白藜芦醇对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的观察白藜芦醇对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法培养的人RPE细胞系分为正常对照组、过氧化氢损伤组和不同浓度白藜芦醇保护组,正常对照组不作任何处理,过氧化氢损伤组加入200mg/L过氧化氢,白藜芦醇保护组加入不同浓度(12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)后加入200μmol/L过氧化氢。采用CCK-8检测细胞抑制率,SOD及MDA试剂盒检测细胞培养液中SOD与MDA含量。结果通过CCK-8法检测发现50mg/L、100mg/L白藜芦醇保护组作用2h,8h,24h可以明显降低细胞抑制率,且与氧化损伤组相比差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇保护组50mg/L、100mg/L SOD活性与氧化损伤组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇保护组12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L 2h、8h、24h MDA含量与氧化损伤组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白藜芦醇对过氧化氢诱导的人RPE细胞氧化损伤有一定的保护作用,提示白藜芦醇对AMD的预防和治疗有一定的作用。     

白藜芦醇对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察白藜芦醇预处理对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:40只雄性SD大鼠随机分成4组,每组10只,即生理盐水灌胃28天进行假手术组、白藜芦醇75 mg/(kg·d)灌胃28 d进行假手术组、生理盐水灌胃28 d进行手术组、75 mg/(kg·d)白藜芦醇灌胃28 d进行手术组。生理盐水或者75 mg/(kg·d)白藜芦醇灌胃结束手术组大鼠通过结扎冠状动脉左前降肢进行心肌缺血再灌注,缺血时间为40 min,再灌注时间为150 min。假手术组大鼠只插管不结扎。再灌注结束检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量,心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的表达。结果:心肌缺血再灌注可使LDH、MDA水平升高(P﹤0.01),NO、SOD含量降低(P﹤0.01)。白藜芦醇能够降低缺血再灌注损伤中LDH以及MDA的水平(P﹤0.05),增加SOD和NO含量(P﹤0.05),并能在缺血再灌注损伤中上调Bcl-2、下调Bax表达。结论:白藜芦醇能够抑制心肌缺血再灌注损伤中的氧化应激和细胞凋亡,从而起到保护心血管的作用。     

黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老作用研究——Ⅱ.超微形态研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,在用扫描和透射电镜观察细胞衰老过程中超微结构变化的同时,动态观察黄芪抗细胞衰老效应。结果表明,体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞成活至52代,而含0.2%黄芪制取液的培养基使细胞成活至77代。扫描电镜下可见细胞随增龄而由扁平长梭形变为圆球形,伪足、微绒毛递增,细胞胞体变小,细胞凹陷增多且逐步加深。透射电镜显示细胞增龄变化主要为细胞核逐渐变小,核进行性凹陷加深,核膜从部分融合到全部崩解;异染色质渐增,而常染色质递减;核仁变小且疏松;线粒体减少,嵴少,基质凝聚,肿胀,空泡化;粗面内质网减少,脱粒,游离核糖核蛋白体增多;高尔基复合体减少,其囊泡排列紊乱且肿胀;溶酶体递减;脂褐质递增.黄芪组细胞衰老过程中细胞器的变化与上述非黄芪组细胞的衰老变化规律基本相同;但其改变程度显然较轻,变化速率相对缓慢.特别是黄芪组细胞之高尔基复合体、中心体特别发达,虽细胞已衰老而它们却不甚衰老.研究证明黄芪具抗衰延寿的良好效应,以其做为抗衰老延寿命的药物值得高度重视和大力开发.     

黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老作用研究——Ⅱ.超微形态研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,在用扫描和透射电镜观察细胞衰老过程中超微结构变化的同时,动态观察黄芪抗细胞衰老效应。结果表明,体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞成活至52代,而含0.2%黄芪制取液的培养基使细胞成活至77代。扫描电镜下可见细胞随增龄而由扁平长梭形变为圆球形,伪足、微绒毛递增,细胞胞体变小,细胞凹陷增多且逐步加深。透射电镜显示细胞增龄变化主要为细胞核逐渐变小,核进行性凹陷加深,核膜从部分融合到全部崩解;异染色质渐增,而常染色质递减;核仁变小且疏松;线粒体减少,嵴少,基质凝聚,肿胀,空泡化;粗面内质网减少,脱粒,游离核糖核蛋白体增多;高尔基复合体减少,其囊泡排列紊乱且肿胀;溶酶体递减;脂褐质递增.黄芪组细胞衰老过程中细胞器的变化与上述非黄芪组细胞的衰老变化规律基本相同;但其改变程度显然较轻,变化速率相对缓慢.特别是黄芪组细胞之高尔基复合体、中心体特别发达,虽细胞已衰老而它们却不甚衰老.研究证明黄芪具抗衰延寿的良好效应,以其做为抗衰老延寿命的药物值得高度重视和大力开发.     

β—胡萝卜素对氧化镍致人肺成纤维细胞DNA损伤作用的影响

目的 探讨β—胡萝卜素对氧化镍致人肺成纤维细胞DNA损伤作用的影响。方法 应用单细胞凝肢电泳技术(single cell gel electrophoresis,SCGE)或称彗星电泳技术(comet assay)比较研究。结果 氧化镍(Ni2O3)可引起人肺成纤维细胞DNA双链断裂损伤，Ni203与β—胡萝卜素共同处理的人肺成纤维细胞的DNA双链损伤较之Ni2O3单独处理组降低(P＜0．01)。结论 氧化镍可引起人肺成纤维细胞DNA双链损伤。β—胡萝卜素可明显降低Ni2O3对人肺成纤维细胞DNA链的损伤作用。SGGE是一种简便、快速、敏感及经济的细胞基因毒性检测方法，可应用于各级水平的环境与人类疾病(镍污染)检测与研究。     

bFGF对脊髓损伤的保护作用及其机制

碱性成纤维细胞生长因子是一种对神经细胞的生长、发育、分化及再生起重要调节作用的蛋白质,对脊髓损伤的修复具有重要作用。本文就碱性成纤维细胞生长因子在脊髓损伤中的作用机制予以综述。     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞的生长抑制及细胞外基质合成的影响

目的:研究姜黄素对体外培养人胚肺成纤维细胞(HEF-5)MRC-5增殖、胶原表达和周期分布的影响。方法:体外培养MRC-5细胞,用姜黄素处理,分为正常对照组和10、20、30、40、50、60μmol/L姜黄素组。于37℃继续培养24 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,用天狼猩红染色法测定细胞内胶原的表达,用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:姜黄素呈剂量和时间依赖性抑制MRC-5细胞的增生(P<0.05),并降低胶原的生成(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示,细胞主要停滞于G1期。结论:姜黄素能抑制MRC-5细胞的增殖和胶原的增加,并使细胞周期停滞在G1期,提示姜黄素可能通过抑制MRC-5细胞的增殖来减少细胞外基质积聚,从而发挥其抗肺纤维化的作用。     

辅酶Q10对人RPE细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究

目的:分析辅酶Q100对人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,RPE)细胞氧化应激损伤的作用效果与机制。方法:实验分为4组:氧化应激模型组,用H_2O_2进行处理;实验高、低剂量组,采用不同剂量辅酶Q10预处理细胞,然后再经H_2O_2诱导;正常细胞对照组,不用辅酶Q10和H_2O_2处理。采用CCK-8法检测细胞活性;应用DCFH-DA荧光探针检测法检测细胞内活性氧含量;Western blot法检测细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax、磷酸化-Akt、Akt的表达量。结果:辅酶Q10能够增强H_2O_2处理后的人视网膜色素上皮细胞的活性;降低由于H_2O_2引起的细胞内活性氧的水平,抑制人视网膜色素上皮细胞中Caspase-3、Bax的表达,促进细胞中Bcl-2的表达水平;抑制人视网膜色素上皮细胞中Akt的磷酸化水平。结论:辅酶Q10对人RPE细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制细胞氧化损伤与凋亡发生相关因子的表达,促进凋亡抑制因子Bcl-2表达,抑制Akt发生磷酸化等多个方面起作用。     

人胚肺成纤维细胞感染人巨细胞病毒不同时间病毒载量的分析

目的:检测人巨细胞病毒(HCMV)感染人胚肺成纤维细胞(HELF)后不同时间点HCMV DNA载量,以明确HCMV感染HELF的时效性.方法:将HCMV接种HELF细胞,收集感染后3,5,8,10,15,20,30,60,120 min时间点细胞,提取病毒DNA,以即刻早期1基因(IE-1)为靶基因进行荧光定量PCR检...     

百草枯对人胚肺成纤维细胞CTGF表达的影响

目的：探讨百草枯中毒对人胚肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子（CTGF）的影响,进一步阐明百草枯致中毒性肺纤维化的发病机理。方法：体外培养人胚肺成纤维细胞（MRC-5）,通过ELISA法检测经过百草枯处理后的细胞CTGF的表达情况。结果：正常MRC-5细胞分泌少量CTGF ,经过不同浓度百草枯处理后的人胚肺成纤维细胞48～72h细胞CTGF浓度随时间变化而明显增加（P＜0．05）,在72h CTGF浓度有大幅度的提高。结论：百草枯中毒后人胚肺成纤维细胞表达CTGF明显上调,明显高于正常细胞,提示在百草枯中毒后肺成纤维细胞CTGF表达增加,进而导致肺纤维化。     

白藜芦醇调控SIRT1改善高脂小鼠肾损伤的作用及机制研究

目的: 探究白藜芦醇(RSV)对高脂小鼠肾功能的影响及其调控SIRT1抑制氧化应激反应改善小鼠肾损伤的作用机制。方法: 选取30只6周龄C57BL/6J小鼠构建高脂小鼠模型,将小鼠分为对照组(CTRL组)、高脂组(HL组)、白藜芦醇组(RSV组)三组,各10只。喂养18周后取血检测小鼠血脂、肌酐(CRE)水平;采用HE、免疫组化染色观察小鼠肾脏病理变化;采用Western blot和RT-PCR法观察小鼠肾脏SIRT1、氧化应激相关蛋白的变化。结果: RSV组小鼠血TG、TC、LDL-C及肌酐(CRE)水平均降低,肾组织中系膜增生和纤维化程度减少,纤维粘连蛋白(FN) 的表达增加,小鼠肾脏中SIRT1及抗氧化酶GPx4、SOD2表达增加。结论: RSV通过调控SIRT1通路提高抗氧化酶的表达,抑制肾组织氧化应激反应改善了高脂小鼠诱导的肾功能损伤。     

白藜芦醇对人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP及亲代细胞作用的研究

目的探讨白藜芦醇（Res）对人胃癌耐药细胞系SGC7901/DDP及亲代细胞作用机制的研究。方法采用MTT法和集落形成试验等方法观察SGC7901/DDP及亲代细胞在Res作用后,细胞生长曲线、生长抑制等方面的变化。结果MTT法结果表明,Res对SGC7901/DDP及亲代细胞具有明显的抑制作用,SGC7901/DDP细胞在Res作用0.5~1d内较亲代细胞敏感,在2d后开始表现出耐药性,3d后则与亲代细胞没有差别。结论Res对人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP及亲代细胞具有明显的抑制作用,可能是通过诱导肿瘤细胞发生坏死和凋王引起的。     

氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响

目的探讨氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响。方法不同浓度过氧化氢（H,0,）作用于人胰腺导管上皮细胞6～48h,采用四甲基偶氮唑盐（MTr）比色法检测细胞光密度（OD）,绘制细胞生长曲线,计算细胞存活率;采用碘化丙啶（PI）单染色法检测细胞周期,计算细胞增殖指数（proliferationindex,PI’）。结果细胞处理6h．H202300μmol／L组存活率下降[（79．10±9．21）％VS．（100．00±14．84）％,P〈O．05]。12hH202300vμmoYL组OD值降低（O．277±0．022vs．0．309±0．015;P〈0．05）,存活率明显下降f（56．90±29．91）％vs．（100．00±20．91）％,P〈0．01]。24hH20,100、200、300~mol／L组OD值明显降低（0．493±0．011,0．434±0．029,0．373~0．014VS．0．529~0．011;P〈0．01）．存活率明显下降[（87．95±3．73）％,（67．61±9．87）％,（46．84±4．76）％VS．（100．00~3．85）％;P〈0．01】,PI’明显降低【（25．50~1．81）％。（25．20~1．80）％,（21．11＋1．78）％VS．（32．20~2．33）％;P〈0．011。48hH202251~mol／L组OD值明显升高（0．683~0．014VS．0．587~0．024,P〈0．01）,存活率明显升高[（127．39~3．99）％VS．（100．00~6．72）％;P〈0．011,H20225、50~moUL组PI’明显升高【（44．20~4．75）％,（40．50~2．67）％VS．（35．40~1．25）％;P〈0．01】;而H202100、200、300txmol／L组OD值明显降低（0．533±0．011,0．440±0．018,0．376~0．003VS．0．587~0．024;P〈0．01）,存活率明显下降『（84．74±3．08）％,（58．20±5．10）％,（39．87±0．71）％vs．（100．00±6．72）％;P〈0．01】,PI’明显降低f（24．30±1．83）％,（21．97~1．82）％,（16．94±3．55）％vs．（35．40±1．25）％;P〈0．011。结论低浓度H202显著促进人胰腺导管上皮细胞增殖,呈时效及量效关系：反之,高浓度H,0,抑制细胞增殖。     

二甲亚砜对染毒支气管上皮细胞的保护作用分析

目的在观察铀矿粉对体外培养的支气管上皮细胞的毒性作用同时,加入二甲亚砜,以了解其在支气管上皮细胞受铀矿粉染毒时的可能保护机制。方法将不同浓度的铀矿粉与体外培养的支气管上皮细胞进行长时间接触,分为对照组、染毒组和二甲亚砜（DMSO）保护组,通过血清抗性实验等,观察各组间细胞受损的情况。结果随着铀矿粉浓度的增高,支气管上皮细胞受损明显加重,加入二甲亚砜的支气管上皮细胞受损情况好于未加入者。DMSO对铀矿尘作用于BEAS-2B细胞后,可引起细胞DNA断裂,造成细胞拖尾率、彗星尾部DNA含量、尾长、尾部面积、尾距增加具有较好的抑制作用。结论铀矿粉对支气管上皮细胞有明显的恶性转化作用,可能是铀矿粉对肺损伤的主要机制,二甲亚砜具有一定的保护作用。     

白藜芦醇通过保护线粒体功能延缓骨髓间充质干细胞衰老

目的: 探讨白藜芦醇对骨髓间充质干细胞（MSC）衰老的影响及其机制。方法: 分离SD乳鼠（7日龄）MSC,传代培养至第3代后检测0、1、10、50 g/L D-半乳糖对MSC衰老的影响,确定D-半乳糖诱导MSC衰老的最佳浓度。再将细胞随机分为10、50、100 μmol/L白藜芦醇组及对照组。衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色观察各组细胞衰老变化;DCFH-DA染色检测总活性氧水平;MitoSOX Red染色检测线粒体活性氧水平;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1法）检测线粒体膜电位变化;纯化线粒体膜通道孔（mPTP）比色法检测线粒体膜通道开放水平;蛋白质印迹法检测衰老相关蛋白p53、p16、γ-H2AX表达和细胞质内线粒体细胞色素C外泄水平。结果: 10、50 g/L D-半乳糖可明显增加SA-β-gal染色阳性MSC数量和线粒体活性氧水平（均P < 0.01）。与对照组比较,白藜芦醇组SA-β-gal染色阳性细胞数减少（均P < 0.01）,p53、p16和γ-H2AX表达减少,细胞内总活性氧和线粒体活性氧水平下降（均P < 0.01）,线粒体膜电位下降（P < 0.05或P < 0.01）,膜通道开放水平降低（P < 0.05或P < 0.01）,细胞质内细胞色素C外泄减少。结论: 白藜芦醇可保护MSC线粒体功能,延缓MSC衰老。     

樱桃汁和草莓汁激活Nrf2信号通路对砷诱导的人支气管上皮细胞损伤的保护作用

目的：研究草莓汁和樱桃汁对NF-E2相关因子2（Nrf2）信号通路的影响,以及两种果汁对砷诱导的人支气管上皮（HBE）细胞损伤的保护作用。方法选择人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,分为空白对照组、萝卜硫素组,以及樱桃（草莓）汁1∶10、1∶20、1∶40和1∶80组（果汁稀释比例分别为1∶10、1∶20、1∶40和1∶80）,采用抗氧化反应原件（ARE）荧光素酶报告基因和Westerm blotting筛选并确证两种果汁对Nrf2信号通路的影响;选择HBE细胞,分为空白对照组、萝卜硫素组,以及樱桃（草莓）汁1∶10、1∶20、1∶40组（果汁稀释比例分别为1∶10、1∶20和1∶40）,采用QuantiChrom谷胱甘肽（GSH）试剂盒测定两种果汁对内源性抗氧化剂GSH水平的影响;采用MTT法和细胞转染技术评价两种果汁对砷诱导的HB E细胞的保护作用。结果草莓汁和樱桃汁能够剂量依赖地增强ARE荧光强度,上调MDA-MB-231细胞中Nrf2及其下游基因NADPH苯醌氧化还原醇（NQO1）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γGCS）蛋白的表达;两种果汁能够提高HBE细胞内源性抗氧化剂GSH水平;两种果汁和砷处理HBE细胞后,果汁预处理的细胞生存率高于砷单独处理的细胞生存率,两种果汁表现出对砷诱导细胞毒性的保护作用,而这种保护作用在转染Nrf2-siRNA后消失。结论草莓汁和樱桃汁通过激活Nrf2信号通路抑制砷诱导的细胞毒性,对HBE细胞具有保护作用。     

GPC3-WNT-JNK通路介导脂多糖诱导肺局部细胞炎症

目的：探讨GPC3在脂多糖（LPS）诱导的气道上皮细胞局部炎症微环境中的重要作用,并以GPC3-WNT通路介导的调控机制为核心进一步研究LPS诱导的肺局部炎症分子机制。方法：LPS经气道滴入小鼠后模拟肺损伤模型,检测肺泡灌洗液及肺组织中GPC3表达情况以及其表达位置。培养人肺16HBE细胞,LPS刺激16HBE细胞建立急性炎症细胞,予以RT-PCR检测其细胞中GPC3、TNF-α和TGF-β的mRNA表达情况,予以Western Blot检测GPC3、TGF-β和TNF-α蛋白表达情况。加入外源性GPC3刺激16HBE细胞,建立GPC3高表达细胞模型,检测炎症因子TNF-α和TGF-β mRNA的表达情况。不同浓度GPC3-WNT通路抑制剂处理细胞,观察上述指标变化。结果：LPS诱导ALI小鼠模型显示GPC3表达水平显著提高。此外,LPS在体外也产生了GPC3表达升高的现象。同时,外源性GPC3蛋白刺激支气管上皮细胞产生多种炎症因子,可能提示GPC3具有促炎作用。此外,GPC3诱导支气管上皮细胞系炎性细胞因子的产生被WNT-JNK通路的抑制剂阻断,提示ALI/ARDS过程中GPC3参与肺局部的潜在信号通路。结论：LPS刺激支气管上皮细胞的过程中存在一条线性信号通路即GPC3-WNT-JNK。这一发现可能为ALI/ARDS的治疗和生物标志物的开发提供一个新的分子靶点和分子机制。     

周期性机械牵张对人支气管上皮细胞（HBE）AOP5的影响

目的探讨周期性机械牵张对人支气管上皮细胞（HBE）水通道蛋白5（AQP5）表达的影响及可能的作用机制。方法利用周期性机械牵张加力装置对HBE细胞进行不同作用时间刺激,采用RT—PCR检测AQP5mRNA的表达,Western blot测定AQP5蛋白的表达及ERK的磷酸化水平变化。结果2000／zstrain机械牵张刺激时间依赖性的提高HBE细胞AQP5基因转录水平;加力3h时,AQP5蛋白表达量明显增加,至12h达到峰值。在2000μtstrain的周期性机械牵张刺激下,HBE细胞ERK的磷酸化活化具有时间依赖性,在1h时即与对照相比差异极显著（P〈0．01）。结论2000μstrain机械牵张刺激增加人支气管上皮细胞AQP5基因表达,ERK的磷酸化修饰有可能参与HBE细胞对周期性机械牵张刺激的应答。     

白藜芦醇对肝脂肪积累的抑制作用及其分子机制

目的研究白藜芦醇对SIRT基因家族表达的影响,探讨白藜芦醇抑制不同条件引起脂肪积累的分子机制。方法分别用高糖、高糖＋白藜芦醇、高脂、高脂＋白藜芦醇的培养基处理肝细胞HL7702,油红O染色法检测细胞内脂肪积累水平;后提取各组蛋白质,Western blotting方法检测不同组间SIRT基因家族各成员的表达情况。结果白藜芦醇能明显降低高脂引起的脂肪积累,对高糖引起的脂肪积累作用不明显;在高脂条件下,白藜芦醇可以促使SIRT1、SIRT3、SIRT4和SIRT5的表达增加,使SIRT7表达降低;在高糖条件下,白藜芦醇可以促使SIRT1、SIRT4、SIRT5和SIRT7的表达增加。结论 SIRT1、SIRT3和SIRT7是白藜芦醇抑制脂肪积累的关键基因。     

Effects of Res on proliferation and apoptosis of human cervical carcinoma cell lines C33A, SiHa and HeLA

Objective： To explore the effects of Res on the proliferation and apoptosis of human cervical cancer cell lines C33A, SiHa and HeLa. Methods： Inhibition rates by different concentrations of Res were calculated using MTT method. Apoptosis rates and cell cycles were measured and examined by flow cytometry （FCM）. Morphological configuration of apoptotic cells were observed under the fluorescence microscope. Results： The growth of cancer cells was inhibited by Res of varied concentrations in a time-and dose-dependent manner （P〈0.01）. The cells showed characteristic apoptosis morphologic changes under fluorescence microscope. Res exerted no effects on cell cycles. Conclusion： Res inhibits the growth of cervical cell lines C33A, SiHa and HeLa by inducing cell apoptosis in a time- and dose-dependent manner.