血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子对心肌细胞周期素和p27蛋白表达量的调节

目的：细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）和ＣＤＫ抑制蛋白（ＣＫＩ）是对细胞周期起正性和负性调节作用的两类物质。ｐ２７蛋白是ＣＫＩ的一种，主要对细胞外部促进或抑制增殖的信号起反应。本文观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对心肌细胞细胞周期素和ｐ２７蛋白表达量的影响。方法：培养的心肌细胞除血清２４ｈ使其处于静止状态，加入ＡｎｇⅡ１０－６ｍｏｌ／Ｌ、ＰＤＧＦ－ＢＢ２０ｎｇ／ｍＬ后不同时间收集细胞，用碘化丙啶（ＰＩ）标记细胞ＤＮＡ，以确定细胞所处的周期。用细胞周期素或ｐ２７蛋白的单抗和标记ＦＩＴＣ的二抗标记细胞，用流式细胞仪测定被激发出的荧光量来测定细胞周期素和ｐ２７蛋白表达的相对量。结果：ＡｎｇⅡ可促进细胞周期素的表达，但对ｐ２７蛋白的表达没有影响，不能促进心肌细胞增殖；ＰＤＧＦ明显促进心肌细胞细胞周期素的表达，也不能明显抑制ｐ２７的表达，也不能促进心肌细胞增殖。结论：细胞周期素的表达增加与心肌细胞能否进入细胞周期并不一致，ｐ２７蛋白是心肌细胞能否进入细胞周期并进行有丝分裂的重要调节因子。     

CKIs蛋白在视黄酸诱导HL-60细胞分化中的作用研究

从细胞周期调控这一途径探讨视黄酸抑制细胞增殖、诱导细胞分化的分子机制。结果显示：５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）及芳维甲（ＡＥ）处理的ＨＬ－６０细胞生长受抑,４ｄ后９０％细胞停滞于Ｇ０／Ｇ１期,Ｇ１→Ｓ期转换受阻,同时ＮＢＴ还原反应增强,ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析及免疫细胞化学染色表明处理后的细胞ｐ１６、ｐ２１两种细胞周期素依赖激酶抑制物（ＣＫＩｓ）表达增加,而ＣｙｃｌｉｎＤ１和ｐＲｂ蛋白则降低,其中尤以ＡＴＲＡ作用为明显。结果提示,细胞周期调控相关蛋白可能在视黄酸及其衍生物抑制细胞增殖、诱导细胞分化过程中起重要作用。     

Ang—Ⅱ对血缺氧性心肌胶原代谢的影响

目的：探讨缺血缺氧性心肌损伤过程中血管紧张素－Ⅱ（Ａｎｇ－Ⅱ）与心肌胶原代谢的关系。方法：是丙基肾上腺素（ＩＳＰ）注射大鼠、造成心肌缺血缺氧和心肌坏死模型,检测血清内ＧＯＴ、ＣＫ、ＬＤＨ、ＨＢＤＨ（羟丁酸脱氢酶）的活性,并检测心肌组织内血管紧张素－Ⅰ转换酶（ＡＣＥ）、血管紧张素－Ⅱ（Ａｎｇ－Ⅱ）和心肌胶原含量变化,观察细胞外间质效应细胞增殖情况。结果：注射ＩＳＰ后,血清ＧＯＴ、ＣＫ、ＬＤＨ、ＨＢＤ     

Ang-Ⅱ对缺血缺氧性心肌胶原代谢的影响

目的：探讨缺血缺氧性心肌损伤过程中血管紧张素－Ⅱ（Ａｎｇ－Ⅱ）与心肌胶原代谢的关系。方法：用异丙基肾上腺素（ＩＳＰ）注射大鼠,造成心肌缺血缺氧和心肌坏死模型,检测血清内ＧＯＴ、ＣＫ、ＬＤＨ、ＨＢＤＨ（羟丁酸脱氢酶）的活性,并检测心肌组织内血管紧张素－Ⅰ转换酶（ＡＣＥ）、血管紧张素－Ⅱ（Ａｎｇ－Ⅱ）和心肌胶原含量变化,观察细胞外间质效应细胞增殖情况。结果：注射ＩＳＰ后,血清ＧＯＴ、ＣＫ、ＬＤＨ、ＨＢＤＨ活性增加,心肌匀浆内ＡＣＥ、Ａｎｇ－Ⅱ含量上升,并发现在ＡＣＥ、Ａｎｇ－Ⅱ升高的同时有成纤维细胞的增生,以后心肌胶原含量明显升高。结论：心肌缺血缺氧后,心肌局部合成释放ＡＣＥ、Ａｎｇ－Ⅱ增加,使心肌成纤维细胞增殖和合成胶原能力增强,出现心肌胶原含量的增加。说明Ａｎｇ－Ⅱ是心肌间质胶原反应的一个信号分子     

p27表达和DNA倍体在软骨肉瘤中的研究

目的：软骨肉瘤是常见的骨恶性肿瘤之一。其形态多变、生物学行为复杂，对软骨瘤和高分化软骨肉瘤，只凭病理组织学特征鉴别它们通常是很困难的，并且软骨肉瘤组织学分级与其生物学行为时常不一致。因此，需要更为客观可靠的指标来协助诊断，指导软骨肉瘤的分级和估计软骨肉瘤的预后。肿瘤细胞周期的研究是当前肿瘤研究热点之一，肿瘤细胞周期受一系列细胞周期调节因子控制，包括Ｇ１期细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎｓ）和相应的细胞周期素依赖激酶（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｓ，ＣＤＫｓ），ＣＤＫｓ活性又受一系列细胞周期素依赖激酶抑制物（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＣＤＫＩｓ）控制。ｐ２７是新近发现的ＣＤＫＩｓ家族之一，在细胞周期增殖和分化调控中起非常重要作用。ｐ２７蛋白主要抑制Ｇ１期ｃｙｃｌｉｎＥ－ＣＤＫ２复合物及ｃｙ－ｃｌｉｎＤ－ＣＤＫ４／６复合物活性，它过度表达可使细胞周期停滞在Ｇ１中期。软骨肉瘤ｐ２７表达国内外尚未见报道。检测软骨肉瘤中ｐ２７表达，从而探讨ｐ２７表达与软骨肉瘤组织分级和ＤＮＡ倍体的关系及其对软骨肉瘤的诊断和预后判断是否具有应用价值十分必要。方法：３６例经典软骨肉瘤未脱钙     

表达人HGF／MBP融合蛋白的pMAL—MBP／HGF重组质粒的构建及鉴定

将人ＨＧＦ完整编码区ｃＤＮＡ片段插入ＭＢＰ表达型ｐＭＡＬ－Ｃ２载体质粒中，构建了表达人ＨＧＦ／ＭＢＰ融合蛋白的ｐＭＡＬ－ＭＢＰ／ＨＧＦ重质粒。表达的ＨＧＦ／ＭＢＰＧＥ分析分子量约为１１０ｋＤ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ表明能被兔抗ＭＢＰ抗体和抗人ＨＧＦＭｃＡｂ所识别。     

p53基因结构与功能研究的新进展

ｐ５３蛋白的信号区有１个ＳＨ－３区结合部位,非专一ＤＮＡ结合区可促进顺序专一的ＤＮＡ结合区与ＤＮＡ损伤部位结合。ｐ５３蛋白可整合细胞对各种危急情况的反应,其信息传递途径上游是各种危急状况,有ＡＴＭ类的基因起作用。ｐ５３蛋白通过靶基因ｐ２１ＷＡＦ－１及ＧＡＤＤ４５调控Ｇ１关卡,也参加了Ｇ２／Ｍ关卡的调控;通过上调靶基因Ｂａｘ、ＩＧＦ－ＢＰ－３,抑制ＢｃＬ－２基因表达,调控凋亡;维持基因组的遗传学稳定性,行使抑瘤基因功能。     

转化生长因子β1对G1期的负性调节

ＴＧＦ是具有生物活性的多肽，它通过下调Ｇ１期细胞周期蛋白Ａ，Ｄ，Ｅ的表达、改变细胞周期蛋白依赖性激酶ＣＤＫ２，ＣＤＫ４和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子ｐ１６，ｐ１５，ｐ２１，ｐ２７的活性，使细胞停滞在Ｇ１期，ＴＧＦ－β１还可通过抑癌基因产物Ｒｂ非磷酸化状态的聚积和下调Ｇ１早期“演进因子”ｃ－ｍｙｃ的表达阻止Ｇ１期细胞向Ｓ期进展     

BPI23-Fcγ1重组融合蛋白在E.coli中的表达

目的 构建ｐＢＶ－ＢＰＩ６００－Ｆｃγ１７００重组表达载体,转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α诱导表达ＢＰＩ２３－Ｆｃγ１抗菌重组蛋白。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从ＨＬ－６０细胞和正常人白细胞ｍＲＮＡ中扩增编码ＰＢＩ２３和ＩｇＧ１Ｆｃ（Ｆｃγ１）的基因;通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体;转化感受态Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α细胞,通过温控诱导表达ＢＰＩ２３－Ｆｃγ１重组蛋白。结果 （１）ＲＴ－ＰＣＲ     

低氧致鼠腺泡内肺动脉PDGF—B链蛋白表达的变化

目的：探讨血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）在低氧肺动脉高压血管构形重建发生中的作用。方法：应用免疫组化技术结合计算机图像分析，检测了低氧大鼠腺泡内肺动脉（ＩＡＰＡ）ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达水平。结果：常氧时，ＩＡＰＡ仅有ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白弱表达；低氧１天时，ＩＡＰＡ便有较强的ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达，定位于ＩＡＰＡ的内皮和中膜，低氧３天至１４天仅分布于中膜；低氧１、３、５、７、１４天各时间点ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达分别为常氧组的１．５３、１．５９、１．５６、１．６２和１．４２倍，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论：ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白可能参与了低氧肺动脉高压血管构形重建的发病过程     

含人PDGF—B链基因不同上游序列报告基因的构建和表达

本研究构建了含人ＰＤＧＦＢ链基因不同上游序列的荧光素酶报告基因ｐＳＩＳ－１７５８／＋４３Ｌｕｃ和ｐＳＩＳ－４０２／＋４３Ｌｕｃ，经与ｐＳＶβＧａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅＣｏｎｔｒｏｌＶｅｃｔｏｒ共转染血管内皮细胞后，测定了基础水平和ＴＮＦα作用下细胞裂解液中的荧光素酶和β半乳糖苷酶活性。结果表明：在ＴＮＦα作用下，ＰＤＧＦＢ链基因上游序列上调内皮细胞荧光素酶的表达，其主要调控区可能位于－１７５８／－４０３ｂｐ之间。     

血管紧张素Ⅱ在压力超负荷性心肌肥厚发病学中的意义

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）在心肌肥厚发病学的意义。方法：采用大剂量血管紧张素转化酶抑制剂（ＡＣＥＩ）ｃａｐｔｒｏｐｒｉｌ（Ｃａｐ）治疗大鼠腹主动脉缩窄所致左室肥厚（ＬＶＨ）。结果：Ｃａｐ早期能抑制肥厚心肌ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达,６周后ＬＶＨ＋Ｃａｐ组较ＬＶＨ组Ｂｐ,ＬＶＷ／ＢＷ各下降２５．９％（Ｐ〈０．０１）,２９．０（Ｐ〈０．０１）,同时心脏舒张功能改善（Ｐ〈０．０５）,肌球蛋白ＡＴＰ     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立

本文应用兔抗ｈＡＦＰ ＩｇＧ包被板条，以异硫氰酸苯基－ＥＤＴＡ－Ｅｕ＾３＋标记抗ｈＡＦＰ ＭｃＡｂ，建立了固相“夹心”二步法分析ｈＡＦＰ技术，结果显示，分析范围是６．２５ｎｇ／ｍｌ－１００ｎｇ／ｍｌ（ｒ＝０．９９），变异系数在１．６７％－１７．７４％之间，ｈＡＦＰ最小可测值为０．３５ｎｇ／ｍｌ。测定７６例孕妇血清样品，同所购ＤＥＬＦＩＡ ｈＡＦＰ最小可测值为０．３５ｎｇ／ｍｌ。测定７６例孕妇血清样     

G1期细胞周期调节因子与细胞癌变

目前研究结果表明，细胞周期中的多种调整因子参与细胞癌变，特别是Ｇ１期的Ｄ型细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎＤ）的过表达，细胞周期蛋白依赖性抑制因子（ＣＤＩ）的ｐ１６，ｐ１５，ｐ２１，ｎ２７及参与Ｇ１期负向调节的抑癌基因产物ｐ５３，Ｒｂ的低表达或基因突变皆可导致恶性肿瘤的发生。     

钙调素拮抗剂对HeLa细胞S期进程的影响

目的　探讨钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）对ＨｅＬａ细胞Ｓ期进程的影响及其分子机理。　方法　通过ＴｄＲ双阻断法获得同步化的Ｓ期ＨｅＬａ细胞,以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和Ｗｅｓｔｅｒｎ 技术分别观察了ＴＦＰ对ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程和胸苷激酶（ｔｈｙｍ ｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ,ＴＫ）活性及细胞周期引擎分子ＣｙｃｌｉｎＡ、Ｃｄｋ２ 和细胞周期调节蛋白ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ＰＣＮＡ、ｐ２１ 蛋白表达水平的影响。　结果　ＴＦＰ（２０μｍ ｏｌ／Ｌ）能使３ Ｈ－ＴｄＲ的掺入峰值后移,并抑制了Ｃｙ－ｃｌｉｎＡ、ＰＣＮＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ的表达和提高了ｐ２１ 蛋白的水平,但对Ｃｄｋ２的表达几乎无影响。　结论　ＣａＭ 除了能通过影响ＰＣＮＡ的水平直接作用于ＤＮＡ 合成,同时又可通过作用于ＣｙｃｌｉｎＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ｐ２１ 等周期引擎分子和调控因子水平正调ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程。     

细胞周期分子调控与癌变

细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）、细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶（ＣＤＫ）以及ＣＤＫ抑制蛋白（ＣＫＩ）三类分子的调控。细胞周期蛋白分别在细胞周期的不同时期程序性合成和降解，同时做为调节亚基对ＣＤＫ活性进行调节。ＣＤＫ的活性还受磷酸化状态的影响。ＣＫＩ能结合ＣＤＫ－ｃｙｃｌｉｎ复合物并抑制其活性，ＣＫＩ的失活可导致ＣＤＫ活性的异常。使细胞无限增殖。肿瘤的发生同细胞周期调控机制的改变密切相关。     

抗桥粒斑蛋白II单克隆抗体的研制及鉴定

本文用改良枸椽酸－枸椽酸钠法，从新鲜牛鼻表皮制备的ＤｅｓｍｏｐｌａｋｉｎⅡ（ＤＰⅡ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾淋巴细胞在ＰＥＧ介导下与Ｓｐ２／０细胞融合，经筛选、克隆化获得４株能稳定分泌ＤＰⅡＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系（分别命名为ＤＰｙ－１，２，３，４）。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧｌ，染色体数目为９３￣１０５。免疫组化分析表明，４株ＤＰⅡＭｃＡｂ具有很高的上皮组织特异性和敏感性，并提示ＤＰⅡ可能不存在于     

细胞周期分子调控与癌变

细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）、细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶（ＣＤＫ）以及ＣＤＫ抑制蛋白（ＣＫＩ）三类分子的调控。细胞周期蛋白分别在细胞周期的不同时期程序性合成和降解，同时做为调节亚基对ＣＤＫ活性进行调节，ＣＤＫ的活性还受磷酸化状态的影响。ＣＫＩ能结合ＣＤＫ－ｃｙｃｌｉｎ复合物并抑制其活性，ＣＫＩ的失活可导致ＣＤＫ活性的异常，使细胞无限增殖。肿瘤的发生同细胞周期调控机制的改变密切相关。     

HIV—1gp120基因及其与IFN—α基因共表达产物的构建和 …

目的 研究细胞因子ＩＦＮ－α在机体免疫应答过程中的免疫佐剂效应。方法 以表达中国流行株ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰ及共表达中国流行株ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因与ＩＦＮ－α基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰＩＦＮ－α免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，用流式细胞仪测定１００００个免疫鼠脾淋巴细胞中ＣＤ４＾＋，ＣＤ８＾＋Ｔ细胞数及ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值。结果 ｐＧ－ＰＩＦＮ－α与ｐＧＰ比较，ｐＧＰＩＦＮ－α免     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44生长和分化的影响

目的探讨去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对胶质瘤生长和分化的作用及可能机理。方法分别将ＮＤＧＡ加入培养基中和进行单细胞胞浆内显微注射ＮＤＧＡ，观察它对人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞生长、形态、细胞周期和免疫组化特性的影响。结果经ＮＤＧＡ处理的瘤细胞贴壁率和生长速率受抑制，增殖活性降低，细胞周期也有明显改变；细胞异型性变小，胞浆中胶质细丝增多，且其中ＧＦＡＰ标记增加而ｖｉｍｅｎｔｉｎ标记减少；ｐ５３蛋白和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）表达也降低。单细胞胞浆内注射ＮＤＧＡ（约１．５×１０－１１ｇ／细胞）后上述作用更显著，且作用迅速而持久。结论ＮＤＧＡ对恶性胶质瘤细胞具有抑制生长和诱导分化作用；对血管生成因子表达亦有抑制作用。