外泌体来源的miR-181a促进胶质瘤的血管生成

目的:探讨外泌体来源的miR-181a对胶质瘤血管生成和肿瘤进展的影响.方法:选用2017年8月至2019年12月海南医学院第二附属医院手术切除的83例胶质瘤和13例瘤旁组织标本,以及胶质瘤细胞U87、A172、U251、LN229、U373和小神经胶质细胞HM,用qPCR法检测瘤组织和细胞中miR-181a的表达水平...     

PDGF-BB通过外泌体促进人骨肉瘤的血管新生

目的:探索PDGF-BB是否可以通过外泌体传递,并且验证其在人骨肉瘤中的促血管新生的功能.方法:分离多种人骨肉瘤细胞中的外泌体,WB法检测PDGF-BB在人骨肉瘤细胞及其外泌体中的表达,将骨肉瘤SJSA-1细胞来源的外泌体与HUVEC共孵育,免疫荧光和激光共聚焦扫描显微镜观察外泌体PDGF-BB进入细胞的方式;慢病毒感...     

miR-15a在多发性骨髓瘤患者外泌体中的表达及外泌体对肿瘤生长的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-15a在多发性骨髓瘤（MM）患者外泌体中的表达及外泌体对肿瘤发生发展的意义。［方法］ 选择在我院治疗的MM患者71例及健康志愿者20例,分析miR-15a在血浆外泌体中的表达水平;并以人源MM细胞株MM.1R细胞为实验模型,采用增殖实验观察外泌体对肿瘤细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡,采用Western blot检测凋亡通路相关蛋白的表达。［结果］与健康志愿者相比,MM患者的血浆miR-15a水平显著降低(4.45±0.20 vs 12.86±0.63,P<0.001),且与患者临床分期有关（P=0.023）。当使用MM患者来源的外泌体处理MM.1R细胞后,实验组细胞增殖率较对照组提高,在12h、24h、48h时分别提高了14.1%、34.0%、52.7%(P<0.01);而健康志愿者来源的外泌体则使细胞增殖率降低,在12h、24h、48h时分别降低了12.4%、20.8%、27.5% (P<0.01)。流式细胞术结果显示,MM患者来源外泌体抑制了肿瘤细胞凋亡,24h凋亡率减少了3.3% (P=0.005);而健康志愿者来源外泌体促进了肿瘤细胞凋亡,24h凋亡率增加了7.8% (P<0.001)。Western blot检测发现MM组的Bcl-2表达增加,Bax和caspase-3表达下降,与健康志愿者来源的外泌体作用相反。［结论］促凋亡因子miR-15a在MM患者外泌体中的表达水平低于健康人群,且MM患者来源的外泌体具有促进肿瘤发展的作用。     

miR-429对食管鳞癌细胞EC9706的影响及其分子机制探讨

目的:探讨miR-429对食管鳞癌细胞的影响及其靶向潜在的分子机制。方法:将miR-429 mimics、miR-429 mimics NC、miR-429 inhibitor和miR-429 inhibitor NC分别转染至食管鳞癌细胞EC9706,分别设为miR-429 mimics组、miR-429 mimics NC组、miR-429 inhibitor组和miR-429 inhibitor NC组。利用实时荧光定量检测各组miR-429的表达情况,MTT法检测细胞增殖率,通过TargerScans Human7.1预测miR-429靶基因并利用荧光素酶活性检测对其进行验证,蛋白免疫印迹检测各组细胞中E盒锌指结合蛋白1（ZEB1）蛋白的表达情况。结果:空白对照组、miR-429 mimics NC组、miR-429 inhibitor NC组之间miR-429相对表达量差异不明显（P＞0.05）。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组食管鳞癌EC9706细胞中miR-429表达量显著上调（P＜0.05）;与miR-429 inhibitor NC组相比,miR-429 inhibitor组食管鳞癌EC9706细胞中miR-429表达量显著下调（P＜0.05）。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组中EC9706细胞增殖率显著下降（P＜0.05）,miR-429 inhibitor NC组中EC9706细胞增殖率无显著差异（P＞0.05）,miR-429 inhibitor组中EC9706细胞增殖率显著增加（P＜0.05）。预测miR-429靶基因为ZEB1,荧光素酶活性检测证实ZEB1为miR-429靶基因。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量显著下调（P＜0.05）,miR-429 inhibitor NC组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量无显著差异（P＞0.05）,miR-429 inhibitor组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量显著上调（P＜0.05）。结论:miR-429可通过靶向ZEB1抑制食管鳞癌细胞增殖。     

miR-203抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭及其分子机制探讨

目的:探究miR-203对食管鳞癌细胞(TR146、EC109)迁移、侵袭能力的影响及其分子机制。方法:检测miR-203在食管鳞癌细胞系中的表达水平,并通过转染miR-203激动剂agomir使TR146、EC109细胞稳定高表达miR-203,miR-203 agomir阴性对照组(NC)和无处理组(Blank)作为对照。通过划痕实验、Transwell实验检测miR-203对TR146、EC109细胞迁移、侵袭能力的影响。利用生物信息学分析miR-203潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验、实时定量PCR（qPCR）实验、Western blot实验验证miR-203靶基因。通过拯救实验探究miR-203是否通过抑制靶基因发挥作用。结果:与正常食管上皮细胞相比,miR-203在食管鳞癌细胞系中表达下调。在TR146、EC109细胞内将miR-203表达水平上调数倍,划痕实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞迁移能力,Transwell实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞侵袭能力。生物信息学、qPCR实验和Western blot实验表明LASP1(LIM and SH3 domain protein 1)是miR-203潜在的靶基因。拯救实验表明miR-203通过靶向抑制LASP1发挥抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭的作用。结论:miR-203能够抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭,并且该抑制作用可能通过miR-203靶向抑制LASP1介导,为食管鳞癌临床诊断和靶向治疗提供了理论依据。     

肿瘤细胞外泌体microRNA调控血管生成机制的研究进展

外泌体在促进肿瘤细胞生长和转移的过程中发挥着非常重要的作用.肿瘤细胞分泌的外泌体包含了来自肿瘤细胞的信息,其中包括蛋白质、脂类以及微小RNA(microRNA,miRNA)在内的核酸物质等.在肿瘤的发生发展过程中,肿瘤细胞会将对自己有利的信息通过外泌体分泌到周围的微环境中,从而促进肿瘤细胞的生长和转移,这也是肿瘤患者高...     

血清外泌体miR-148a联合miR-106a检测用于胃癌筛查的研究探讨

目的:寻找合适的外泌体mi RNA作为肿瘤生物标志物,辅助临床进行胃癌筛查。方法:将mi R-148a及mi R-106a作为潜在标志物,研究两种mi RNA在癌组织及癌旁组织表达的差异性。选取2017年9月至2018年9月在福建省立医院诊治的初诊胃癌术后标本共37对(胃癌组织及癌旁组织)进行组织学mi RNA检测。选取初诊胃癌患者83例为胃癌组,良性病变的患者78例为对照组,全部进行血清外泌体mi RNA检测。结果:与癌旁组织相比,癌组织中mi R-148a表达水平降低,mi R-106a表达水平升高,联合检测2^-△△CP[△CP=CP₍(mi R-148a))-CP₍(mi R-106a))]值降低。与对照组相比,胃癌患者中血清外泌体mi R-106a表达水平降低,联合检测2^-△△CP值升高。血清外泌体联合检测2-△△CP值对胃癌组和对照组鉴别的曲线下面积[AUC为0.844(95%CI:0.782～0.905,P<0.001)],大于mi R-148a及mi R-106a单独检测,其cu...     

miR-146a对食管鳞癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的探讨miR-146a对食管鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期等生物学行为的影响及其机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-146a在食管鳞癌细胞株Eca109、KYSE140和KYSE150中的表达。将miR-146a模拟物转染Eca109细胞, 上调miR-146a的表达, 采用细胞增殖实验检测细胞的增殖能力, Transwell实验检测细胞的侵袭能力, 划痕实验检测细胞的迁移能力, 流式细胞术检测细胞的凋亡和细胞周期。运用相关生物信息学技术预测miR-146a的靶基因, 采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-146a与靶基因白介素1受体相关激酶1(IRAK1)3′端非翻译区(3′UTR)的结合情况, RT-qPCR技术和Western blot法分别检测靶基因mRNA和蛋白的表达。结果食管鳞癌Eca109、KYSE140和KYSE150细胞中miR-146a的相对表达量分别为0.36±0.05、0.16±0.06和0.09±0.02, 均低于食管正常上皮细胞HEEC(1.00±0.05, 均P<0.01)。miR-146a模拟物转染E...     

外泌体在胃癌转移中作用机制的研究进展

胃癌是发病率高且进展较快的消化道恶性肿瘤之一。随着手术、化疗、靶向治疗等多种治疗方法的不断进步,胃癌患者的5年生存率较过去有所改善,但由于胃癌早期缺乏有效的诊断方法,多数患者在确诊时往往已发生转移,预后较差。因此,对胃癌转移机制的探寻始终是胃癌研究领域的热点之一。外泌体是一种可以传递蛋白质、核酸等多种分子、实现细胞间信息交流的胞外囊泡。外泌体运载的分子参与了胃癌的转移过程,并且可能成为诊断胃癌的新型分子标志物,为胃癌的精准治疗提供了新方向。本文就外泌体在胃癌转移中的作用及机制进行综述。     

MiR-195-5p对食管鳞癌细胞放射敏感性的影响及作用机制研究

目的：探讨miR-195-5p对食管鳞癌细胞放射敏感性的影响及作用机制。方法：采用4和8 Gy X射线照射KYSE510和KYSE150细胞,以未照射细胞为对照。采用CCK-8法检测细胞生长情况,qPCR检测细胞内miR-195-5p及survivin mRNA的表达水平,Western blot检测细胞内survivin蛋白的表达水平。KYSE510细胞分为转染miR-195-5p类似物组、转染miR-195-5p拮抗物组和相应的对照组,并采用X射线照射后,Incucyte实时动态活细胞监测和EdU掺入实验测定细胞增殖情况,克隆形成实验和流式细胞术分别测定细胞克隆形成率和凋亡率,双荧光素酶报告基因实验验证各组KYSE150细胞的荧光素酶活性。结果：经X射线照射后的KESE510和KYSE150细胞生长均受到明显抑制,与未照射组相比,照射组细胞miR-195-5p表达降低,survivin蛋白表达升高（P<0.05或0.01）。转染miR-195-5p类似物组的KESE510细胞在接受X射线照射后的存活率较阴性对照组降低,EdU阳性率和克隆存活率降低,凋亡率显著升高,细胞中survivin mRNA和蛋白表达较阴性对照组均降低（P<0.05或0.01）;转染miR-195-5p拮抗物组KESE510细胞的EdU阳性率和克隆存活率较阴性对照组升高,细胞中survivin mRNA和蛋白表达均升高（P<0.01）。在KYSE150细胞中过表达miR-195-5p能够抑制BIRC5 3' UTR报告基因的荧光素酶活性（P<0.05）。结论：MiR-195-5p可能通过靶向抑制survivin基因的表达增强食管鳞癌细胞的放射敏感性。     

食管鳞癌中骨桥蛋白的表达及与血管生成关系

目的 观察骨桥蛋白(OPN)在食管鳞癌组织中的表达状况,同时观察食管鳞癌组织中血管生成状况,探讨OPN与血管生成的关系.方法 运用免疫组化S-P法做44例食管鳞癌组织 兔抗人骨桥蛋白抗体染色,用抗CD34单克隆抗体做44例食管鳞癌组织免疫组化染色,并在显微镜下作MVD计数.结果 OPN在食管癌组织的表达率为86.3﹪.癌组织中OPN主要表达于肿瘤细胞的细胞浆中.全组44例标本MVD计数为24.07±5.82,癌巢及癌细胞密集区MVD少于癌周区域.本研究提示,OPN阳性组MVD高于阴性组(P＜0.05).等级相关分析,结果表明OPN表达与MVD呈正相关(r=0.320,P=0.034).结论 食管鳞癌组织中OPN主要由肿瘤细胞产生.食管鳞癌中存在活跃的血管生成.OPN与血管生成关系密切.     

食管鳞癌肿瘤微环境相关研究进展

食管鳞癌是我国食管癌的主要类型，危害严重。近年来，许多研究发现，其发生、发展与所在的肿瘤微环境密切相关。食管鳞癌细胞所在的肿瘤微环境可通过调控免疫微环境、释放细胞因子、改变血管生成等多种途径促进食管鳞癌细胞生长、侵袭和转移，并造成免疫逃逸。本综述从白介素-6（interleukin-6，IL-6）、程序性死亡［蛋白］-1（programmed death-1，PD-1）/程序性死亡［蛋白］配体-1（programmed death ligand-1，PD-L1）、转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、乏氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）及血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等影响食管鳞癌肿瘤微环境的重要通路方面，阐述肿瘤微环境与食管鳞癌预后的关系及相关机制，并介绍相关靶向治疗的研究进展，旨在为食管鳞癌的防治研究提供参考。     

Latexin在食管鳞癌组织中的表达及其临床价值

目的 探讨Latexin（LXN）在食管鳞癌组织中的表达情况及临床价值。方法 采用组织芯片和免疫组织化学技术检测183例食管鳞癌组织中的LXN蛋白表达,并分析其表达情况与临床病理参数（肿瘤大小、T分期、N分期、分化程度和TNM分期）及预后间的关系。结果LXN在癌旁食管鳞状上皮中呈微弱表达,阳性表达率为100.0%,而在食管鳞癌组织中呈淡黄色或不表达,其阳性表达率为48.6%（89/183）,低于癌旁组织（P＜0.05）;LXN阳性表达与肿瘤大小、T分期、N分期、组织分化及TNM分期有关。单因素生存分析表明LXN阳性表达者的中位总生存期长于LXN阴性表达者（P=0.001）。结论LXN在食管鳞癌中表达下调,且与临床病理参数有关,在一定程度上反映了食管癌的不良预后。     

miR-520a在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的:探讨miR-520a在人食管鳞癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法:采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测59例食管鳞癌组织和45 例癌旁组织中miR-520a的表达,分析其与临床病理特征之间的关系。结果:miR-520a在食管鳞癌组织中的表达明显低于癌旁组织（P＜0.05）,并与患者淋巴转移明显相关（P＜0.05）。结论:miR-520a在食管鳞癌中低表达,提示其可能发挥抑癌基因的功能。     

miR-203基因在食管鳞癌中的表达及其甲基化状态的研究

[摘要] 目的：检测食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）中miR-203基因的表达及其甲基化状态,探讨miR-203基因在食管鳞癌发生及发展中的作用。方法：分别应用实时定量RT-PCR（Real-Time RT-PCR, qRT-PCR）以及甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR, MSP）的方法检测DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycitydine, 5-aza-dC）处理前后的食管癌细胞系（TE1、TE13、YES-2、EC109、T.TN）以及食管鳞癌组织及相应癌旁正常组织中miR-203基因的表达和甲基化状态。结果：未经5-aza-dC处理的五种食管癌细胞系中miR-203基因的表达均相对较低,经5-aza-dC处理后,五种食管癌细胞系中miR-203基因的表达均增高。五种食管癌细胞系在5-aza-dC处理前表现为miR-203基因高甲基化状态,应用5-aza-dC处理后,YES-2细胞系中miR-203基因甲基化程度降低,非甲基化程度增加,其余四种细胞系中miR-203基因均表现为非甲基化状态。miR-203基因在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织（P＜0.05）,并与TNM分期和组织学分化程度密切相关（P＜0.05）。食管鳞癌组织中miR-203基因的启动子区甲基化率为62.7%（52/83）,显著高于癌旁正常组织（7.22%, 6/83） （P＜0.05）,并与TNM分期和组织学分化程度密切相关（P＜0.05）。发生miR-203基因甲基化的食管鳞癌组织中miR-203基因的表达显著低于未发生甲基化的食管鳞癌组织（P＜0.05）。结论：miR-203基因在食管鳞癌中的异常低表达与食管鳞癌的发生、发展密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一。     

苦参碱通过诱导miR-433-3p表达抑制食管鳞癌放射抵抗

目的 探讨苦参碱在食管鳞癌中对放射抵抗及miR-433-3p表达的影响.方法 构建miR-433-3p及RAD21过表达和敲减放射抵抗Eca-109R细胞,经不同照射剂量(0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy及8 Gy)及不同浓度(0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、3.0 mg/mnL、4....     

miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭

背景与目的：生物信息学分析提示GATA6是miR-203a-3p的潜在靶基因,明确miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭。方法：采用Lipofectamine ^TM RNAiMAX对培养的KYSE-70和KYSE-180细胞瞬时转染。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测miR-203a-3p和GATA6的表达水平。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测GATA6蛋白的水平。质粒联合转染后检测相对萤光素酶活性。对食管鳞癌患者标本进行恶性肿瘤与异型增生组织miR-203a-3p和GATA6的表达检测。结果：RTFQ-PCR及Western blot检测结果显示,与对照组比较,GATA6基因和蛋白的表达在miR-203a-3p转染组中降低,在miR-203a-3p inhibitor组却升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,miR-203a-3p转染组KYSE-70细胞增殖能力下降,miR-203a-3p inhibitor组中却升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。在KYSE-180中虽然差异无统计学意义,但其趋势却与KYSE-70一致。与对照组比较,在KYSE-70和KYSE-180细胞系中,侵袭细胞数值/视野在miR-203a-3p转染组中均明显下降（P<0.01）,在miR-203a-3p inhibitor组中却明显升高（P<0.05）。与miR-203a-3p掠夺型+GATA6野生型组和miR-203a-3p野生型+GATA6突变型组比较,相对萤光素酶活性在miR-203a-3p野生型+GATA6野生型组中降低,差异有统计学意义（P<0.05）。与异型增生组织相比较,100%（10/10）食管鳞癌患者miR-203a-3p在恶性肿瘤组织的表达下调,而GATA6表达水平上调。结论：miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭能力。     

牙髓干细胞外泌体对口腔鳞状细胞癌CAL-27增殖、迁移的影响及其机制的研究

目的 研究人牙髓干细胞来源的外泌体(human dental pulp stem cell-derived exosome,hDPSCs-exo)对口腔鳞状细胞癌细胞(CAL-27)增殖和迁移的影响。方法 收集来哈尔滨医科大学附属第一医院治疗的16~28岁患者因阻生或正畸拔除的牙髓组织,通过超速离心法提取hDPSCs-exo,不同浓度hDPSCs-exo处理CAL-27细胞,通过MTT实验、Transwell实验和划痕实验检测CAL-27细胞增殖和迁移能力的变化;Western blot研究PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果 MTT实验结果显示,仅80 μg/mL hDPSCs-exo组在第5d对CAL-27细胞的增殖有抑制作用(P＜0.05),其余各浓度组均没有显著影响;Transwell和划痕实验结果显示20、60、80 μg/mL组可以显著地促进CAL-27细胞的迁移(P＜0.05);Western blot结果显示经hDPSCs-exo处理后,CAL-27细胞中PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、P-Akt的表达水平明显上调(P＜0.05)。结论 hDPSCs-exo高浓度时抑制CAL-27细胞的增殖,适宜浓度能显著促进CAL-27细胞的迁移能力,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。