三丁酸甘油酯对白血病细胞株和人实体瘤细胞株体外作用的比较

目的 探讨三丁酸甘油酯（tributyrin,TB）对人急性髓系白血病HL-60细胞及胃癌细胞（SGC-7901）的增殖、细胞周期的调控及细胞凋亡的影响,并比较TB对HL-60细胞及SGC-7901的作用效果.方法 用MTT法测定TB在不同浓度、不同时间的细胞增殖变化;应用免疫组化检测抑癌基因p16的表达;应用流式细胞仪观察细胞周期;通过DNA电泳观察细胞凋亡情况.结果 TB可以抑制HL-60细胞及SGC-7901细胞增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系;1.0 mmol/L的TB对HL-60细胞作用72 h,有典型的DNA梯形条带.流式细胞仪分析证实TB使细胞周期阻滞在G0/G1期.结论 TB对HL-60细胞的抑制作用更明显,其作用机制可能与上调Bmi-1基因上的p16INK4蛋白表达有关.     

实体瘤迭合白血病六例

实体瘤迭合白血病和骨髓增生异常综合征在临床上少见，我院１９９７～１９９８年收治６例，报告如下。１　临床资料１．１　一般资料　６例中，女４例，男２例；年龄３０～６６岁，平均４８．２岁。１．２　实体瘤的诊断与治疗　６例实体瘤均经病理活检证实：乳腺癌２例，胃癌、脑膜瘤、神经鞘瘤、直肠腺瘤各１例。均行手术治疗，其中１例术后给予顺铂、５－氟尿嘧啶化疗，１例予直线加速器放疗（９０Ｇｙ）、并联合环磷酰胺、氨甲喋呤、５－氟尿嘧啶化疗。１．３　实体瘤与白血病迭合情况　５例以实体瘤为首发症状，从实体瘤到白血病和骨髓…     

实体瘤迭发白血病2例报告

实体瘤治疗后发生的白血病,称为治疗相关性白血病( therapy- related leukemia,TRL ) ,比较少见,国内陆续有少量病例报道。其发病机制一般认为是由于肿瘤经化疗或(及)放疗后细胞发生突变所致。1　临床资料病例1:女性,5 4岁。1992年6月因“鼻息肉”入院手术治疗,术中见肿块来自鼻咽部。病理报告:“鼻咽部”恶性淋巴瘤,B细胞型。骨髓检查正常。术后予CHOP方案(环磷酰胺、表阿霉素、长春新碱、强的松)化疗2个疗程后,于1992年8月12日～11月3日行放射治疗:鼻咽部DT 6 0 Gy,鼻腔加DT 2 0 Gy,双侧上颈部DT 5 0 Gy,锁骨上区DT 5 0 Gy。放疗…     

实体瘤迭合白血病7例报告

实体瘤治疗后发生的白血病 ,即称治疗相关性白血病 (Ｔｈｅｒａｐｙ ｒｅｌａｔｅｄｌｅｕｋｅｍｉａ ,ＴＲＬ) ,国内外均已有报道。其发病机制一般认为是由于肿瘤经化疗或放疗后细胞发生突变所致。我们在临床发现 7例实体瘤迭合白血病患者 ,具有一些特点。现予报道。1　资料与方法7例中 ,男 3例 ,女 4例 ;年龄 3 1～ 6 0岁 ,平均5 2岁。实体瘤均经各种检查并经病理活检确诊。其中胃癌 2例 ,肝癌伴肝硬化、肺癌、乳腺癌、鼻咽癌、子宫内膜癌各 1例。1例子宫内膜癌术后行放疗 1个月 (总量 5 0Ｇｙ) ,1例乳腺癌术后放疗 2个疗程 (总量 70Ｇｙ)…     

青蒿素对人白血病细胞株和原代细胞的影响

青蒿素是一种低毒、有效的抗疟药 ,最近发现其有抑制实体瘤细胞增殖的作用[1,2 ] 。我们研究了青蒿素对人白血病细胞株和原代细胞的影响及可能机制 ,以期为其抗白血病新用途提供实验证据。一、材料与试剂1 材料 :人白血病细胞株NB4 ,K5 6 2为江苏血液病研究所馈赠 ,原代细胞从急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者骨髓液分离。2 试剂 :青蒿素晶体 (黑龙江省医药工业研究所 ) ,纯度99 8% ,配制 5mmol/L储存液 ,避光 4℃保存。用前由RPMI 16 4 0稀释至所需浓度。Fluo 3/AM (Sigma)。RPMI 16 4 0培养基含 10 %的新生牛血清 ,青霉素、链霉素…     

自体造血干细胞移植治疗恶性血液病及实体瘤的临床研究

目的探讨自体造血干细胞移植(AHSCT)治疗恶性血液病及实体瘤的疗效。方法1996年5月至2005年2月广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心用AHSCT治疗的白血病及恶性淋巴瘤患者共20例,年龄18～50岁。预处理化疗方案选用以下药物中任意2种或3种联合:阿糖胞苷3～4g/m2,环磷酰胺4～6g/m2,依托泊苷(VP-16)0.5～1.0g/m2,司莫司汀300mg/m2,马法兰140mg/m2,塞替哌600mg/m2,卡铂1.0g/m2,白消安(Bu)16mg/kg。除2例ALL联合全身照射(剂量为8Gy)外,其余均单用化疗。结果所有患者移植后均重建造血,无移植相关死亡;随访中位值39.5(2～109)个月,无病生存者15例,占全部移植患者的75.0%。其中无病生存1年12例(60%),2年8例(40%),3年8例(40%),最长存活9年余。结论自体造血干细胞移植可明显提高完全缓解肿瘤患者的治愈率;对于复发或难治者,可以提高完全缓解率,延长生存期,提高生活质量。     

片仔癀对人结肠癌SW480细胞株的抑制作用研究

目的探究片仔癀对人结肠癌SW480细胞株的抑制效果。 方法通过对人结肠癌SW480细胞株常规体外培养,随机设定空白组、5-氟尿嘧啶（5-FU）组和不同浓度片仔癀组,分别采用对应药物干预24 h、48 h、72 h,并通过细胞增殖活力检测法（MTT法）和荧光显微镜观察其抑制效果。采用人结肠癌SW480细胞株建立结肠癌小鼠模型,把造模成功的150只小鼠随机分为模型组,5-FU组和片仔癀低、中、高剂量组,每组30只;分别以不同剂量药物外敷3 d,通过抑瘤率和原位凋亡检测（TUNEL法）解释抑制效果。 结果1 mg/mL、2 mg/mL、3 mg/mL浓度片仔癀对人结肠癌SW480细胞体外抑制率最高,为70.05%、71.39%、70.12%,与5-FU组比较差异具有统计学意义（χ²=4.49,4.97,4.52;均P<0.05）。4 mg/mL片仔癀抑制率为67.39%,与5-FU组比较差异无统计学意义（χ²=3.57,P>0.05）;荧光显微镜显示5-FU组与片仔癀各组人结肠癌SW480细胞株数量均显示不同程度的减少、体积变小、折光性差、细胞悬浮及脱落死亡。片仔癀高、中、低剂量组对人结肠癌SW480细胞的体内抑瘤率分别为51%、39%、23%,其中高、中剂量组与5-FU组比较差异无统计学意义（χ²=0.05,0.49;均P>0.05）,低剂量组与之比较差异有统计学意义（χ²=4.09,P<0.05）;荧光显微镜显示片仔癀各剂量组和5-FU组对人结肠癌SW480细胞均有不同程度的凋亡反应。 结论片仔癀外用对人结肠癌SW480细胞生长有明显的抑制作用,高、中剂量体内抑制作用与5-Fu相近,优于低剂量,临床可考虑采用高剂量可能取得更佳效果,体外抑制作用上显示则优于5-Fu,但剂量差异影响不大。     

柠檬醛诱导白血病细胞株NB4凋亡的分子机制

目的探讨柠檬醛（Citral）诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的分子机制。方法Citral处理NIM细胞后,采用DNALadder检测断裂DNA;流式细胞仪Annexin V／PI双染法检测细胞凋亡率;Westernblot检测caspase3、9的活化以及Bcl-2家族中Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1蛋白的表达水平变化;实时荧光定量PCR法检测Mcl-1mRNA的表达水平变化。结果Citral诱导NB4细胞凋亡呈现剂量和时间依赖性;caspase3、9在Citral作用后均发生活化;Citral处理的NB4细胞抗凋亡蛋白Mcl-1表达水平下降,但其mRNA的表达水平改变无统计学意义。结论Citral诱导NB4细胞凋亡,其中线粒体途径是重要的凋亡途径,这可能和抗凋亡蛋白Mcl-1的下调有关,Mcl-1的下词发生在转录后水平。     

雷公藤内酯醇抗单核细胞白血病细胞株THP-1的实验研究

目的:探讨雷公藤内酯醇对人类单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响。方法:运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对THP-1细胞株增殖和凋亡的影响。结果:雷公藤内酯醇能明显抑制THP-1细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用48 h时其半数抑制浓度IC50为18 nmol/L,且经雷公藤内酯醇处理后THP-1细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05)。雷公藤内酯醇作用后48 h的变化与THP-1细胞凋亡率具有相关性,r=0.97,P<0.05,而作用24 h,其无明显诱导凋亡的作用。结论:雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰THP-1细胞周期,上调细胞G1/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用。     

海生素对体外白血病K562细胞的抑制作用及其机制

目的探讨海生素对体外白血病K562细胞的抑制作用及机制。方法将0.1、1、10、100、1000μg/ml的海生素分别作用于K562细胞24、48 h,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果海生素作用后K562细胞抑制率明显高于对照组,且呈现浓度及时间依赖性。K562细胞bcl-2蛋白表达下调,bax蛋白表达上调。结论海生素可抑制K562细胞的生长,其机制可能为通过下调bcl-2蛋白表达,增加bax蛋白的表达,诱导细胞凋亡。     

大蒜油对胃癌细胞增殖的抑制作用

[目的]探讨大蒜油对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用。[方法]①胃腺癌SGC7901细胞在体外常规培养，给予不同浓度大蒜油处理，观察细胞生长情况，用四唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖，计算抑制率。②细胞给予大蒜油或转化生长因子α（TGF-α）处理，或同时给予大蒜油和TGF-α处理，用MTT比色法检测细胞增殖情况，计算抑制率。[结果]①胃癌SGC7901细胞常规培养，加入5％、10％、15％大蒜油作用72h时，其细胞增殖明显受抑制，抑制率分别为24．5％、44．0％和54．8％。②加入2．5％低浓度大蒜油作用72h，与2．5％血清培养比较，细胞增殖速度无明显变化；加入30μg／L TGF-α时，细胞增殖明显加快；当同时加入2．5％大蒜油和30μg／L TGF-α时，则TGF-α的促增殖作用明显受抑制，抑制率为18．1％。[结论]大蒜油能够抑制胃癌细胞增殖，并能抑制TGF吨刺激的胃癌细胞增殖。提示大蒜油可能对胃癌细胞的TGF-α自分泌、旁分泌促增殖环路具有抑制作用。这可能是大蒜油抗肿瘤细胞增殖的作用方式之一。     

Methylation is an inactivating mechanism of the p16 gene in multiple myeloma associated with high plasma cell proliferation and short survival

In order to gain further insights into the role of the p16 gene in cell cycle regulation and the prognostic implications of its inactivation, we investigated the methylation status of the p16 gene in 98 untreated patients using a polymerase chain reaction assay based on the inability of some restriction enzymes to digest methylated sequences. Forty-one patients showed a p16 methylated gene (42%). The percentage of S-phase plasma cells (PC) in these patients was almost three times higher than in those with an unmethylated p16 gene (4.16% +/- 3.37%vs 1.5% +/- 1.41%, P < 0.001). The presence of p16 methylation also correlated with both elevated beta2-microglobulin serum levels and high C-reactive protein values. Patients with a p16 methylated gene had shorter overall and progression-free survival than those patients without p16 methylation. However, this feature did not retain independent prognostic influence on multivariate analysis, probably due to its association with the S-phase PC, which had more potent statistical significance in the Cox model. These findings showed methylation of the p16 gene was a frequent event inMM patients at diagnosis, and was associated with an increased proliferative rate of plasma cells and a poor prognosis, indicating an important role for p16 gene in the cell cycle regulation of multiple myeloma tumour cells, and thus in the clinical outcome of the disease.     

非小细胞肺癌hTERT与p16基因甲基化的表达

目的 探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)和p16基因甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)发病中的作用.方法 应用实时荧光定量RT-PCR法和甲基化特异性PCR法检测45例NSCLC组织、21例肺正常组织hTERT和p16基因甲基化的表达.结果 NSCLC、正常肺组织hTERT mRNA的表达分别为2.854±0.728、2.042±0.378,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);NSCLC组织、肺正常组织p16基因甲基化阳性率分别为57.8%、14.3%(P<0.01).hTERT mRNA与NSCLC病理类型相关,p16基因甲基化与NSCLC细胞分化程度及淋巴结转移相关(P均<0. 05).结论 hTERT与p16基因甲基化存在相关性,hTERT和p16基因甲基化的表达与NSCLC的发生、发展有关.     

结肠癌中心和边缘组织增殖能力的差异及相关基因的表达

目的探索结肠癌组织不同区域肿瘤细胞是否存在增殖能力的差异，且这种区域性差异和多重抑痛基因p16及其可变读码框架pl4基因的表达情况及其甲基化状态的相关性。方法免疫组化法测定癌块不同区域增殖蛋自Ki67和P16、P14的表达差异，激光显微切割技术结合甲基化特异性PCR、巢式逆转录PCR观察同一癌块不同区域癌细胞p16及p14基因甲基化状态的改变及其mRNA的表达情况。结果在42份癌组织标本的中心，增殖蛋自Ki67均呈强阳性表达，而P16和P14蛋白表达缺失；在癌组织标本的边缘．有13份Ki67表达阳性（30．1％）。不同区域癌细胞的增殖能力差异有统计学意义（P〈0．05）．且与年龄、性别、Dukes分期、p14的表达无关，但与p16的表达显著相关（X^2=25．37，P〈0．01）。且p16基因的甲基化状态和mRNA的表达也存在明冠的区域性差异（P〈0．05）。结论人结肠癌组织中存在肿瘤细胞增殖能力的区域性差异，在癌组织边缘肿瘤细胞侵袭力增强的同时增殖能力下降，癌边缘区P16基因去甲基化后的再表达可能是这一细胞事件的分子原因。     

p16、p53、p21基因对肺癌细胞增殖的影响

目的 观察肿瘤抑制基因ｐ１６,ｐ５３及细胞周期信赖激酶抑制物ｐ２１基因单独或联合应用时对肺癌细胞增殖的影响。方法 应用十八酰基胺阳离子脂质体介导ｐ１６,ｐ５３,ｐ２１基因单独或共转染到非小细胞肺癌细胞系Ａ５４９和小细胞肺癌细胞系ＳＨ７７,观察转染后１,３,５日该细胞增殖的活力。采用四甲基偶氮唑 盐微量酶反应比色法（ＭＴＴ法）测定吸光度（Ａ）,以检测细胞增殖活力,结果 Ａ５４９细胞系：Ａ均值分别为：     

睾酮对衰老心肌细胞及细胞周期调控因子的作用

目的 探讨不同剂量睾酮对心肌细胞衰老的干预作用及其可能机制.方法 用1 μmol/L、 100 nmol/L、10 nmol/L三种剂量睾酮干预自然衰老的小鼠心肌细胞,应用流式细胞仪检测各组细胞周期分布,用RT-PCR及Western印迹检测各组细胞p16INK4a、cyclinD1 mRNA、蛋白及去磷酸化RB蛋白的表达.结果 与衰老心肌细胞相比,1 μmol/L、100 nmol/L、10 nmol/L睾酮干预细胞G0/G1期比例明显降低(P＜0.05),这一作用具有剂量依赖性.睾酮干预可上调cyclinD1mRNA及蛋白表达,下调p16INK4a mRNA及蛋白表达,并使去磷酸化RB蛋白表达下降(P＜0.05),而这些作用均可被雄激素受体阻断剂而不被雌激素受体阻断剂所阻断(P＜0.05).结论 睾酮可剂量依赖性的抑制小鼠心肌细胞衰老,这一作用部分是通过睾酮上调cyclinD1表达,下调p16INK4a及去磷酸化RB蛋白表达而实现的.     

P16真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用

目的构建pcDNA3/p16真核表达质粒并了解其对肝癌细胞BEL-7404生长的抑制作用.方法将p16 cDNA亚克隆至pcDNA3真核表达载体上,并经脂质体介导转染至BEL-7404细胞中.应用MTT法和流式细胞仪分析转染细胞生长情况和细胞周期.结果重组pcDNA3/p16表达质粒构建成功.经pcDNA3/p16转染的BEL-7404细胞生长速度受到明显抑制,且细胞多停滞于G0/G1期.结论重组pcDNA3/p16质粒能在BEL-7404细胞内表达,且能抑制BEL-7404细胞的生长.     

大蒜素对人肺腺癌细胞生长抑制作用的实验研究

目的研究大蒜素对人肺腺癌A549细胞增殖抑制、细胞凋亡的影响。方法用不同浓度大蒜素作用体外培养的A549细胞,采用CCK8法检测大蒜素对A549细胞增殖抑制能力,荧光显微镜观察A549细胞形态学变化,ELISA法测定A549细胞上清液VEGF水平,比色法检测caspase3、caspase9活性变化。结果大蒜素对A549细胞增殖有明显抑制作用,并呈时间及浓度依赖性;24 h、48 h及72 h大蒜素对A549细胞的IC50分别为114.26μg/ml、85.27μg/ml、76.83μg/ml(P<0.05);60μg/ml以上大蒜素作用A549细胞48h可产生显著凋亡特征;随大蒜素浓度增加,A549细胞上清液VEGF水平呈下降趋势,A549细胞caspase3、caspase9蛋白活性显著增加。结论大蒜素能显著抑制A549细胞增殖、诱导其凋亡,可能与VEGF表达下降及caspase3、caspase9激活相关。