一种N端缺失的rhGM—CSF（7～127）在大肠杆菌中的表…

在ｈＧＭ－ＣＳＦ结构与功能研究的基础之上，通过应用ＰＣＲ介导的缺失与突变和基因重组等技术，构建了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）的三种原核表达载体ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＧＡ，ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＡＡ和ｐＢＶ２２０／ＧＭ－３′ＵＴＲ。在三种载体内，ｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）ｃＤＮＡ的５′端块缺失６个氨基酸，３′端则分别为天然终止密码ＴＧＡ，突变终止密码ＴＡＡ和ＴＧＡ加３′ＵＴＲ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表     

人CD7胞外区基因在大肠杆菌中的表达

目的 在大肠杆菌中表达人白细胞分化抗原CD7胞外区蛋白。方法 采用PCR技术调整CD7基因的阅读框架,使之与生物素化蛋白基因阅读框架一致,缺失了CD7cDNA基因的起始密码子并增加一个大肠杆菌偏性终止密码子,构建CD7胞外区cDNA和生物素化蛋白基因融合的原核表达质粒PinPointxa3-CD7。将重组质粒转入大肠杆菌DH5α表达,SDS-PAGE及Western blotting鉴定结果。结果 融合蛋白的分子量约为30000u,Western blotting结果表明,表达的蛋白质可被抗CD7的单克隆抗体识别。结论 为研制抗CD7基因工程抗体奠定了基础。     

B7—1（CD80）基因的克隆及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人Ｂ淋巴瘤细胞系Ｒａｊｉ中克隆到Ｂ７－１（ＣＤ８０）ｃＤＮＡ，并经测序证实，将其插入至真核表达载体ｐＬＸＳＮ中，用脂质体转染小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，Ｇ４１８筛选，并经流式细胞仪检测，得到了细胞表面表达Ｂ７－１的重组克隆。ＰＣＲ从其基因组ＤＮＡ中扩增到Ｂ７－１基因，提示Ｂ７－１ ｃＤＮＡ已整合至宿主细胞的基因组ＤＮＡ中，本文为研究Ｂ７－１在肿瘤免疫中所起的作用奠定了基础。     

IL-7通过调节CD127表达调控脓毒症患者CD8 +T细胞的体外活性

目的:观察脓毒症患者中膜型CD127(membrane-bound CD127,mCD127)和可溶型CD127(soluble CD127,sCD127)的表达,探讨IL-7调控脓毒症患者CD8 +T细胞活性的机制。 方法:采用前瞻性研究队列,入组47例脓毒症患者和18例健康对照者,分离血清和外...     

热休克蛋白90α(HSP90α)在大肠杆菌中的表达

目的 :探讨热休克蛋白 90α的生物学功能 ,获得高质量及充足的HSP90α蛋白。方法 :采用PCR的方法扩增HSP90αcDNA5’端 42 4bp片段 ,在起始密码子位置制造一个NcoI酶切位点 ,将PCR产物克隆到中间载体 ,再通过合适的酶切位点将其余片段连接到此载体 ,形成一个带有NcoI突变位点的HSP90αcDNA全长克隆。最终将HSP90α全部编码cDNA插入到pET 16b表达载体中。结果 :经诱导表达 ,SDS PAGE凝胶电泳分离显示在分子量大约 83kD处有一诱导蛋白带。WesternBlot证明表达产物与抗HSP90α抗血清有特异的免疫反应。结论 :构建成了T7启动子控制下的HSP90α表达质粒。     

EHEC O157:H7志贺样毒素Ⅱ(Stx2)的克隆表达与活性研究

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7志贺样毒素Ⅱ(Shiga like toxinⅡ,Stx2),并鉴定其生物学活性。方法采用PCR法自EHEC O157：H7基因组扩增志贺样毒素Ⅱ的编码基因stx2,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-six2,经测序鉴定后转化E．coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE、Western blot分析目的蛋白的表达。以EHEC O157：H7野生菌株作对照,通过对HeLa细胞的细胞毒作用及对小鼠攻毒实验,鉴定重组蛋白的生物学活性。结果扩增的stx2基因约1230bp；原核表达质粒pET-11c(+)-stx2经酶切和测序鉴定与预期序列一致；并在E．coli BL21 (DE3)中得到表达,蛋白表达率约25％；PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(M_r)约72×10~3；重组蛋白Stx2对HeLa细胞具有细胞毒作用,CD_(50)为35pg/ml；Stx2对小鼠致死剂量LD_(100)为10μg。结论成功克隆并表达了Stx2重组蛋白,为探讨O157：H7菌的感染机制及其防治研究奠定了一定的基础。     

3种新型人肿瘤坏死因子衍生物在大肠杆菌中的表达与活性检测

目的 研制高抗瘤活性的新型肿瘤坏死因子.方法 在总结前人有关hTNF-α结构与功能关系研究的基础上,应用PCR技术构建了3种多位点同时突变的hTNF-α新型编码基因,分别在大肠杆菌中进行表达,并用DNA序列分析和Western blot进行鉴定,L929细胞检测体外抗瘤活性.结果 3种衍生物均在大肠杆菌中获得高效表达,活性测定结果表明,3种衍生物对L929细胞的细胞毒活性分别比原型hTNF-α提高576、641和153倍.结论 3种衍生物的抗瘤活性有了较大的提高,从而显示出潜在的临床应用前景.     

一例46,XX,t(5;7)伴自然流产

患者　女 ,2 8岁 ,汉族。婚后 4年自然流产 3次 ,均在孕后5 0～ 70天。身高 1.5 8m,体重 5 2 kg,表型及智力正常 ,无有害化学物质及放射线接触史 ,孕期无患病、服药史。夫妇非近亲结婚 ,双方家族中无类似患者。其它检查未见异常。细胞遗传学检查 :取患者外周血常规淋巴细胞培养、制片 ,G显带。镜下计数 5 0个中期分裂相 ,分析 10个分裂相 ,为 5 ;7号染色体平衡易位携带者 ,核型为 46 ,XX,t(5 ;7) (5 pter→ 5 q33∷ 7q32→ 7qter;7pter→ 7q32∷ 5 q33→ 5 qter) ,见图 1。其丈夫核型正常。讨论　染色体平衡易位是两个非同源染色体发生断…     

大肠杆菌菌株(λ衍生噬菌体)/PBR322衍生质粒作为人IL-6表达系统的研究

为探索人白细胞介素－６（ＩＬ－６）在原核细胞中高效表达的途径，选用ＢＬ２１（ＤＥ３）／ＰＥＴ－２８作为表达系统，以聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增了ｈＩＬ－６的互补ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）的编码区，引入了ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ位点。用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切后，克隆于ＰＥＴ－２８载体的相应位点，转化ＤＨ５α。选出阳性克隆，经ＤＮＡ序列分析，表明其编码区内无非特异突变。将重组质粒转入ＤＨ５α，筛选阳性克隆，用异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＰＴＧ）进行诱导表达。全细菌裂解液进行十二烷基黄酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），结合固化蛋白质的免疫学测定（Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ）杂交进行分析。结果表明：Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ杂交发现有与抗ＩＬ－６特异结合的蛋白带，以４ｈ的产量最多，激光扫描显示ＩＬ－６的吸收峰占总吸收面积的３７％（４ｈ诱导）。分子量约为２７ｋＤ。实验显示，人ＩＬ－６在原核细胞中实现了高效表达，表达产物具有ＩＬ－６的免疫活性     

47,XXY克氏综合征伴精神分裂症和inv(7)一例

患者　男,32岁。智力低下2 0年。2 3岁时无明显原因出现幻听、幻想、自语。1994年9月在苏州大学附属第一医院诊为“精神分裂症”,予氯丙嗪等治疗病情时好时坏。2 0 0 3年7月病情加重,且拒绝服药,拒食。查体:身高180 cm,体重6 8kg,神清语少,淡漠不合作,思维联想迟缓,远近记忆力差,理解判断力比常人差。喉结不明显,轻度双侧乳房发育,左侧睾丸发育不全呈蚕豆样大小。查IQ为5 3分,实验室检查雌二醇92 .5 pmol/L,卵泡刺激素4 3.2 IU/ L,黄体生成素35 .8IU/ L,均高于正常值;血清睾酮0 .4 78nmol/ L,明显低于正常值。细胞遗传学检查:患者外周血…     

46,XX,t(5;7)(q35;q32)inv(9)(p11q13)染色体异常一例

患者　女 ,2 7岁 ,结婚 5年。孕 4次 ,第 1胎孕 4 0多天 ,行“药流术”;第 2胎孕 5 0多天 ,行“刮宫术”;第 3、4胎孕 5 0多天 ,无明显诱因出现阴道出血 ,B超提示“宫内妊娠”,行保胎治疗无效后流产。患者表型正常 ,妇科检查未见异常。丈夫表型正常。非近亲结婚。妊娠期间无有毒、有害物质接触史、无畏寒、发热等不适病史 ,无服用药物史。患者父母表型正常 ,无不良生育史 ,生育 3女 ,表型均正常。两个妹妹无不良生育史 ,一个妹妹生一个表型正常男孩 ,另一个妹妹生两个表型正常男孩。因患者家人均在外地 ,无法追查异常染色体来源。细胞遗传…     

人类神经型一氧化氮合酶原核表达载体的构建和在大肠杆菌中的表达（英文）

目的:构建在大肠杆菌中表达重组人神经型一氧化氮合酶的高表达系统。方法:用PCR方法从cDNA中扩增目的编码基因,然后将编码基因连接入表达载体pCWori+,将重组的质粒转染入大肠杆菌BL21进行蛋白高表达,经Western blot确认表达后,进行大量培养,通过层析方法精制此酶,并用吸收光谱法对酶的性质进行测定。结果:从该表达系统中可以获得3 mg/L培养基的高产量的一氧化氮合酶。结论:从该表达系统中可获得大量有活性的人一氧化氮合酶。     

人类新细胞因子(CKLF-1)在大肠杆菌中的表达与鉴定

目的：进一步研究人类新细胞因子－－趋化素样因子1（CKLF－1）蛋白的结构与生物学活性。方法：构建了融合蛋白的原核表达质粒，并在大肠杆菌中进行诱导表达，获得了原核表达的融合蛋白，经凝血酶切割获非融合重组蛋白，并进行体外活性鉴定。结果：CKLF－1原核表达蛋白获得了高表达，纯化后获得约90％纯度以上蛋白，发现其可以与肝素结合，生物学活性检测表明其对人中性粒细胞，外周血单个核细胞和大鼠的巨噬细胞具有明显的趋化作用。结论：CKLF－1原核表达蛋白具有与真核表达蛋白类似的生物学活性。     

抗-D抗体Fab段基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的：于大肠杆菌表达抗-D抗体Fab段基因，为真核载体表达完整的人抗-D抗体奠定基础。 方法： 将已克隆测序的Fab段基因亚克隆到pComb3噬粒载体，用PCR和限制性内切酶酶切鉴定后于大肠杆菌进行表达，表达产物用SDS-PAGE和ELISA等方法分析。 结果： SDS-PAGE电泳表明重组克隆表达了1条约48 kD的蛋白条带, ELISA结果显示，所表达的抗体和Rh+的人红细胞呈阳性反应，和Rh-红细胞反应为阴性，阴性对照和Rh+及Rh-红细胞反应均为阴性。 结论： 于大肠杆菌表达了具有抗原结合特性的人抗-D抗体Fab段抗体分子。     

46,XX,t(4;7)伴新生儿死亡一例

患者　女,2 4岁,孕2产1,第1胎足月分娩,胎儿出生后因肺不张死亡。第2胎孕3月B超示胚胎无胎心,停止发育。患者孕期无患病及不良因素接触史,夫妇身体健康,智力正常,非近亲结婚。患者外周血细胞遗传学检查,核型为4 6 ,XX,t( 4 ;7)( 4 pter→4 q34∷7q11→7qter;7pter→7q11∷4 q34→4 qter) ,其丈夫核型正常。患者家族其它成员无不良孕产史,并拒绝接受染色体检查。讨论　染色体异常是导致自然流产、死胎的重要原因之一,平衡易位携带者因无遗传物质的明显缺失或重复,表型多正常,但其在形成配子过程中,同源染色体要进行配对分离,非同源染色体平…     

人黄体松弛素原基因的克隆及在大肠杆菌中的初步表达

为了加速我国基因工程高技术药物的研制，开发新型、具有生物活性功能的人重组松弛素原，利用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术从人黄体组织克隆了松弛素原的编码基因，包括Ｂ和Ａ链以及连接肽（Ｃ肽）。克隆的松弛素原基因进行序列测定后，再亚克隆到原核表达载体ＬＫＢ２，转化大肠杆菌ＢＬ２１，用ＩＰＴＧ诱导表达。结果表明，克隆的松弛素原基因与已发表的基因序列相同，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示表达蛋白的分子量为２０ｋＤ，为可溶性蛋白，占菌体蛋白的３０％。     

46,XX,t(7;14)伴流产一例

患者　女 ,35岁。已婚 ,怀孕 3次。第 1胎人工流产 ,第 2胎与第 3胎均在孕 6 0天左右不明原因的阴道流血 ,经保胎无效 ,B超检查为死胎 ,行人工流产手术。患者平时月经正常 ,无其它疾病。夫妇表型及智力均正常 ,双方兄弟姐妹均无异常生育史和流产史。其夫现 5 0岁 ,曾有一子 ,前妻没有流产史 ,均无不良嗜好和毒物接触史 ,非近亲婚配。细胞遗传学检查　夫妇双方外周血细胞培养、G显带染色体核型分析 ,各计数 30个中期染色体分裂相 ,其夫的染色体核型正常 ,患者染色体核型为 4 6 ,XX,t(7;14 ) (q36 ;q13) (7pter→7q36∷ 14 q13→ 14 qter;14…     

EHEC O157:H7志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的基因克隆、表达与纯化

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157H7志贺样毒素B亚单位(Shiga liketoxin 2B,Stx2B),并对其初步纯化.方法设计引物采用PCR法自EHEC O157H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b,经测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,以Tricine-PAGE和Western blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白.结果扩增的stx2b基因约210 bp;原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli BL21(DE3)中得到高效可溶性表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约7×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达90.1%.结论EHEC O157H7志贺样毒素B亚单位的高效表达与初步纯化,有利于进一步的生物学性质研究.     

人C5a受体在大肠杆菌中的功能性表达(摘要)

人Ｃ５ａ受体在大肠杆菌中的功能性表达（摘要）齐洁１朱锡华１人Ｃ５ａＲ由３５０个氨基酸和一寡糖侧链组成，属Ｇ蛋白偶联／七个跨膜区超家簇和视紫质（ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ）超家簇成员。其天然配体是Ｃ５ａ和Ｃ５ａｄｅｓＡｒｇ。自１９９１年首次成功克隆出人Ｃ５ａＲ...