阻断ERK信号通路降低大鼠脑创伤后MMP-9的表达及减轻脑水肿

目的 观察并探讨阻断ERK通路激活对SD大鼠脑创伤后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达变化及脑水肿形成的影响及意义。方法 取健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为：对照组：只在颅骨上做一直径约为4 mm的骨窗,不作脑创伤;脑创伤组：制作改进式Feeney’s创伤性脑损伤模型;ERK抑制组：脑创伤前15 min股静脉注射ERK抑制剂（SCH772984,500 μg/kg）,每组30只/组大鼠。制作改进式Feeney’s 脑创伤模型后,分别在脑创伤后2 h、2 d时断头取脑,Evans Blue法测定血脑屏障通透性变化,干湿比重法测定脑组织含水量,RT-PCR法和Western blotting法检测各组大鼠脑组织ERK磷酸化的水平及MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平。结果（1）与对照组比较,脑创伤组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在伤后2 h和2 d均出现明显上升（P<0.01）,MMP-9mRNA和蛋白的表达在脑创伤后2 d时表达也出现显著增高（均P<0.01）;与脑创伤组比较,ERK抑制组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在各时间点均明显下降（P<0.01）,MMP-9 mRNA和蛋白在伤后2 d的过表达水平也较脑创伤组出现明显降低（均P<0.01）;（2）脑创伤组大鼠的血脑屏障通透性较对照组在伤后出现显著升高（P<0.05）,ERK抑制组大鼠的血脑屏障通透性则较脑创伤组出现明显降低（P<0.05）;脑创伤组大鼠的脑含水量在伤后在2 d时出现显著增加（P<0.01）,ERK抑制组大鼠的脑含水量则较脑创伤组有明显降低（P<0.01）。结论 阻断ERK通路过度的活化可显著降低大鼠脑创伤后MMP-9高表达,减轻大鼠血脑屏障破坏及创伤性脑水肿,提示ERK信号通路在脑创伤后的过度活化可通过调节MMP-9的表达在创伤性脑水肿中发挥重要作用。     

脑疏宁对颅脑创伤后大鼠血脑屏障通透性及MMP-9表达的影响

目的观察中药脑疏宁对创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)通透性及脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响,探讨中药保护血脑屏障的作用机理.方法按Feeney自由落体撞击法造成TBI模型,采用免疫组织化学技术观察大鼠脑组织MMP-9表达.结果模型组创伤后24h BBB破坏,脑组织含水量增加,病灶区MMP-9蛋白表达增高,脑疏宁组BBB通透性、脑组织含水量及MMP-9表达较模型组降低(P＜0.01).结论颅脑损伤后MMP-9表达增高,促使BBB破坏,导致血管源性脑水肿.中药脑疏宁可以保护BBB,降低脑组织含水量,其作用可能与抑制MMP-9在损伤脑组织中的表达有关.     

大鼠脑出血后MMP-9的表达与脑含水量变化的关系

目的:探讨大鼠脑出血(ICH)后基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达和脑含水量变化的关系.方法:采用未抗凝新鲜自体股动脉血注入大鼠尾状核建立脑出血动物模型.湿重-干重法测定脑含水量的变化.结果:MMP-9在ICH后6 h开始表达,24～48h最明显(P＜0.01),6 d仍有较低水平表达.脑组织含水量ICH后6 h开始增加,24～72 h达高峰(P＜0.01),6 d基本恢复正常水平.结论:MMP-9可能参与急性期脑水肿的形成.     

粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血后脑水肿及MMP-9的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠脑出血(ICH)后脑水肿的影响及可能机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组,断尾取自体血法制备大鼠ICH模型,治疗组于造模1小时后腹腔注射重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)60μg/kg。3组大鼠于术后6、12、24、48、72h和7d处死,干湿重法测定脑组织含水量,免疫组化染色观察MMP-9的动态表达。结果模型组脑组织含水量明显高于假手术组(P<0.05),在造模后48、72h最明显,且与6、12、24h和7d相比差异显著(P<0.05);治疗组脑组织含水量明显低于模型组(P<0.05)。模型组脑组织MMP-9的表达明显高于假手术组(P<0.05);治疗组各时间点MMP-9的表达低于模型组(P<0.05)。结论 G-CSF可减轻ICH后脑水肿程度,其机制可能与G-CSF抑制MMP-9表达密切相关。     

大鼠脑缺血再灌注后MMP-9、MMP-2表达与脑水肿的关系

目的:观察大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的动态变化规律及其与脑水肿的关系。方法:将80只SD大鼠分为假手术组(n=10)和实验组(再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d和10 d组,n=10)。线栓法复制大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d和10 d测定大鼠神经功能缺损评分;断头取脑,按Elliot公式计算脑组织含水量,免疫组织化学法测定相应时间点MMP-2、MMP-9免疫阳性细胞数。结果:实验组再灌注后6 h出现神经功能障碍,48 h最严重,10 d仍未完全恢复,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组再灌注6 h出现脑水肿,48 h最严重,7 d时脑水肿仍存在,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组再灌注6 h有少量的MMP-9免疫阳性细胞,12 h开始增多,48 h达到高峰,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组再灌注24 h见少量MMP-2免疫阳性细胞,48 h逐渐增多,72 h最多,7 d和10 d仍有较多表达,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:脑缺血再灌注后MMP-2和MMP-9均升高,两者表达方式的不同,提示MMP-9主要参与脑缺血再灌注后脑水肿形成,MMP-2可能与组织修复和神经再生有关。     

甲基强的松龙对创伤性脑水肿中AQP4及MMP-9的影响

目的研究大鼠创伤性脑水肿皮质中AQP-4与MMP-9的表达关系及甲强龙对其表达的影响。方法采用成年雄性SD大鼠随机分为甲强龙组（n=25）、模型组（n=25）、假手术组（n=5）;甲强龙组和模型组均采用改进Feeney法制作脑损伤模型。甲强龙组致伤后即刻腹腔内给药,模型组则注射对应生理盐水。根据处死时间分为6h、24h、3d、5d、7d,5组。过度麻醉并断头取脑,对损伤皮层采用HE染色及免疫组化进行AQP4与MMP-9的检测。结果在模型组与甲强龙组中6h已可见AQP4与MMP-9的表达,MMP-9与AQP-4的表达均在3d达到高峰,模型组AQP4及MMP-9的表达显著高于甲强龙组（P〈0.05）,相关系数（r=0.753,P〈0.01）。结论创伤性脑损伤后大鼠AQP4与MMP9的表达呈正相关;甲强龙冲击治疗能够通过下调AQP4及MMP9的表达来发挥减轻脑水肿的作用。     

p38MAPK对大鼠肾缺血再灌注损伤早期MMP-9表达的调控

目的 探讨p38MAPK对大鼠肾缺血再灌注后MMP-9表达的调控情况及它们在肾缺血再灌注损伤中的作用.方法 48只健康雄性SD大鼠,分组建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,测定各组实验大鼠血清肌酐水平的变化,应用免疫组化二步法检测p38MAPK、MMP-9表达的变化.结果 与假手术组比较,缺血再灌注各组血清肌酐水平升高,缺血45min再灌注,24h达高峰(P＜0.01).MMP-9蛋白在假手术组呈少量散在表达或不表达,缺血45min再灌注6h有少量表达,再灌注12、24h及72h呈阳性表达,在24h达高峰(P＜0.01);p38MAPK蛋白在假手术组呈少量散在表达或不表达,缺血45 min,再灌注6、12h及24 h呈阳性表达,12h达高峰(P＜0.01).p38MAPK,MMP-9蛋白的表达与血清肌酐水平的变化呈显著正相关.结论 肾缺血再灌注可激活p38MAPK,活化的p38MAPK可以上调MMP-9蛋白的表达,可能促进了肾缺血再灌注损伤的发生和发展.     

创伤性脑损伤后脑水肿的分类及机制

创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）,也称为脑外伤,是指由创伤引起的脑组织损害。在当今社会仍是影响健康的常见疾病之一。损伤的原因大多为坠落伤、斗殴和交通事故。目前脑损伤的严重程度不断加重,其中交通事故占主要作用,虽然其引起的颅脑损伤在住院患者中所占的比例较小,但死亡率、致残率却很高。一些国家每年达100万以上,死亡率为9／10万,占住院全部死亡数的1％;而在我国每年有数十万人死于创伤,其中50％死于致命的创伤性脑损伤,15％～20％的死亡者年龄在5—35岁。TBI伤后,均有不同程度的脑水肿的发生和存在,引起病情进一步恶化,如果脑水肿治疗理想,能显著降低患者病死率、致残率,改善患者预后。     

黄芩苷对哮喘大鼠 p38 MAPK 信号通路影响初探

目的：初步探讨黄芩苷防治支气管哮喘的作用机理。方法用卵蛋白致敏大鼠制备支气管哮喘动物模型,经黄芩苷干预治疗,运用免疫组化法及 Western Blot 法检测各组大鼠肺组织匀浆中 p38 MAPK 磷酸化蛋白表达量。结果两种检测方法均显示,p38 MAPK 磷酸化蛋白水平在模型组中有明显的增加,地塞米松组、黄芩苷高剂量组和低剂量组的 p38 MAPK 磷酸化蛋白水平均低于模型组（P ＜0．05）。结论黄芩苷能有效治疗哮喘的作用与抑制哮喘大鼠 p38 MAPK 信号通路的表达密切相关。     

鼻渊合剂对急性鼻窦炎模型大鼠鼻窦黏膜p38MAPK信号通路及IL-9/IL-10的影响

目的 观察鼻渊合剂治疗急性鼻窦炎的临床疗效,并探讨其对大鼠急性鼻窦炎模型鼻窦黏膜p38MAPK信号通路及IL-9、IL-10的影响。方法 建造大鼠急性鼻窦炎模型,设中、西药组、生理盐水组,分别使用鼻渊合剂、克拉霉素分散片及桉柠蒎肠溶软胶囊、生理盐水灌胃,观察症状积分,并设空白组,测定造模后0、7、14、21 d鼻窦黏膜IL-9、IL-10及p-p38水平,进行统计学分析。结果 通过大鼠症状积分比较,表明中、西药都有治疗作用。造模后大鼠IL-9及p-p38水平明显增高;用药后中药、西药组大鼠鼻窦黏膜IL-9及p-p38水平随治疗周期明显下降,与生理盐水组比较有显著性差异（P<0.05）,中药组IL-9及p-p38水平下降与西药组无显著性差异。用药后中药组、西药组及生理盐水组鼻窦黏膜IL-10水平随治疗周期逐步升高,中药组、西药组与生理盐水组比较均存在显著性差异（P<0.05）,中药组与西药组比较无显著性差异。结论 鼻渊合剂治疗急性鼻窦炎有确切疗效,IL-9、IL-10参与了急性鼻窦炎发病的免疫过程,与p38MAPK通路存在一定关系,鼻渊合剂有促进IL-10、抑制p-p38活化阻断p38MAPK通路抑制IL-9产生的作用。      

重组人促红细胞生成素对大鼠急性创伤性脑损伤脑组织中基质金属蛋白酶-9及水通道蛋白-4表达的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠急性创伤性脑损伤的神经保护作用及其机制。方法健康雄性SD大鼠55只随机分为假手术组（n=5）、对照组（n=25）和EPO治疗组（n=25）;对照组和治疗组采帽改进的Feeney等的方法制作脑创伤模型,EPO治疗组在模型建立后立即腹腔注射rhEPO5000U／kg,对照组和似手术组往等时间点给予等量生理盐水。根据伤后处死时间点不同每组再分为5个亚组,即6h、24h、48h、3d、7d组．每个亚组5只动物。断头、取脑,行HE染色和免疫组织化学方法检测大脑皮层组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及水通道蛋白-4（AQP-4）的表达。结果脑创伤大鼠6h创伤灶脑组织出现MMP-9和AQP-4的表达。与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。EPO治疗组和对照组槲比较MMP-9及AQP-4的表达明显降低（P〈0．05）。结论 rhEPO对大鼠急性创伤性脑损伤有一定的神经保护作用,其机制可能是通过降低MMP-9及AQP-4的表达来实现的。     

大鼠轻度脑外伤后水通道蛋白9在大脑皮质及海马的表达变化

目的研究轻度脑外伤（traumatic brain injury，TBI）后水通道蛋白9（AQP9）在脑组织中的表达变化规律，初步探讨AQP9对脑外伤的作用。方法采用Feeney自由落体法制作大鼠轻度脑外伤模型。用TTC法、免疫组织化学法、RT—PCR分别检测脑组织缺血程度、AQP9的表达及双侧大脑皮质和海马AQP9mRNA的变化。结果TTC染色结果显示．损伤早期脑缺血灶不明显，但随时间的推移，逐渐扩大，于72h达最大面积。AQP9及AQP9mRNA表达变化基本一致：TBI后1h，所测区AQP9 mRNA的含量均无明显变化，至3h，双侧大脑皮质及对侧海马AQP9 mRNA的含量明显增高，6h后降低；24h后，双侧大脑皮质及海马均再次明显增高，并于48-72h达峰值。结论TBI早期和继发性损伤期AQP9表达的上调可能分别与TBI应激和能量代谢调节有关。     

重型颅脑损伤后神经源性肺水肿的临床分析

目的探讨重型颅脑损伤后神经源性肺水肿的发病机制、临床表现与诊断以及治疗方法。方法回顾性分析2001年以来收治的13例神经源性肺水肿患者的临床特点和诊治情况。结果本组救治成功6例,死亡7例。结论重性颅脑损伤合并神经源性肺水肿治疗上应兼顾颅脑损伤和肺部,尽早适时气管切开、机械通气以及激素治疗,可以提高救治成功率。     

脑星形细胞瘤MMP-9表达与MRI瘤周水肿的相关性研究

目的探讨脑星形细胞瘤MMP-9表达与瘤周水肿及病理级别的相关性。方法对48例手术及病理证实的星形细胞瘤石蜡标本进行MMP-9免疫组化染色,并分析其表达程度与瘤周水肿、肿瘤级别的关系。结果星形细胞瘤MMP-9表达与瘤周水肿、病理级别明显相关(P<0.001)。随着MMP-9表达增高,瘤周水肿范围增大,MMP-9表达与瘤周水肿呈明显正相关(rs=0.757,P<0.001)。结论脑星形细胞瘤MMP-9表达与瘤周水肿、病理级别密切相关。术前分析瘤周水肿与MMP-9表达的关系,可为临床制定手术方案、评估预后提供参考依据。     

大鼠脑出血后MMP-2和MMP-9的动态表达及七叶皂苷钠对其表达的影响

目的观察大鼠脑出血（ICH）后基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9蛋白动态表达及其与血肿周围脑组织含水量的关系,以及观察七叶皂苷钠对MMP-2、MMP-9表达的影响。方法Wistar大鼠250只随机分为4组：正常对照组10只、假手术组80只、ICH组80只和七叶皂苷钠治疗组80只,于制模后6、12、24、48、72、120h、7d和15d 8个时间点,测定各组血肿周围脑组织含水量、MMP-2和MMP-9的蛋白表达。结果治疗组神经功能缺失较ICH组明显改善（P〈0.05）;6-120h治疗组血肿周围脑组织含水量较ICH组明显减少（P〈0.05）;ICH后MMP-2蛋白表达在6h达到高峰,12h时下降,与正常对照组相比,MMP-2蛋白表达具有统计学意义（P〈0.01）;治疗组MMP-2蛋白表达在各时间点较ICH组明显减少（P〈0.01）;ICH后MMP-9蛋白表达在6h开始上升,24-48达高峰,72h时下降,与正常对照相比,具有统计学意义（P〈0.01）,其表达水平与血肿周围脑组织含水量呈正相关（r=0.949,P〈0.05）;治疗组MMP-9蛋白表达在各时间点ICH组明显减少（P〈0.01）。结论大鼠ICH后MMP-2、MMP-9蛋白的表达是ICH后早、中期脑水肿形成主要因素,七叶皂苷钠能降低MMP-2、MMP-9蛋白表达和脑组织含水量,对ICH具有保护作用。     

局灶低温治疗大鼠脑外伤对脑组织SOD、MDA的影响

目的观察局灶低温治疗对大鼠脑创伤后氧自由基的影响。方法SD大鼠84只,随机分成3组,每组28只:A组,假手术对照组:B组,脑外伤模型对照组:C组,25℃水局灶低温治疗组。除A组外各组动物均按Feeney方法造成重度脑创伤(traumaticbraininjury,TBI),B组伤后不予治疗,C组伤后30min开始给以局灶低温治疗,20～30min局灶脑温降至31℃并维持3h。各组又根据伤后观察时间长短分1、3、5和7d等四个亚组,每亚组7只。所有动物分别于伤后l、3、5、7d处死,取伤区脑组织测水含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果B组与A组比,脑组织水含量和MDA含量升高、T-SOD含量下降(1、3、5和7d组均P<0.05)。C组与B组相比,C组水含量和MDA含量降低、T—SOD含量升高(1、3、5、7d组均P<0.05)。结论对大鼠脑创伤后脑水肿,25℃水局灶低温治疗有效,减少丙二醛生成、抑制氧自由基反应可能是其作用机制之一。     

大鼠颅脑损伤后Caspase-9的表达变化及其法医学意义

目的探讨大鼠颅脑损伤后Caspase-9随时间变化的规律及其法医学意义。方法将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假损伤组以及损伤后1、6、12h及1、2、3、5、7、10d和14d共12组。采用免疫组织化学SP方法、ELISA和图像分析技术观测大鼠脑外伤后不同时间段平均光密度值、阳性面积比及血清中Caspase-9含量,并对所测数据进行统计学分析。结果 ELISA检测结果,正常对照组血清Caspase-9含量为(8.75±2.37)ng/mL,伤后12h组血清中Caspase-9含量明显高于对正常对照组,至伤后1d组血清中Caspase-9含量达到高峰,为(45.23±3.31)ng/mL,此后血清中Caspase-9含量逐渐下降,至伤后7d组血清含量降至正常范围。Caspase-9免疫组织化学染色结果,脑损伤后1～6h,损伤区周围及海马可见个别Caspase-9细胞,着色较浅,损伤后12h,出现较多的Caspase-9阳性产物,损伤至1d时阳性细胞进一步增多,达到高峰,染色明显加深,伤后2～5d有很明显的Caspase-9阳性细胞,染色较深,伤后7～14d,阳性细胞明显减少。同比之下,假损伤组阳性反应物的平均光密度值及阳性面积比均高于正常组,但差异无统计学意义(P>0.05),而在损伤1～12h之间,损伤组阳性反应物的平均光密度值及阳性面积比逐渐升高,在1d时达到高峰,分别为(0.424±0.017)OD和(19.31±1.96)%,且与正常对照组及假损伤组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),之后随着时间的延长,阳性反应物的平均光密度值及阳性面积比逐渐下降。结论大鼠脑外伤后Caspase-9的表达呈现出升高-高峰期-逐渐下降期的规律性变化,可能为法医学损伤时间推断和颅脑损伤鉴定提供一种新的指标。