多药耐药蛋白P-糖蛋白及其抑制剂的研究进展

胰腺癌的化疗效果不理想主要原因与肿瘤细胞的多药耐药有关。胰腺癌细胞多药耐药产生的机制目前并未阐明，随着对多药耐药认识的不断深入，新的逆转剂已经产生。本文通过近5年文献资料的回顾复习，对胰腺癌耐药机制及其抑制剂的研究进展作一综述。     

P-糖蛋白中药抑制剂的研究进展

P-糖蛋白是一种ATP依赖性的外向型转运泵,分布于全身多个重要脏器中,参与多类药物的体内转运过程,也是抗肿瘤药物产生多药耐药作用的主要原因。天然产物的特色在于复方,易对P-糖蛋白产生抑制作用,可以引起其它治疗药物体内浓度增加,提高疗效。由此中药与药物的相互作用不仅可以提高化疗药物杀伤肿瘤细胞的功能,而且成为用药安全性评价的重要研究内容。     

人膀胱癌非P-糖蛋白介导的多重抗药性

目的：建立人膀胱癌耐阿霉素细胞系及研究它们的生物学特性及药物耐受性的机制。方法：采用人膀胱癌细胞系EJ，经递增阿霉素剂量的方法，历时一年，建立一株耐药亚株EJ／DOR，对其生物学特性及耐药机制进行了研究，并应用反转录PCR检测了MDR1，MRP和DAN TopoⅡ基因的表达。结果：EJ／DOR对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞提高了14．3倍。对蒽环类，长春花属生物碱及DAN TopoⅡ靶制剂足叶乙甙有明显的交叉耐药性，但对顺铂，丝裂霉素无明显的交叉耐受性；耐药细胞对柔红霉素的细胞内聚集量显著减少；EJ／DOR并不表达MDR1基因，而MRP基因过表达，但细胞内DAN TopoⅡ基因表达低于亲本细胞。结论：细胞内DAN TopoⅡ基因表达下降及MRP基因过表达是EJ／DOR表现为多耐药受性亚型的主要原因，这种非P-gp介导的非经典型多耐药受性细胞为寻求包括阿霉素在内的化疗方案提供了良好的实验模型。     

体内多药耐药的显像研究

了多药耐药产生的各种机制及体内Ｐ－糖蛋白和多药耐药相关蛋白显像的情况。ＳＰＥＣＴ和ＰＥＴ都可以用来研究Ｐ－和ＭＲＰＷＪ ＮＦ Ｒ ＬＦＮＹＦＣＰ ＮＧＵＫ２。     

肿瘤多药耐药蛋白抑制剂

肿瘤细胞产生多药耐药性是肿瘤化疗失败的主要原因之一,肿瘤多药耐药性（ｍｕｌｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓａｎｃｅ,ＭＤＲ）的产生主要与肿瘤细胞的膜蛋白,Ｐ－糖蛋白（ＰＧ－１７０）多药耐药蛋白（ＭＲＰ－１９０）和肺耐药蛋白（ＬＲＰ）的过多表达有关。在发现维拉帕米,奎尼丁和环孢菌素等药物具有逆转ＭＤＲ作用的基础上,发展了一些新的能够逆转ＭＤＲ现象的多药耐药蛋白抑制剂,如环孢菌素的类似物ＳＤＺＰＳＣ８３３和奎民丁     

99Tcm-MIBI显像检测乳腺癌P-糖蛋白

探讨了乳腺癌多药耐药的主要机制和99Tcm-MIBI SPECT检测P-糖蛋白在多药耐药中的研究进展.作为一种功能显像技术,99Tcm-MIBI SPECT能够无创伤性检测乳腺癌多药耐药,为临床治疗提供参考.     

肺癌组织的P—糖蛋白表达及临床意义探讨

近年来研究表明肿瘤的耐药是化疗失败的主要原因之一。而耐药性的产生是由于多药耐药基因的过度表达和其编码产物Ｐ－糖蛋白的增多。应用免应组织化学方法对３９例未经化疗的不同类型肺癌检测Ｐ－糖蛋白的表达。结果显示３５例非小细胞肺癌组织中共有２１例在肿瘤细胞胞膜上和胞浆内有Ｐ－糖蛋白的阳性表达，阳性率为６０％；１９例胞癌中１５例阳性，阳性率为７８．９％；１６例鳞癌中６例阳性，阳性率３７．５％。小细胞未分化癌４例均为阴性。表明肺腺癌Ｐ－糖蛋白表达阳性率显著高于肺鳞癌（Ｐ＜０．０５）。非小细胞肺癌Ｐ－糖蛋白的表达是产生内在抗药性机制之一。揭示肺癌Ｐ－糖蛋白表达可预测化疗的每感性，对预后的估计也有一定价值。     

重组人p53腺病毒在乳腺癌裸鼠体内耐药逆转作用及其对P-糖蛋白表达的影响

目的 研究重组人p53腺病毒（rAd-p53）对人乳腺癌MCF-7/ADR裸鼠移植瘤的耐药逆转作用及其对耐药相关P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达的影响.方法 建立人乳腺癌MCF-7/ADR裸鼠耐药模型,随机分为对照组、rAd-p53组、阿霉素组、联合组,分别给予不同治疗.观察裸鼠肿瘤体积的变化,western blot检测P-gp蛋白表达情况.结果 成瘤后rAd-p53组、阿霉素组、联合组抑瘤率分别为42.05％、49.21％、69.97％,各治疗组体积与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,且联合组显著优于rAd-p53组和阿霉素组（P＜0.05）.对照组、rAd-p53组、阿霉素组、联合组P-gp表达水平分别为（0.5964±0.0806）、（0.5506±0.0127）、（0.5641±0.0055）、（0.4652±0.0982）,联合组P-gp表达水平低于其他各组.结论 Ad-p53对人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF4/ADR建立的裸鼠移植瘤具有多药耐药的逆转作用,并可下调P-gp的表达.     

分割剂量电离辐射对卵巢癌细胞多药耐药的影响

目的 研究不同分割剂量电离辐射方案对卵巢癌细胞多药耐药性的影响.方法 采用卵巢癌亲本细胞SKOV3及其耐药细胞株SKVCR,分别进行假照射、单次照射(10 Gy)、常规分割照射(2 Gy ×5)和超分割照射(1 Gy×2 ×5).MTT方法检测细胞对4种化疗药物硫酸长春新碱( vincristine,VCR)、依托泊苷(etoposide,VP-16)、盐酸吡柔比星(pirarubicin,THP)和顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的变化.Western blot检测P-gp蛋白表达量.结果 与SKOV3相比,SKVCR倍增时间增加为1.8倍,P-gp糖蛋白表达增高,4种药物对SKVCR的IC50浓度明显增加(P＜0.05).在SKOV3中,与假照组相比,单次照射后细胞对THP、DDP药敏性降低,常规分割照射后细胞对VCR、THP、VP-16药敏性降低,超分割照射使VP-16药敏性降低;在SKVCR中,与假照组相比,3个照射组对VCR、VP-16的药敏性增高,对DDP的药敏性无明显改变,单次和分割照射均可降低P-gp表达.结论 单次、分割和超分割照射在SKOV3亲本细胞中诱导多药耐药,在耐药株SKVCR中逆转对VCR、VP-16的耐药性.     

体内多药耐药的显像研究

探讨了多药耐药产生的各种机制及体内P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)显像的情况。SPECT和PET都可以用来研究P-gp和MRP介导的转运情况。锝标记的甲氧异腈、p53和Q复合物都是P-gp泵的转运底物。显像剂如11C标记的秋水仙碱、维拉帕米、阿霉素等已经用于体内P-gp介导的转运水平的底量研究。白三烯是MRP的特异转运底物,因此N-11C-乙酰基白三烯E4可用于无创性评价MRP的转运功能。     

P-糖蛋白对荷瘤裸鼠体内摄取18F-FDG的影响

目的 研究Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠在依克立达(GH20918)干预前后的18F-FDG摄取变化,在活体内评价P-gp对18F-FDG摄取的影响.方法 分别用人乳腺癌Bcap37细胞及转MDR1基因的Bcap37(Bcap37/MDR1)细胞建立荷瘤裸鼠模型.荷瘤裸鼠培F-FDG microPET动态采集:10只荷瘤裸鼠(Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠各5只)经尾静脉给予7.4 MBq 18F-FDG,给药后立即采集,共采集90 min,得到各个时间段的动态显像图,绘制ROI的TAC.隔日相同采集及处理方法,尾静脉给予含GF120918(按体质量2.0 mg/kg)的18F-FDG 7.4 MBq,获得GF120918干预后肿瘤组织18F-FDG摄取的TAC,观察GF120918干预前后TAC的变化.另取10只荷瘤裸鼠(Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠各5只),行18F-FDG microPET静态显像,并比较GF120918干预前后肿瘤组织的SUV mean的变化.数据分析采用两样本t检验.结果 Bcap37荷瘤裸鼠肿瘤组织在GF120918干预前后的TAC差异元统计学意义,GF120918可明显增加Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠肿瘤组织平台期18F-FDG的摄取水平.荷瘤裸鼠静态microPET显像示,GF120918干预前后Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠肿瘤组织的SUVmean分别为1.028±0.045、1.052±0.028和0.712±0.031、1.015±0.043,前者干预前后的SUVmean差异无统计学意义(t=1.792,P＞0.05),后者干预前后的SUVmean差异有统计学意义(t=3.365,P＜0.05).在无GF120918存在情况下,Bcap37荷瘤裸鼠肿瘤组织的18 F-FDG摄取要高于Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠(t=3.952,P＜0.05);在给予GF120918后,两者间18F-FDG摄取水平差异无统计学意义(t=1.835,P＞0.05).结论 18F-FDG是P-gp的底物之一,18F-FDG联合GF120918可能是一种有效、无创检测肿瘤MDR的方法.     

P-gp影响18F-FDG摄取的体外实验

目的 评价P-gp抑制剂维拉帕米(VER)及GF120918作用后,人乳腺癌细胞株Bcap37和Bcap37/多药耐药蛋白1(MDR1)的18F-FDG摄取变化;探讨18F-FDG摄取与P-gp表达之间的关系.方法 将Bcap37及Bcap37/MDR1细胞分别接种于6孔培养板上,1×106细胞/孔,分成对照组、VER组和GF120918组.分别将18F-FDG、VER及GF120918用不含FBS的RPMI 1640培养基配成37 kBq/ml18 F-FDG溶液、37 kBq/ml 18F-FDG+100 μnol/L VER溶液及37 kBq/ml 18F-FDG+50 μmol/LGF120918溶液,2种细胞株在上述溶液中孵育,分别于10、30、60及120 min分离细胞与培养基,用γ计数仪测量各试管内的放射性计数,计算Bcap37、Bap37/MDR1细胞的18F-FDG摄取率.2种细胞间及同种细胞不同处理组间18F-FDG摄取率比较行t检验.结果 在无抑制剂存在的情况下,孵育10 minBcap37/MDR1细胞中18F-FDG摄取率高于Bcap37细胞,其摄取率分别为(1.88±0.19)％和(1.37±0.18)％(t=7.832,P＜0.05);孵育60和120 min时Bcap37细胞对18F-FDG摄取率高于Bcap37/MDR1细胞,分别为(2.29±0.23)％、(2.34±0.15)％和(1.47 ±0.14)％、(1.53±0.22)％(t值分别为8.437和8.283,均P＜0.05).给予Bcap37/MDR1细胞VER或GF120918后,60和120 min时18F-FDG摄取率分别为(2.45±0.21)％、(2.46±0.25)％和(2.50±0.24)％、(2.48±0.27)％,较未给抑制剂时明显增加(t值分别为9.032、9.243与8.765、8.803,均P＜0.05).Bcap37细胞在有无抑制剂作用的情况下,18F-FDG摄取率无明显变化.结论 18F-FDG是P-gp的底物之一,Bcap37/MDR1细胞与Bcap37细胞间18F-FDG摄取率差异是由P-gp介导的外排作用引起的,18F-FDG可用于评价肿瘤细胞的P-gp功能.     

P糖蛋白对高能X射线照射后Cyt-c释放和caspase-3活性的影响

目的 探讨抗P-gp单抗UIC2对X射线照射后不同时间肿瘤细胞凋亡、细胞内cytochrome c（Cyt-c）释放和caspase-3活性的影响。方法 以抗P-gp单抗UIC2抑制P-gp功能，X射线照射P-gp表达的乳腺癌耐药细胞MCF-7／Adr。运用流式细胞仪检测X射线照射后细胞凋亡、细胞内Cyt-c和caspase-3活性的变化。结果 X射线照射后6、12和24h应用UIC2抑制P-gp功能组细胞凋亡显著增加（P〈0．01），胞浆cyt-c的表达均明显高于对照组（P〈0．05），胞内caspase-3活性均显著高于对照组（P〈0．01）。结论 抑制P-gp功能，增加了Cyt-c释放和caspase-3活性，提示P-gp对X射线照射后肿瘤细胞胞浆cyt-c释放和caspase-3活性均有抑制作用。     

P-gp糖蛋白及其编码的基因在受照射鼻 咽癌细胞株中的表达

目的模拟临床放射方法对人鼻咽鳞癌CNE细胞分次照射，检测照射前、后CNE细胞肿瘤多药耐药蛋白P-gp及其编码的基因MDR1的表达和功能。方法对人鼻咽鳞癌CNE细胞进行体外培养，待细胞进入指数生长期后模拟临床放疗方法进行X射线分割照射，2Gy／（d·f^-1），连续5d，总剂量10Gy。于照射前、照射后4、8、13、17和21d分别收取标本进行检测。利用RT-PCR、免疫细胞化学检测照射前、后人鼻咽鳞癌CNE细胞MDR1及P-gp的表达；MTT法检测其耐药指数（RI）的变化，评价P-gp的功能。结果人鼻咽鳞癌CNE细胞MDR1基因照射前呈弱表达，照后4d过度表达，8d到21d表达逐渐降低，与照射前比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；其编码的蛋白产物P-gp照射前、照射后4和8d呈弱表达，13至21d表达增高，P-gp迟于MDR1基因高表达。MTT法检测耐药指数结果显示：照射前、照射后4和8d RI值均为1，13、17和21d RI分别增高为8、10和11．2，RI值变化的情况与P-gp的变化情况相一致。结论人鼻咽鳞癌CNE细胞照射前MDR1及P-gp呈弱表达，有原始的低度耐药性；照射后MDR1及功能性P-gp高表达并且持续一段时间。     

The value of Tc-99m-tetrofosmin scintigraphy in the assessment of P-glycoprotein in patients with malignant bone and soft-tissue tumors

P-glycoprotein (Pgp) overexpression has been shown to be correlated with resistance to chemotherapy in patients with malignant bone and soft-tissue tumors. The aim of our study was to investigate the role of 99mTc-tetrofosmin as a functional imaging agent reflecting Pgp expression in these tumors. METHODS: Twenty eight patients with various malignant bone and soft-tissue tumors were studied. Radionuclide angiography with 99mTc-tetrofosmin was done first and planar images were acquired at 15 min and 90 min postinjection. Vascular phase was evaluated visually on dynamic images, metabolic state was evaluated both visually and quantitatively on planar images. Quantitative analysis was performed by the calculation of tetrofosmin uptake in the lesion against background and percent washout rate (WR%) of the tracer. Immunohistochemical analysis of Pgp was performed on biopsy specimens and the degree of expression was graded from 0 to 3. RESULTS: There was a positive correlation between the Pgp score and the washout rate of tetrofosmin (r = 0.73, p = 0.000). The mean washout rate of tetrofosmin from the lesions with Pgp expression (31.81 +/- 6.72) was found to be significantly higher than those of without Pgp expression (21 +/- 3.49) (p = 0.000). No statistically significant correlation was found between 15 min and 90 min uptake ratios (UR) of tetrofosmin and Pgp score (r = -0.10, p = 0.6 and r = -0.21, p = 0.2, respectively). When the cut-off value of 24.5 (according to ROC-analysis) for the washout rate was used to discriminate the lesions with and without Pgp expression, the test yielded a sensitivity value of 87.5% with a specificity of 100%. CONCLUSIONS: In malignant bone and soft-tissue tumors, 99mTc-tetrofosmin uptake were not related to Pgp overexpression. Pgp overexpression was found to be correlated with the washout rate of the tracer. 99mTc-tetrofosmin scintigraphy with washout analysis may not only be a useful method for evaluating Pgp overexpression but also its function.     

免疫抑制剂对人胰岛细胞活性的影响

目的了解免疫抑制剂对人胰岛细胞活性的影响,探讨其在胰岛移植中的作用。方法体外分离、纯化人胰岛细胞,与不同浓度、不同种类的免疫抑制剂共同培养后,通过MTT法检测细胞活性。结果低浓度的雷帕霉素对胰岛细胞活性没有影响,高浓度（≥1ng／m1）的雷帕霉素显著降低胰岛细胞活性。赛尼哌和FTY720无论是高浓度还是低浓度对胰岛细胞活性均无影响。结论雷帕霉素对胰岛细胞有毒性作川,其程度与雷帕霉素浓度有关,赛尼哌和F1、Y720对胰岛细胞无明显毒性作用。     

苦碟子注射液抗大鼠肝纤维化的实验研究

目的观察苦碟子注射液抗大鼠肝纤维化的作用。方法采用复合因素法复制肝纤维化大鼠模型,测定各组大鼠血清中LN、HA、PⅢNP的含量,光镜下观察各组大鼠肝组织病理切片。结果模型组大鼠血清中LN、HA、PⅢNP的含量均显著升高(P<0.01),丹参治疗组、苦碟子治疗组血清中LN、HA、PⅢNP的含量均显著降低(P<0.05或P<0.01);光镜下模型组肝组织病理切片胶原纤维增生程度积分最高,在用药治疗的各组中,丹参治疗组、苦碟子治疗组积分均有所恢复。结论苦碟子注射液有一定程度的抗肝纤维化作用。     

人胚胎骨髓间充质干细胞在大鼠体内分化为肝细胞的研究

目的：观察人胚胎骨髓间充质干细胞(MSC)在受体大鼠体内的分化演变，研究人胚胎骨髓间充质干细胞在活体大鼠体内转化为人肝细胞的可行性。方法：将人胚胎MSC移植到肝损伤合并自身肝细胞再生抑制大鼠的脾脏。术后分时段取脾脏进行免疫组化染色，了解人白蛋白(ALB)、人角蛋白(CK8)、人CK18、人CK19的表达情况。结果：人胚胎MSC移植后10d大鼠脾脏的人CK8、人CK18、人CK19免疫组化染色可见阳性细胞；移植后15d大鼠脾脏组织内人ALB免疫组化染色可见阳性细胞。结论：人胚胎MSC能够在自身肝细胞再生抑制的肝损伤大鼠脾脏内分化为肝细胞。     

贝伐单抗对实验大鼠脑水肿模型治疗作用研究

目的探讨贝伐单抗腹腔全身给药对实验大鼠脑水肿的干预效应。方法将30只大鼠单纯分成正常组、空白组和治疗组。治疗组又分为建模前72 h注射贝伐单抗(包括低、中、高治疗剂量组),及建模后2 h注射贝伐单抗(包括低、中、高治疗剂量组)。随后,观察各组大鼠大体及光镜下病理组织的水肿改变。同时,测量每组动物的脑组织含水量,并对其神经功能进行评分。最后,应用统计学方法做出分析、总结。结果与空白组比较,贝伐单抗治疗组脑缺血损伤后的神经功能缺失症状明显改善,且随着药物浓度的增加而改善(P<0.01)。同时,随着贝伐单抗浓度的增加,脑水肿的含量逐渐减少,脑组织水肿的情况逐渐减轻,而且,对于贝伐单抗存在一定的浓度依赖性(P<0.01)。但术前给药与术后给药比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论贝伐单抗对实验大鼠脑水肿有一定治疗效果,但具体机制及临床应用需要进一步深入研究。