外泌体调控自噬对心血管疾病影响的研究进展

外泌体作为细胞间生物信息的载体,在细胞间信号传递中发挥了重要作用,并广泛参与细胞自噬、细胞凋亡、炎症反应、免疫调节等多种病理生理过程。外泌体通过其传递的内容物影响目标细胞的自噬水平。自噬是一种细胞分解代谢过程,可通过消除错误折叠的蛋白质和受损的细胞器来维持细胞内稳态,目前的研究表明自噬与心脏的衰老和萎缩密切相关。因此,调节自噬可能是未来心血管疾病治疗的新靶点。通过综述外泌体的生物发生和自噬的意义以及外泌体和自噬之间的关系,总结介绍了外泌体调控自噬对心血管疾病的影响作用及其研究的进展情况。     

低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响及机制

目的 探究低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体对卵巢癌细胞生物学功能的影响及机制。方法 人单核细胞系THP1诱导分化为M2型巨噬细胞,提取并且鉴定正常培养条件下M2型巨噬细胞外泌体(N-M2 exo)以及缺氧培养条件下M2型巨噬细胞外泌体(H-M2 exo)。SKOV-3细胞分为PBS组、N-M2 exo组和H-M2 exo组,分别与PBS、10μg/ml的N-M2 exo和H-M2 exo共孵育48 h, CCK-8法检测各组细胞增殖能力,Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞MEK和ERK的磷酸化水平。结果 相比于PBS组,N-M2 exo组和H-M2 exo组SKOV-3细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均显著增加(P<0.05),细胞凋亡水平显著下降(P<0.001),MEK和ERK的磷酸化水平显著增加(P<0.001)。相比于N-M2 exo组,H-M2 exo组SKOV-3细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均显著增加(P<0.05),细胞凋亡水平显著下降(P<0.001),M...     

缺氧诱导的外泌体活化自噬促进肝癌进展

目的 探讨缺氧诱导的外泌体对肝癌进展的调节作用及其机制。方法 将Huh7细胞置于0.1%O₂培养箱培养24 h作为缺氧组,另设常氧组,提取外泌体,纳米追踪技术检测外泌体的浓度和粒径大小,免疫印迹检测HSP70、Alix、CD63的表达。将Huh7细胞分为对照组(PBS)、常氧外泌体组(20μg/ml常氧外泌体)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体),实时无标记细胞分析仪(real-time cell analysis, RTCA)实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,免疫印记检测细胞PCNA、cyclin D1、Bax、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3、p62的表达,激光共聚焦检测自噬流的改变。Huh7细胞分为对照组(PBS)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体)、缺氧外泌体+3-MA组(5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤+1 h后20μg/ml缺氧外泌体),检测细胞增殖、迁移和相关蛋白的表达。结果 与常氧组相比,缺氧组外泌体浓度增加,但外泌体粒径的大小没有明显变化,缺氧组外泌体标记蛋白HSP70、Ali...     

细胞外泌体蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药关系及机制研究

目的:探讨细胞外泌体蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药的关系。方法:用不同浓度顺铂(6、12、18、24μg/mL)处理细胞,筛选出大鼠卵巢癌耐药细胞株,MTT法检测细胞存活率。用超速差速离心法获得外泌体蛋白,纳米流式检测外泌体蛋白的粒径大小及颗粒浓度。通过qRT-PCR技术比较两组细胞系AGR2相关mRNA的转录情况,并通过Western blot实验对外泌体中AGR2蛋白表达水平进行比较,分析细胞外泌体中蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药的关系。结果:NUTU-19肿瘤细胞生存率与化疗药浓度呈负相关;药物浓度的升高与耐药细胞株(NUTU-19R)死亡率相关性不明显。NUTU-19R细胞株AGR2相关mRNA表达水平高于NUTU-19细胞株,差异有统计学意义(P<0.05);NUTU-19R细胞株AGR2蛋白表达高于NUTU-19细胞株,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:细胞外泌体蛋白AGR2高表达促进了上皮性卵巢癌获得性耐药的形成。     

脐带间充质干细胞源外泌体通过自噬对肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用研究

目的 研究间充质干细胞源外泌体(Exo)对衣霉素(TM)诱导肾小管上皮细胞(HKC)的凋亡作用。方法 以不同浓度(0、1、2、4μg/mL)TM诱导HKC产生凋亡。采用CCK-8法检测细胞增殖活性。采用蛋白印迹法及流式细胞术检测细胞凋亡情况;检测自噬蛋白LC3B、Atg5和Beclin1的基因及蛋白表达水平。分离脐带间充质干细胞Exo,并进行流式细胞术表面标志物鉴定,研究不同浓度Exo(0、50、75、100、150、200μg/mL)与TM共处理对细胞活性的影响。通过流式细胞术及细胞免疫荧光检测LC3B的表达情况。分析Exo与TM共处理对细胞凋亡水平的影响。结果 1、2、4μg/mL TM均能抑制HKC增殖活性并呈浓度依赖性;不同浓度TM均能诱导HKC凋亡,并激活细胞自噬信号通路。与TM组(1μg/mL TM处理)比较,TM处理中分别加入75、100、150、200μg/mL Exo后细胞增殖活性明显增强;免疫荧光和流式检测发现,TM+Exo组自噬标志性蛋白LC3B表达水平上调。TM组细胞凋亡率为(13.36±1.47)%,TM+Exo组细胞凋亡率为(7.75±0.62)%,差异有统...     

Bcl-2抑制剂S1诱导的卵巢癌细胞凋亡对自噬影响的实验研究

【目的】 凋亡与自噬密切相关,但二者之间的关系尚需进一步探究。本研究利用Bcl-2抑制剂S1建立卵巢癌细胞(SKOV3)凋亡模型,初步探究S1诱导的SKOV3细胞中凋亡对自噬的影响。 【方法】 培养SKOV3细胞。用MTT法检测S1对细胞生存率的影响。用流式细胞术检测细胞凋亡率。用蛋白质印迹方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3和自噬相关蛋白Beclin1、LC3的变化。用免疫荧光技术检测Beclin1及LC3蛋白的表达情况。在S1作用的基础上,应用广谱caspase抑制剂Z-VAD抑制caspase后,检测SKOV3细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3的变化。 【结果】 S1能够降低SKOV3细胞的生存率;增加SKOV3细胞的凋亡率。与对照组(0 h)相比,S1组(2、4、8、12、24、48 h)中的Bcl-2蛋白表达持续降低,Bax及caspase3蛋白表达持续增高,呈现出明显的时间依赖性;S1组(2、4、8、12、24、48 h)中自噬的发生也呈时间依赖性,但自噬并不是持续增强的,在12 h时,自噬相关蛋白Beclin1和LC3蛋白表达水平最高,12 h后则呈下降趋势,Beclin1和LC3的荧光结果也表现出一致的现象。与S1单独作用(8、24 h)相比较,给予广谱caspase抑制剂Z-VAD,8 h结果显示 Beclin1及LC3蛋白的表达水平基本无变化,而24 h结果显示Beclin1及LC3蛋白的表达水平显著增高,同时荧光实验也显示出同样的结果。 【结论】 在SKOV3细胞中,S1通过抑制Bcl-2、促进Bax释放,诱导细胞发生凋亡,并呈时间依赖性增强。同时S1通过抑制Bcl-2,释放自噬起始基因Beclin1,诱导自噬发生。但是自噬并未始终呈时间依赖性增强,自噬水平在S1长时间作用下反而出现下降的趋势。据此推测,随着S1诱导凋亡的不断增强,大量活化的caspase可能通过裂解自噬起始基因Beclin1,从而抑制Beclin1诱导的自噬。     

白藜芦醇通过巨噬细胞源性外泌体调节肝星状细胞活化对肝纤维化的影响

目的：探讨白藜芦醇（RSV）通过调节巨噬细胞影响肝星状细胞活化的机制。方法：以超速离心法提取空白组（NC-E组）和RSV处理（RSV-E）组外泌体并进行鉴定。将NC-E组及RSV-E组外泌体与转化生长因子-β1(TGF-β1)活化的肝星状细胞JS-1共培养,分为对照组、TGF-β1活化组（TGF-β1组）、NC-E+TGF-β1活化组（NC-E+TGF-β1组）和RSV-E+TGF-β1活化组（RSV-E+TGF-β1组）。采用免疫荧光法、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、western blotting检测肌动蛋白A(α-SMA)和Ⅰ型胶原a1链（Col1a1）纤维化指标表达。Western blotting检测Beclin1和LC3 Ⅰ/Ⅱ自噬相关指标表达。结果：与对照组相比,TGF-β1组α-SMA、Col1a1、Beclin1和LC3 Ⅰ/Ⅱ表达水平升高（P<0.05）;与TGF-β1组相比,RSV-E+TGF-β1组α-SMA、Col1a1、Beclin1和LC3 Ⅰ/Ⅱ表达水平下降（P<0.05）,NC-E+TGF-β1组与TGF-β1组差异无统计学意义（P...     

胶质瘤细胞外泌体通过miR-125b对细胞增殖凋亡的影响

目的探索胶质瘤细胞来源的外泌体对细胞增殖凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法高速离心法提取胶质瘤细胞U251外泌体,通过电镜及纳米粒径分析外泌体形态,Western blot检测外泌体特征性蛋白表达。在U251细胞培养基中分别加入浓度为100μg/ml的外泌体悬液30μl(外泌体组)或等量不含外泌体培养基(对照组),通过双荧光染色法验证外泌体能否进入U251细胞;CCK-8及流式细胞法检测细胞增殖凋亡的变化。通过RT-PCR法筛选U251外泌体与人星型胶质细胞外泌体中差异性表达的miRNAs。最后,将miR-NC、miR-125b mimics或miR-125b inhibitor转染U251细胞,重新提取外泌体后加入细胞培养基,采用CCK-8及流式细胞法检测U251细胞增殖凋亡变化。结果 U251细胞分离的外泌体为圆形或卵圆形囊泡状小体,直径范围约100 nm,富含CD63和CD9蛋白。在U251细胞培养基中加入外泌体悬液后,外泌体能够被U251细胞吞噬。CCK-8及流式细胞法显示:外泌体组细胞增殖活性高于对照组,凋亡比例低于对照组。RT-PCR显示:U251细胞外泌体miRNA-12...     

茶多酚对卵巢癌SKOV3细胞自噬水平的影响及相关机制研究

目的研究茶多酚(EGCG)对人卵巢癌SKOV3细胞自噬水平的影响及相关机制。方法用EGCG处理SKOV3细胞,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-II及蛋白激酶B(PKB)信号通路相应蛋白表达变化。结果 EGCG处理SKOV3细胞后,自噬相关蛋白LC3-II表达上调,并呈一定的时间浓度依赖性。EGCG处理SKOV3细胞后,AKT的磷酸化水平下调,AKT激活剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)预处理后,自噬相关蛋白LC3-II高表达被抑制。结论 EGCG通过AKT介导的信号通路诱导SKOV3细胞自噬水平升高。     

M2型巨噬细胞来源的外泌体对类风湿关节炎小鼠的作用及其机制研究

目的 探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体（M2-Exo）对胶原诱导的类风湿关节炎（RA）小鼠的作用及可能机制。方法 分离提取C57BL/6J小鼠骨髓来源的巨噬细胞（BMDMs）,收集白细胞介素-4（IL-4）诱导的M2型巨噬细胞培养的上清液,用超速离心法分离出M2-Exo。使用透射电子显微镜（TEM）和动态光散射（DLS）观察M2-Exo的形态结构及粒径分布;采用细胞免疫荧光染色及Western blotting法检测M2-Exo处理的M1型巨噬细胞的表面标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶（Arginase）的表达。复制胶原诱导的DBA/1小鼠RA模型,随机分为模型组和M2-Exo组,以正常DBA/1小鼠为对照组。M2-Exo组在首次免疫后第16天及第26天关节腔注射M2-Exo（100 μg/只）,发病全过程监测关节炎病变并评分,于第42天安乐处死小鼠。对3组小鼠左后足拍照并测定厚度;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠关节中促炎症细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子ɑ（TNF-ɑ）和白细胞介素-6（IL-6）的表达;采用RT-PCR检测3组小鼠关节中M1型和M2型巨噬细胞的表面标志物iNOS2、CD86、Arginase、CD206 mRNA的相对表达量。结果 M2-Exo为类圆形、有完整的包膜的囊状结构,粒径均值为44.1 nm。M2-Exo处理24 h后的M1型巨噬细胞表达Arginase,不表达iNOS。在RA发病过程中,M2-Exo组小鼠平均关节炎指数（AI）低于模型组（P <0.05）。与模型组比较,模型复制第42天M2-Exo组小鼠的足趾关节红肿不明显,活动障碍程度不高,差异无统计学意义（P >0.05）;M2-Exo组小鼠关节IL-1β、TNF-ɑ和IL-6水平均降低（P <0.05）。M2-Exo组小鼠关节组织中iNOS和CD86 mRNA的相对表达量低于模型组（P <0.05）,而CD206和Arginase mRNA的相对表达量高于模型组（P <0.05）。结论 M2-Exo可能通过重编程炎症M1型巨噬细胞转换为M2型抗炎的巨噬细胞,以缓解RA病情。     

IL-18诱导的肿瘤相关巨噬细胞对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭作用的影响

目的 探讨外源性IL-18对单核细胞(THP-1)的活化作用以及白介素18(IL-18)激活诱导的肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)对肺癌A549细胞增殖、转移和侵袭作用的影响。方法 外源性IL-18刺激THP-1细胞后检测M1、M2型TAMs的比例;IL-18激活诱导的TAMs和肺癌细胞A549共培养,平板克隆形成实验检测共培养后A549细胞增殖作用的变化;细胞划痕实验检测共培养后A549细胞迁移作用的变化;细胞侵袭实验观察共培养后A549细胞体外侵袭作用的变化;扫描电镜观察共培养后A549细胞形态的变化;qRT-PCR和western blot检测共培养后A549细胞EMT标志蛋白E-cadherin和N-cadherin、 Snail以及Slug的表达。结果 外源性IL-18刺激THP-1细胞表型由M2向TAMs方向分化;IL-18诱导TAMs促进了A549细胞增殖、迁移和侵袭能力;扫描电镜观察发现TAMs促进A549细胞尾足生长;qRT-PCR和western blot检测结果表明TAMs抑制A549细胞E-cadherin的表达,促进了N-cadherin、 Snail以及Slug的表达,说明TAMs激活了A549细胞发生EMT。结论 在肺癌中,IL-18可以激活诱导TAMs并促进其活化,活化后的TAMs通过激活EMT机制促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭作用。     

人卵巢癌细胞系SKOV3对树突细胞免疫功能及凋亡的影响

目的:探讨人卵巢癌细胞系SKOV3对树突细胞(DC)免疫表型、细胞因子分泌及凋亡的影响。方法:采用外周血单个核细胞培养DC,以PBS溶液为对照,应用流式细胞仪检测人卵巢癌细胞系SKOV3培养上清液作用于DC后,其凋亡的发生率、免疫表型的表达,应用酶标记免疫吸附分析法(ELISA)检测DC白细胞介素-12(IL-12)的分泌情况。结果:人卵巢癌细胞系SKOV3培养上清液作用于DC后,可诱导DC发生凋亡,DC的CD80、CD83及人类白细胞(位点)DR抗原(HLA-DR)等表型明显下调,IL-12分泌明显下降,与对照组相比差异显著(P<0.05),且IL-12分泌随SKOV3作用时间的延长,其抑制作用更加明显。结论:人卵巢癌细胞系SKOV3可明显抑制DC的免疫功能,并诱导其凋亡。     

肿瘤相关巨噬细胞外泌体调控肝癌细胞生长、转移及衰老的功能

目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞外泌体对肝癌细胞生长、转移及衰老的影响及机制。 方法 提取并鉴定M0和M2型巨噬细胞外泌体（M0 exo和M2 exo）,肝癌细胞HepG2和SMMC-7721细胞分为PBS组、M0 exo组和M2 exo组,CCK8法检测各组肝癌细胞的增殖能力,Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力,SA-β-Gal染色检测细胞衰老,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测各组细胞P16、P21、HMGA1的表达水平。〖HTH〗结果 M0 exo和M2 exo均符合外泌体的结构和生物学特征,相较于PBS组,M2 exo组HepG2和SMMC-7721细胞增殖能力显著增加,迁移和侵袭能力显著增加,细胞周期G1期降低,SA-β-Cal染色阳性率显著降低,衰老相关蛋白P16、P21、HMGA1表达显著下调（均P＜0.05）,而M0 exo组上述指标与PBS组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论 M2型巨噬细胞外泌体可诱导肝癌细胞HepG2和SMMC-7721增殖、迁移和侵袭能力的增加,其机制可能为抑制细胞衰老     

肿瘤相关巨噬细胞极化状态对前列腺癌干细胞自我更新能力和血管生成拟态的影响

目的:探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化状态对前列腺癌(PCa)干细胞自我更新能力与血管生成拟态的影响,阐明TAM在PCa进展中的作用.方法:从人PCa细胞系DU145中分选出PCa干细胞,将人单核白血病细胞株THP-1诱导为M2型TAM,作为诱导组,并以未诱导的THP-1细胞作为对照组,实时荧光定量PCR(RT-qP...     

沉默信息调节因子3对白藜芦醇诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响

目的：检测沉默信息调节因子3（Sirt3）对白藜芦醇（Res）诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响,探讨其促进凋亡的机制。方法：人卵巢癌SKOV3细胞加入不同浓度（0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0 mg·L^-1）Res培养24h,MTT法检测细胞存活率。将细胞随机分为对照组、Sirt3抑制剂3-（1H-1,2,3-三唑-4-基）吡啶（3-TYP）组、Res组和3-TYP+Res组,培养24h后,MTT法检各组细胞增殖抑制率;采用Hoechst 33342进行细胞核染色,激光共聚焦显微镜观察细胞核形态;采用活性氧（ROS）探针检测细胞中ROS水平;Western blotting法检测各组细胞中Sirt3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleavedcaspase-3）蛋白表达水平。结果：MTT实验,随着Res浓度的增加,细胞存活率明显降低,Res的半数抑制浓度（IC₅₀）为42.73 mg·L^-1。与对照组比较,Res组和3-TYP+Res组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）;与Res组比较,3-TYP+Res组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）。与对照组比较,3-TYP+Res组细胞核出现固缩、染色增强、核碎裂增多。与对照组比较,3-TYP组细胞红色荧光无明显变化,Res组和3-TYP+Res组细胞红色荧光明显减少。Western blotting法检测,与对照组比较,3-TYP组细胞中Sirt3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）,Res组细胞中Sirt3和Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与Res组比较,3-TYP+Res组细胞中Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Bcl-2和Sirt3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：Res可以诱导SKOV3细胞的凋亡,3-TYP通过抑制Sirt3表达可增强Res的作用。     

杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡诱导作用

目的:观察杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制及凋亡诱导作用,并探讨其可能机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,按杨梅素给药浓度将细胞分为对照组和低、中、高浓度杨梅素组,杨梅素给药浓度分别为0、20、40和60 mg·L^-1。MTT法检测各组SKOV3细胞存活率;激光共聚焦显微镜观察各组SKOV3细胞核形态变化并计算异常细胞核比率;免疫荧光法检测各组SKOV3细胞中凋亡相关蛋白-活化半胱氨酸蛋白酶3(active Caspase-3)的表达;Western blotting法检测各组SKOV3细胞中DNA损伤相关蛋白γ-H₂AX的表达水平。结果:与对照组比较,低、中和高浓度杨梅素组SKOV3细胞存活率明显下降(t=-12.35,t=-11.42,t=-10.21,P<0.05);激光共聚焦显微镜下各浓度杨梅素组细胞出现核皱缩等凋亡形态学改变,且细胞中异常细胞核比率高于对照组(t=6.87,t=9.35,t=7.22,P<0.05),高浓度杨梅素组异常细胞核比率高于低、中浓度杨梅素组(t=9.55,t=7.25,P<0.05);随着杨梅素给药浓度的增加,SKOV3细胞中active Caspase-3的表达水平有升高趋势,各浓度杨梅素组SKOV3细胞中γ-H₂AX的表达水平高于对照组(t=5.41,t=3.21,t=6.58,P<0.05)。结论:杨梅素可抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导其凋亡,DNA双链断裂可能是其促凋亡的机制之一。     

Galectin-9对卵巢癌细胞侵袭转移的影响

目的 探讨半乳糖凝集素-9(Galectin-9)对卵巢癌细胞侵袭转移的影响.方法 将不同浓度外源性Galectin-9[0(阴性对照)、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL]加入卵巢癌SKOV3细胞中,培养48 h,Western blot法检测细胞内Galectin-9的表达,MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、上皮间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达.结果 与阴性对照比较,4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL外源性Galectin-9能显著提高卵巢癌SKOV3细胞中Galectin-9的表达(P<0.01);4μg/mL、8μg/ml、16μg/mL外源性Galectin-9能显著降低SKOV3细胞活力[(100.00±7.46)vs(77.92±8.03)、(60.62±6.42)、(47.63±5.41)](P<0.01),减少细胞迁移[(99.49±9.63)vs(78.36±8.90)、(65.42±7.32)、(50.31±6.78)]及侵袭数目[(99.13±10.30)vs(76.69±7.23)、(63.68±6.32)、(52.37±4.99)](P<0.01),并能显著下调MMP2、MMP9及Vimentin的表达(P<0.01),上调E-cadherin的表达(P<0.01).结论 上调卵巢癌细胞SKOV3中Galectin-9的表达能显著抑制细胞迁移侵袭等恶性生物学行为,可能与下调MMPs及调节EMT相关蛋白表达有关.     

TWEAK刺激后巨噬细胞源性外泌体抑制上皮性卵巢癌细胞侵袭和迁移的机制

目的 经肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)作用后,探究巨噬细胞源性外泌体对上皮性卵巢癌细胞侵袭与迁移过程的抑制作用机制.方法 对TWEAK在刺激作用前后的巨噬细胞源性外泌体进行收集并得以探究,同高转移人卵巢...     

褪黑素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖及凋亡的影响

目的: 探讨褪黑素(MLT)、卡铂(CBP)单独及联合应用在体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,阐明MLT和CBP的药物协同作用。 方法: 将体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、MLT组(1和2 mmol·L^-1)、CBP组(12.5、25.0和50.0mg·L^-1)、联合用药组(不同浓度MLT及CBP联合用药)。应用MTT比色法、流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率及凋亡情况,并应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定各组SKOV3细胞中Bcl-2和Bax基因表达水平。 结果: MTT法检测,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于MLT组,且高于 50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2 mmol·L^-1MLT联合50mg·L^-1CBP 组效果最佳,增殖抑制率为(70.7±4.2)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05)。流式细胞术检测,联合用药组SKOV3细胞凋亡率高于MLT组,且高于50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2mmol·L^-1MLT 联合50mg·L^-1CBP组SKOV3细胞凋亡率为(58.9±2.0)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。与同浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞中Bax基因表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2基因表达水平明显降低(P<0.05)。 结论: MLT可增强CBP在体外对卵巢癌SKOV-3细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用,通过增强Bax基因表达及下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。     

消癥抑癌方对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨消癥抑癌方对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和迁移的影响及潜在作用机制。方法 利用网络药理学分析消癥抑癌方抗卵巢癌的关键活性成分和核心靶点,并通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析筛选其相关生物学过程和通路。制备消癥抑癌方含药血清,用含药血清处理卵巢癌SKOV3细胞。采用CCK-8法和EdU染色法检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞增殖的影响;采用划痕实验和Transwell迁移实验检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞迁移的影响;采用Western blotting法检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞自噬蛋白(P62)、自噬相关蛋白3(ATG3)、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的影响。结果 网络药理学研究显示,消癥抑癌方抗卵巢癌的关键活性成分是槲皮素、山柰酚、木犀草素、汉黄芩素、柚皮素等,核心靶点是MAPK3、AKT1、SRC、MAPK1、TP53等。KEGG富集分析共得到171条通路(P<0.01),其中Degree值排名较靠前且与...