ｆｅｂｒｉｌｅｃｏｎｖｕｌｓｉｏｎｓ，ＦＳ）与热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰ）７０基因的关系。应用ＤＮＡ印迹杂交和ＰＣＲ技术，对５０个简单型ＦＣ家系成员进行了ＭＨＣ连锁的热休克蛋白ＨＳＰ７０基因进行了多态性分析，并以１０３例无关健康个体作对照。结果发现：ＦＣ患者及ＦＣ史阳性亲属组中的基因型及等位基因型分布与健康对照组明显不同。主要表现为ＦＣ患者及ＦＣ史阳性亲属组的ＨＳＰ７０－２编码区ＰｓｔⅠ＋、ＨＳＰ７０－２３′非翻译区（３′ＵＴ）扩增产物Ａ２型（１８８ｂｐ）及ＨＳＰ７０－１５′非翻译区（５′ＵＴ）扩增产物Ｃ型等位基因的表型频率均明显高于健康对照组，而无ＦＣ史亲属组的各基因型频率及等位基因表型频率与对照组相比无统计学差异。提出ＨＳＰ７０－２ＰｓｔⅠ＋、７０－２３′ＵＴＡ２及７０－１５′ＵＴＣ３种等位基因型与家族性ＦＣ的易感性可能有关，其中前者为与ＦＣ关联的主要等位基因型，后二者则主要继发于与ＰｓｔⅠ＋等位基因的关联性。     

杜氏利什曼原虫热休克蛋白70的DNA疫苗表达载体构建及体内 …

以多聚酶链反应技术扩增获得了杜氏利什曼原虫热休克蛋白７０全长基因序列，构建ＤＮＡ疫苗表达载体ＰＶＲ１０２０－ＨＳＰ７０。以脂质体法我转染小鼠成纤维细胞系ＳＶＴ２，应用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法证产构建的表达载体具有表达ＨＳ宾能力，以１０μｇ的ＤＮＡＵ凤苗表达载体质粒经肌肉、皮下注射进行免疫，２周后即可出现抗ＨＳＰ７０的抗体应答。建立了ＤＮＡ疫苗免疫应答的模型。     

家族性热性惊厥的染色单体型相对风险和传递不平衡分析

目的　确认家族性热性惊厥是否与染色体６ｑ 或８ｑ 连锁。方法　对核心家系为主的５０ 个家族性热性惊厥家系的热休克蛋白（ ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ , Ｈ Ｓ Ｐ）７０ 编码区 Ｐｓｔ Ⅰ位点、 Ｈ Ｓ Ｐ７０１ ５′非翻译区、 Ｈ Ｓ Ｐ７０２ ３′非翻译区、微卫星 Ｄ８ Ｓ８４ 和 Ｄ８ Ｓ８５ 等５ 个遗传标志的分型结果,用计算机群体与家系遗传分析系统 Ｐ Ｐ Ａ Ｐ 进行单体型相对风险（ｇｅｎｏｔｙｐｅｂａｓｅｄ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｉｓｋ , Ｇ Ｈ Ｒ Ｒ） 和传递不平衡（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕ ｍ ｔｅｓｔ , Ｔ Ｄ Ｔ） 分析。结果　 Ｇ Ｈ Ｒ Ｒ 显示标志 Ｄ８ Ｓ８５ 、 Ｔ Ｄ Ｔ 分析显示 Ｄ８ Ｓ８４ 与家族性热性惊厥有一定关联或存在连锁不平衡。结论　提示家族性热性惊厥可能与染色体８ｑ 连锁。     

小鼠肝癌细胞膜上HSP70的表达及检测分析

应用流式细胞仪和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 检测了６１５ 系小鼠肝癌细胞系Ｈｃａｆ 细胞膜上ＨＳＰ７０ 的表达。结果表明Ｈｃａｆ 细胞膜上有较高的ＨＳＰ７０ 表达且具有可诱导性,推测肿瘤细胞ＨＳＰ７０ 的高表达与其生物学行为相关。应用亲合层析技术对ＨＳＰ７０ 进行了分离,对其进一步研究和应用有重要的意义。     

热休克预处理抗过氧化氢所致心肌细胞损伤保护作用的细胞分子机理

体外培养的鸡胚心肌细胞分别置于３７℃．３９℃．４２℃下进行预处理，ＳＤＳ－ＰＡＧＦ、Ｎｏｒｔｈｅｍｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ显示４２℃预处理２ｈ导致心肌细胞中热休克蛋白（ＨＳＰｓ）特别是ＨＳＰ７０基因表达明显增加，并明显减轻了随后Ｈ２Ｏ２所致的心肌细胞损伤，表现为较高的细胞存活率、较高的ＳＯＤ及过氧化氢酶活性及较低的ＴＢＡＲＳ水平，而３９℃２ｈ的热休克预处理未能获得上述结果。在转录抑制剂放线菌素Ｄ或翻译抑制剂放线菌酮存在下，热休克预处理所诱导的ＨＳＰ基因表达被完全阻断，上述心肌细胞保护作用亦被完全取消。本研究为热休克蛋白的心肌保护作用提供了进一步证据     

鼠肝癌细胞的热休克蛋白诱导及其抗瘤机理研究

摸索鼠肝癌Ｈ２２细胞膜热休克蛋白７０最适的话导条件，并明确其体内外的抗瘤机理。方法用免疫荧光及ＦＣＭ光检测热休克Ｈ２２细胞膜ＨＳＰ７０蛋白的动态表达。并用ＭＭＣ灭活，热休克后的Ｈ２２细胞作抗原进行体内肿瘤免疫保护试验及体外肿瘤杀伤试验。