毛囊上皮干细胞及其诱导分化

毛囊具有独特的结构和周期性再生能力,这主要是在毛囊外根鞘隆突部位蕴藏着丰富的具有强大增殖能力的表皮多能干细胞,这些多能干细胞不仅能衍生为毛发,也能分化成表皮和皮脂腺组织。经免疫组织化学及超微结构研究已证实,毛囊上皮干细胞定位于毛囊外根鞘的隆突部位。在毛囊生长初期到中期阶段,毛囊隆突细胞与真皮毛乳头细胞的密切接触,特别是选择性的接收毛乳头细胞发出的向上生长信号是必不可少的。     

毛囊微型化发生的机制与最新研究进展

雄激素性脱发（androgenetic alopecia,AGA）又称为脂溢性脱发，是临床上最常见的脱发类型，毛囊微型化是该病发生发展过程中的重要特征。目前研究已发现有很多原因可诱导毛囊微型化的发生，一方面通过促使患者头皮毛囊真皮乳头细胞（dermal papilla cell,DPC）分泌毛囊抑制因子、DPC发生凋亡和自噬障碍，另一方面通过毛周微循环形成障碍、毛囊干细胞的过度耗竭及真皮鞘细胞的丢失与纤维化进一步加剧了AGA的发生发展，最终导致患者的毛发由最初的终毛逐渐转换为细小的毳毛。本综述从不同角度探讨毛囊微型化的病因与机制，为未来对AGA的有效治疗提供帮助。     

毛囊干细胞的研究进展

毛囊干细胞在毛囊的形态发生和毛发的周期生长起着重要的作用。毛囊干细胞具有干细胞的一般特征，并定位于毛囊隆突部。它具有自己特定的表面标志物、调节基因以及传导通路。     

毛囊干细胞的研究进展

毛囊干细胞在毛囊的形态发生和毛发的周期生长起着重要的作用。毛囊干细胞具有干细胞的一般特征,并定位于毛囊隆突部。它具有自己特定的表面标志物、调节基因以及传导通路。     

皮肤干细胞体外培养与诱导分化

目的 探讨新生儿皮肤干细胞(ESCs)的培养方法,并研究新生儿皮肤干细胞的增殖及诱导分化.方法 用两步酶消化法分离新生儿脐带获得角质形成细胞,采用Ⅳ型胶原快速黏附法筛选ESCs并培养.在含细胞因子的条件培养基中加入人头发组织或猪软骨组织作为诱导物,对增殖的ESCs进行体外诱导培养,观察ESCs的分化状况.结果 培养的新生儿ESCs有克隆状生长现象,角蛋白K19免疫组化染色阳性,培养初期细胞有向毛发的毛根和毛干为中心聚集生长现象,并逐步分化成类似毛皮质的结构.结论 新生儿ESCs在含毛发组织为诱导物的条件培养基中逐步分化成类似毛干皮质的组织结构,这为体外构建毛发组织工程奠定了一定的理论基础.     

毛乳头细胞与毛囊生长周期

毛囊是一个具有生长、退化、休止三个阶段周期性循环的器官,它由上皮和真皮二部分组成。在生长期,毛囊的上皮和真皮部分增殖分化,上皮部分向真皮延伸,形成毛母质、内根鞘、毛乳头和毛干。进入退化期,毛母质向上运动,与不断缩小的毛乳头分离。在休止期毛囊内毛母质消失,毛乳头浓缩成球点状,直到下一周期的开始［１］。尽管毛囊的这些周期性变化早已为大家所熟悉,但有关控制这些变化的机制至今尚未阐明。近年来研究毛囊生长周期（Ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｙｃｌｅ,ＦＧＣ）调控的文章较多,一些研究显示,毛乳头细胞（Ｄｅ…     

毛囊来源的表皮干细胞在不同培养条件下细胞生长情况的比较及效果评价

目的：探讨毛囊来源的表皮干细胞(ESCs)培养条件,阐明成纤维细胞在ESCs培养中的作用。方法：以拔出的毛发为细胞来源,通过细胞培养的方式,比较在无包被、鼠尾胶原包被、Ⅳ型胶原包被和3T3成纤维细胞作为饲养层细胞条件下细胞生长情况。并通过RT-PCR和免疫荧光等方法对培养出的细胞进行细胞角蛋白(CK)15的检测。结果：在无包被、鼠尾胶原包被、Ⅳ型胶原包被和3T3成纤维细胞作为饲养层细胞条件下,以3T3成纤维细胞作为饲养层对细胞的生长最为有利;同时,对不同毛囊节段（毛球、中间节段、隆突和峡部）的培养表明,毛囊隆突部位的细胞增殖能力最强。RT-PCR及免疫荧光结果表明,应用此种方法从毛囊中分离培养的细胞表达表皮干细胞的特异性标志CK15。结论：以3T3成纤维细胞作为饲养层细胞,可以从拔出毛发根部的隆突部位培养出ESCs,此培养条件对细胞的生长最为有利。     

uPA/uPAR在人胚胎毛囊隆突区中表达的研究

目的 研究人胚胎毛囊干细胞所在部位隆突区形态及uPA/uPAR表达.方法 通过HE染色,确定毛囊隆突区的部位及大小;采用免疫细胞化学和原位杂交技术研究毛囊干细胞的隆突区部位uPA/uPAR的表达.结果 在球形毛钉期,毛囊隆突区最为明显;位于毛囊隆突区的干细胞有uPA/uPAR的表达.结论 球形毛钉期是研究人毛囊干细胞的较佳期;uPA/uPAR的表达与毛囊干细胞的增殖、迁移和细胞间信号传递有关.     

毛囊隆突细胞

毛囊具有不断更新的功能,提示毛囊中存在干细胞。由于周期漫长的细胞集中存在于隆突部位,所以隆突细胞被认为是表皮组织的干细胞。现已成功证实隆突细胞具有干细胞的一系列特性:高增殖能力、多向分化能力等。基于技术的飞速发展,人们对隆突细胞的表面标志、分离技术以及基因表达都有了较深刻的认识。     

毛囊细胞移植诱导裸鼠毛囊样结构形成的研究

目的:观察毛囊细胞移植诱导裸鼠毛发再生和毛囊重建情况.方法:采用细胞培养技术和裸鼠移植技术,将培养的毛囊毛乳头细胞、真皮鞘细胞和头皮真皮成纤维细胞按比例与毛囊上皮细胞混合,移植到裸鼠皮下,观察毛囊形成情况.结果:在毛囊毛乳头细胞与毛囊上皮细胞混合后移植到裸鼠皮下后可见毛囊样结构形成,而毛囊真皮鞘细胞和头皮成纤维细胞与毛囊上皮细胞混合则不能诱导裸鼠毛囊样结构形成.结论:低传代培养的毛乳头细胞与毛囊上皮细胞混合后在体内可诱导毛囊样结构形成.     

人头皮毛乳头细胞体内诱导毛囊形成的实验研究

目的 探讨人头皮毛乳头细胞和毛囊上皮细胞在体内的相互作用，了解毛乳头细胞在体内诱导毛囊形成和调控毛囊生长发育的能力，为毛囊细胞移植奠定实验基础。方法 人头皮毛乳头细胞和毛囊上皮细胞共同移植到无胸腺裸鼠体内，在不同时相取材进行组织切片。H—E、角蛋白免疫组织化学染色。结果 毛乳头细胞和毛囊上皮细胞在体内相互作用，首先形成不规则的混合细胞团、逐渐发展到排列规则、最终形成完整的毛囊结构，并且在移植腔上方的裸鼠皮肤内形成了毛囊结构。这些结构表达毛囊特有的角蛋白。结论 培养的毛乳头细胞与毛囊上皮细胞在裸鼠体内能形成完整的毛囊结构，同时也能诱导裸鼠角质形成细胞、形成毛囊结构。     

毛乳头细胞凝集性生长对诱导毛囊样结构形成能力的影响

目的　以细胞外基质成分纤维连接蛋白促进培养的人头皮毛乳头细胞凝集性生长行为 ,观察毛乳头细胞的凝集性生长对诱导毛囊形成能力的影响。方法　传代培养的人头皮毛乳头细胞经细胞外基质纤维连接蛋白预处理后 ,促进形成凝集性生长团 ,再与毛囊上皮细胞共同移植于裸鼠皮下 ,分别于 8、12周进行组织学检查 ,观察毛囊形成及分化程度。结果　 8周后纤维连接蛋白预处理的毛乳头细胞组可见有毛囊样结构形成 ,未处理组仅见松散细胞团 ;12周后两组均可见有毛囊样结构形成 ,但纤维连接蛋白预处理组较未处理组诱导形成毛囊样结构分化更成熟 ;真皮成纤维细胞组未见有毛囊样结构形成。结论　毛乳头细胞的凝集性生长特性对其诱导毛囊形成的能力有密切的关系 ,细胞呈凝集性生长后 ,其生物学功能增强。     

毛囊细胞移植法诱导毛囊的初步研究

目的 构建一个可靠有效的移植毛囊细胞诱导毛发发育的模型,以治疗脱发.方法 取自愿捐献的成人头皮标本,联用显微分离与免疫磁珠法获得人毛囊干细胞;消化法获得毛乳头细胞.培养后混合植入裸鼠皮下,观察毛囊形成情况.结果 在裸鼠的皮肤切片中可以看到较为完整的毛囊结构形成.结论 毛囊细胞移植法可以在体内诱导出毛囊样结构,为将来治疗脱发奠定了基础.

Abstract：

Objective To establish a convenient and reliable method for inducing hair regeneration by follicular cell implantation for the treatment of alopecia. Methods The human hair follicle stem cells were separated and purified by micromanipulation and magnetic cell sorting, and human scalp dermal papilla cells were isolated by enzyme digestion. The two cells were mixed and implanted subcutaneously in nude mice to observe the regeneration of the hair follicles. Results Formation of intact hair follicle-like structures was observed in the skin sections of the recipient nude mice. Conclusion Follicular cell implantation can induce hair follicle-like structures in nude mice, which provides a means for efficient hair regeneration for treatment of hair loss.     

人毛囊外根鞘隆起、真皮鞘和毛乳头细胞高效同步分离培养的方法

目的 寻求一种快速高效同步分离培养人头皮毛囊外根鞘隆起(Bulge)细胞.真皮鞘细胞和毛乳头细胞的方法.方法 将人头皮标本剪成小块,中性蛋白酶中37℃孵育2h后镜下将带外根鞘的毛干从真皮鞘中拔出,组织块法培养外根鞘隆起(Bulge)细胞;从真皮一皮下组织交界处横断头皮,拔出含毛乳头的真皮鞘,胶原酶D 37℃孵育6～8h,多次低速离心,毛乳头沉淀重悬后培养,收集的真皮鞘细胞上清液经高速离心后重悬培养;培养的细胞分别用K19或α-平滑肌动蛋白组化鉴定.结果 同一标本可获得纯化的外根鞘Bulge细胞,真皮鞘细胞和毛乳头细胞.结论 将现有的分离方法改进和综合运用.可以从同一毛囊标本同步高效获取3种成分细胞.     

成年鼠被毛毛乳头细胞分离方法的建立与评价

目的 寻求一种简单高效的分离培养小鼠被毛毛乳头细胞的方法.方法 取5周龄C57小鼠背部皮肤,刮去毛发后予0.2％Ⅰ型胶原酶37℃消化2h,刮下毛球部,经过2次Ficoll密度梯度离心后,得到纯净的毛乳头进行培养.检测毛乳头贴壁率、毛乳头细胞特异性标记表达及其体内毛囊重建能力.结果 该分离方法能显著降低工作强度,减少污染机会,获得的毛乳头贴壁快、细胞迁出快.qRT-PCR、细胞免疫荧光实验结果均证实体外培养的小鼠被毛毛乳头细胞可表达与毛囊诱导能力相关的特异性标记物ALP、β-catenin及Versican,且与触须毛乳头细胞相比差异无统计学意义(P＞0.05).体外培养的小鼠被毛毛乳头细胞具有诱导毛囊再生的能力.结论 胶原酶消化结合Ficoll梯度离心是一种简单、有效地分离获取小鼠背部毛乳头的方法.     

Constructing skin-equivalents using hair follicle stem cells

Objective： To establish the method of constructing skin-equivalents （SE） using hair follicle stem cells （HFSC）. Methods： K19 positive cells derived from hair were cultivated using serum-free medium KGM and seeded on dermal equivalents （DE）. After the culture between the air-liquid interface for 14 days, SE were harvested and used for evaluation. Results： K19 positive cells chosen as HFSC were located in bulge of out root sheet in hair follicle. Cultivated HFSC could build a fully developed, multi-layered epidermis on the basis of DE, resembling the skin structure. Conclusion： HFSC located in out root sheet can differentiate into kerafinocyte in vitro and be used for SE construction.     

大鼠胚胎背部皮肤发育过程中毛囊干细胞的发育初探

目的探讨大鼠胚胎背部皮肤毛囊干细胞的发育规律。方法使用冰冻超薄切片后固定,结合免疫组织化学染色方法（IHC）,显示出毛囊干细胞的位置和发育程度,然后对医学阳性程度表达区域使用软件分析和统计方法处理。结果大鼠胚胎背部皮肤呈现逐渐增厚的趋势,其中毛囊隆突区并不明显,但可明显观察到三种干细胞标记物在皮肤全层,尤其是基底层的表达变化。结论形态学观察说明毛囊发生初期毛囊干细胞（hair follicle stem cell,HFSC）不仅仅定位于毛囊上段,三种HFSC标志物的表达有差异。背部皮肤基底层细胞具有干细胞特性,未分化为表皮细胞或者毛囊中的各种细胞。β1-integrin,CD34和K15的表达变化可能与毛囊干细胞以及毛囊的生物学特性有关。     

环氧合酶-2在毛囊皮脂腺单位的表达及其意义

目的研究环氧合酶-2(cyc looxygenase-2,COX-2)在成年大鼠毛囊皮脂腺单位中的表达模式。方法用RT-PCR、免疫组织化学技术和原代干细胞培养技术观察COX-2在毛囊皮脂腺单位的表达情况。结果成年大鼠毛囊皮脂腺单位中,bu lge(隆突)区弱表达,皮脂腺高表达,而毛球部未见表达。结论COX-2在正常成年大鼠皮脂腺中呈特异性的表达,并且它的表达模式联系毛囊干细胞从bu lge到皮脂腺迁移分化通路,提示COX-2在毛囊干细胞定向分化为皮脂腺细胞中可能起一定的作用。