MSCs分离培养及定向分化为血管内皮细胞的研究

目的建立分离和培养大鼠骨髓源间充质干细胞（MSCs）的方法及定向分化为血管内皮细胞诱导条件的优化。方法淋巴细胞分离液（比重1．077g／m1）密度梯度离心法分离单个核细胞（MNC），在含10％胎牛血清L—DMEM培养基中培养，并传代扩增MSCs；选取状态较稳定的第4代细胞，分别用含10％胎牛血清和2％胎牛血清的诱导液（终浓度为10ng／mlVEGF、2ng／mlbFGF的DMEM培养液）继续培养，于第7、14天用流式细胞术分析CD34的表达情况，免疫组化法观察FVⅢ的表达情况。结果密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化MSCs，细胞呈均一的成纤维细胞样，流式细胞术分析MSCs结果显示，CD34阳性率为1．01％、CD29阳性率为97．32％；诱导14d后免疫组织化学法检测FVⅢ的表达，10％和2％胎牛血清诱导体系细胞的阳性率分别为12．21％和91．43％。结论密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化MSCs；就诱导效果而言，2％胎牛血清诱导体系明显好于10％胎牛血清诱导体系，说明低浓度的胎牛血清更有利于MSCs向血管内皮细胞分化。     

人脐带间充质干细胞体外分化为胰岛素分泌细胞

目的探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法采用直接贴壁法从脐带中分离UC-MSCs,取第3代细胞作流式细胞术鉴定其表型。用β-巯基乙醇、尼克酰胺和碱性成纤维生长因子(bFGF)诱导UC-MSCs(诱导组),对照组在未添加任何诱导试剂的培养基中培养。倒置显微镜下观察UC-MSCs的形态学变化;取诱导后3周的细胞进行双硫腙染色,采用化学发光免疫法测定培养上清液中胰岛素水平,RT-PCR检测胰岛细胞相关基因的表达。结果细胞高表达UC-MSCs相关抗原CD90、CD105和CD13,而低表达造血细胞相关抗原CD34、CD45和HLA-DR。UC-MSCs经诱导后细胞形态由梭形变为圆形或椭圆形,双硫腙染色为阳性。诱导组胰岛素水平明显高于对照组[(0.305±0.065)μU/ml vs.(0.085±0.024)μU/ml](P<0.01)。RT-PCR显示诱导后细胞表达胰岛细胞相关基因。结论 UC-MSCs具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能。     

人脐带间充质干细胞的生物学特性及向神经样细胞分化的研究

目的探究人脐带间充质干细胞具有的生物学特性,并对其向神经样细胞的分化进行研究。方法检测人脐带间充质干细胞细胞表面的标记;以β巯基乙醇与丹参诱导其向神经细胞分化,并为分化细胞与未分化细胞进行免疫细胞化学鉴定。此外,半定量RT-PCR检测细胞神经相关基因表达。结果分离自人脐带的贴壁细胞在体外可以生长成类似成纤维细胞的形态,在未分化状态下可以维持稳定增殖形态,且体外增殖远超10代,这类细胞表面标记CD105、CD59、CD44、CD29有较高的表达,而造血细胞的表面标记CD117、CD45、CD34、CD33、CD28、CD14则无表达或低表达,而与其相同表达的还有移植免疫排斥相关的表面标记,如CD86、CD80、CD40。经诱导分化的细胞表达神经元标记β-Ⅲ类神经微管和神经微丝、神经干细胞标记巢蛋白、神经胶质细胞标记的胶质纤维酸性蛋白。经过RT-PCR检测可知,经丹参诱导后的间充质干细胞表达神经干细胞的相关基因Neatin,而诱导前后间充质干细胞全部表达神经细胞基因Pleiotrophin并且在诱导后表达增强。结论人脐带间充质干细胞具有易于培养扩增的生物学特性,其表达间充质干细胞的表面标记,低或不表达造血细胞、与移植排斥有关的细胞标记。同时,其可以分化为神经样细胞并表达神经细胞的基因与相关标记,这种细胞可以作为肝细胞的一个来源,用于中枢神经系统细胞的移植。     

诱导间充质干细胞向心肌细胞分化方法及分化机制进展

干细胞在体外特定条件下,可特异的向某种组织类型细胞进行分化,其中包括向心肌细胞分化。目前,胚胎干细胞(em-bryonic stem cells,ESCs)虽然具有这方面的功能,且其分化效率较一般成体细胞高,但是由于伦理问题限制了其在临床的应用。而间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)不仅取材方便,且没有伦理争议,是最具希望的再生医学种子细胞,引起了人们的极大关注。目前对于体外诱导不同来源的间充质干细胞向心肌细胞分化方法的实验研究很多,主要包括化学试剂诱导和模拟体内微环境诱导两大类。该文就MSCs向心肌分化的体外诱导方法和分化机制的研究进展作一综述。     

人脐带间充质干细胞对大鼠烧伤的治疗作用

目的探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对重度烧伤大鼠的治疗作用。方法分离纯化人UC-MSCs。24只SD大鼠均分为两组:治疗组烧伤后实施UC-MSCs移植;对照组烧伤后滴入PRMI 1640培养液。HE染色观察大鼠皮损的病理结构,比较创面愈合率。结果成功培养获得UC-MSCs,所得细胞分别经形态学、流式细胞术、体外分化方法作表型鉴定。治疗组大鼠创面愈合时间为(22.0±3.1)d,短于对照组的(27.0±3.1)d(P<0.05)。术后14d,治疗组创面愈合率为(56.3±9.8)%,高于对照组的(47.2±8.3)%(P<0.05)。结论局部UC-MSCs移植能有效促进烧伤组织恢复。     

体外诱导人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化

目的 通过体外培养将人脐带间充质干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞.方法 将体外培养的人脐带间充质干细胞分为诱导组和对照组.诱导组先后予以1 mmol·L-12-巯基乙醇培养2 d,10 μg·L-1表皮生长因子、10 μg·L-1碱性成纤维细胞生长因子及2% B27培养7 d,之后添加20 mmol·L-1尼克酰胺及艾塞那肽培养7 d.对照组不添加诱导剂,继续换液培养.通过观察细胞形态变化、RT-PCR体外扩增两组细胞的胰腺-十二指肠同源框-1（PDX-1）基因、放射免疫法测定两组细胞胰岛素分泌量三种方法来鉴定胰岛素分泌细胞.结果 （1）通过形态学观察,诱导组细胞类似胰岛样细胞,对照组细胞则无明显改变;（2）应用RT-PCR方法,诱导组细胞可扩增出PDX-1基因,而对照组则没有.（3）诱导组细胞培养上清液可检测出胰岛素分泌,7 d时胰岛素浓度为（6.32±0.18）mIU·L-1,21 d时增至（34.57±4.54）mIU·L-1,而对照组则未测出.结论成功在体外微环境下将人脐带间充质干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞.     

人脐带问充质干细胞体外培养、鉴定及其诱导分化的研究

目的通过体外分离、培养及鉴定人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUCMSCs）,探讨其多向分化潜能。方法取正常足月新生儿脐带,采用组织贴壁培养法分离原代hUCMSCs,观察细胞生长形态。采用流式细胞仪技术检测hUCMSCs细胞表型及细胞周期。通过成神经细胞诱导和成脂肪细胞诱导,鉴定hUCMSCs的多向诱导分化能力。结果成功分离和培养hUCMSCs原代细胞,经流式细胞仪鉴定高表达间质细胞标志CD44和CDl05,阳性率为96．73％和96．10％,整合素受体CD29阳性率为99．53％;低表达造血系标志CD34和CD45阳性率为0．80％和1．91％,人白细胞抗原HLA-DR阳性率为1．41％。细胞周期检测hUCMSCs主要处于G0／G1期。hUCMSCs成神经细胞诱导,出现神经元样细胞;免疫组化检测神经巢蛋白（Nestin）呈阳性表达。hUCMSCs成脂肪细胞诱导,出现空泡样脂肪滴,油红O染色可见脂质沉积。结论hUCMSCs具有多向分化潜能,可跨胚层诱导分化为多种组织类型的细胞。     

人骨髓间充质干细胞诱导分化的内皮细胞相关鉴定及活性检测

目的探讨将人骨髓间充质干细胞（Human bone mesenchymal stem cells,HBMCs）诱导为内皮细胞（endothelial cells,ECs）的可行性。方法将HBMCs分离、培养后,加入诱导因子定向诱导为ECs,并对细胞进行鉴定和细胞活性检测。结果经鉴定,HBMCs在特定环境下分化为了ECs,而且后者与人正常血管ECs的细胞活性无显著差异性。结论以HBMCs诱导的ECs作为种子细胞,具有可行性。     

脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的临床观察

目的分析脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的临床效果,更好地提高我国临床治疗的水平。方法将2009年5月至2012年7月在我院接受脐带间充质干细胞移植的50例脊髓损伤病患作为研究对象,分析病患治疗前后感觉及运动、生活自理的能力。结果患者治疗后和治疗前相比,脊髓损伤病患的生活自理能力、感觉以及运动评分等方面均有显著改善,患者的各项身体生化指标无异常,未见明显的不良反应与严重并发症现象,治疗前后病患的评分具有差异性,即P>0.05。结论采用脐带间充质干细胞移植方法对治疗脊髓损伤具有重要的意义,而且疗效明显,可提高病患的生活质量与我国的临床治疗水平。     

脐带间充质干细胞在脑内微环境影响下向神经细胞自发分化的研究

几乎任何形式的脑外伤均伴有不同程度的神经细胞死亡和功能缺失,残存神经元的功能代偿和神经干细胞替代是创伤后神经功能恢复的两个主要方面[1].但由于在成人残存神经元发挥代偿功能的局限性和自身有限的神经干细胞数量,严重限制了脑创伤后的神经功能恢复[2].近年来,脐带间充质干细胞（MSCs）作为神经干细胞的有益补充,成为神经细胞替代的又一＂种子＂来源.相比较于来源于骨髓、脂肪的MSCs,脐带MSCs具有利于自体细胞培养和终身储存,无免疫排斥反应和细胞数量多等等诸多优势,成为组织再生领域新的研究热点[3].     

不同培养基对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

目的观察不同培养基对人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）生物学特性的影响,优化培养方法。方法采用贴壁法从正常足月胎儿脐带中分离出间充质干细胞,细胞贴壁后利用DMEM/F12,Mesen PRORSTM Medium这两种培养体系进行体外扩增,绘制生长曲线,流式细胞仪检测其表面标志。结果从人脐带中分离出的间充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长;细胞表达CD29、CD44,不表达CD34、CD45和HLA-DR。结论加入Mesen PRORSTM Medium培养的细胞增殖速度快,更适合于脐带间充质干细胞的体外扩增。     

人脐带间充质干细胞对急性肺损伤氧化应激的影响

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)氧化应激失衡的作用。方法人脐带间充质干细胞的分离,培养和鉴定。将30只Wistar大鼠随机分为生理盐水(NS)对照组(A组)、LPS模型组(B组)和HUC-MSCs移植组(C组),每组10只。移植6h后,处死各组大鼠,取肺组织行病理学观察,肺湿/干重比测定,丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性检测。结果流式细胞术结果显示,纺锤样细胞高表达CD29、CD44和CD105,极低表达CD34,符合HUMSCs的特征。与A组比较,B组W/D和MDA含量明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05)。与B组比较,C组W/D和MDA含量明显降低(P<0.05),SOD活性明显升高(P<0.05)。结论在大鼠模型中人脐带间充质干细胞移植能减轻肺损伤,并能降低肺组织MDA含量和提高SOD活性。     

人脐带间充质干细胞对大鼠受损子宫内膜的影响

目的 探讨人脐带华通氏胶间充质干细胞(WJ-MSCs)移植对大鼠受损子宫内膜的影响.方法 妊娠大鼠25只均分为五组.于妊娠第3天阻断子宫动脉血流30 min(A1组和B1组)或60 min(A2组和B2组),建立大鼠胚泡着床障碍的动物模型.A2和B2组子宫动脉夹闭同时经子宫角部注入WJ-MSCs;A1和B1组未注入WJ-MSCs.于妊娠第9天,观察胚泡着床情况,化学发光法检测血清雌二醇、孕酮,光镜及透射电镜观察子宫内膜的形态及超微结构变化.结果与空白对照组妊娠大鼠比较.结果 与对照组比较,A1和B1组胚泡着床率明显下降(P＜0.01),子宫内膜、腺体和间质细胞明显损伤;B1组比A1组明显,出现明显细胞凋亡.而A2及B2组子宫内膜改变明显轻于A1和B1组,胚泡着床数与对照组相仿(P＞0.05).五组大鼠血性激素水平无统计学差异(P＞0.05).结论 WJ-MSCs能明显促进胚胎着床期子宫内膜的生长及腺体的增生和发育.     

诱导兔骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞和软骨细胞的研究

目的：探讨兔骨髓间充质干细胞(MSC)体外分离培养、增殖，以及向成骨细胞和软骨细胞定向诱导分化的条件，为骨、软骨缺损的修复和重建提供种子细胞。方法：抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液，经密度梯度离心法及塑料板贴壁培养法分离纯化出MSC，并增殖。对第二代MSC进行成骨矿化诱导，测定其碱性磷酸酶(ALP)活性及成骨矿化情况。并对第二代MSC进行诱软骨特定培养液诱导，对诱导细胞进行甲苯胺蓝染色，测定诱导后的软骨细胞表型。结果：MSC为梭型的成纤维细胞样贴壁生长，增殖能力强。在成骨诱导剂作用下，MSC具有成骨能力，诱导后ALP活性明显提高，并且出现矿化结节沉积。在成软骨诱导剂作用下，可见细胞由成纤维样的梭形变为椭圆形及肾形，并分泌基质，甲苯胺蓝染色呈阳性，表现为软骨细胞分化特点。结论：在特定诱导条件下，兔骨髓MSC体外可定向诱导分化为成骨细胞和软骨细胞，可用于组织工程骨和软骨组织的修复和重建。     

脐带间充质干细胞治疗类风湿关节炎八例临床分析

类风湿性关节炎（RA）的发病原因至今尚未完全明了,传统治疗主要是非甾体类抗炎药（NSAID）和慢作用的抗风湿药（SAARDS）,这些药物副作用明显且治疗后复发率高。近年来随着组织细胞工程学和基因工程学的发展,干细胞治疗成为RA治疗的热点,其中间充质干细胞因其多向分化能力、免疫抑制性能、组织损伤修复能力及低风险,为RA治疗提供了新的前景。     

有关骨髓间充质干细胞的临床应用

骨髓间充质干细胞具有高度的自我更新和多相分化潜能。由于取材容易、培养简便及应用前景广泛等特点成为干细胞中研究的热点,在医学各个领域都具有研究和应用价值,目前已应用于多种临床治疗当中。     

脐血间充质干细胞向神经细胞诱导分化的研究进展

脐血间充质干细胞是从胎儿脐带血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为神经细胞的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的研究价值,该文将对脐血间充质干细胞向神经细胞定向分化的诱导方法作一综述。