黑色素瘤抗原基因的检测及其在胃癌中的表达

目的:检测并探讨分析黑色素瘤抗原基因(MAGE)在胃癌中的表达及其分布特点。方法:采用RT-PCR技术检测70 例胃癌组织及相应的癌旁正常组织中MAGE表达。结果:70例胃癌组织中MAGE-1、MAGE-3的阳性率分别为28.6%、35.7%,癌旁正常组织均不表达。基因表达与患者的年龄、性别、Hp感染、肿瘤组织学分型无关(P>0.05)。结论:MAGE基因在胃癌组织中特异性表达,可以此作为靶抗原进行肿瘤免疫治疗。     

环氧合酶2同黑色素瘤抗原-1蛋白在胃癌患者表达的相关性和预后影响分析

目的 检测环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)和黑色素瘤抗原-1(Melanoma-associated antigen 1,MAGE-1)蛋白在胃腺癌切除组织中的表达情况及相关性分析, 以及对胃腺癌患者5年生存率的预后影响。 方法 用免疫组织化学方法对67例胃腺癌切除组织中COX-2和MAGE-1蛋白表达进行统计, 利用SPSS 19.0软件进行预后和相关性的χ2分析。 结果 COX-2表达阳性率为55.2%,MAGE-1表达阳性率为46.3%,分析结果显示COX-2蛋白高表达(阳性)是降低胃癌患者5年生存率的影响因素,MAGE-1高表达(阳性)不是降低胃癌患者5年生存率的影响因素,COX-2 表达同MAGE-1表达没有相关性(P=0.156)。 结论 COX-2蛋白和MAGE-1蛋白在胃腺癌组织中均有较高表达, 但COX-2高表达明显影响胃腺癌患者的5年生存率,尚不能得出MAGE-1蛋白高表达影响胃腺癌患者的5年生存率的结论。     

MDR1基因在胃癌组织中的表达及意义

目的 探讨多药耐药基因MDR1在胃癌组织中的表达及临床意义.方法 收集2009年12月～2010年8月胃癌新鲜癌组织标本53例(实验组)、15例正常胃黏膜组织(对照组),采用逆转录-聚合酶链反应技术检测胃癌组织和正常胃组织中MDR1基因的表达,并分析与临床病理特征之间的关系及对化疗的指导意义.结果 MDR1基因在正常胃组织及胃癌组织中的表达分别为0.57±0.27和0.20±0.10(t=8.13,P＜0.001).MDR1基因的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移之间差异具有统计学意义(t=2.83,3.47;P=0.007,0.002),而与患者性别、肿瘤部位、大小之间差异无统计学显著性意义(t=1.41,0.54,1.16;P=0.16,0.60,0.25).结论 MDR1基因的高表达可能是胃癌多药耐药产生的基础,MDR1基因的检测对制定化疗方案和选择化疗药物有一定的指导意义.     

胃癌患者血清和组织miR-30a表达与胃泌素及患者临床病理特征的相关性研究

目的探讨胃癌患者血清和组织中miR-30a表达情况与血清胃泌素-17(G-17)及患者临床病理特征的关系。方法选取2018年3月至2019年12月在重庆医科大学附属第一医院大足医院确诊的68例初诊胃腺癌患者作为研究对象,采集血样和胃癌组织、癌旁正常组织标本;另选取同期30例健康者血清标本作为对照组。提取血清和组织总RNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-30a相对表达量,另外检测血清G-17水平。采用双荧光素酶报告基因分析miR-30a和胃泌素基因(GAST)的靶向调控关系。结果 GEPIA数据库和OncomiR数据库分析显示,胃癌组织GAST表达量较癌旁正常组织升高,差异有统计学意义(P0.05),胃癌组织中miR-30a表达量低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P0.05),且GAST与miR-30a表达量呈明显负相关(r=-0.520,P0.05)。双荧光素酶报告基因分析显示,miR-30a mimics和GAST-3′UTR-WT共转染,荧光素酶相对表达量降低(P0.05)。与健康者血样或相配对的癌旁正常组织比较,胃癌患者血清和胃癌组织中miR-30a相对表达量[血清:(0.688±0.279)vs.(1.000±0.200),t=5.524,P0.05;胃癌组织:(0.348±0.244)vs.(1.000±0.175),t=13.211,P0.05]明显降低,且与肿瘤直径、TNM分期、血清癌胚抗原、糖类抗原(CA)19-9、CA 125水平及幽门螺杆菌感染均有关(P0.05)。Pearson相关分析显示,胃癌患者血清miR-30a相对表达量与血清G-17水平呈负相关(r=-0.729,P0.05)。结论胃癌患者血清和胃癌组织中miR-30a相对表达量普遍降低,与血清G-17过表达有关,而且GAST基因是miR-30a潜在的下游靶基因,miR-30a/胃泌素有望成为胃癌治疗的新靶点。     

Bcl-2和Hrk及Cyclin E基因在胃癌组织中的表达及其意义

目的研究凋亡抑制基因蛋白Bcl-2与促进凋亡基因蛋白Hrk、细胞周期素CyclinE基因蛋白在胃癌中的表达,探讨其在胃癌发生、发展中的生物学关系及意义。方法应用S-P方法,检测58例胃癌组织及正常胃黏膜组织基因蛋白Bcl-2与Hrk、CyclinE表达情况。结果 Bcl-2蛋白在胃癌组织中阳性表达38例,阳性率为65.5%,在癌旁组织中阳性表达14例,阳性率为24.1%,两组中Bcl-2蛋白阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=20.077,P<0.05)。不同肿瘤分化程度、临床分期及有无淋巴转移胃癌患者中Bcl-2蛋白阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.01);不同年龄、肿瘤直径、Borrmann分型、浸润深度胃癌患者中Bcl-2蛋白阳性率比较,差异均无统计学意义。Hrk蛋白在癌旁组织中阳性表达36例,阳性率为62.1%,在胃癌组织中阳性表达12例,阳性率为20.7%,两组中Hrk蛋白阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=20.471,P<0.05)。CyclinE蛋白在胃癌组织中阳性表达34例,阳性率为58.6%,在癌旁组织中阳性表达11例,阳性率为18.9%,两组中Hrk蛋白阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=19.206,P<0.05)。Bcl-2蛋白与Hrk蛋白和CyclinE蛋白的相关分析,Bcl-2蛋白与Hrk蛋白呈负相关(rs=-0.312,P<0.05),与CyclinE蛋白呈正相关(rs=0.682,P<0.05)。结论 Bcl-2、Hrk及CyclinE基因蛋白均与胃癌发生有关,三者相互制约或协调,参与胃癌形成机制。     

胃癌组织GST-π基因表达检测及临床意义分析

目的 探讨胃癌组织中多药耐药基因谷胱甘肽S转移酶(GST)-π的表达及临床意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应检测53例胃癌组织标本和15例正常胃黏膜组织标本GST-π基因的表达,分析其与胃癌病理特征的关系.结果 癌组织GST-π基因相对表达值为0.56±0.27,高于正常胃黏膜组织(0.18±0.13)(t=5.30,P<0.05);不同分化程度胃癌组织GST-π基因表达程度差异具有统计学意义(t=2.67,P＜0.05).结论 GST-π基因高表达可能导致胃癌产生多药耐药性,GST-π检测对制订化疗方案有一定指导意义.     

胃癌中p16蛋白表达和p16基因启动子甲基化的研究

目的:探讨胃癌中p16基因的失活机制。方法:采用免疫组织化学SP方法检测40例胃癌组织和43例正常胃黏膜组织中p16蛋白的表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法研究40例胃癌组织和35例正常胃黏膜组织p16基因启动子的甲基化状况。结果:23例胃癌组织的p16基因启动子发生了甲基化,甲基化发生率为58%,正常胃黏膜组织中未发现甲基化,两组间比较差异有显著性(P<0.01)。31例胃癌组织中的p16蛋白表达阴性,正常胃黏膜组织中6例表达阴性,两组间差异有显著性(P<0.01)。胃癌组织中,MSP方法和免疫组织化学方法结果间差异无显著性(P>0.05)。结论:胃癌的发生与p16基因失活关系密切,启动子甲基化可能抑制了蛋白的表达,这种途径可能是胃癌中p16基因失活的重要机制。     

MCM7和Rb蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨微小染色体维持蛋白7(MCM7)和视网膜母细胞瘤易感基因(Rb)在胃癌组织中的表达及其意义.方法:采用免疫组化法检测MCM7和Rb蛋白在20例正常胃黏膜、30例非典型增生、80例胃癌组织中的表达,并以标记指数(labeling index,LI)量化其表达.结果:MCM7和Rb蛋白在正常胃黏膜、非典型增生和胃癌组织中的表达之间差异均有显著性(P<0.05);两者的LI在胃癌组织中表达与临床分期、浆膜浸润、术后复发、肝转移及淋巴结转移密切相关(P<0.05),与肿瘤大小及组织学类型无关(P>0.05).胃癌组织中MCM7和Rb的LI表达呈显著负相关(r=-0.287,P=0.010).结论:MCM7的表达升高和Rb蛋白的表达下降与胃癌的发生及发展密切相关,检测MCM7和Rb有助于判断胃癌恶性程度及预后.     

利用RT-PCR检测SM22基因在胃癌及正常组织中表达差异的生物学意义

目的:检测SM22(smoothmuscle22)mRNA在人胃癌及正常组织中的表达水平,探讨SM22基因与胃癌发生的关系,为进一步鉴定胃癌早期诊断筛查的标志物提供理论依据。方法:应用半定量RT-PCR检测42例胃癌组织及14例胃正常组织中SM22mRNA的表达水平并比较其差异。结果:在胃癌组织SM22mRNA的阳性表达率为92.86%(39/42),在正常组织中的阳性表达率为71.43%(10/14),差异无统计学意义(P>0.05)。半定量光密度计数后SM22mRNA表达量在胃癌组织和正常组织中分别为0.86±0.14和0.32±0.22,差异有统计学意义(P<0.01)。在14对胃癌与正常配对标本中,有10对胃癌及正常组织中SM22mRNA均表达阳性而且在肿瘤组织中表达量明显高于正常组织,有4对标本中SM22mRNA只在胃癌组织中表达而在正常组织中表达阴性。结论:SM22mRNA在胃癌组织中的表达量高于正常组织,提示其在胃癌发生发展中可能起一定作用。     

c—myb和PARP基因蛋白在食管癌、胃癌中的表达

目的 揭示c-myb,PARP基因蛋白在食管癌,胃癌中的表达及意义,探讨其在人食管癌、胃癌发生、发展及预后中的作用.方法 免疫组化染色采用SP法,现察c-myb,PARP基因蛋白在胃癌(41例)、食道癌(45例)组织中的表达,用t检验进行统计学处理.结果 c-myb,PARP基因蛋白在食管癌、胃癌组织中有高表达,与癌旁组织的阳性表达率有显著性差异(P<0.01).正常组织中c-myb为阴性,PARP基因蛋白在食管组织中为2.1%、胃组织中为1.7%.结论 c-myb,PARP基因蛋白在食管癌、胃癌中的表达,对这两种痰病的早期诊断、早期治疗及预后都具有现实意义,对开展新型治疗方法有着长远意义.     

直肠癌中肿瘤/睾丸抗原相关基因的表达

目的检测MAGE-1、NY-ESO-1、SCP-1基因在直肠癌中的表达情况,探索其在直肠癌免疫治疗中的应用价值。方法应用MAGE-1、NY-ESO-1、SCP-1单克隆抗体,对68例直肠癌组织进行免疫组织化学法（SP法）检测,SPSS统计软件分析所得数据。结果在检测的68例直肠癌标本中,MAGE-1、NY-ESO-1、SCP-1的阳性表达率分别为30.9%（21/68）、23.5%（16/68）、17.6%（12/68）。多个CTA基因可在直肠癌中同时表达,至少表达一种CTA的频率为67.7%（46/68）,同时表达两种或两种以上CTA的频率是20.6%（14/68）,同时表达三种CTA的频率为5.9%（4/68）。阳性颗粒均位于细胞质。MAGE-1、NY-ESO-1、SCP-1基因的表达主要集中在肿瘤细胞分化较好Ⅰ级直肠腺癌,阳性率有显著性差异（P〈0.05）,与年龄、性别、肿瘤大小、Dukes分期和淋巴结转移无显著相关性（P〉0.05）。结论 CT抗原（MAGE-1、NY-ESO-1、SCP-1）在直肠癌组织中有高特异的表达,这使得用这些CTA编码的蛋白作为疫苗用于直肠癌的免疫治疗成为可能。     

survivin在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨survivin在胃癌诊断、预后等方面的意义。方法利用RT-PCR技术检测38例胃癌组织标本和38例相应癌旁组织标本中survivin mRNA表达情况。结果38例胃癌组织标本中有20例survivin基因表达阳性，高、中、低分化胃腺癌的阳性表达率分别为0％、45．5％和60％；发生淋巴结及远处转移的胃癌组织标本中72％表达survivin，明显高于无转移组。38例癌旁组织标本均无该基因的阳性表达。结论survivin在胃癌组织中有较高的表达率。且表达具有高度肿瘤特异性；survivin的表达与胃癌的侵袭性和预后有关。     

黑色素瘤抗原基因3在K562细胞内质网应激反应性凋亡中的表达及意义

本研究旨在探讨黑色素瘤抗原基因-3（melanoma antigen gene-3,MAGE-3）在内质网应激反应性凋亡中的表达及意义.应用Ca^2＋荧光指示剂Fura-2/AM通过荧光分光光度计测定白血病细胞系K562及其多药耐药细胞株K562/A02经thapsigargin作用前后细胞内Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）变化;Western blot检测GRP78蛋白表达变化;荧光显微镜观察细胞凋亡形态变化;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-PCR检测MAGE-3基因mRNA水平表达变化.结果显示：①毒胡萝卜素（thapsigargin）诱导K562和K562/A02细胞[Ca^2＋]i出现不同程度的升高并呈一定的浓度依赖性,同时诱导GRP78蛋白表达增加以及K562和K562/A02细胞典型的凋亡改变,细胞凋亡率亦呈一定的浓度依赖性;在静息状态下K562/A02细胞[Ca^2＋]i较K562细胞明显增高;②毒胡萝卜素诱导K562和K562/A02细胞凋亡过程中,MAGE-3 mRNA表达明显下调;此外,与K562细胞比较,K562/A02细胞MAGE-3 mRNA表达明显上调.结论：①毒胡萝卜素在一定浓度范围内可诱导K562及其多药耐药细胞株K562/A02发生内质网应激反应性凋亡,并可能与MAGE-3表达下调有关或MAGE-3基因可能参与此凋亡途径的调控;②MAGE-3可能具有抗凋亡活性,K562/A02细胞多药耐药性可能与细胞[Ca^2＋]i增高和MAGE-3表达上调有关.     

胃癌组织中DEC1的表达及其临床意义

目的:探讨分化型胚胎软骨发育基因1 (DEC1)在胃癌组织中表达的临床意义.方法:应用组织芯片方法检测162例胃癌组织和32例癌旁组织中DEC1蛋白的表达;采用实时定量逆转录聚酶链反应(RT-PCR)方法检测11例胃癌组织和12例癌旁胃正常组织中DEC1 mRNA的表达水平.结果:DEC1在胃癌组织中表达的阳性率为11.11％(18/162),而在癌旁组织中的阳性率为3.13％(1/32),两者差异无统计学意义(P＞0.05);DEC1 mRNA在胃癌组织和癌旁胃正常组织中的表达水平极低,无法定量检测.结论:DEC1在胃癌组织中的表达较低,其在胃癌中的临床价值尚有待于进一步研究.     

Housekeeping gene variability in normal and cancerous colorectal, pancreatic, esophageal, gastric and hepatic tissues

Careful normalization is essential for the accurate quantitation of mRNA levels in biopsy-sized tissue samples. Commonly, normalization of the target gene with an endogenous standard, mainly housekeeping genes (HKGs), is applied. However, differences in the expression levels of endogenous reference genes have been reported between different tissues and pathological states. Therefore, we were challenged to identify a set of endogenous reference genes whose mRNA expression levels would not change significantly between normal and cancerous tissues. Quantitative real-time PCR (Q-RT-PCR) analysis was applied to evaluate the variability in gene expression among 21 classical housekeeping genes in colorectal, pancreatic, esophageal and gastric cancer as well as in liver metastases in comparison to the corresponding normal tissue. Our results indicated that some housekeeping genes were candidates with relatively stable gene expression in several of the investigated tissues but for most of the HKGs under investigation our data have revealed distinct differences in the extent of variability in gene expression between the different tissues and pathological states. However, for each of the five tissues investigated we found a group of genes that were expressed at a constant level thus representing a panel of candidates that we can recommend as housekeeping genes in the respective tissue types. In summary, our results can be used as guidance for other scientists studying various carcinomas for tissue-specific selection of the optimal housekeeping gene (HKG) to be used in normalizing target gene expression.     

Correlation between clinicopathology and expression of heat shock protein 72 and glycoprotein 96 in human gastric adenocarcinoma

Heat shock protein 72 (HSP72) and glycoprotein 96 (gp96) are highly expressed in cancer tissues. Recent studies indicate the possible roles of HSP72 and gp96 in the development and progression of gastric carcinomas but detailed information is still ambiguous. In this study, we investigated the correlation between clinicopathology and expression of HSP72 and gp96 in human gastric carcinoma. The expression of HSP72 and gp96 was studied in 60 human gastric carcinomas with or without metastasis as well as in mucous membrane adjacent to cancers by way of immunohistochemistry. HSP72 immunoreactivities were detected in 54 of 60 primary tumors (90.0%) and in 22 of 60 mucous membranes adjacent to cancers (36.7%). Likewise, gp96 immunoreactivities were detected in 49 cases of gastric carcinoma (81.7%) and in 15 samples of mucous membrane adjacent to cancer (25.0%). Both HSP72 and gp96 were stained in cytoplasm. HSP72 and gp96 expression in colonic carcinomas with metastasis was significantly higher than those with non-metastasis (p < 0.05). The results indicate that there exists a significant correlation between the expression of HSP72 and gp96 and the progression of gastric carcinomas. The high-level expression of HSP72 and gp96 may be used as diagnostic or prognostic markers for gastric carcinoma.     

正常上皮细胞特异性-1基因在胃癌细胞株中的表达及甲基化调控

目的:研究正常上皮细胞特异性-1(NES1)基因表达及其CpG岛甲基化状况与胃癌的关系。方法:分别培养胃癌细胞MKN-28(高分化)、SGC-7901、AGS(均中分化)、MKN-45(低分化)、HGC-27(未分化)和原代正常胃上皮细胞。提取细胞RNA,经RT-PCR检测NES1在各细胞株中的表达。以不同浓度DNA去甲基化抑制剂5-aza-dc处理胃癌细胞,RT-PCR检测其NES1mRNA表达。提取细胞基因组DNA,甲基化修饰后MSP分析其CpG岛甲基化状态。结果:各肿瘤细胞株中NES1mRNA表达较胃正常上皮细胞有不同程度降低。甲基化检测显示NES1表达减少的胃癌细胞株均存在不同程度的NES1基因外显子3CpG岛甲基化。NES1表达降低的胃癌细胞株经5-aza-d处理后NES1表达上调。结论:NES1胃癌细胞株中低表达,表达下调与该基因外显子3周围CpG岛甲基化有关。5-aza-dc可使NES1表达降低的胃癌细胞株重新表达NES1mRNA。提示NES1基因CpG岛甲基化可能是NES1在胃癌细胞系中表达缺失的分子机制。     

fur gene expression as a discriminating marker for small cell and nonsmall cell lung carcinomas.

The recently discovered fur gene encodes a membrane-associated protein with a recognition function. To further characterize the gene, we studied its expression by Northern blot analysis using poly(A)-selected RNA from a variety of organs of African green monkey and rat. The fur gene appeared to be differentially expressed, relatively high levels of fur mRNA being present in specimens of liver and kidney, low levels in brain, spleen, and thymus, and very low levels in heart muscle, lung, and testis. mRNA levels in specimens of human lung tissue without neoplastic lesions were also very low. Similar analyses of primary human lung carcinomas of different histopathological types revealed a highly selective and strong elevation of fur expression in nonsmall cell lung carcinomas, but not in small cell lung carcinomas. These results indicate that fur expression can be used to discriminate between these two types of human lung cancer.