TRIB3-AKT-mTORC1-p70S6K/4EBP1信号通路可能参与调节大鼠精原干细胞和精子发生过程的研究进展

在大鼠产后早期Tribbles假激酶-3(Trib3)高表达,Trib3在调节物质代谢、正常的生理过程和疾病的发生中起着非常重要的作用,其作用往往通过信号通路来完成。Trib3通过PI3K-Akt信号通路参与多种物质代谢过程,其中PI3K-Akt–mTORC1-p70S6K/4EBP1参与调节睾丸增殖、分化、精子发生,Trib3是Akt的抑制剂,因此以Akt为切入点,推断出Trib3-Akt-mTORC1-p70S6K/4EBP1信号通路可能调控精原干细胞增殖、分化及精子发生的过程,这个观点可为男性不育分子机制的研究提供新思路。     

精原干细胞移植及其相关研究进展

睾丸功能有赖于精原干细胞持续不断的增殖，这些细胞紧贴于曲细精管基膜，埋嵌在支持细胞间，经过同源性扩增形成分化型精原细胞链，分化形成的精母细胞经过两次减数分裂形成精子细胞，后者经过变态过程最后形成成熟的精子。在整个精子发生过程中，精原干细胞在所有生殖细胞类型中展现出巨大的细胞群扩增能力。另外，DNA在复制和减数分裂的过程中，很可能会出现DNA缺失，     

黄芪注射液对大鼠精原干细胞增殖作用的影响

目的：研究黄芪注射液对体外培养的精原干细胞增殖过程中所起的调控作用;建立完善的精原干细胞体外培养体系,为精原干细胞的体外大量扩增提供技术和方法,为治疗男性不育等提供相关技术.方法：选用9日龄的SD大鼠睾丸,应用不连续Percoll梯度液分离纯化精原干细胞,并应用选择性贴壁法进一步纯化精原干细胞;细胞计数法研究不同浓度（0、5、10、20、50、100 g/L）黄芪注射液对精原干细胞增殖的效应;MTT法研究不同浓度黄芪注射液对精原干细胞增殖的效应.结果：细胞计数法结果显示,与对照组相比,黄芪注射液对精原干细胞有增殖作用（P﹤0.01）.MTT结果也显示实验组比对照组细胞数量均显著增多（P﹤0.01）.结论：黄芪注射液能够促进精原干细胞的增殖.     

GDNF在精原干细胞中对H19和A-myb表达的调控研究

目的通过研究胶质细胞神经源性营养因子（GDNF）对H19和A-myb表达的调控,探讨GDNF调节精原干细胞自我更新的分子机制。方法采用混合酶消化和差速贴壁法从出生后6 d的小鼠睾丸中分离、鉴定并培养精原干细胞。用GDNF分别刺激精原干细胞和经磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路抑制剂LY294002预处理的精原干细胞后,采用RT-PCR技术检测细胞H19和A-myb的表达。结果相关鉴定分析证实分离培养的细胞为精原干细胞。RT-PCR检测结果显示：GDNF刺激下的精原干细胞的H19和A-myb表达均显著上调,而经LY294002预处理的精原干细胞在GDNF刺激下其H19和A-myb的表达无明显变化。结论在体外培养的小鼠精原干细胞中,GDNF通过PI3K/Akt信号通路上调H19和A-myb的表达。     

大鼠精子发生中一种新的阶段性表达基因全长cDNA的分离

精子发生是一系列基因严格按照时空顺序相继转录表达的过程。寻找和研究不同时期、不同发育阶段的差异表达基因,将有助于最终阐明精子发生的机理。由于大鼠生精细胞在曲细精管内的排列极为有序,本研究采用曲细精管分段分离结合差异显示ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）的方法...     

非人灵长类动物精原干细胞研究进展

精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）是维持精子发生的一类干细胞,由于与人亲缘关系的相近性,使得开展非人灵长类动物SSCs研究具有重要的理论意义和比较医学价值。本文综述了非人灵长类动物SSCs的生物学特性、鉴定方法、冷冻保存、移植及生精细胞缺失模型建立等方面的研究进展。     

血睾屏障在精子发生中的作用

血睾屏障（blood-testis barrier,BTB）广泛存在于哺乳动物的睾丸组织中,支持细胞是曲细精管中与生精细胞相接触的唯一体细胞,其参与形成血睾屏障,可分泌多种生精细胞分化成熟所需的物质。BTB的动态开合可调控精子发生所需的营养物质、重要分子以及危害精子发生的有害毒物进入减数分裂期和分裂后期生殖细胞形态变化的近腔室,为哺乳动物的精子发生提供一个适宜的微环境。BTB还可赋予生精上皮细胞极性,参与生精细胞迁移,为生精细胞的迁移提供导向,保证了生精细胞在曲细精管内迁移方向的正确性,同时还能阻止自身对精子抗原产生的自体免疫反应。因而血睾屏障对于精子发生具有极为重要的作用,本文就血睾屏障在精子发生中的作用及机制做一综述,为今后从血睾屏障方面调控男性不育的预防及控制提供线索。     

MicroRNA与生精障碍的研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类长度为20～25个核苷酸的内源性非编码RNA,主要在转录后和翻译水平上调控基因表达。许多研究表明,miRNA在生精过程中发挥重要的调控作用,miRNA的异常影响精子形成的多个阶段和不同的细胞类型,导致生精障碍,引起男性不育。现将近年来miRNA在精子发生和生精障碍领域的研究文献作一综述。并介绍miRNA在精子发生中的作用及其与生精障碍的关系,以及miRNA在生精障碍性疾病领域的诊断和治疗潜力。     

精子发生过程中调控性非编码 RNAs 的功能

精子数量下降和质量减低是全球范围内男性不育疾病增加的主要原因。因此理解精子发生及其调控的分子机制是非常必要的。精子发生主要分为有丝分裂、减数分裂和精子形成三个阶段,这些过程被阶段特异性的基因表达严格调控,而众多的调控性非编码 RNAs则是基因表达的重要调控因子。飞速发展的基因组检测技术已经证实,调控性非编码 RNAs在不同生物演化和疾病进程中基因表达的转录和转录后水平上发挥重要的调控作用,其包括微小 RNA(miRNA)、小干扰RNA（siRNA）、与 PIWI 蛋白相互作用的 RNAs（piRNA）和长链非编码 RNA（lncRNA）。讨论这些转录本在精子发生中的功能作用,并综述其异常表达与相关疾病的关系。     

FSH预测非梗阻性无精子患者精子发生类型的探讨

目的　探讨不同精子发生类型的非梗阻性无精子症患者的FSH水平差异是否有显著性 ,从而评价FSH水平用于单精子卵泡浆内注射时评估精子发生及成熟情况价值。方法　选择 1 60例非梗阻性无精子症患者 ,测定其性激素水平 ,按睾丸活检分为三组 :唯支持细胞、生精成熟停滞、有精子发生但生精功能低下 ,比较三组FSH水平。结果　三组间唯支持细胞与生精成熟停滞、生精功能低下的FSH差异有显著性意义 (P <0 .0 1 ) ,生精成熟停滞与生精功能低下的FSH差异无显著性意义。结论　FSH可为非梗阻性无精子患者行单精子卵泡浆内注射前预测精子发生类型提供参考。     

哺乳动物睾丸生精细胞的体外培养

哺乳动物精子发生是一个十分复杂的过程,影响因素众多,体外培养生精细胞一般有组织培养和细胞培养两类方法,目前,已有生精细胞成功地在体外从细线期精母细胞经2次减数分裂分化为精子细胞的报道,但 精原细胞的分化和精子细胞的成熟仍是两个难点,建立生精细胞体外培养模型有助于研究精子发生的调控机制,可用于辅助生育技术,治疗精子发生阻滞的患者,对精子发生机制的进一步阐明,也会促进生精细胞体外培养研究的发展。     

大鼠A型精原干细胞的分离和纯化

目的摸索完善A型精原干细胞分离、纯化的方法与技术。方法选用9d的SD大鼠,不连续Percoll梯度液分离纯化精原干细胞,应用选择性贴壁法进一步纯化精原干细胞;台盼蓝排斥实验确定精原干细胞的活力;HE染色法观察细胞形态;c-kit细胞免疫组化鉴定细胞类型并进行细胞纯度分析。结果台盼蓝实验显示细胞活力维持于88.73%±0.85%;c-kit细胞免疫组化结果显示分离得到细胞为精原干细胞;细胞纯度为90.48%±1.78%。结论应用梯度离心及选择性贴壁法获得了纯度较高的A型精原干细胞。     

睾丸Sertoli细胞与精子发生调控

哺乳动物精子发生是一个高度有序的细胞发育和分化过程.睾丸Sertoli细胞为唯一与生精细胞接触的体细胞,以其独特的结构和功能为精子发生提供适宜的微环境,对生精过程起至关重要的调控作用.本文从Sertoli细胞结构、Sertoli细胞与精子发生的内分泌、旁分泌调控、Sertoli对生精细胞的营养支持及Sertoli细胞和生精细胞体外培养等方面,就睾丸Sertoli细胞对精子发生过程的调控作用如下综述.     

生精细胞凋亡与P53

精子发生始于精原细胞的克隆扩增,经细胞的分化、有丝分裂、减数分裂、变态,最终形成精子.精子发生受到许多因素的调节,其中最主要受激素控制,促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinising hormone,LH)、雄激素等是生精细胞的存活因子[1].细胞内分子对精子发生的调节也不容忽视,如cAMP反应元素调节子(cyclin AMP-responsive element modulator,CREM)在减数分裂后精子细胞中高表达,是一种转录因子,CREM基因突变致精子缺失可引起不育;c-myc基因可促进生精细胞的凋亡.生精细胞的存亡还与周围的支持细胞以及间质细胞所形成的微环境有关[2].各种生长因子对精子发生也有直接或间接的调节作用,如表皮生长因子(epidermalgrowth factor,EGF)、转化生长因子(transforming growth factor,TGF),胰岛素样生长因子( insulin-like growth factor,IGF)等.在精子发生过程中,各级生精细胞都会发生凋亡.在生理条件下,凋亡是机体清除过量或异常生精细胞的一种方式.     

血清培养对大鼠精原干细胞生长周期的影响

目的探讨血清培养对大鼠精原干细胞生长周期的影响。方法采用percoll分离及差速贴壁法纯化精原干细胞.抗端粒酶逆转录酶免疫组化进行鉴定，用流式细胞仪对细胞生长周期进行判断。结果在有血清的培养基中培养的精原干细胞，其OD值逐渐升高（P〈0．05）；精原干细胞DNA合成期（S期）含量的增多。结论抗端粒酶逆转录酶免疫组化可作为鉴定精原干细胞提供较为充分的依据；血清能促进精原干细胞的体外增殖。     

序言

目的 建立稳定的精原干细胞中Pten基因敲除的小鼠模型,对表型进行初步观察,为研究Pten在精原干细胞中的作用及相关的机制奠定基础.方法 采用Cre/Loxp系统建立Pten在精原干细胞中条件性敲除的小鼠模型,以同窝正常雄鼠作为对照,通过解剖、HE染色等方法对小鼠的表型进行观察,并通过免疫荧光检测精原干细胞标记分子早幼粒细胞白血病锌指蛋白（Plzf）的表达并对免疫荧光染色中的阳性细胞进行统计.结果 与对照组相比,Pten敲除鼠在出生后出现发育迟缓现象,13d左右个体死亡,睾丸大小未受影响,但进一步的细胞计数统计发现Pten敲除后Plzf阳性细胞数目和对照组相比明显减少（P＜0.01）.结论 成功建立精原干细胞中Pten基因敲除的小鼠模型,并且Pten可能通过下调Plzf的表达影响精原干细胞的发育,这为进一步探讨精原干细胞复杂的调控网络提供了一定的实验依据和思路.     

生殖细胞的移植

生殖细胞移植恢复了生精干细胞向精子的发生，1994年最初的生殖细胞移植开始了对精子发生机理基本方面的探索，结合生殖细胞培养、冻存，生殖细胞移植开创了基因工程和家畜生产的新途径。另外，自身精原细胞的移植使男性肿瘤患者保存受精能力的研究又向前迈进了一步。本综述总结了生殖细胞移植的历史和现状，展望了精原干细胞研究的前景。     

精子发生过程中的组蛋白变化与雄性不育

男性不育的许多病理现象与生精细胞的表观遗传改变关系密切。表观遗传在精子发生过程中调控着生精细胞的有丝分裂、减数分裂和精子形成过程,其中,作为表观遗传的一个重要研究内容——组蛋白,在精子发生过程中会发生多位点和多种形式的氨基酸残基修饰,不同的修饰方式在精子发生的不同阶段精确地调控着生殖细胞的发育过程,且在精子形成阶段发生鱼精蛋白和组蛋白的替换。此外,在精子发生过程中,组蛋白修饰的异常改变还可能会损伤精子的发育过程,导致雄性不育。本文总结了精子发生过程中组蛋白修饰的变化、对生殖细胞发育的调控作用,以及组蛋白的异常改变与雄性不育的关系。     

兔精原干细胞培养及生物学特征的初步研究

目的:建立精原干细胞的培养方法并对培养细胞的生物学特征进行研究.方法:用饲养层和无饲养层两种方法培养幼家兔精原干细胞,在倒置相差显微镜下观察培养细胞的生长和形态变化,并对细胞的糖原、脂质及c-kit受体的细胞化学和免疫细胞化学染色结果进行分析.结果:成功的分离并培养幼家兔精原干细胞.在培养细胞中精原干细胞为主体细胞,并可见少量间质细胞.根据精原干细胞体积大小和形态特点,可分为大、小两种类型.PAS染色,精原干细胞胞质呈阳性反应;免疫细胞化学染色显示,体积较小的精原干细胞c-kit受体呈强阳性反应,体积较大的大精原干细胞呈弱阳性反应;间质细胞PAS染色和c-kit受体染色呈阴性反应,而脂质染色呈强阳性反应.精原干细胞培养无论有无饲养层,均能呈集落状生长,但有饲养层的培养,细胞的生长明显优于无饲养层培养.结论:青春期前的睾丸生精小管是精原干细胞最集中、数量最多,且容易获取分离的部位;精原干细胞的成功培养为今后重建完整的生精细胞系的治疗性移植和对这类定向干细胞的发育及分化潜能的研究提供了细胞模型.     

OCT4基因在体细胞肿瘤的研究进展

OCT4基因是POU转录因子家族中的成员,系8聚体结合转录因子,在人类定位于人6号染色体,能转录不同的信使RNA亚型(isoform),翻译几种不同的蛋白质.研究发现OCT4基因主要表达于胚胎干细胞和原始生殖细胞,随着干细胞的分化成熟其表达量逐渐下调.胚胎干细胞的信号调控通路中OCT4、SOX2、Nanog处于核心位置.