不同热缺血时间对犬胰腺移植物功能及能量代谢状态的影响

目的探讨热缺血时间对胰腺能量代谢状态及胰腺移植后移植物功能的影响。方法切取犬胰腺左叶,按分组要求,胰腺分别经历30、60、90、120min热缺血,以0~4℃UW液灌洗,并保存24h,然后行胰腺节段自体异位移植,同时设正常对照组和未经历热缺血的胰腺节段自体移植组。术后连续观察血糖、静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT)、血液中胰岛素含量,测定术后24h和1周时胰液中淀粉酶浓度,高效液相色谱法检测移植前胰腺组织中ATP和腺苷核苷酸总量(TAN),并观察移植后1h时移植物的组织学变化。结果热缺血30min组和60min组的术后3~5d血糖即可恢复至正常范围,而热缺血90min组和120min组术后1周血糖未能恢复至正常;术后1周,无热缺血组、热缺血30min组和60min组的IVGTTK值大于1,热缺血90min组和120min组小于1,且其静脉血中胰岛素的浓度明显低于无热缺血组、热缺血30min组和60min组(P<0.05);热缺血30min组和60min组胰腺组织中ATP和TAN的含量明显高于热缺血90min组和120min组(P<0.05);无热缺血组以及热缺血30min组和60min组的胰腺组织结构基本正常,而热缺血90min组和120min组的组织破坏明显,腺泡坏死、出血和炎症细胞浸润严重。结论用于移植的胰腺热缺血30~60min是安全的,移植后胰腺功能迅速恢复正常;超过60min的热缺血对移植物的能量代谢有显著负面影响。     

改良肠引流式胰肾联合移植的外科技术及临床应用

目的报道改良胰液空肠引流式胰肾联合移植的外科技术和其治疗糖尿病合并尿毒症的近期效果。方法2000年6月至2006年8月,共有38例糖尿病合并尿毒症患者在华中科技大学同济医学院附属同济医院接受胰肾联合移植,移植胰腺的外分泌液用空肠内引流,不作Roux-en-Y吻合。移植胰腺及肾脏的平均冷缺血时间分别为（10±2．0）h和（7±2．0）h。除1例外,术后早期均采用他克莫司、霉酚酸酯及皮质激素预防排斥反应,同时以抗淋巴细胞球蛋白或抗CD25单克隆抗体诱导治疗。结果受者、移植肾脏和胰腺的6个月存活率均为97．4％,平均停用胰岛素时间为（7±6．9）d,空腹血糖恢复正常的平均时间为（14±9．1）d。术后3周口服糖耐量试验、胰岛素和C肽释放试验显示移植胰腺功能完全正常。血淀粉酶恢复正常的平均时间为（10±7．7）d。肾功能延迟恢复8例,其血肌酐恢复正常的平均时间为（53±20．0）d;其余30例血肌酐恢复正常的平均时间为（8±7．4）d。术后主要外科并发症为移植胰腺伤口感染、胰十二指肠-空肠吻合口出血和移植肾脏周围出血,3例（7．9％）因并发症再次手术,未发生与胰液引流术式相关的并发症如胰漏、肠漏、腹腔脓肿及肠梗阻等。结论胰肾联合移植是治疗1型和部分2型糖尿病合并尿毒症的有效方法;改进的胰液空肠引流术式（不作Roux-en-Y吻合）有助于降低胰液空肠引流术式的术后早期并发症发生率,提高受者和移植物的存活率。     

亲属活体胰腺移植进展

亲属活体胰腺移植(LDPT)是继肾脏之后应用于临床的活体供者器官移植。LDPT可缓解供胰不足的问题,具有组织配型好、冷缺血时间短和移植物长期存活率高等优点,但外科技术复杂,供、受者手术风险高,供者术后胰腺内分泌储备功能降低。本文就LDPT有关问题综述如下:一、LDPT的现状     

大鼠胰十二指肠移植缺血-再灌注损伤模型的建立

目的 探索胰腺移植缺血．再灌注损伤(I-RI)的发生机制及防治措施。方法 采用双套管 移植物腹主动脉三通管外接法完成大鼠全胰十二指肠同种异体移植动物模型。实验分为A、B组。每组15只，分别于术后6、24h处死。处死时检测非空腹血糖，并行移植物组织学观察。结果 30次实验中，总手术时间仅为2h左右，移植手术成功率100％。排除因套管内血栓形成引起移植物失功的3例外，其余受试大鼠血糖水平均在术后6或24h降至正常，移植胰功能存活率为90％(27／30)。A、B两组组织学改变符合I-RI病生特点。结论 本模型操作简便、稳定，不需阻断体循环，具有术后移植物功能恢复早的优点，适用于临床胰腺移植有关的理论研究。     

不同热缺血时间对大鼠移植肝功能状态及存活期的影响

目的：探讨不同热缺血时间条件下，大鼠原位肝移植术后肝脏功能和组织形态变化规律，并对动物远期存活情况进行观察，预测无心跳供体（NHBD）中供肝耐受热缺血的安全时限。方法：实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45、60min，随机分为7组。然后按各组条件分别作原位肝移植，观察肝移植后24、48h、3和5d各组肝脏功能和组织形态的恢复性变化，并统计生存时间。结果：供肝经受30min以内热缺血损伤，各组移植术后生存天数差异无显著性，热缺血30min组，肝移植术后1周的存活率达到83.3％（10/12），1个月和3个月存活率分别为58.3％（7/12）和50.0％（6/12）。热缺血45min组，术后1周的存活率为66.7％（8/12），但1个月和3个月存活率分别为33.3％（4/12）和8.3％（1/12）。至于热缺血60min组，1周的存活率仅为8.3％（1/12）。结论：大鼠的供肝可以安全地耐受30min以内的热缺血。45min的热缺血损伤，虽对术后1周存活率无明显影响，但大鼠肝移植术后的远期存活时间明显缩短。60min以后，移植肝组织的结构和功能均难以恢复，大鼠术后生存天数显著降低。     

双套管+腹主动脉三通管外接法建立大鼠胰十二指肠移植模型

目的 改进传统移植模型,建立成功率高的大鼠胰十二指肠移植(pancreaticoduodenal transplantation,PDT)模型,为基础及临床胰腺移植研究奠定基础.方法 提高显微外科手术技巧,高质量获取供体器官,并运用自制血管套管,采用双套管将供胰所带腹主动脉近心端、门静脉分别与受体左肾动、静脉行端端吻合,同时移植物腹主动脉远心端外接三通管,十二指肠断端外引流,在不阻断体循环及门静脉的情况下完成PDT动物模型.术后通过监测随机血糖和十二指肠引流物观察移植物内、外分泌功能.结果 共行30次移植手术.整个手术时间仅为2 h,受体手术时间缩短至(26±5)min,血管重建时间(25±5)min,移植手术成功率100%.术后2 h可见胰液分泌,排除因套管内血栓形成引起移植物失功的3例外,其余受试大鼠血糖水平均在术后6或24 h降至正常.移植胰腺功能存活率为90%(27/30).结论 本模型操作简便、稳定,不需要特殊仪器,术后移植物功能恢复快,可用于临床胰腺移植有关的理论研究.     

胰肾联合移植术后外科并发症的临床分析

目的 分析胰肾联合移植术后外科并发症发生情况、手术治疗及结果.方法 统计2000年1月至2011年12月施行的胰肾联合移植术60例,根据术后是否发生外科并发症将受者分为并发症组及无并发症组,分析手术治疗的原因,评估再次手术对受者及移植物存活率的影响.结果 术后1年内,受者死亡原因主要为肺部感染(3例)、心脑血管意外(2例)、消化道出血(1例).感染及心脑血管意外是导致受者术后早期死亡的主要原因(5/6).56例胰腺手术成功,术后(14± 8)d完全停用胰岛素,外科并发症导致移植胰腺切除4例.15例移植肾功能恢复延迟,术后接受透析的时间为(33±12)d,其余受者肾功能均在术后2～7 d恢复正常,带移植物功能死亡是移植肾丢失的主要原因(3/6).外科并发症发生率为25％ (15/60).外科并发症主要包括:出血、切口感染、移植胰腺血管栓塞及移植胰胰腺炎,外科并发症降低了术后1年受者及移植胰腺的存活率,而对肾脏的存活率无明显影响.结论 胰肾联合移植术后外科并发症发生率高,明显降低了受者和移植胰存活率,是影响术后早期受者和移植胰存活的主要因素.     

热缺血时间对大鼠胰岛结构和功能的影响

目的 探讨胰腺热缺血时间对胰岛形态和功能的影响。方法 以Lewis大鼠的胰腺为研究对象，分别在大鼠被处死后立即、25min后及30min后以胶原配灌注，然后分离、纯化胰岛，观察各组所得胰岛的形态、活性、胰岛当量数(IEQ)与功能。结果 各组均可获得形态完好的胰岛，胰岛细胞活率在85％以上；各组IEQ的差异元显著性；热缺血时间25min组与立即灌注组相比，纯化后的胰岛细胞在低糖与高糖刺激下，胰岛素分泌量的差异元显著性，而热缺血时间30min组与立即灌注组相比，胰岛素的分泌能力显著降低(P＜0．01)。结论 热缺血时间不超过25min时，分离、纯化后得到的胰岛在结构与功能方面的改变不显著，若热缺血时间延长到30min时，胰岛功能出现减退。     

猪同种异体胰十二指肠移植门静脉回流肠内引流模型的实验研究

目的研究猪胰十二指肠移植治疗实验性Ⅰ型糖尿病的可行性及其意义。方法选四川当地杂种长白猪46头(体重25~32kg),分为供、受体2组(n=23),进行同种异体胰十二指肠移植手术。观察术后手术并发症,术前、术中及术后1、3、5及7d检测血糖、胰岛素及胰高血糖素水平,观察移植物存活及急性排斥反应情况。结果进行猪同种异体胰十二指肠移植23例,手术中因麻醉意外死亡1例,手术成功率为95.7%。发生手术并发症2例,其中静脉血栓形成1例(4.5%),十二指肠空肠吻合口漏1例(4.5%)。在切除胰腺30min内即可见血糖升高,术后第3d开始恢复至术前水平。胰岛素和胰高血糖素在切除胰腺30min内开始下降,术后第3d开始恢复到术前水平。手术后第1d开始出现排斥反应,并逐渐加重,第9d达到高峰,但未出现血糖、胰岛素及胰高血糖素水平变化和排斥反应的临床症状。结论猪胰十二指肠移植治疗Ⅰ型糖尿病效果确实、可靠,移植术后急性排斥反应是影响术后功能的主要因素。     

胰腺移植后的慢性排斥反应

由于外科技术的不断提高和新型免疫抑制剂的应用，胰腺移植的短期效果显著提高，移植胰腺的1年存活率在80％左右。随着移植物存活时间的延长，慢性排斥反应将成为移植物功能丧失的一个重要原因。据2004年美国器官共享网络（UNOS）与国际胰腺移植登记处（IPTR）的统计，术后1年导致移植胰腺功能丧失的原因，     

移植肝热缺血损伤后糖原及酶组织化学活性的动态变化

目的：探讨不同热缺血时间下大鼠移植肝组织糖原及酶组织化学活性变化规律，预测供肝耐受热缺血性的安全时限。方法：用组织化学和细胞化学的方法，对大鼠移植肝组织进行动态观察，按热缺血时间随机分为0、15、30、45、60min5组，观察肝移植后的恢复性变化。结果：随热缺血时间的延长，肝组织琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素氧化酶（CO）和三磷酸腺苷酸（Mg^2 ,ATPase)活性逐渐降低，糖原减少，热缺血30min以前各组酶活性变化轻微，而45、60min组均出现明显的酶活性降低和高碘酸－无色品红（PAS）反应减低，15、30min组，在复流后24h糖原颗粒逐渐增多，呈明显的恢复，酶活性逐渐恢复至接近正常水平，45、60min组，复流后24hPAS反应和酶活性仍无明显恢复趋势，结论：移植肝热缺血在30min以内，肝组织损伤仍处在可复性阶段，复流后能逐渐恢复至正常的形态和功能，移植肝糖原含量，酶组织化学活性的变化以及术后其恢复性的潜能可作为衡量供肝质量的重要标准。     

Definition of normothermic ischemia limits for kidney and pancreas grafts

Normothermic ischemia tolerance is an important aspect of organ procurement and transplantation. The function of pancreas and kidney autografts was investigated in totally pancreatectomized or nephrectomized canine recipients. In 30 dogs the left limb (tail) of the pancreas was removed but left in the abdominal cavity after cessation of blood flow to produce warm ischemia for 30, 60, and 120 min (10 dogs at each time point), and then was flushed with cold Ringers' lactate and transplanted to the iliac vessels. Twenty dogs with fresh pancreatic transplants were controls. The success rate of pancreas transplants with warm ischemia of 1/2 and 1 hr was the same as that of controls (80%); however, after 1 hr normothermia 5/10 dogs had episodes of hyperglycemia for 1 week before glucose levels came back to normal. All but one graft with 2 hr warm ischemia failed. Intravenous glucose tolerance test (IVGTT) mean (+/- SEM) K values were not different in the successful groups, i.e., no warm ischemia: -1.55 +/- 0.15%; 1/2 hr warm ischemia: -1.81 +/- 0.18%; 1 hr warm ischemia: -1.64 +/- 0.09%. Amylase levels increased after transplant with maximum values at Day 2, then returned to normal, but the levels remained elevated in recipients of grafts subjected to longer normothermia with evidence of pancreatitis after 1 hr warm ischemia. Fifteen kidney grafts were treated similarly with warm ischemia exposure of 1/2 hr (n = 9) and 1 hr (n = 6) before being flushed and autotransplanted, and were compared to 16 fresh kidney transplants. After 1/2 hr warm ischemia none of the kidney grafts failed but 78% of the recipients had elevated serum creatinine and urea nitrogen levels which returned slowly to normal after 3 to 4 weeks. There was only one long-term survivor after 1 hr warm ischemia. Thus the pancreas seems to be more resistant to warm ischemia damage than is the kidney. This difference should be taken into consideration in regard to organ procurement for clinical transplantation.     

Effect of warm ischemia on segmental pancreas transplantation in the rat

This study was performed to determine the effect of warm ischemia on post-transplantation endocrine function of rat segmental pancreas transplants. Diabetic (streptozotocin) rats were recipients of syngeneic vascularized grafts in all experiments. Thirty-, 60-, and 90-min periods of absolute ischemia at 37 C in addition to approximately 30 min of anastomosis time did not impair control of glucose metabolism as manifested by daily serum glucose values or response to intravenous glucose challenge when compared with control rats transplanted with freshly harvested pancreata. However, when the ischemic period was lengthened to 120 min, only one of five recipients had normal glucose values post-transplant. Islet morphology in the 30-, 60-, and 90-min ischemia groups was not different from controls. On the other hand, after 120 min of ischemia, islets were decreased in number, appeared smaller in size, and had undergone degeneration. For comparison, renal isografts using kidneys with 90 min of warm ischemia failed. These data suggest that in this model, islets in segmental pancreas transplants are more tolerant of warm ischemia than kidneys.     

无心跳供体中供肝微循环的动态变化

目的 探讨不同热缺血时间下大鼠无心跳供体肝组织微循环的变化规律，预测供肝耐受热缺血的安全时限。方法 实验动物按供肝热缺血时间分别为0、15、30、45、60min，随机分为5组。然后按各组条件分别作原位肝移植．对肝移植术后各组血清透明质酸(HA)的水平进行动态检测，以及观察肝组织微循环超微结构的动态变化。结果 在热缺血30min以内，移植肝组织复流后能逐渐恢复至正常的微循环结构和功能。热缺血45min，复流后大部分肝血窦腔可逐渐恢复通畅。但部分血窦仍充满较多的膜浆泡和血细胞积滞；热缺血45min以前各组术后3d血清HA可基本恢复。热缺血60min，复流后内皮细胞损伤不但不能恢复，且出现加重、扩大趋势。结论 供肝经受30min以内热缺血损伤，肝组织微循环的变化处在可复性阶段。45min的热缺血时间可能县供肝微循环功能耐受热缺血损伤的极限．热缺血60min以后．呈现不可逆性的微循环障碍．     

热缺血损伤对大鼠移植肝组织能量代谢及存活期的影响

目的：探讨不同热缺血时间下大鼠肝组织能量代谢变化规律,预测供肝耐受热缺血的安全时限。方法：实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45和60min,随机分为7组。采用反相高效液相色谱法测定单纯热缺血后肝组织能量代谢指标并进行超微结构的观察。然后按各组条件分别作原位肝移植,观察移植后24、48h各组肝组织能量代谢指标的恢复性变化,并统计生存时间。结果：供肝经受热缺血损伤后,肝组织ATP含量和EC水平远逐渐下降,其中前30min下降比较急剧,以后趋向平缓。热缺血30min内肝组织ATP含量和EC水平在肝移植再复流24h后基本得到恢复,术后大鼠仍可以获长期存活。45min组,移植肝在48h后能量代谢的功能也基本恢复,虽不足以影响术后的1周存活率,但对大鼠肝移植术后的3个月存活率影响显著。60min组,肝脏能量代谢储备功能难以恢复,大鼠术后生存天数显著降低。结论：供肝组织三磷酸腺苷（ATP）含量和能荷（EC）水平以及其移植术后恢复的潜能是衡量供肝质量的重要标准。供肝热缺血损伤的时间与肝组织能量代谢功能的恢复及术后动物生存情况密切相关。     

Continuous Resuscitation for Porcine Liver Transplantation From Donor After Cardiac Death

BackgroundTo solve the serious donor shortage, the demand is increasing for developing a new method to use the marginal donors, including donors after cardiac death (DCD). Continuous machine perfusion from ex vivo to in situ is a novel technique to overcome warm ischemia during organ grafting as an ischemia-free transplantation. Herein, we tested orthotopic and heterotopic ischemia-free liver transplantation in pigs and evaluated the perfusion characteristics of DCD grafts from ex vivo preservation to implantation.Materials and MethodsThe demonstration of ischemia-free transplantation was conducted using both orthotopic and heterotopic transplantation models. Warm ischemia time (WIT) was set at 60 minutes or 120 minutes in the DCD models. Recipients were humanely killed 3 days after transplant. Flow rates of portal vein and hepatic artery were set to 0.06 to 0.15 mL/min/g and 0.04 to 0.06 mL/min/g for the liver weight ratio, respectively.ResultsUnder the stable perfusion rate by machine perfusion, the average hepatic artery pressure of the liver graft after a WIT of 120 minutes was approximately 80 mm Hg higher than after WIT of 60 minutes. The recipient with liver graft of WIT of 60 minutes could not survive overnight. In heterotopic model, the recipient with 1 hour DCD liver survived until humanely killed.ConclusionsThe results of pressure monitoring in our DCD liver graft model indicate that pressures are influenced not only by thrombus formation but also by postmortem rigidity at 2 hours after cardiac death.     

大鼠无心跳供体热缺血损伤后供肝组织学与超微结构的动态变化

目的动态观察移植肝热缺血损伤后组织学与超微结构的变化特点，预测无心跳供体（NHBD）中供肝耐受热缺血的安全时限。方法实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45、60min，随机分为7组。按各组条件分别作原位肝移植，动态观察单纯热缺血期和肝移植术后6h、24h、48h各组移植肝组织学、组织化学和超微结构变化规律。结果NHBD的供肝不仅发生热缺血阶段缺血缺氧造成的损伤，在移植肝复流后，也存在再灌注损伤，且再灌注期肝组织损伤的程度与热缺血时间长短有密切关系。热缺血30min以前，移植肝仅出现组织细胞的变性，未见明显坏死。45min组，肝组织可见小灶状的坏死，在小叶中央区首先发生。60min组，肝细胞坏死的范围扩大，呈片状或弥漫性分布；肝窦内皮细胞明显肿胀呈泡状或气球状，肝血窦阻塞，呈微循环障碍。结论大鼠供肝经受30min以内热缺血损伤，肝组织损伤处在可复性阶段。热缺血60min以后，呈现不可逆性的形态学改变。     

Prediction of viability of ischemically damaged canine pancreatic grafts by tissue flow rate with machine perfusion.

We studied the viability of canine pancreatic grafts using a short-time perfusion technique with an organ perfusion machine, "ORPH3000C". The following parameters were examined during perfusion of warm ischemically damaged grafts: Amylase, lipase, and insulin levels in the perfusate after 1-hr perfusion showed no significant correlation with warm ischemic time (WIT), and these indices could not be used to assess graft viability. Tissue flow rate (TFR) at the end of perfusion was significantly decreased with prolonged WIT. TFR correlated with the percent decrease in tissue SOD activity, thus TFR was a reliable predictor of reperfusion injury. Histological studies showed no findings attributable to warm ischemic injury before 1-hr perfusion. After 1-hr perfusion, the grafts were allotransplanted and the relation between TFR and endocrine function of the transplanted grafts was examined. TFR correlated with K value calculated from IV-GTT performed on day 5 postoperatively, suggesting that TFR is a predictable index of isolated pancreatic graft viability. Using TFR levels, this method allowed us to select only grafts with good function prior to transplantation. This technique appears to be of use for pancreatic transplantation from cadaver donors after cardiac arrest.     

不同热缺血时间的无心跳供肝在肝移植中应用的疗效评价

目的:探讨不同热缺血时间的无心跳供肝在临床肝移植中应用的疗效。方法:回顾性分析142例冷保存时间在12h之内的不同热缺血时间的无心跳供肝肝移植患者的临床资料, 根据热缺血时间分为3组：Ⅰ组为5 min之内, 43例; Ⅱ组为5～10 min, 77例; Ⅲ组为10～15 min, 22例。比较3组间肝移植术后谷丙转氨酶（ALT）峰值、原发性移植肝无功能、急性排斥反应、胆道并发症、血管并发症、感染以及移植肝存活和受体存活的差异。结果:3组患者术后均未发生原发性移植肝无功能。Ⅱ组术后ALT峰值及感染发生率显著高于Ⅰ组; 而Ⅲ组术后ALT峰值、胆道并发症发生率、血管并发症发生率及感染发生率均显著升高。随访 8~32个月。Ⅲ组移植肝存活率及受体存活率均降低, 与Ⅰ组和Ⅱ组比较, 差异均有统计学意义。结论:冷保存时间在12 h之内的无心跳供肝能耐受热缺血的安全时限为10 min; 热缺血时间大于10 min的供肝, 移植术后相关并发症发生率显著增加, 移植肝和受体存活率显著降低。