线粒体铰链蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究线粒体铰链蛋白在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达及其临床意义,并对线粒体铰链蛋白与肝癌的恶性行为之间关系进行研究.方法:80例HCC、80例癌旁组织和50例正常肝组织标本常规制作石蜡包埋切片,线粒体铰链蛋白染色方法为SP免疫组化法.结果:HCC组织中的线粒体铰链蛋白表达阳性率及其评分明显高于癌旁组织和正常肝组...     

肝细胞肝癌组织中survivin和caspase 3、Ki67的表达及意义

目的研究survivin和caspase 3、Ki67在肝细胞肝癌(HCC)及癌旁肝组织中的表达及其意义.方法利用RNA提取试剂获取新鲜肝癌组织RNA,用RT-PCR方法测定survivin基因mRNA;用免疫组化方法检测肝细胞肝癌及其癌旁组织中caspase 3和Ki67蛋白的表达.结果17例新鲜HCC组织,survivin基因表达阳性13例,阳性率为76.5%,癌旁肝组织和正常肝组织survivin表达全为阴性.13例survivin表达阳性的肝癌组织其caspase 3蛋白表达平均染色强度为0.98±0.35,显著低于4例survivin表达阴性的HCC组织1.36±0.47(P＜0.01),而survivin表达阳性的HCC组织其Ki67表达强度平均评分为2.787±0.71,又显著高于survivin表达阴性的HCC组织1.662±0.38(P＜0.01).88例肝癌组织caspase 3蛋白的阳性表达率明显低于癌旁肝组织(18.5%vs38.6%,P＜0.01),caspase 3蛋白的表达强度与HCC的分化程度相关,分化愈差,caspase 3蛋白表达愈弱(F=8.651,P＜0.01);Ki67在肝癌组织中其平均表达强度评分为2.44±1.12,在癌旁肝组织中为散在灶性表达,Ki67表达强度评分与HCC分化程度有关,分化愈差,Ki67表达强度评分愈高(F=9.121,P＜0.01).结论本文结果提示在HCC发生过程中survivin的表达或许可通过抑制caspase3而抑制细胞凋亡,促使细胞增殖,使HCC呈现无限制的生长及恶性程度不断增高.     

转酮醇酶在肝癌中的表达及临床意义

目的 探讨转酮醇酶基因家族在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及其与临床病理的关系。方法检测42例HCC组织及对应癌旁组织的转酮醇酶活性;用RT PCR的方法检测转酮醇酶基因家族各成员（tkt、tktl1、tktl2）mRNA在HCC及癌旁组织中的表达。结果 HCC组织的转酮醇酶活性明显高于癌旁组织（P＜0.05）。HCC组织中tktl1的阳性表达率明显高于tkt和tktl2（P＜0.05）,tktl1在HCC中的阳性表达率及表达量均明显高于癌旁组织（P＜0.05),tktl1的表达同肿瘤分化程度、静脉癌栓、肝内有无卫星灶以及5年生存情况有关（P＜0.05）。tktl2在HCC中的表达量高于癌旁组织（P＜0.05）,其表达与肿瘤分化程度有关（P＜0.05）。结论 转酮醇酶与HCC的发生发展有关,tktl1的表达在肝癌转酮醇酶活性中起主要作用,且影响肝癌的分化、转移及患者预后;tktl2可能在肝癌分化中起协同作用。它们有望成为HCC治疗的新靶点。     

肝细胞癌组织中PTEN蛋白的表达以及与肝癌侵袭转移的关系

目的研究人原发性肝癌(HCC)中的磷酸酶基因(PTEN基因)蛋白的表达及其临床意义。方法用免疫组织化学方法分别检测人HCC组织、癌旁组织中PTEN蛋白的表达情况。结果PTEN蛋白的表达在人HCC组织显著低于癌旁组织(P=0.038),其阳性率也显著低于癌旁肝组织(P=0.007)。PTEN蛋白的表达与HCC患者的年龄、血清AFP水平、肿瘤个数、肿瘤直径、临床分期、术后复发、有无肝外转移、病理分级等多数临床病理学指标无关,而与有无门脉癌栓有密切的关系。无门脉癌栓的患者的肝癌组织中的PTEN蛋白较有门脉癌栓的表达高(P=0.010)。结论HCC的发生中可能存在PTEN基因的突变或缺失。PTEN基因的表达缺失可能与HCC的恶性程度,疾病的进程及HCC的侵袭转移有密切关系。PTEN基因低表达,HCC患者病程较晚、肝癌的恶性程度较高,较容易发生侵袭转移,预后较差。     

趋化因子CCL15在肝细胞肝癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究趋化因子CCL15在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达及其临床意义,并对CCL15与肝癌的恶性行为之间关系进行研宄.方法:80例HCC、80例癌旁组织和50例正常肝组织标本常规制作石蜡包埋切片,CCL15染色为SP免疫组化法.结果:HCC组织中的CCL15表达阳性率及其评分明显高于癌旁组织和正常肝组织(P＜0.05),在癌旁组织和正常肝组织之间没有差异;CCL15的蛋白表达与患者的性别、年龄、肝硬化、病理学分级、术前AFP浓度无明显关系(P＞0.05),而与肿瘤的大小、癌栓、有无包膜以及TNM分期等有显著关系.结论:CCL15的表达与HCC的一些恶性临床病理特征密切相关,提示CCL15可能是反映HCC发生发展、侵袭、转移的一个重要的生物学指标.     

半胱氨酸蛋白酶抑制SN在肝细胞癌中的表达意义

目的:分析肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中半胱氨酸蛋白酶抑制SN的表达水平及其与各临床病理特征之间的关系,探讨半胱氨酸蛋白酶抑制SN表达水平与HCC患者预后之间的联系.方法:收集72例原发性肝癌患者的临床信息,采用免疫组织化学法检测72份HCC组织及60份癌旁组织蜡块标本中半胱氨酸...     

钙结合蛋白S100A13在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的:探索钙结合蛋白S100A13(S100 calcium binding protein A13,S100A13)在肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法:收集广西医科大学第一附属医院34例HCC及相应癌旁组织、18例正常肝组织标本,商业购置197例肝癌及相应癌旁高密度组织芯片。应用原位RT-PCR技术检测HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中S100A13 mRNA的表达,使用免疫组织化学技术检测HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中S100A13蛋白的表达,并用Image-ProPlus软件分析免疫组织化学光密度值。结果:S100A13 mRNA在HCC、相应癌旁和正常肝组织中表达的阳性率分别为70.21%、51.06%和33.33%;S100A13 mRNA定位主要在胞核,多表达于核膜。S100A13蛋白在HCC、相应癌旁和正常肝组织中表达的阳性率分别为55.84%、38.96%及26.32%,HCC组织中的平均D值最高(0.038±0.051),其次是癌旁组织(0.022±0.034),正常肝组织(0.01±0.009)最低(P<0.05);S100A13蛋白主要表达于HCC细胞的胞质中,部分细胞核偶见表达,此外在癌旁次生胆小管中及部分炎细胞中也存在高表达。S100A13蛋白在HCC中的表达与患者的性别、年龄及病理分级无关。结论:HCC组织高表达S100A13蛋白,S100A13可能具有作为肝癌治疗靶点的潜力。     

tktl1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究转酮醇酶样基因1(tktl1)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与临床病理的关系.方法:RT-PCR法检测转酮醇酶基因家族各成员(tkt、tktl1、tktl2)mRNA在42例HCC及癌旁组织中的表达并研究其与临床病理参数间的关系.结果:HCC组织中tktl1 阳性表达率明显高于tkt和tktl2的阳性表达率 (P＜0.05).tktl1在HCC中的阳性表达率明显高于癌旁组织(P＜0.05);而 tkt和tktl2阳性表达率在肝癌及癌旁组织间无明显差异(P＞0.05). HCC中tktl1的高表达同肿瘤分化程度,静脉癌栓,CLIP评分有关 (P＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肝内及淋巴转移、AFP水平无关(P＞0.05).结论:tktl1与HCC的发生发展有关,影响肝癌的分化、转移及患者预后,有望成为HCC治疗的新靶点.     

PFKFB3在肝癌中的表达及其临床意义

目的 探讨6-磷酸果糖激酶-2／果糖双磷酸酶-2同工酶3（PFKFB3）在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 采用逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR）检测PFKFB3在42例HCC组织及其对应癌旁组织中的表达情况,并研究其与临床病理参数（性别、年龄、肿瘤直径、淋巴转移、静脉癌栓、治疗前甲胎蛋白、分化程度及肝内转移）间的关系,采用Kaplan-Meier法分析PFKFB3 mRNA表达对HCC患者生存的影响。结果 HCC和癌旁组织中PFKFB3 mRNA的阳性表达率分别为73.81％（31／42）和52.38％（22／42）,相对表达量为1.075±0.171和0.877±0.451,HCC组织中PFKFB3 mRNA的阳性表达率及相对表达量均高于癌旁组织（P＜0.05）;PFKFB3 mRNA的表达与肿瘤TNM分期、分化程度、肝内转移及总生存期有关（P＜0.05）。结论 PFKFB3在HCC的发生发展中发挥作用,且影响肝癌的分化、转移并提示肝癌患者预后不佳;可作为评估HCC恶性程度的生物学指标。     

CD146 mRNA在人肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨CD146mRNA在人肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法:用荧光实时定量聚合酶链反应(realtimePCR)技术定量检测70例HCC患者癌组织、癌旁肝组织及18例非癌肝组织中CD146mRNA的表达情况。结果:CD146mRNA在肝癌组织(0.044±0.0178)明显高于在癌旁肝组织(0.0367±0.0121)中的表达水平(P<0.01),癌旁肝组织中的表达水平明显高于非癌肝组织(0.0263±0.0102)中的表达水平(P<0.05)。CD146mRNA在人肝癌组织中的含量与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移及术后复发明显有关,而与肿瘤个数、肿瘤直径、血清AFP水平及分化程度无明显关系。结论:本研究结果提示CD146可能与肝癌的发生、发展及术后转移复发有关;可作为预测肝癌转移复发的参考指标之一。     

lncRNA LOC730101对肝细胞癌增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LOC730101对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）生物学行为的影响。方法 利用R软件分析TCGA数据库LIHC数据集374例HCC组织和50例正常组织中LOC730101的表达差异。收集2018年广西医科大学附属肿瘤医院外科手术切除、经病理确诊的40例HCC患者的癌组织及其相应癌旁组织,培养肝癌细胞系Huh-7、HCCLM3、HepG2和人正常肝细胞系L02,采用qRT-PCR检测组织和细胞系中LOC730101的相对表达水平。在肝癌细胞系Huh-7、HCCLM3中采用慢病毒感染法构建过表达LOC730101(OE-LOC730101)和敲低LOC730101(sh-LOC730101)的稳转细胞株,同时设置相应空白对照（control组）及阴性对照组（sh-NC组、OE-NC组）,然后采用qRT-PCR验证感染效果,CCK-8实验检测各组细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力。结果 TCGA数据库分析结果显示,LOC...     

HBx蛋白抑制DKK4表达的机制及对肝癌细胞系增殖和迁移的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白下调DKK4的机制及对肝癌细胞系增殖和迁移能力的影响。方法 将编码乙型肝炎病毒X蛋白的腺病毒（Ad-HBx）分别感染肝癌细胞系HepG2和SMMC7721细胞,同时设感染GFP腺病毒（Ad-GFP）为对照组,用去乙酰化酶抑制剂（TSA）处理肝癌细胞系,并用小干扰RNA-组蛋白去乙酰化酶1（si-HDAC1）及过表达DKK4的慢病毒转染肝癌细胞系。Western blot检测DKK4、HDAC1及SIRT1的表达情况。MTT实验、结晶紫实验和Transwell实验分别检测肝癌细胞系的增殖和迁移能力。结果 Ad-HBx感染肝癌细胞系后DKK4蛋白表达水平下降（P<0.05）,TSA处理后DKK4蛋白表达水平回复（P<0.05）。Ad-HBx感染肝癌细胞系后,HDAC1及SIRT1蛋白水平显著升高（P<0.05）。小干扰RNA沉默HDAC1后能够恢复DKK4的表达（P<0.05）,沉默HDAC1和（或）过表达DKK均能抑制肝癌细胞系的增殖和迁移能力（P<0.05）。结论 乙型肝炎病毒X蛋白通过上调HDAC1、SIRT1来抑制DKK4的表达,沉默HDAC1及过表达DKK4蛋白表达能够抑制感染Ad-HBx肝癌细胞系的增殖和迁移能力。     

Linc00704对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨Linc00704（long non-coding RNA 00704）对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 RT-qPCR检测配对结直肠癌及癌旁正常组织、结直肠癌细胞和正常永生化人结肠上皮细胞系FHC中Linc00704 mRNA的表达。反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide,ASO）转染结直肠癌细胞构建Linc00704低表达细胞模型,慢病毒感染结直肠癌细胞构建Linc00704过表达细胞模型,RT-qPCR检测转染效率;CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果 相比癌旁组织,Linc00704在结直肠癌组织中表达降低（t=4.103,P<0.001）。8种结直肠癌细胞系中有6种细胞系（RKO、HCT15、NCI-H716、SW480、SW1463、SW48）Linc00704的表达较FHC细胞低（F=44.750,P<0.001）。沉默 Linc00704表达可促进Caco-2、DLD-1细胞迁移和侵袭能力（均P<0.01）,但对增殖无明显影响（均P>0.05）。过表达Linc00704可抑制RKO、HCT15细胞迁移和侵袭能力（均P＜0.001）,但对增殖无明显影响（均P>0.05）。结论 Linc00704在结直肠癌组织中呈低表达,过表达Linc00704可抑制结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。     

BLOC⁃3介导Rab32线粒体定位改变对肝癌细胞生长的作用研究

目的 观察溶酶体相关细胞器生物发生复合体⁃3 （biogenesis of lysosome⁃related organelles complex⁃3,BLOC⁃3）亚基Hps1和Hps4对肝癌细胞中Rab32线粒体定位的影响及在肝癌细胞生长中的作用。 方法 通过公共数据库GenDoma,String和InBio Discover分析Hps1和Hps4与Rab32的相互作用情况。体外培养人肝癌细胞系SNU⁃739和Hep⁃3B,利用脂质体转染方法分别转染Hps1和Hps4相关的siRNAs和质粒,采用免疫荧光和Western blot观察Hps1和Hps4对Rab32线粒体定位的影响,细胞划痕、克隆形成、EdU、MTS及Transwell侵袭实验检测Hps1和Hps4调控Rab32线粒体定位后肝癌细胞迁移、增殖和侵袭的变化情况。通过公共数据库UALCAN中的数据集CPTAC分析Rab32蛋白在肝癌和正常肝脏组织中的表达差异。 结果 数据库分析结果显示,Hps1和Hps4均可以与Rab32相互作用;与正常肝脏组织相比,Rab32蛋白在肝癌组织中的表达显著降低（P<0.001）。在肝癌细胞系SNU⁃739中干涉Hps1或Hps4或同时干涉Hps1和Hps4后,Rab32线粒体定位均减少（均P<0.01）,细胞线粒体Rab32蛋白表达均降低（均P<0.001）,细胞增殖、迁移和侵袭能力增强（均P<0.05）;在肝癌细胞系Hep⁃3B中过表达Hps1和Hps4后,Rab32线粒体定位增多（P<0.01）,细胞线粒体Rab32蛋白表达增加（P<0.001）,细胞增殖、迁移和侵袭能力均受抑制（均P<0.01）,而单独过表达Hps1或Hps4时无显著抑制作用（均P>0.05）。结论 BLOC⁃3亚基Hps1和Hps4均可与Rab32相互作用并增加Rab32线粒体定位,进而抑制肝癌细胞生长。     

TIPIN分子与肝细胞癌预后的关系及其生物学作用机制

目的 分析节律分子Timeless（TIM）相互作用蛋白（TIM interacting protein,TIPIN）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中的表达及其与患者预后的关系,并探究TIPIN对肝癌细胞增殖的影响及可能的生物学作用机制。方法 通过UALCAN数据库分析TIPIN在HCC组织中的表达情况及其与HCC患者预后的关系。将siTIPIN及其阴性对照序列分别转染至肝癌MHCC⁃97H细胞,采用qRT⁃PCR和Western blot检测TIPIN的表达情况,采用MTS实验和平板细胞克隆形成实验检测TIPIN表达对细胞增殖的影响。利用UALCAN数据库对TIPIN进行GO和KEGG富集分析,以及TIPIN与TIM、TP53的关联分析。 结果 UALCAN数据库分析结果显示,TIPIN在HCC组织中的表达明显高于正常肝组织（P<0.01）;TIPIN高表达患者的总生存期和无病生存期均明显短于TIPIN低表达患者（P=0.037,0.021）。与正常肝细胞HL7702相比,肝癌细胞MHCC⁃97H、MHCC⁃97L、HepG2、BEL⁃7402中TIPIN的mRNA和蛋白表达水平均明显升高（均P<0.01）。MTS和克隆形成实验结果显示,沉默TIPIN表达后肝癌MHCC⁃97H细胞的增殖和平板细胞克隆形成能力明显受到抑制（均P<0.05）。GO和KEGG富集分析结果显示,TIPIN可能通过调控细胞分裂、DNA复制、细胞周期的相互作用通路促进肝癌的恶性进程。Pearson相关性分析结果显示,TIPIN分子与TIM表达呈明显正相关（r=0.67,P<0.01）。TIPIN在TP53突变HCC患者中的表达显著高于TP53野生型HCC患者（P<0.01）。 结论 TIPIN在肝癌中表达上调,且与患者不良预后密切相关,沉默TIPIN可抑制肝癌细胞增殖。TIPIN在肝癌中可能通过与TIM形成复合体或调控TP53信号通路发挥其生物学作用。     

Hsa-miR-4282对肝癌细胞系SMMC-7721生长的影响

目的  探讨Hsa-miR-4282在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达及其对细胞生长的影响。方法 采用实时荧光定量PCR法检测Hsa-miR-4282在人正常肝上皮细胞系HL-7702和人肝癌细胞系MHCC97-H、SMMC-7721，以及 20例肝癌组织及其相应癌旁组织中的表达。采用瞬时转染法将Hsa-miR-4282 mimics（上调组）和Hsa-miR-4282 inhibitor（下调组）分别转染肝癌SMMC-7721细胞，上调组和下调组分别设置相应阴性对照组。转染后采用MTT法检测细胞增殖能力，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果 Hsa-miR-4282在肝癌组织、肝癌细胞MHCC97-H及肝癌细胞SMMC-7721中的表达均低于癌旁组织及正常肝细胞HL-7702（P＜0.05）。MTT实验结果显示，Hsa-miR-4282上调后肝癌SMMC-7721细胞的OD值低于其阴性对照组，而下调后OD值高于其阴性对照组 （P＜0.05）。平板克隆形成实验显示，下调组的细胞克隆数高于其阴性对照组［（240±7） 个 vs （191±10） 个，P=0.005）］，而上调组细胞克隆数低于基阴性对照组［（146±10） 个 vs （193±12） 个，P=0.013）］。流式细胞仪检测结果显示，Hsa-miR-4282上调组细胞凋亡率较其阴性对照组升高［（23.89±1.89）% vs（16.6±1.14）%，P=0.009）］，下调组细胞凋亡率较期阴性对照组降低［（14.98±0.46）% vs （17.79±0.73）%，P=0.010］。结论 Hsa-miR-4282上调可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖，促进细胞凋亡，可能与肝癌的发病机制有关。     

miR⁃145⁃5p靶向调控LOX基因对肝癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨miR-145-5p靶向调控LOX对肝癌细胞侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法 收集2017年9月至2019年9月广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科手术切除的73例肝癌患者肿瘤组织及其配对癌旁正常组织,以及肝癌细胞系SMMC-7721、SK-Hep1,采用RT-PCR法检测组织中miR-145-5p和LOX的表达。分别将miR-145-5p慢病毒载体、LOX过表达质粒及LOX慢病毒沉默载体转染至肝癌细胞SMMC-7721或SK-Hep1,同时用LOX过表达质粒和过表达miR-145-5p慢病毒载体共转染SMMC-7721细胞,各转染组均设置相应阴性对照组及空白对照组;然后采用Transwell实验检测肝癌细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测LOX蛋白的表达水平;通过TargetScan数据库预测miR-145-5p的靶点,并利用Cluster Profiler包进行GO和KEGG富集分析。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-145-5p在癌旁正常组织中的表达高于肝癌组织（4.196±2.288 vs 2.835±1.817,P<0.0001）;LOX在肝癌组织中的表达高于癌旁正常组织（12.17±1.369 vs 11.26±1.556,P<0.001）。Transwell检测结果显示,过表达LOX能促进肝癌细胞侵袭、迁移,敲低LOX则抑制肝癌细胞侵袭、迁移（均P<0.05）;过表达miR-145-5p能抑制肝癌细胞的侵袭、迁移能力,LOX过表达能逆转miR-145-5p对SMMC-7721细胞迁移和侵袭的抑制能力。TargetScan数据库预测显示,LOX是miR-145-5p的靶基因。Western blot检测结果显示,miR-145-5p能抑制LOX蛋白表达水平（P<0.001）。结论 miR-145-5p在肝癌组织中低表达,LOX则高表达,miR-145-5p可能通过负向调控LOX抑制肝癌细胞侵袭和迁移。     

慢病毒介导Ras-GRF1调控肝癌干细胞干性维持与自我更新能力的机制

目的:探究Ras蛋白特异性的鸟苷酸释放因子1（Ras protein specific guanylate releasing factor 1,Ras-GRF1）在肝癌干细胞（cancer stem cells,CSC）生物学特性及自我更新中的作用,并初步探究其作用机制。方法:实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人正常肝细胞系（HL-7702）和不同肝癌细胞系（Huh7、HepG2、Hep3B、CLC4、CLCl3、SMMC-7721）中Ras-GRF1表达水平;流式细胞术分选出肝癌干细胞,利用Ras-GRF1-pCMV6-GFP重组慢病毒感染肝癌干细胞,MTT法、EdU染色和平板克隆形成实验检测过表达Ras-GRF1对肝癌干细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验检测过表达Ras-GRF1后肝癌干细胞迁移与侵袭变化;成球实验检测过表达Ras-GRF1后肝癌干细胞的自我更新能力;蛋白免疫印迹（Western blot）检测肿瘤干细胞中Hippo信号通路关键蛋白大肿瘤抑制因子（large tumor suppressor,LATS）、Yes协同蛋白（Yes cooperative protein,YAP）和哺乳动物STE20样蛋白激酶（mammalian STE20-like protein kinase,MST）的蛋白及磷酸化表达水平。结果:不同肝癌细胞中Ras-GRF1 mRNA表达量较人正常肝细胞中显著降低（P＜0.05）;分离到的肝癌干细胞在感染Ras-GRF1-pCMV6-GFP重组慢病毒后,细胞中Ras-GRF1 mRNA表达量显著升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;在两种肝癌干细胞 HepG2-CSC和SMMC-7721-CSC中,相较于空白对照组,Ras-GRF1-pCMV6组细胞增殖活性显著降低,EdU阳性染色数目和细胞克隆形成数目均显著减少,细胞迁移与侵袭数目也均显著减少,细胞成球能力明显降低,p-LATS/LATS、p-YAP/YAP及p-MST/MST蛋白表达显著增加,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论:通过慢病毒介导Ras-GRF1在肝癌干细胞中过表达后,能够抑制肝癌干细胞的增殖、迁移与侵袭,降低自我更新能力,其机制可能与调控Hippo信号通路相关。     

沉默ERK5对胃癌SGC-7901、BGC-823细胞生物学功能的影响

目的 探讨沉默细胞外信号调节激酶5（extracellular signal regulated kinase 5,ERK5）对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生物学功能的影响。方法 实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测人胃癌细胞株和人胃黏膜上皮细胞株ERK5 mRNA的表达水平。应用短发荚RNA（shRNA）干扰技术沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达。CCK-8法检测ERK5沉默后胃癌细胞的生长能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布。结果 与胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、AGS、HGC-27中ERK5 mRNA均呈高表达,相对表达量分别为2.696±0.501、1.865±0.185、1.793±0.137和1.530±0.093（P<0.05）。ERK5-shRNA有效沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达水平,沉默效率分别为（74.4±1.5）%和（69.1±3.9）%,差异有统计学意义（P<0.05）。沉默 ERK5的表达能有效抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力（P<0.05）,而促进胃癌细胞凋亡（P<0.05）,并诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 沉默ERK5可显著抑制胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的生长侵袭,促进细胞凋亡,ERK5可能是胃癌治疗的潜在靶点。     

miR-802在原发性肝细胞癌中的表达及意义

[目的]检测微小RNA(miR)-802在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织与细胞中的表达水平,分析miR-802在HCC中的临床意义。[方法]采用qRT-PCR检测HCC癌组织与癌旁组织中mi R-802的表达水平,及Hep3B、HCCLM3与HL-7702细胞的表达水平。分析miR-802表达水平与HCC临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier方法计算生存曲线,以Log-rank检验评估miR-802表达水平与HCC预后的关系。通过Cox比例风险回归模型单因素和多因素分析评估HCC的预后指标。[结果] HCC癌组织中miR-802的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05),且Hep3B、HCCLM3细胞中mi R-802的表达水平亦显著低于HL-7702细胞(P<0.05)。Ⅲ+Ⅳ期癌组织中miR-802的表达水平低于Ⅰ+Ⅱ期癌组织(P<0.05),血管转移患者癌组织中miR-802的表达水平低于非血管转移患者癌组织(P<0.05)。mi R-802低表达组患者的5年生存率显著低于高表达组(P<0.05)。单因素分析显示,低表达mi R-802、高TNM分期及阳性血管转移是HCC患者预后不良的预测指标(P<0.05)。多因素分析显示,低表达miR-802是HCC患者预后不良的唯一独立预测指标(P<0.05)。[结论] HCC组织和细胞中miR-802表达下调,低表达miR-802是HCC患者预后不良的独立预测指标。