3T3体外替代试验的建立及在化妆品中的安全性评价

目的 通过建立3T3中性红成纤维细胞光毒替代试验，研究运用体外替代方法在化妆品安全性评价中替代动物试验检测化妆品光毒性的可行性。     

紫草素和姜黄素在化妆品动物替代试验的研究

目的 探究化妆品中药原料紫草素和姜黄素在动物替代试验中的应用.方法 选用紫草素和姜黄素单体原料分别进行体外兔角膜上皮细胞短时暴露试验,体外3T3中性红摄取光毒性试验与皮肤变态反应:局部淋巴结试验(DA法,LLNA:DA).结果 紫草素在3个试验中结果均为阴性.姜黄素不能在兔角膜上皮细胞短时暴露试验和体外3T3中性红摄取...     

三维重组皮肤模型在体外替代遗传毒性评价中的应用

三维（3D）重组皮肤模型已证实在模拟体内代谢条件、给药浓度及反应靶器官毒性特点方面具有突出优势。近年来已有多家公司构建3D重组人工皮肤模型,且一些制药公司已将3D细胞模型应用于药物的早期毒性筛选。我国动物实验替代方法的研究仍处于起步阶段,利用3D重组皮肤模型进行体外安全性评价成为目前替代方法的研究热点之一。综述人3D重组皮肤模型在遗传毒性评价中体外微核试验和彗星试验的研究进展,并对该模型在外用药物体外替代遗传毒性评价中的应用前景进行探讨。     

应用优化的3T3细胞中性红摄取试验评价6种化妆品的光毒性

目的 建立一种针对化妆品的体外光毒性检测方法.方法 选取6批市售化妆品样品,通过摸索样品的细胞毒性,确定光毒浓度区间,设立样品加阳性对照的参比物,再进行光毒性评价,通过Phototox软件分析结果.结果 6种市售化妆品光刺激因子≤2,表明均无潜在光毒性.建立适合于检测化妆品的样品阳性对照,且与阳性对照结果均表现强光毒性...     

皮肤毒理学检验中的替代方法和整合测试评估方法

近些年,随着实验动物“3R”原则的兴起,动物替代实验的研究越来越重要。为了使国产化妆品的开发和国际标准接轨,中国加快了替代实验方法在化妆品“安全性”检验中的应用。针对化妆品对皮肤可能造成的刺激性、致敏性和光毒性等不良反应,本文分别对化妆品皮肤毒理学检验中的替代实验方法及毒理学终点相应的整合测试评估方法（IATA）进行概述。同时,本文也为三维重组皮肤模型和模式生物斑马鱼在化妆品皮肤毒性检验中的应用提供重要依据。     

光-直接多肽反应试验方法的建立及其在化学物光致敏性评价中的应用

目的 建立基于光-直接多肽反应试验(photo-direct peptide reactivity assay, photo-DPRA)的化妆品原料光致敏性体外化学评价方法,并使用该方法筛选化妆品用化学防晒剂的光致敏性。方法 将受试物与半胱氨酸多肽以1∶10的比例混合,在UVA光照(5 J/cm²)或避光处理后,再避光孵育24 h,采用高效液相色谱分析并计算半胱氨酸多肽在光照和避光条件下的消耗率,依据半胱氨酸多肽预测模型进行光致敏性预测。结果 建立的光-直接多肽反应试验能够准确区分出7种标准化学品的光致敏性,方法建立成功。使用该方法对12种化妆品用防晒剂的检测结果显示,苯基苯并咪唑磺酸被判定为具有光致敏性,其余11种防晒剂未见光致敏性。结论 光-直接多肽反应可用于化妆品原料的光致敏性高通量初筛,为建立化妆品原料的光致敏性评价替代模型提供参考。     

2种光源对体外3T3细胞光毒性试验结果的比较

目的 比较2种光源对体外3T3细胞光毒性试验结果的影响。方法 参照化学品体外3T3中性红摄取光毒性试验指导原则（OECD 432）,采用模拟阳光光源和紫外光源对6种参考物质进行试验。结果 6种参考物质在2种光源照射后其光刺激因子和平均光效应均接近OECD 432中的参考值,各个物质在无光和有光下的IC₅₀值也相近。结论 2种光源对体外3T3细胞光毒性试验结果基本无影响。     

3T3中性红摄取光毒性试验的验证研究

目的验证3T3成纤维细胞中性红摄取实验检测化学物质光毒性试验方法的可行性。方法使用两种盲样对3T3成纤维细胞进行染毒,用中性红摄取法测定细胞活性。结果 1号样品预测有潜在光毒性,2号样品预测无潜在光毒性。结论 3T3成纤维细胞中性红摄取实验可用于检测化学物质的光毒性。     

Evaluation of the skin phototoxicity of systemically administered pharmaceuticals in Sprague-Dawley rats

探讨3种光毒性条件下细胞内p38和Erk1/2的表达变化,同时对3种检测方法进行比较,并深入研究其分子机制。

使用3种测试方法评估氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ)和噻洛芬酸(tiaprofenic acid,TA)的光毒性。随后收集3种测试方法所涉及的生物样本的全细胞裂解物,并利用蛋白质印迹法评估细胞内p38和Erk1/2的表达变化。

这3种测试方法均能准确判断CPZ和TA作为光毒性阳性化合物。在3T3 NRU光毒性试验中,与空白组相比,TA和CPZ在光毒性剂量下显著提高了p38的表达水平(P<0.05),这一现象在其他测试方法中未观察到。在豚鼠和人工皮肤模型的光毒性试验中,p38和Erk1/2表达模式的变化相似。

p38和Erk1/2在3T3 NRU光毒性试验中具有明显的剂量依赖性和高度敏感性,可被视为评估3T3 NRU光毒性的潜在分子标志物,但在豚鼠试验和EpiKutis人工皮肤试验中尚未可行。豚鼠和EpiKutis人工皮肤表现出更相似的p38和Erk1/2表达变化,提示EpiKutis人工皮肤模型试验方法可能比3T3 NRU方法能更好地替代动物试验。

     

氯化镉、硫酸锌和亚硒酸钠细胞毒性检测方法的比较

近年出于动物保护和动物福利的要求,许多国家和国际组织都立法限制或禁止动物试验,使体外试验作为一种替代方法得到了迅速发展.体外细胞毒性试验作为体外试验的一类重要试验在新药的研究、开发以及化学物质毒性评价方面发挥重要作用.从1999年开始,美国和欧盟就开始进行用体外细胞毒性试验代替动物经口急性毒性试验的研究,虽然发现体内的经口急性试验与体外细胞毒性试验有很大的相关性,但不能完全替代体外试验.而对他们的试验进行研究发现,他们对所有种类的化学物质都采用同一的方法进行评价.这样虽然有助于方法的标准化,由于化学物质的作用机制的不同,有必要探索不同种类物质的不同细胞毒性方法的适用性[1-2].噻唑蓝法(MTT)和中性红法是2种应用较多且较成熟的检测方法,均具备简便、快捷和试验条件可控等优点,是毒理学检测细胞毒性首选或必选的方法.但是,受试验体系的影响,每种方法的不足可能对实验结果产生一定的影响.因此,对不同的试验体系加以验证,可以更好地推断其适用性.     

氯丙嗪和噻洛芬酸在三种光毒性测试中致p38和Erk1/2表达变化研究

目的 深入探讨三种光毒性条件下细胞内p38和Erk1/2的表达变化,同时对三种检测方法进行比较,并深入研究它们的分子机制。方法 使用三种测试方法评估氯丙嗪（Chlorpromazine,CPZ）和噻洛芬酸（Tiaprofenic Acid,TA）的光毒性。随后,我们收集了三种测试方法所涉及的生物样本的全细胞裂解物,并利用蛋白免疫印迹（Western Blot,WB）技术评估细胞内p38和Erk1/2的表达变化。结果 这三种测试方法均能准确判断CPZ和TA作为光毒性阳性化合物。在3T3 NRU光毒性试验中,与空白组相比,TA和CPZ在光毒性剂量下显著提高了p38的表达水平（p<0.05）,这一现象在其他测试方法中未观察到。在豚鼠和人工皮肤模型的光毒性试验中,p38和Erk1/2表达模式的变化相似。结论 p38和Erk1/2在3T3 NRU光毒性试验中具有明显的剂量依赖性和高度敏感性,可被视为评估3T3 NRU光毒性的潜在分子标志物,但在豚鼠试验和Epikutis人工皮肤试验中尚未可行。尽管如此,与3T3 NRU相比较,豚鼠和Epikutis人工皮肤表现出更为相似的p38和Erk1/2表达变化,提示Epikutis人工皮肤模型试验方法可能比3T3 NRU方法更好的替代动物试验,对豚鼠试验与Epikutis人工皮肤的其他分子标志物的发掘,仍有广阔的前景。     

溶血试验替代眼刺激试验应用于农药毒性评价的研究

<正>传统农药、保健食品、化妆品和药品的安全性评价均主要依赖于动物实验的结果。兔眼刺激性试验(Draize test)是检测农药眼刺激性的经典方法并已写入GB15670—1995《农药登记毒理学试验方法》[1]。然而,由于动物福利日趋受到重视及"3R"原则的兴起,Draize试验在伦理上也不断受到质疑[2]。为此欧美日等发达国家致力于推动Draize试验替代方法的研究与验证工作,欧盟更制定了相应的法规限制实验动物的使用[3]。而我国在这方面的     

化妆品SIRC细胞短时暴露法试验

随着动物福利和动物保护运动的日益高涨,以"3Rs",即减少(Reduction)、优化(Refinement)、替代(Replacement)为指导原则的化妆品安全性评价体外替代方法的研究在世界范围内广泛的开展.     

药物发育毒性体外替代方法研究进展及组合策略

随着3Rs原则的实施,药物非临床生殖发育毒性研究中的整体动物试验面临严重挑战,体外替代研究逐步成为研究热点。生殖发育毒性周期长,涵盖面广,现有的任何一种体外方法无法全面模拟药物在体内作用的全过程,无法全面反映其对于生殖发育周期中性成熟、受精、配子发生、合子发育、出生后发育及性功能等方面的影响。形成一套完整的生殖发育毒性体外替代法评价是解决体外替代法预测结果接近体内检测结果的关键,在整合体外替代研究时,应考虑体细胞与生殖细胞,不同进化阶段的物种,多个生殖毒性周期,体内外代谢活化差异等因素。根据受试物特性、分布、用途、适用范围,其他毒理学实验及毒代动力学资料,技术水平,管理部门的要求等特点进行实验设计,通过一系列反应不同试验终点的组合实验(Integrated testing strategy,ITS)综合评定药物体外生殖发育毒性,但目前尚无最合理的组合方案。对生殖发育毒性体外试验研究进展及应用策略需考虑要点进行综述,以推动替代技术在药物非临床安全性评价中的应用。     

医用透明质酸钠修复贴的生物学试验

目的 观察医用透明质酸钠修复贴对实验动物的皮肤致敏反应、皮肤刺激反应和细胞毒性反应,为其作为医疗器械用途的生物安全性评价提供科学依据.方法 根据该产品与人体接触方式及接触时间,按照医疗器械生物学评价标准选择皮肤致敏试验,皮肤刺激试验,细胞毒性试验进行生物安全性评价.结果 未出现皮肤致敏反应及皮肤刺激反应,无细胞毒性.结论 医用透明质酸钠修复贴临床用于缓解和补偿损伤使用是安全的.     

纳米氧化锌安全性评价及化妆品法规管理现状

目的：了解国内外纳米氧化锌安全性评价及化妆品法规管理现状,为我国对纳米原料与纳米化妆品监管提供参考。方法：通过文献研究,总结目前国内外纳米氧化锌的毒理学研究进展及世界主要国家及地区对纳米氧化锌的化妆品法规管理现状。结果：透皮吸收试验发现防晒霜中的纳米氧化锌主要聚集在人体皮肤角质层和毛囊皮脂腺开口处,微量锌可经皮肤吸收进入血液,但不能确定是以氧化锌还是锌离子的形式吸收。体外彗星试验结果显示纳米氧化锌引起人表皮细胞、人鼻粘膜细胞DNA损伤。亚急性经口毒性试验发现纳米氧化锌通过氧化应激介导小鼠肝脏细胞DNA损伤和凋亡。纳米氧化锌对小鼠具有生殖发育毒性。急性吸入毒性试验显示纳米氧化锌导致大鼠肺脏、肝脏组织损伤。亚慢性毒性试验显示纳米氧化锌高剂量组（536.8 mg·kg^-1）SD大鼠出现贫血及轻度到中度胰腺炎,纳米氧化锌的未观察到有害作用水平（NOAEL）为268.4 mg·kg^-1。欧盟、美国、中国台湾已出台了一系列化妆品纳米材料的法规或文件,指导化妆品行业开展纳米材料的安全性评价。结论：化妆品中纳米氧化锌对人体具有潜在安全风险,我国应尽快制定化妆品中纳米原料的相关管理政策。     

50种化妆品兔皮肤及眼刺激试验结果分析

为探讨化妆品在动物试验中对皮肤和眼刺激性的可接受程度,我们按照《化妆品安全性评价程序和方法》规定的方法,用兔对50种化妆品做了皮肤和眼刺激试验。做一次皮肤刺激试验的25个样品     

用人角质细胞评价4种化妆品的细胞毒性

传统的化妆品安全性评价是在试验动物上进行的,但近年来随动物保护运动的加强,动物福利的理念逐渐被引入到国际贸易领域中,化妆品的毒性试验或过敏性试验逐渐向非动物方面转移[1].     

灭螨液体外杀螨作用及皮肤安全性的实验研究

目的观察自制的复方中药制剂灭螨液对人体蠕形螨的体外杀灭作用;通过动物皮肤急性毒性试验,皮肤刺激性试验和皮肤过敏性试验,了解灭螨液皮肤用药的安全性,对其临床应用与推广提供试验依据。方法设灭螨液试验组、2%甲硝唑对照组和液体石蜡空白对照组,每组取蠕形螨50只,进行体外杀螨效果比较;采用家兔同体完整皮肤和破损皮肤对照法观察灭螨液对皮肤的急性毒性作用和刺激性作用及强度;采用豚鼠进行皮肤过敏性试验,对灭螨液进行皮肤安全性评价。结果灭螨液的体外杀螨时间为4 h,与2%甲硝唑的体外杀螨时间(9 h)相比,差异有统计学意义(P<0.001);家兔完整皮肤和破损皮肤经24 h用药后未出现急性毒性反应;致敏豚鼠未引起过敏反应;灭螨液对完整皮肤的刺激总评分为0,对破损皮肤的刺激总评分为0,无明显毒性。结论灭螨液具有较强的体外杀蠕作用且具有皮肤安全性。     

药物毒理学研究中体外替代试验研究现状及展望

药物的安全性和有效性是药物研发成功的决定因素,而药物毒性是终止药物研发的关键因素之一。相关监管指南和指导原则为利用动物进行毒理学研究及生物测试或其他相关试验制定了基本标准。动物体外替代试验不仅遵守了国际上提倡的“3R原则”,也符合毒理学学科发展、社会经济发展及新药研发的要求。动物体外替代试验已成为21世纪毒性测试的重要方向,毒性测试的重点将集中在敏感性终点的选择与评价、细胞-反应网络、高通量与中通量筛选方法的构建及应用、作用机制及作用模式、毒性通路以及系统生物学效应等方面,并且已获得药物研发领域广泛的支持和监管部门的认可,具有广阔的发展前景和重要的应用价值。