成纤维细胞生长因子受体2在小鼠肾发生发育中的表达

目的观察成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）在小鼠肾发生发育中的表达规律和定位,探讨FG-FR2与小鼠肾发生发育的关系。方法应用免疫组织化学技术和蛋白印迹技术（Western blotting）对胚龄12、14、16、18 d和生后1、7、14、21、40 d小鼠肾组织中FGFR2的表达进行定性观察和定量分析。结果FGFR2在生肾区输尿管芽微弱表达,在生后肾组织及各期肾小体未见表达。随着肾脏发育成熟,FGFR2主要表达于远端小管,且远直小管表达较强,远曲小管表达较弱;近端小管和集合管无阳性表达。蛋白印迹检测显示随着胚日龄的增加,FGFR2在肾组织的表达量逐渐增多。结论推测FGFR2在肾组织的表达可能与远端小管的发育密切相关。     

小鼠肾发育中Slit2 及其受体Robo1 的表达

目的 观察并检测Slit2 及其受体Robo1 在小鼠肾发育中的表达变化。方法 通过免疫组织化学技 术系统观察小鼠肾脏Slit2 和Robo1 的表达和定位;应用蛋白印迹技术检测小鼠肾脏Slit2 和Robo1 表达的变 化规律。结果 Slit2 和Robo1 在胚龄12 d 小鼠肾脏生肾区开始表达;Slit2 在小鼠输尿管芽及其周围的间充质 聚集的部位阳性表达,Robo1 在小鼠肾脏生肾区广泛表达,主要分布于生后肾组织和输尿管芽上皮细胞基底 面;在肾单位发育过程中,Slit2 定位表达于逗号小体阶段和S 小体阶段,且表达较强,在Ⅲ期肾小体阶段、Ⅳ 期肾小体阶段及成熟肾小体阶段有微弱表达;Robo1 定位表达于逗号小体阶段、S 小体阶段、Ⅲ和Ⅳ期肾小 体阶段,且表达较强,在成熟肾小体阶段有微弱表达;Slit2 及其受体Robo1 在肾脏泌尿小管如近端小管、远 端小管及集合管发育过程中均有表达。蛋白印迹检测从小鼠胚龄14 d 开始,Slit2 表达先递增,至胚龄16 d 达 峰值,而后逐渐递减。Robo1 表达从小鼠胚龄14 d 开始逐渐递减。结论 Slit2 及其受体Robo1 参与肾输尿管 芽的萌出、输尿管芽与生后肾组织的诱导、肾小体发育及泌尿小管发育和成熟过程。     

Calbindin—D28k在胚胎期小鼠肾组织的表达

目的 观察Calbindin-D28k在胚胎发育不同时期小鼠肾组织中的表达规律,探讨Calbindin-D28k在胚胎小鼠肾发育中的作用.方法 应用免疫荧光技术及蛋白印迹技术(Western blotting)对胚龄10、12、14、16、18 d小鼠肾组织中Calbindin-D28k的表达进行定性观察和半定量分析.结果 Calbindin-D28k在胚龄12 d胎鼠肾输尿管芽开始微弱表达,之后随胚龄增加其表达量逐渐增加.胚龄12 d在输尿管芽表达;胚龄14 d在输尿管芽Y型分支表达;胚龄16 d在榆尿管芽壶腹表达,且在S小体与输尿管芽壶腹连接处有少量表述;胚龄18 d定位于连接小管、皮质集合管上皮细胞胞浆内.结论 推测Calbindin-D28k可能对胚胎小鼠肾集合管系的发育有一定作用.     

小鼠肾发育中整合素α2、α3及α5的表达

目的:观察细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)受体-整合素α2、α3及α5在小鼠肾发育过程中的时空性表达,探讨其与肾发育的关系.方法:应用免疫组织技术结合体视学方法对不同胚龄及生后日龄小鼠肾组织中的整合素α2、α3及α5的表达进行系统观察和定量分析.结果:从胚龄12 d整合素α2、α3及α5即开始表达;整合素α2在发育各期肾小体表达较弱,在肾小管和集合管表达较强;整合素α3在发育各期肾小体表达较强.体视学分析结果显示它们的含量均随肾的发育逐渐增加.结论:推测整合素α2、α3及α5在小鼠肾发育中起一定作用,α2主要与肾小管和集合管发育相关,α3与肾小体发育相关最密切.     

层黏连蛋白和纤维连接蛋白在小鼠肾小体发育中的表达

目的 观察层黏连蛋白(LN)和纤维连接蛋白(Fn)在小鼠肾小体发育过程中的表达规律,探讨其与肾小体发生发育的关系及作用.方法 采用免疫组织化学技术结合体视学方法定量检测LN和Fn的表达.结果 胚龄12d的胎鼠LN表达于输尿管芽周围,胚龄14d始,在各期肾小体的基膜均有表达.体视学测量发现,随着肾小体的发育成熟,其阳性表达的面密度值逐渐增多.Fn在除逗号小体以外的各期肾小体的基底膜处均有表达.体视学测量结果显示其表达量逐渐增加.结论 LN和Fn在小鼠肾小体发育和成熟过程中发挥重要作用.     

神经型一氧化氮合酶在小鼠肾小体发育过程中的表达

目的 观察神经型一氧化氮合酶(Neuronal Nitric Oxide Synthas,nNOS)在小鼠发育不同阶段肾小体中的表达,探讨其在小鼠肾小体发育过程中的作用.方法 选取胚龄(E)12、14、16、18 d及生后日龄(P)1、3、7 d小鼠,应用免疫组织化学方法和图像分析技术检测肾小体发育各阶段nNOS的表达情况.结果 免疫组化染色显示E12d时在输尿管芽周围的生后肾组织中即可见到nNOS的阳性表达;随后,在各期肾小体中都可见到nNOS的表达,但是表达强度逐渐减弱.图像分析结果显示nNOS随着肾小体的发育,表达逐渐减少.结论 nNOS在小鼠肾小体发育早期即发挥作用,但随着肾小体的发育成熟,作用逐渐减弱.     

小鼠肾发育中集合管细胞的超微结构变化及AQP-的表达

 目的 观察小鼠肾发育过程中集合管细胞的超微结构变化及水通道蛋白4（AQP-4）的表达,探讨AQP-4与小鼠肾集合管细胞发育的关系及作用。方法 应用透射电镜、免疫组织化学、免疫印迹技术,并结合体视学方法观察并检测胚龄14,16,18 d 胎鼠及生后1,3,7,14,21,42 d仔鼠肾发育过程中集合管细胞的超微结构变化及AQP-4的表达。结果 小鼠胚龄18 d可见发育早期的主细胞。生后7~21d,主细胞形态结构发育基本完善。A型闰细胞在胚胎18 d出现,B型闰细胞生后21 d出现。AQP-4于胚龄14 d表达在集合管细胞的基底膜和侧膜,随着胚龄的增加表达逐渐增强,于生后1 d达到高峰。结论 集合管细胞在胚胎时期出现,但其形态结构在生后才逐渐完善。AQP- 4对胚胎期小鼠肾脏水平衡的调节起了重要的作用,而在生后只起辅助性作用。     

Megalin在胚胎期小鼠肾脏中的表达

目的观察胞吞受体megalin在胚胎发育不同时期小鼠肾脏中的表达。方法采用免疫组织化学技术及体视学方法检测胚龄9．5、11、14、16、18d小鼠肾脏megalin的表达。结果Megalin在胚龄9．5d小鼠表达于中肾管上皮细胞游离面,胚龄11d表达于输尿管芽的上皮细胞游离面,胚龄14d megalin表达量逐渐增多,主要分布于输尿管芽的壶腹部和发育中的肾近端小管上皮细胞游离面及较成熟的近端小管刷状缘。胚龄16d至胚龄18d megalin主要表达于近端小管的刷状缘,肾小球内也有微量表达。结论Megalin在胚胎肾发生中的表达存在着时空顺序,可能与肾小管,乃至肾单位的分化及成熟有关。     

缺锌对生长期小鼠肾脏金属硫蛋白-1表达的影响

目的在成功制备缺锌小鼠动物模型的基础上,观察缺锌对生长期小鼠肾脏中金属硫蛋白-1(MT-1)定位、定量表达的影响,初步探讨锌缺乏影响肾发育的机制。方法应用免疫组织化学技术观察缺锌小鼠肾组织中MT-1的定位表达变化。应用蛋白印迹技术检测缺锌小鼠肾组织中MT-1蛋白表达量变化。结果免疫组化结果显示:在小鼠肾脏MT-1定位表达于近端小管上皮细胞胞浆内,分布较均匀,少量分布在远端小管和集合管上皮细胞胞浆,肾小球无明显表达。蛋白印迹结果显示:与对照组相比,缺锌组小鼠肾脏MT-1表达量明显下降。结论发育期锌缺乏可使肾组织中MT-1蛋白表达降低,从而影响肾脏的发育和功能。     

神经型一氧化氮合酶在小鼠肾小体发育过程中的表达

目的观察神经型一氧化氮合酶（Neuronal Nitric Oxide Synthas,nNOS）在小鼠发育不同阶段肾小体中的表达,探讨其在小鼠肾小体发育过程中的作用。方法选取胚龄（E）12、14、16、18 d及生后日龄（P）1、3、7 d小鼠,应用免疫组织化学方法和图像分析技术检测肾小体发育各阶段nNOS的表达情况。结果免疫组化染色显示E12d时在输尿管芽周围的生后肾组织中即可见到nNOS的阳性表达;随后,在各期肾小体中都可见到nNOS的表达,但是表达强度逐渐减弱。图像分析结果显示nNOS随着肾小体的发育,表达逐渐减少。结论 nNOS在小鼠肾小体发育早期即发挥作用,但随着肾小体的发育成熟,作用逐渐减弱。     

成纤维细胞生长因子受体2在中毒性耳聋小鼠耳蜗的定位表达研究

目的观察成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）,在中毒性耳聋小鼠（C57）耳蜗中的定位和表达度其FGFR2表达,降低成年小鼠的听功能情况。方法原位杂交检测FGFR2的表达,听性脑干请发电位检测听功能。结果FGFR2在成年小鼠耳蜗的螺旋神经节中表达;无干预措施下,FGFR2功能降低小鼠的听功能度表达与野生型小鼠相比较无明显差异;注射庆大霉素后,两组小鼠中FGFR2的表达增强。结论FGFR2与bFGF共同作用于耳蜗,二者联合对庆大霉素有一定的对抗作用。     

碱性成纤维细胞生长因子及成纤维细胞生长因子受体在豚鼠前庭中的定位和表达

目的 :观察碱性成纤维细胞生长因子 ( b FGF)及成纤维细胞生长因子受体 ( FGFR)在豚鼠前庭终器的定位和表达。方法 :免疫组织化学。结果 :b FGF位于支持细胞和毛细胞的胞浆及胞核 ,FGFR位于支持细胞表面。b FGF及 FGFR在成年豚鼠表达较弱 ,新生豚鼠及庆大霉素内耳损伤豚鼠表达较强。结论 :提示 b FGF在豚鼠前庭终器发育、结构功能维持及损害后修复中起重要作用     

bFGF促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经元转化及机制

目的探讨碱性成纤维生长因子对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的作用及信号通路.方法利用bFGF与不同生长因子和化学诱导剂组合诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向神经元转化,观察分化过程中细胞形态、数目的变化,观察免疫细胞化学检测分化后细胞神经细胞标志蛋白和部分神经功能相关蛋白以及FGFR的表达情况,并计算转化率.结果①3组不同条件诱导后,MSCs均能分化为具有典型神经元形态的细胞,并明显表达NSE、MAP2和5-HT1D,但不表达GFAP;②bFGF预诱导组的转化率明显高于未预诱导组;③诱导后的神经元样细胞FGFR3表达明显增强.结论以DMSO和BHA为基础诱导剂,bFGF预处理可明显提高MSCs跨胚层分化为神经元样细胞的转化率,浓度为10 ng/ml的bFGF主要是通过FGFR3作用于MSCs.     

人成纤维细胞生长因子1-Ⅲb受体亚型在胰腺导管细胞增殖中的作用及对蛋白激酶的调节

目的探讨人类成纤维细胞生长因子受体1的Ⅲb亚型（FGFR1-Ⅲb）在TAKA-1胰腺导管细胞增殖中的作用及对有丝分裂激活的蛋白激酶（MAPK）的调节。方法以脂质体法将人类全长FGFR1-Ⅲb表达质粒pSVK4／FGFR1-Ⅲb稳定转染入TAKA-1胰腺导管细胞,采用Western印迹、Northern印迹、免疫荧光和糖基化分析等方法鉴定FGFR1-Ⅲb在TAKA-1细胞中的表达、分布和结构特征,并以生长因子刺激转染细胞,通过MTY法及MAPK分析,观察FGFR1-HIb受体在胰腺导管细胞中的功能及作用机理。结果FGFR1-Ⅲb受体是位于120000和130～150000之间的糖基化受体,在细胞膜表面和胞浆中为中等强度表达,在胞浆的核周围区为高表达,细胞核内不表达。FGF-1、-2和-4能够明显促进转染FGFR1-Ⅲb基因的TAKA-1细胞的生长,同时能够明显增强p44／p42MAPK的磷酸化。结论人类FGFR1-Ⅲb受体在胰腺导管细胞中为功能性受体,FGF-1、-2和4能够促进转染FGFR1-Ⅲb基因的TAKA-1细胞的增殖,其机制为促进p44／p42MAPK的磷酸化。     

肾透明细胞癌中FGFR1的表达及其临床意义

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor1,FGFR1)在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)中的表达及其临床意义。方法:采用SP免疫组化方法检测45例RCCC组织中FGFR1的表达。同时,用原位杂交方法检测20例RCCC组织中FGFR1mR-NA的表达。结果:在RCCC中FGFR1蛋白及FGFR1mRNA表达的阳性率分别为68.9%(31/45)、80.0%(16/20),明显高于癌旁正常肾组织(P<0.01)。FGFR1蛋白表达与FGFR1mRNA的表达呈一致性(P<0.05)。FGFR1蛋白表达与病理组织学分级和临床TNM分期相关(P<0.05)。结论:FG-FR1与肾透明细胞癌的发生发展和转移密切相关,对判断预后具有一定临床意义。     

胎儿皮肤发育中成纤维细胞生长因子受体-2表达的免疫组织化学研究

目的 研究不同发育时期胎儿皮肤中成纤维细胞生长因子受体-2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)的表达及分布,探索FGFR2在皮肤发生、发育中的作用.方法 对不同发育时期胎儿皮肤取材、固定,制成石蜡切片,S-P法检测FGFR2的表达.结果 胚胎发育期FGFR2在表皮细胞表达较弱,甚至呈阴性表达.表皮分层期时,表皮层开始增厚,并可见毛囊的初级原基;FGFR2在表皮层和毛囊初级原基内呈弱阳性表达.毛囊形成期时,毛囊的结构初步形成,体积细小,形态幼稚;FGFR2主要在毛母质细胞内表达,并且随着胎龄增加,表达范围逐渐扩大,表达量逐渐增多.毛囊发育成熟期后,毛囊的结构发育相对成熟,FGFR2则在表皮层、毛细血管内皮细胞及皮脂腺的导管部均有表达,尤其在毛母质细胞呈强阳性表达.结论 FGFR2在胎儿皮肤中的表达与分布与毛囊的发生、发育密切相关.FGFR2的表达上调可能促进毛囊干细胞的增殖,并诱导其定向分化形成终末组织功能细胞.     

欧几里德几何距离矩阵法对FGFR2 Ser252Trp点突变小鼠头颅形状特征的分析

目的 通过定量分析模拟Apert综合征患者的FGFR2 Ser252Trp突变小鼠模型和野生型小鼠头颅表型,并与Apert患者所表现出来的异常头颅颜面特征进行比较,探讨所建立的Apert小鼠模型能否真实地模拟Apert综合征患者的头颅表型.方法 采用蚂蚁啃食的方法制备Ser252Trp突变小鼠和同窝对照小鼠头颅标本,用三维坐标测量仪检测头颅27个标记点的三维坐标值,用欧儿里德几何距离矩阵法(euclidean distance matrix analysis,EDMA)对突变小鼠和对照小鼠头颅三维数据进行处理和统计分析.结果 Ser252Trp突变小鼠头颅形状与同窝对照组相比具有统计学差异(P<0.01),突变小鼠头颅长度缩短,且头颅前端缩短比后部缩短更严重,头颅面部鼻骨长度、前颌骨、上颌骨及颧骨长度明显缩短(P<0.01),眼间距和额骨宽度变宽,颅腔长度有所缩短,宽度增加,颅顶升高(P<0.01),这与Apert患者颅而的临床表现高度相似:眼间距增宽,面中部发育不良,鼻骨缩短,上颌骨发育低下,突眼,颅腔变宽呈圆鼓状.结论 FGFR2 Ser252Trp突变小鼠从表型上真实地反映Apert患者的头颅颜面特征,可以作为人类Apert综合征的较好模型用于有关疾病致病机制、手术及药物治疗的研究模型.     

脊髓星形胶质细胞FGFR3在神经病理性疼痛中的表达改变及作用

目的观察成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3)在坐骨神经分支选择结扎后神经病理性疼痛中大鼠脊髓的表达变化。方法 40只SD雄性大鼠,分为假手术对照组(sham)和手术组(SNI),每组20只。使用坐骨神经分支选择结扎方式建立大鼠神经病理性疼痛模型,观察sham组和SNI组大鼠术前1 d以及术后1、3、5、7 d的行为学改变并检测2组大鼠的机械痛阈,采用免疫荧光双标观察2组大鼠术后7 d脊髓背角星形胶质细胞FGFR3和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的共表达,Western blot法检测SNI术后各时间点2组大鼠FGFR3蛋白表达。结果术前1 d 2组大鼠机械痛阈无明显差异(P>0.05),术后1、3、5、7 d SNI组大鼠机械痛阈值分别为(6.67±2.12)、(3.17±0.99)、(2.33±0.65)、(1.75±0.31),相应时间点sham组大鼠机械痛阈值分别为(12.75±2.83)、(12.33±2.84)、(12.08±2.57)、(11.50±2.65),SNI组大鼠机械痛阈在各时间点较sham组明显降低(P<0.05);术后7 d患侧脊髓背角GFAP阳性表达的细胞,FGFR3也呈阳性表达;术后1、3、5、7 d sham组大鼠脊髓FGFR3蛋白表达分别为(0.192 8±0.013 0)、(0.213 6±0.021 4)、(0.294 6±0.025 1)、(0.266 4±0.027 3),相应时间点SNI组大鼠脊髓FGFR3蛋白表达分别为(0.280 4±0.015 3)、(0.328 2±0.026 3)、(0.567 7±0.027 0)、(0.528 8±0.032 8),与sham组比较,SNI组脊髓FGFR3蛋白表达随时间增长而上调(P<0.05)。结论在神经病理性疼痛过程中FGFR3表达下调并可能参与GFAP的激活,提示FGFR3在神经病理性疼痛的发生以及发展过程中可能发挥着重要的作用。     

TNP-470对肺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用

目的:应用体外细胞培养法探讨O-(氯乙酰-氨甲酰基)烟曲霉素(TNP-470)对肺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖的影响及其可能机制.方法:免疫细胞化学方法检测血管内皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、胚胎肝激酶1(Flk-1)、纤维细胞生长因子受体(FGFR)的表达.结果:TNP-470以剂量依赖方式抑制肺癌细胞条件培养液或细胞粉碎液诱导的血管内皮细胞PCNA,Flk-1,FGFR的表达,与对照组比较差异均显著(P<0.05).结论:TNP-470能够相对特异地抑制血管内皮细胞增殖,可能与通过降低内皮细胞表面Flk-1,FGFR的表达,进而减弱酪氨酸激酶受体介导的细胞增殖途径有关.     

缺氧时前列腺间质细胞生长类激素受体的表达

目的观察缺氧条件下前列腺间质细胞WPMY-1体外培养细胞膜表面生长类激素受体表达的变化。方法 WPMY-1在缺氧或有氧环境中体外培养。接种后4,8,12,24,48 h分别用RT-PCR和免疫组化法检测其细胞膜表面生长类激素受体[表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR),成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growthfactor receptor,FGFR),转化生长因子受体(transforming growth factor receptor,TGFR),胰岛素样生长因子受体(insulin-likegrowth factor receptor,IGFR),血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)]基因和蛋白表达。结果较有氧环境,缺氧条件下WPMY-1细胞膜表面各类生长因子受体表达均增加,以EGFR为例,缺氧培养4 h后EGFR mRNA为0.34±0.04,略高于有氧条件下的0.29±0.01,但两者比较差异无统计学意义(P=0.149);此后观察时间点缺氧条件下细胞EGFR mRNA表达均显著高于有氧条件下。免疫组化显示缺氧条件培养4 h后细胞膜表面EGFR阳性表达为(7.11±0.31)/200个细胞,显著高于有氧条件的(6.00±0.29)/200个细胞(P=0.011),此后观察时间点除12 h差异无统计学意义外(P=0.166),缺氧条件下细胞EGFR蛋白表达均显著高于有氧条件下。结论缺氧可上调前列腺间质细胞膜表面上述各类生长因子受体表达。