模拟微重力条件下奥金肽对MC3T3-E1前成骨细胞增殖的影响

目的：研究模拟微重力（simulated microgravity,SMG）条件下奥金肽（osgentide, OST）对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖功能的影响。方法在正常细胞培养环境下,利用MTT法检测6种OST化合物对MC3T3-E1细胞增殖的影响,从中筛选出有效作用浓度的化合物,进一步利用 MTT 实验及流式细胞术分别检测 SMG 条件下1 nmol／L OST5对MC3T3-E1细胞的增殖效应及细胞周期的分布。结果在正常细胞培养环境下,1 nmol／L OST5对MC3T3-E1细胞的增殖具有显著促进作用（P＜0．01）。 MTT实验结果表明,与正常细胞培养环境相比,MC3T3-E1细胞在SMG条件下其增殖受到显著抑制。在SMG条件下,用1 nmol／L OST5处理MC3T3-E1细胞（ OST-SMG）3 d,流式细胞术检测结果表明,SMG促使更多的MC3T3-E1细胞进入G1期。1 nmol／L OST5处理MC3T3-E1细胞后S期比例比SMG条件下显著提高（P＜0．05）,表明OST5能够促进DNA合成。结论在SMG条件下,OST5能够促进成骨细胞的增殖,为研究OST5对模拟微重力相关的骨丢失防治提供了理论依据。     

RNF185的克隆及过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响

目的克隆RNF185全长基因,构建真核表达载体,检测其蛋白表达和亚细胞定位,并探讨RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。方法 TRIzol法提取人胚肾HEK293T细胞的总RNA,经RT-PCR反应扩增出RNF185基因,并通过酶切连接将其构建到真核表达载体pCMV-Myc和pEGFP-N1上,阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序。测序正确后抽提质粒作为模板扩增N端截短体,构建其真核表达载体。转染MC3T3-E1检测其蛋白表达及亚细胞定位情况。采用碱性磷酸酶染色法分析RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。结果①完成了RNF185的分子克隆,构建的真核表达载体pCMV-Myc-RNF185测序正确,所获得的序列与GenBank中收录的序列完全一致,N端截短体测序正确;②成功转染至MC3T3-E1细胞,蛋白相对分子质量大小与预期一致,全长形式定位于质膜;③RNF185及其N端截短体过表达均可抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化。结论 RNF185过表达可抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化。     

大梯度强磁场抗磁物质悬浮的生物学效应及其应用

梯度强磁场是一种特殊的人工稳恒强磁场,抗磁性物质在这种磁场中的特殊位置上可模拟失重效应,即抗磁悬浮。与目前建立的多种模拟失重环境或失重生物学效应的装置与技术相比,抗磁悬浮技术在力学本质上更接近于空间失重环境,且模拟失重的作用时间持久,具有良好的稳定性,更适用于长时间失重环境要求的生物学实验。目前大梯度强磁场下的抗磁悬浮技术在生物学研究中的应用还处于现象揭示及基础研究阶段,有许多科学问题和应用方向值得探索。综述了大梯度强磁场下抗磁物质悬浮对动物、植物、微生物、细胞和生物大分子等影响的研究进展,并对其应用前景进行了展望。     

Fe_3O_4涂层多巴胺修饰PET人工韧带对MC3T3-E1细胞粘附、增殖和分化影响的实验研究

目的:观察MC3T3-E1细胞在Fe_3O_4涂层多巴胺修饰聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)人工韧带材料表面的粘附、增殖及成骨分化情况。方法:按PET材料表面涂层情况分为4组:PET组,即PET表面未处理组;多巴胺(DA)组,即PET表面进行多巴胺涂层组;100 Fe_3O_4组和200 Fe_3O_4组,分别为PET经多巴胺处理后表面涂有100μg/ml和200μg/ml的Fe_3O_4溶液组。在上述4组PET材料上分别培养MC3T3-E1细胞,进行各项检测。扫描电镜(SEM)和X射线能谱分析(EDS)材料涂层情况。细胞在材料上培养3天和7天后行荧光染色,观察细胞粘附情况。培养1、3、7天后,行CCK-8检测MC3T3-E1细胞的增殖。诱导培养基培养7天检测碱性磷酸酶活性;培养21天行茜素红染色,检测细胞矿化情况;培养14天行Real Time PCR检测骨钙蛋白和胶原I基因的表达。结果:SEM和EDS检测验证涂层成功。荧光染色显示涂层组有效增加了细胞的粘附。细胞增殖实验示涂层组对细胞增殖有促进作用,各涂层组与未涂层组差异具有统计学意义(P<0.05)。涂层材料组碱性磷酸酶OD值明显高于未涂层组(P<0.05)。茜素红染色示各组都有较多矿化结节形成,定量分析显示100 Fe_3O_4组和200 Fe_3O_4组与PET组比较差异有统计学意义(P<0.05)。PCR检测显示涂层组骨钙蛋白和I型胶原基因的表达都较未涂层组增加,骨钙蛋白:Fe_3O_4组与PET组比较差异有统计学意义(P<0.01);I型胶原:DA组、Fe_3O_4组与PET组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:经多巴胺修饰四氧化三铁涂层处理的PET人工韧带材料,能明显促进MC3T3-E1细胞的粘附、增殖和分化。     

模拟微重力条件下成骨生长肽促进MC3T3-E1成骨样细胞的增殖与分化

目的研究回转模拟微重力(simulated microgravity,SMG)条件下成骨生长肽(OGP10-14)对MC3T3-E1成骨样细胞增殖与分化的影响。方法利用回转器模拟失重,MTT法检测OGP10-14对回转24 h,48h,72 h MC3T3-E1细胞增殖的效应,并观察培养液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨桥素(osteopontin,OPN)活性变化。结果回转模拟微重力条件下,10-8mol/L OGP10-14能够显著促进成骨细胞系MC3T3-E1的增殖(P<0.01)并促进成骨细胞系MC3T3-E1的ALP和OPN活性。结论回转模拟微重力条件下,OGP10-14对成骨细胞系MC3T3-E1的增殖与分化具有促进作用。     

模拟失重对前成骨细胞MC3T3-E1内钙离子浓度的影响

目的：研究模拟失重对前成骨细胞MC3T3-E1内钙离子浓度的影响。方法：利用回转器模拟失重条件培养前成骨细胞MC3T3-E1 48h。然后将细胞用Fluo-3AM标记,使用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度。结果：模拟失重条件培养后,细胞内钙离子浓度检测显示,与对照组相比,模拟失重组细胞内钙离子浓度降低。流式细胞仪结果显示,与对照组相比,模拟失重组细胞的荧光阳性率显著降低,提示模拟失重可以抑制细胞活性。结论：模拟失重导致前成骨细胞MC3T3-E1内游离钙离子浓度降低,并可能抑制细胞活性。     

双层含骨基质骨器官芯片的构建

目的构建双层含骨基质骨器官芯片并用于体外模拟成骨细胞和破骨细胞分化, 为抗骨质疏松药物开发提供新平台。方法使用WorkSoild软件制作双层双通道骨器官芯片设计图, 利用光刻技术制备浇注母版。以聚二甲基硅氧烷(PDMS)为原料, 通过模具浇注制备芯片主体。以牛皮质骨片为间隔, 分隔培养室4个通道进出口采用储液柱封闭。芯片验证实验分为成骨、破骨诱导组和成骨、破骨对照组, 成骨、破骨诱导组将小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1和小鼠巨噬细胞RAW264.7分别接种于芯片上, 成骨诱导14 d, 破骨诱导7 d。成骨、破骨对照组为不进行诱导的MC3T3-E1细胞和RAW264.7细胞。观察指标包括:(1)芯片外观及密封性:芯片制备完成后拍照观察外观并通过密封实验观察密封性能。(2)生物相容性:MC3T3-E1细胞和RAW264.7细胞接种于芯片培养3 d及培养1、3、5 d后, 分别采用钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶(AM/PI)染色和细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)实验观察细胞存活情况。(3)成骨分化情况:对成骨诱导组细胞进行碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色观察成骨细胞诱导情...     

长时间力学载荷抑制体外培养成骨细胞的增殖和分化

目的:观测长时间生理强度力学载荷对体外培养小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1增殖和成骨分化的影响,探讨长时间生理载荷影响骨组织的细胞生物学机理。方法:采用四点弯曲加载装置,向成骨前体细胞MC3T3-E1施加2000微应变(με)、0.5 Hz的周期性张应变,持续时间为0~24 h。然后采用MTT法检测细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;比色法检测碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;RT-PCR检测ALP、骨钙蛋白(OCN)、I型胶原(Col I)的m RNA表达;免疫印迹法检测OCN和Col I蛋白,以及骨形成蛋白表达。结果:短时间的力学载荷(12 h以内)对成骨前体细胞的增殖无影响,24 h的力学载荷抑制成骨细胞增殖活性,但效果不显著;0~24 h的力学载荷均对成骨细胞的凋亡率无明显影响。短时间力学载荷可提高ALP活性和ALP m RNA表达,12 h后开始下降;短时间的力学载荷可提高OCN和Col I的m RNA和蛋白水平,但载荷作用24 h后,OCN和Col I的蛋白表达开始降低。0~8 h的载荷促进骨形成蛋白2和4的表达,12 h载荷后,蛋白表达降低。另外,长时间载荷可提高细胞培养上清的LDH活性。结论:长时间的生理力学载荷对细胞增殖的抑制作用不显著,对细胞凋亡也没有明显影响,但可显著促进细胞坏死,并抑制细胞成骨分化。     

三氧化二砷对人结肠癌细胞增殖及凋亡影响的研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）对人结肠腺癌LS-174T细胞增殖的抑制及凋亡的诱导作用。方法：应用MTT法、细胞集落形成试验、流式细胞仪技术和TUNEL法观察不同浓度的As2O3(1.0μmol,2.0μmol，4.0μmol，8.0μmol，16.0μmol/L）对LS-174T细胞增殖和凋亡的影响。免疫组化技术观察As2O3对bcl-2基因表达的影响。结果：LS-174T细胞经As2o3作用后，细胞生长抑制率上升，细胞集落形成率下降，细胞周期中G1期细胞比例上升，S期和G2/M期细胞比例下降，TUNEL法显示凋亡细胞数增加，免疫组化结果显示bcl-2的表达明显减弱。结论：As2O3能抑LS-174T细胞增殖并诱导该细胞株凋亡，其机理可能与下调bcl-2表达有关。     

模拟失重骨细胞条件培养基对成骨细胞活性的影响

目的 探讨三维随机回转模拟失重培养后的骨细胞条件培养基(RCM)对成骨细胞活性的调节作用.方法 采用三维随机回转模拟失重培养小鼠骨细胞系MLO-Y448 h后,收集回转条件培养基(RCM)和未回转对照组的条件培养基(CCM),用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、对硝基苯磷酸(pNPP)法和流式细胞术(FCM)检测RCM对小鼠成骨样细胞系MC3T3-E1增殖、周期及细胞分泌碱性磷酸酶(ALP)活性的影响.结果 三维随机回转48 h后的MLO-Y4 RCM可促进 MC3T3-E1增殖,用100%的MLO-Y4RCM和CCM培养 MC3T3-E1 48 h和72 h后,RCM组比CCM组分别增加了1.21和1.27倍,差异性极显著(P<0.001);周期检测结果表明,RCM可以使MC3T3-E1越过周期阻滞点(S期);MC3T3-E1的ALP活性在RCM组和CCM组之间无差异.结论 三维随机回转模拟失重培养骨细胞48 h后的条件培养基促进了成骨细胞的增殖;并使成骨细胞的周期越过阻滞点,对成骨细胞的ALP活性无影响.     

1 G和模拟微重力下前列腺癌细胞PC-3对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1增殖和活性的影响

目的　探讨1 G和模拟微重力条件下前列腺癌细胞分泌物对成骨细胞增殖和活性的影响,以期今后用于对抗微重力导致的骨质丢失以及常人的骨质疏松。　方法　1 G条件下,将小鼠成骨样细胞MC3T3 E1与人前列腺癌细胞PC 3分别接种在混合培养板的外室和内室中培养48 h, 用MTT法检测MC3T3 E1的增殖、用PNPP法检测MC3T3 E1 的碱性磷酸酶(ALP)活性。回转器模拟微重力条件下,将培养过PC 3的培养液加入到培养24 h的MC3T3 E1培养瓶中,培养瓶固定于回转器,转速20 r/min 下继续培养48 h 后,用MTT 法检测MC3T3 E1 的增殖、用PNPP 法检测MC3T3 E1的ALP活性。　结果　1 G条件下,与PC 3混合培养后,MC3T3 E1的增殖和ALP活性均较对照组有显著增加(P<0 05)。回转模拟微重力条件下MC3T3 E1 的增殖和ALP活性比静止对照组有显著下降(P<0 05),与微重力可导致骨质丢失的现象相一致。回转培养、加PC 3 培养液的MC3T3 E1的增殖和ALP活性比回转对照组有增加趋势,但不具统计学意义(P>0 05)。　结论　前列腺癌细胞确实分泌了某种因子可刺激成骨细胞的增殖和活性,模拟微重力条件的实验结果没有1 G条件的显著,这可能是实验方法不同所导致,有待进一步深入研究。     

染料木素7,4’-硝氧基丁酸酯的合成及其对MC3T3-E1细胞的增殖作用

目的为改善染料木素的治疗效果,对其进行结构修饰。方法通过成酯、硝基化反应,在染料木素的7-位,4’-位进行修饰,得到一个硝基酯类化合物;并考察得到的化合物对MC3T3-E1细胞的促增殖作用。结果得到的化合物经核磁、质谱等结构鉴定与设计目标一致。该化合物能够显著促进MC3T3-E1细胞的增殖,且呈一定的时间、剂量依赖关系。结论染料木素7,4’-硝氧基丁酸酯较母体药物更好地促进成骨细胞的增殖,为骨质疏松症治疗药物的开发提供新的参考。     

软骨细胞在微载体中的培养和快速扩增

目的：探索在短期内获得大量成活率高、分化良好的兔关节软骨细胞的方法,方法：应用胰蛋白酶、胶酶消化的方法从新生新西兰兔关节软骨处分离、培养软骨细胞,并将获得的软骨细胞在旋转生物反应应（RCCS）内应用Cytodex-3微载体进行培养。应用倒置显微镜和扫描电镜对微载体表面的软骨细胞进行动态观察,并对收获的软骨细胞进行Ⅰ、Ⅱ型胶原的细胞免疫化学染色分析。结果：并节软骨细胞可快速贴附于Cytodex-3微载体表面,细胞伸展后生长加速,到培养后期,细胞密度可达最初接种的20倍。在微载体上收获的软骨细胞Ⅰ型胶原的免疫细胞化学染色呈阴性,Ⅱ型胶原染色则呈强阳性。结论：微载体细胞培养技术是一种简便、快速的体外细胞扩增方法,可为构体建组织工程化人工软骨提供大量软骨软件。     

大梯度强磁场环境下细胞培养条件优化（英文）

目的优化大梯度强磁场环境下细胞培养条件,为后续模拟失重实验研究提供更完善的实验平台。方法通过进行二氧化碳浓度控制单元设计,气体温度湿度调节单元设计,气体循环水浴保温单元,细胞培养三点支撑架设计,配套细胞培养容器设计,优化大梯度强磁场环境下细胞培养条件,并通过实验验证该系统的稳定性和可靠性。结果与对照组相比,优化后的细胞培养容器细胞形态、面积、增殖均无显著性差异;腔室温度可控制在(37±0.5)℃之间,湿度及二氧化碳浓度可达到细胞培养要求。结论优化后的系统可满足大梯度强磁场环境下细胞培养条件要求,节约实验成本,提高实验的严谨性。     

模拟微重力诱导小鼠成骨细胞微丝变化对碱性磷酸酶及骨钙蛋白的影响

目的 研究模拟微重力诱导小鼠成骨细胞微丝结构改变对碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）及骨钙蛋白（osteocalcin,OCN）的影响,探讨失重导致骨质疏松的机制.方法本研究以已建株的小鼠成骨样细胞株（MC3T3-E1）作为对象,以回转器模拟微重力效应.实验将细胞分为4组：模拟微重力组、0.5 μg/ml细胞松弛素B组、模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组及正常重力组（对照组）.培养48 h后,利用异硫氰酸荧光素鬼笔环肽（fluoresceine isothiocyanate phalloidin,FITC-phalloidin）进行免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察各组细胞微丝的变化;同时用ALP试剂检测各组细胞培养液内ALP的酶活性,采用ELISA法检测各组细胞裂解液中OCN的表达量.结果 除正常重力组外,其余各组细胞微丝结构都出现了不同程度的解聚,张力纤维减少,失去方向性,以模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组改变最为明显.和正常重力组比较,其余各组ALP的酶活性和OCN的表达量均成下降趋势（F=17.23、121.91,P〈0.01）,且模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组与模拟微重力组和0.5 μg/ml细胞松弛素B组这两组之间的差别都有统计学意义（P〈0.05）.结论 微重力影响成骨细胞ALP的酶活性及OCN的表达可能与微重力诱导细胞骨架微丝解聚相关.     

不同重力环境对流体剪切应力致成骨细胞前列腺素E_2分泌的影响

目的　观察不同重力环境对流体剪切应力致成骨细胞前列腺素 E2 (PGE2 )分泌的变化 ,探讨重力变化对成骨细胞力学信号转导功能的影响。　方法　传代培养的大鼠乳鼠颅骨成骨细胞分别在 1G、3G及模拟失重环境中培养。6 0 h后 ,将成骨细胞置于流体槽中给予 0 .5 Pa或 1.5 Pa的流体剪切应力作用 1h,检测细胞分泌 PGE2 的变化。　结果　在 1G重力环境下培养的成骨细胞中 ,在一定的时间范围内 (5～ 6 0 m in) ,细胞 PGE2 的分泌反应随剪切应力作用时间的延长而显著增强 (P<0 .0 1) ;而在一定的剪切应力范围内 (0 .5～ 1.5 Pa) ,细胞 PGE2 的分泌反应与应力水平无明显关系 ,即不随剪切应力的大小而改变 (P>0 .0 5 )。与之相比 ,模拟失重环境下培养的成骨细胞对剪切应力的反应有显著性下降 (P<0 .0 1) ,0 .5 Pa应力作用下无 PGE2 的分泌反应 ,1.5 Pa应力作用下虽有 PGE2 的分泌 ,但分泌延缓且水平下降 (P<0 .0 1)。3G重力环境下 ,细胞对剪切应力的反应特性与 1G重力组细胞的表现相比 ,差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。　结论　模拟失重可以导致大鼠成骨细胞力学信号转导功能的下降 ;3G重力环境对成骨细胞的力学信号转导功能无显著影响     

NICD表达下调对辐射损伤小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖和功能基因表达的影响

目的利用RNA干扰抑制小鼠成骨细胞系MC3T3-E1表达Notch信号通路胞内结构域（NICD）,探讨靶向抑制NICD表达对辐射损伤MC3T3-E1细胞的增殖和相关功能基因表达的影响。方法建立抑制NICD表达的MC3T3-E1细胞株,利用实时定量PCR（qRT-PCR）和Western blot法检测其NICD基因的表达。MC3T3-E1细胞和NICD RNA干扰MC3T3-E1细胞经2 Gy γ射线照射后,用BrdU掺入法和qRT-PCR法检测上述细胞的增殖及相关功能基因的表达水平。使用Student-Newman-Keuls进行组间差异分析,两组间比较采用t检验。结果用RNA干扰技术可靶向抑制MC3T3-E1细胞表达NICD。抑制NICD表达可干扰前体成骨细胞和成骨细胞的增殖。2 Gy照射后,前体成骨细胞和成骨细胞以及NICD RNA干扰的成骨细胞的增殖明显下降,各靶细胞的相关功能基因与照射前相比的变化如下:①2 Gy照射后的前体成骨细胞成骨特导性转录因子（Runx2）表达上调,差异有统计学意义（t=2.353,P < 0.05）,NICD RNA干扰的前体成骨细胞Runx2表达下调,差异有统计学意义（t=2.353,P < 0.05）;②2 Gy照射后的前体成骨细胞和成骨细胞以及NICD RNA干扰的前体成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）表达上调,差异有统计学意义（t=3.182、3.345、3.555,均P < 0.05）,NICD RNA干扰的成骨细胞ALP表达下调,差异有统计学意义（t=5.045,P < 0.01）;③2 Gy照射后前体成骨细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）表达下调,差异有统计学意义（t=2.541,P < 0.05）,成骨细胞和NICD干扰的前体成骨细胞RANKL表达上调,差异有统计学意义（t=3.299,P < 0.05;t=10.212,P < 0.01）,而抑制NICD表达则发生相反变化,差异无统计学意义（t=0.765,P>0.05）;④2 Gy照射后的前体成骨细胞和成骨细胞骨保护素（OPG）表达下调,差异有统计学意义（t=2.994、2.782,均P < 0.05）,抑制NICD表达使前体成骨细胞OPG表达上调,差异有统计学意义（t=5.841,P < 0.01）,成骨细胞OPG表达下调,差异有统计学意义（t=2.544,P < 0.05）;⑤2 Gy照射后各靶细胞巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）表达变化趋势与RANKL表达变化情况一致。结论在不同阶段的成骨细胞中抑制NICD表达对辐射损伤表现出的作用是不同的:①可降低前体成骨细胞和成骨细胞的增殖,对辐射损伤后的前体成骨细胞的增殖有保护作用;②可通过调节Runx2从而明显抑制辐照后前体成骨细胞分化,减少骨质丢失;③辐照后各成骨细胞不会通过RANKL/OPG/RANK系统表现出对破骨细胞功能的调节作用;④成骨细胞经过调节M-CSF表现出对破骨细胞的功能抑制作用。     

不同重力环境对流体剪切应力致成骨细胞前列腺素E2分泌的影响

目的观察不同重力环境对流体剪切应力致成骨细胞前列腺素E2(PGE2)分泌的变化,探讨重力变化对成骨细胞力学信号转导功能的影响.方法传代培养的大鼠乳鼠颅骨成骨细胞分别在1G、3G及模拟失重环境中培养.60h后,将成骨细胞置于流体槽中给予0.5Pa或1.5Pa的流体剪切应力作用1h,检测细胞分泌PGE2的变化.结果在1G重力环境下培养的成骨细胞中,在一定的时间范围内(5～60min),细胞PGE2的分泌反应随剪切应力作用时间的延长而显著增强(P＜0.01);而在一定的剪切应力范围内(0.5～1.5Pa),细胞PGE2的分泌反应与应力水平无明显关系,即不随剪切应力的大小而改变(P＞0.05).与之相比,模拟失重环境下培养的成骨细胞对剪切应力的反应有显著性下降(P＜0.01),0.5Pa应力作用下无PGE2的分泌反应,1.5Pa应力作用下虽有PGE2的分泌,但分泌延缓且水平下降(P＜0.01).3G重力环境下,细胞对剪切应力的反应特性与1G重力组细胞的表现相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论模拟失重可以导致大鼠成骨细胞力学信号转导功能的下降;3G重力环境对成骨细胞的力学信号转导功能无显著影响.     

穿膜肽mCLOCK's DNA-BIND作为药物载体的生物安全性初步评价

目的 研究一种新的来源于节律蛋白mCLOCK's DNA结合域的穿膜肽mCLOCK's DNA-BIND(CDB)作为药物携带载体的生物安全性.方法 化学合成穿膜肽CDB.体外采用Phorbol 12-Myristate 13-acetate(PMA)诱导NIH3T3细胞的近日节律.于诱导后不同时间点,CDB与小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞共孵育,RT-PCR检测其对近日节律核心分子mPeriod1(mPer1)基因表达的影响.此外,培养的NIH3T3直接与CDB共孵育12 h和24 h后,MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期和凋亡的作用.结果 CDB没有明显影响PMA诱导的mPer1节律基因表达.此外,CDB不干扰NIH3T3细胞增殖及生长周期,亦无明显的诱导凋亡作用.结论 CDB对细胞近日节律、细胞增殖、生长周期及细胞凋亡均无明显毒副效应,可望作为一种安全有效药物载体,并具有广泛的临床应用前景.     

人Slitrk1基因对PC12细胞增殖和分化的影响

目的研究人Slitrk1基因过表达对PC12细胞增殖和分化的影响。方法PCR扩增人Slitrk1 CDS,克隆到pcDNA4／myc-His A载体,构建重组质粒pcDNA4／St1,分别以空载体和重组质粒转染PC12细胞,RT-PCR法鉴定出阳性转染细胞,观察空载体转染的PC12细胞（pcDNA4／PC12）和过表达Slitrk1的PC12细胞（ST1／PC12）的表型并用MTT法检测细胞增殖情况。结果与空载体转染的PC12细胞相比,过表达Slitrk1基因的细胞增殖速度明显减慢。pcDNA4／PC12与野生型PC12细胞表型一致,均为悬浮成团生长,细胞少有突起,而ST1／PC12细胞大部分贴壁生长,突起多见,呈分化状态。结论过表达人Slitrk1基因能够抑制PC12细胞增殖,促进细胞的贴壁及突起长出。人Slitrk1基因可能有促进PC12细胞神经分化的作用。