胶质母细胞瘤8号、22号染色体等位基因杂合性丢失的研究

目的：寻找胶质母细胞瘤（GBM）8号，22号染色体上可能存在肿瘤抑制基因的杂合性丢失（LOH）区域。为发展和定位肿瘤抑制基因（TSG）提供线索和依据。方法：应用聚合酶链反应（PCR）方法，采用荧光标记的引物和377型DNA序列自动分析仪，分别分析了21例GBM8号，22号染色体上14个，7个微卫星多态性标记的LOH。结果：本组病例8号染色体LOH率为23．8％，在16．3％能提供信息位点检测到LOH，8P的LOH率明显高于8q，分别为23．8％，14．3％，8q上所有位点的LOH率都在15％以上，以8p22-23上D8S550和D8S549的LOH率较高，分别是27．8％，30．0％，染色体22q的LOH率为47．6％，在30．0％可提供信息位点存在LOH，以22q13.2-13.3上D22S274的LOH率最高（41．2％），结论：8号，22号染色体等位基因杂合性丢失可能在GBM的分子发病机制中发挥着重要作用。在8p22-23上D8S550和D8S549位点间区域以及22q13.2-13.3上D22S274位点所在区域可能存在多个与GBM相关的肿瘤抑制基因。     

乳腺癌组织中染色体8p的杂合性丢失

目的：探讨乳腺癌组织中8号染色体短臂杂合性丢失（LOH）的意义。方法：应用聚合酶链反应技术,检测210例乳腺癌组织中8p上9个及8q上1个座位DNA微卫星多态林记的杂合性丢失。结果：发现在8p11-21.3区域的LOH频率为35％～49％,8p23.1－ter区域的LOH频率为38％～43％,8p22的LOH频率为28％,8q上D8S285的LOH频率仅为24％。结论：研究提示在8p11-21．3及8p23．1－ter区域可能存在与乳腺癌发生发展密切相关的候选抑癌基因。     

宫颈上皮内瘤样病变3p14杂合性丢失和微卫星不稳定性研究

目的探讨宫颈上皮内瘤样病变染色体3p14区域D3S1300、D3S1600LOH及MSI与宫颈上皮内瘤样病变病理分级的相关性。方法选择3p14区域两个微卫星多态性位点，显微分离提取42例宫颈上皮内瘤样病变石蜡切片中的正常组织和病变组织。经PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色，进行LOH及MSI研究。结果42例样本中有21例至少存在一个位点的LOH，D3S1300位点LOH的频率为29％，D3S1600位点LOH的频率为26％，MSI发生频率相对较低，D3S1300的MSI频率为5．3％，D3S1600的MSI频率为7．7％。D3S1300、D3S1600位点LOH的发生率与病理分级呈正相关（CMNX2=7．773，P〈0．05）。而MSI与之无相关性（CMNX2=1．432，P〉0.05）．结论3p14区域内D3S1300、D3S1600位点具有较高的LOH，提示这两个微卫星位点附近可能存在尚未克隆的与宫颈上皮内瘤样病变发生、发展相关的肿瘤抑制基因。宫颈上皮内瘤样病变染色体3p14区域LOH与病理分级成正相关，提示检测该区域的LOH可作为病变进展及预后的重要参考指标。     

国人9号和17号染色体膀胱移行细胞癌相关微卫星位点的杂合性丢失

目的 探讨国人9号和17号染色体微卫星位点的杂合性丢失(LOH)与膀胱移行细胞癌(TCC)发生、发展的关系。方法 选取微卫星位点D9S156、D9S157、D17S786和TP53，对24例TCC组织和外周静脉血提取的DNA用特异引物进行PCR扩增，扩增产物进行6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染，并进行LOH分析。结果 至少有1个位点出现LOH的TCC组织为58．3％(14／24)，同一组织2个位点同时出现LOH的肿瘤为12．5％(3／24)。X^2检验和Fisher精确概率检验(P＞O．05)，4个位点LOH的发生在浅表性和浸润性TCC之间无显著性差异。结论 国人9号染色体上肿瘤抑制基因(TSG)的失活与TCC的发生有关，与TCC的浸润性生长无关。17号染色体上TSG的失活可能与TCC的浸润性生长有关。     

人肺腺癌染色体8p21～p22杂合性缺失精细作图

目的　在染色体 8p2 1 8p2 2界定发生于中国人肺腺癌的杂合性缺失 (LOH)的最小区域 ,为定位克隆肺腺癌相关抑癌基因提供线索。方法　利用 32例肺腺癌患者肿瘤组织检测位于 8p2 1～p2 2的 17个微卫星多态性标记的LOH频率 ,并且探讨各位点LOH与病理分级和临床分期的关系。结果　在 32例肺腺癌患者组织中有 31例 (96 6 7% )存在至少 1个位点的LOH ;主要集中于 3个区域 :位于 8p2 2的D8S2 5 4～ 2 6 1、D8S182 7～ 1731以及D8S1135。所检测位点中仅D8S2 6 1位点的LOH发生频率与肺腺癌分期呈正相关 (P <0 0 5 )。结论　 8p2 2区域可能存在位于D8S2 5 4～ 2 6 1,D8S1135和D8S182 7～ 1731的、与中国人肺腺癌相关的抑癌基因     

前列腺癌染色体8p22-8p12基因杂合性丢失研究

目的探讨中国人前列腺癌染色体8p22～8p12基因杂合性丢失的发生率及细胞生物的意义.方法采用PCR-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色技术,对32例前列腺癌组织及癌旁组织进行8p22-8p12区域内的5个微卫星多态标志物等位基因杂合性丢失(LOH)分析.结果5个微卫星平均发生率为76.6%,其中LPL-3GT位点LOH发生率最高(88.9%),D8S87位点最低(59.1%);8p22-p12位点LOH发生率与肿瘤分化密切相关.其中D8S133和D8S135位点LOH发生率与肿瘤分化程度呈正相关(P＜0.01),LPL-3GT、NEFL和D8S87位点LOH与肿瘤细胞分化程度无统计学意义(P＞0.05).结论研究结果提示,前列腺癌p22-8p12是LOH的频发区域,该区域等位基因LOH与前列腺癌的发生密切相关.不同位点LOH的发生其细胞生物学意义不同,提示可能存在生物学功能不同的肿瘤抑制基因.     

胶质母细胞瘤染色体1p36杂合性缺失的初步研究

目的探讨1p36上可能存在的与胶质母细胞瘤（GBM）发生有关的肿瘤抑制基因的缺失区域，为发现和定位肿瘤抑制基因提供线索和依据。方法运用聚合酶链反应（PCR）技术为基础的杂合性缺失分析（LOH）法对12例胶质母细胞瘤染色体1p36上12个微卫星多态标记序列作了较详细研究。结果12例胶质母细胞瘤至少有一个位点出现杂合性缺失者11例，总缺失率为91．7％（11／12），其中以D1S214-D1S2666位点间区域LOH的频率最高。结论胶质母细胞瘤染色体1p36发生高频率杂合性缺失，提示位点D1S14-D1S2666缺失区域间可能存在着与GBM发生有关的抑癌基因。     

慢性粒细胞白血病8p22杂合性缺失的检测及意义

目的探讨8号染色体短臂(8p22)的杂合性缺失(LOH)在慢性粒细胞白血病(CML)发生和演变中的作用。方法采用多聚酶链反应(PCR)扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色技术,检测8p22上D8S511和D8S258位点的LOH。结果22例慢性期和8例加速期CML病人在8p22D8S511和D8S258位点均未发生LOH。4例急变期CML病人在D8S511位点上均未检出LOH,仅1例在D8S258位点发生LOH。5例正常对照组均未发生LOH。结论8p22上D8S511位点的LOH与CML各期的发生和演变无关;D8S258位点的LOH与CML慢性期和加速期的发生和演变无关,但可能与CML急变有关。     

乳腺癌3p染色体微卫星杂合性缺失与血管生成

目的探讨乳腺癌染色体3p区域微卫星杂合性缺失(LOH)与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达及临床病理特征之间的关系。方法选取乳腺浸润性导管癌病例石蜡组织切块40例。运用激光显微切割技术留取组织中导管癌及正常乳腺细胞,应用毛细管电泳测序技术进行4个微卫星位点的LOH检测。应用免疫组织化学技术SP法检测CD34、VEGF和Her2的表达,分析LOH与乳腺癌临床病理参数的关系。结果 40例乳腺癌患者中D3S1038的LOH发生率为20%(8/40),D3S1295的LOH发生率为37.5%(15/40),D3S1581的LOH发生率为17.5%(7/40),D3S3118的LOH发生率为5%(2/40)。LOH与VEGF的表达呈正相关(r=0.658 0,P<0.01),LOH和MVD也呈正相关(r=0.804 9,P<0.01)。LOH发生率与Her2表达(r=0.539 4)、组织学分级(r=0.497 2)、淋巴结转移(r=0.506 4)、TNM分期(r=0.596 0)均有相关性(均P<0.01)。结论乳腺癌染色体3p微卫星位点LOH与血管生成具有相关性,抑癌基因失活并通过对血管生成的影响可能为肿瘤生长与转移提供了条件;同时检测染色体3p微卫星位点LOH与血管生成情况,可能有助于更全面地了解乳腺癌的生物学特性。     

急性淋巴细胞白血病患者微卫星DNA杂合性缺失检测

目的：探讨微卫星DNA杂合性缺失与急性淋细胞白血病（ALL）的相关性。方法：ALL患者72例，其中T－ALL9例，B－ALL55例，慢性粒细胞性白血病（慢粒）急淋为8例，应用PCR－变性聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染技术，检测ATM基因D11S2179位点、BRCA2基因D13S269点位点和D13S25在B－ALL、T－ALL和慢粒急淋变患者的微卫星杂合性缺失（LOH）。结果：72例ALL患者中，3位点总LOH频率为26．4％。D11S2179、D13S260和D13S53位点LOH的发生频率分别为15．3％、12．5％和5．5％。B－ALL患者3个位点平均LOH发生率为12．7％。在D11S2179和D11S2602位点同时发生LOH频率为9．1％。9例T－ALL患者未发现LOH。8例慢性急淋变患者只在D11S2179位点检测到3例（37．1％），其他2位点未异常。结论：ATM基因、BRCA2基因帮D13S25位点微卫星的LOH与B－ALL的发病存在相关性；而ATM基因遗传不稳定性可能参与慢粒急淋变过程。     

p16、p21、p53蛋白在肺癌组织中的表达及其意义

目的 探讨肺癌组织中p16、p21、p53蛋白的表达及其意义。方法 采用免疫组化方法检测30例肺癌组织中p16、p21、p53蛋白的表达情况。以上标本中有7例呼吸道合胞病毒(RSV)N基因片段扩增阳性。结果 30份肺癌标本中p16、p21、p53蛋白阳性表达率分别为36．7％(11／30)、43．3％(13／30)、53．3％(16／30)；各种蛋白阳性表达例数在鳞癌与腺癌组织间差异无显著性意义；不同临床分期的肺癌标本，其p16、p21阳性表达，差异具有显著性意义；晚期肿瘤组织较早期p53阳性表达增强。p16、p21在肿瘤Ⅲ Ⅳ期较Ⅱ期阳性表达率下降。p16、p21、p53蛋白在RSV N基因片段扩增阳性肺癌标本中的表达与扩增阴性的肺癌标本比较差异无显著性意义。结论 p16、p21可能作为判断肺癌分期及预后的参考指标。RSV感染对肺癌组织细胞癌基因无明显影响。     

p15/p16与白血病

ｐ16和ｐ15基因已被公认为肿瘤抑制基因 ,通过参与细胞周期负调控调节机体代谢 ,维持自身稳定 ,控制着肿瘤的发生 ,作用较Ｒｂ和ｐ5 3更直接 ,特异性更强 ,在多种肿瘤的发生机制研究及利用抑癌基因的治疗中引起关注。现就其在白血病中的研究进展综述如下 :1　ｐ16和ｐ15基因的发现 ,定位 ,结构1993年底Ｓｅｒｒａｎｏ等在研究与ＣＤＫ结合的蛋白质时 ,发现一分子量为 15 845ｋＤ的蛋白质 ,定名为ｐ16蛋白。 1994年 ,Ｋａｍｂ等在对近 30 0种肿瘤细胞系进行普查时 ,在染色体 9Ｐ2 1(约 40ｋｂ)发现了两个肿瘤抑制基因 ,分别命名为多种肿瘤抑…     

p53，rasp21，C－erbB－2癌基因蛋白在胃癌中的表达及分布特征

作者应用免疫金银染色（ＩＧＳＳ）方法检测了８２例胃癌标本ｐ５３，ｒａｓｐ２１，Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白。其阳性结果分别为５６．１％，５１．２％，５８．５％，胃癌旁正常粘膜上皮的阳性率分别为１．２％，１４．６％，９．８％，与肿瘤区相比较有显著差异（Ｐ＜０．０１）。ｐ５３阳性细胞的染色部位在细胞核内，ｐ２１及ｐ１８５阳性细胞的染色部位在胞浆及／或胞膜。ｐ５３、ｐ１８５阳性表达与肿瘤的分化程度有关，即分化越差，其阳性表达越高。８２例胃癌中有３６例显示ｐ５３与ｐ２１协同阳性。而无１例单独ｐ５３表达阳性。     

INK4系列抑癌基因(p16、p15、p18、p19)在白血病中的甲基化

目的 探讨p16基因家族失活与白血病发生、发展及预后的关系，进一步阐明白血病发病机制，监测发病过程。方法 采用甲基化敏感限制内切酶Hpa Ⅱ或Msp Ⅰ结合PCR技术研究白血病患者p16、p15、p18、p19基因甲基化状况：(1)研究不同类型、不同阶段白血病p16基因家族外显子1和／或外显子2纯合子缺失，(2)用REP-PCR分别对上述病例中无外显子1缺失的病例进行甲基化研究，探讨甲基化发生频率，分析与白血病发病关系。结果 p16、p15基因外显子1在急性白血病(AL组)甲基化率分别为35．29％，48．65％，急性非淋巴细胞白血病(ANLL组)为25％，37．5%，急性淋巴细胞白血病(ALL组)为60％，69．23％，初治AL组为29．09％，42．10％，复发AL组为61．54％，70．59％，慢性粒细胞白血病(CML)慢性期、急变期、白血病完全缓解(CR-AL)、对照组均无甲基化。p18、p19基因无论在AL组、ALL组、ANLL组、复发AL组、初治AL组，或是在CML的慢性期、急变期、CR-AL、对照组均无甲基化。结论 (1)在p16基因家族中，p16、p15基因甲基化在AL的发生频率较高，ALL甲基化率明显高于ANLL，以复发ALL组最高。p18、p19基因在AL组中未见甲基化。(2)在ALL中，p15甲基化率高于p16甲基化率，在ANLL中，p16、p15基因的甲基化率高于对照组。(3)p16、p15基因甲基化可作为AL病程进展、复发、预后的指标之一。(4)p16、p15基因甲基化在CML病程中(慢性期、急变期)意义不大。     

p16、p21、p27基因多态性与上皮性卵巢癌易感性关联的研究

目的探讨抑癌基因p16、p21和p27的多态性与上皮性卵巢癌易感性的关联.方法选取2007年3月-2011年4月间120例卵巢癌患者作为考察对象,同时选取120例健康女性人群作为对照组.分别采集外周静脉血5ml,提取基因组DNA,分析每个样本的基因型,并做统计学分析.结果两组的p16基因C540G的C/C、C/G和G/G基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组的p16基因C580T的C/C、C/G和G/G基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组p21基因的T/T、T/C和C/C基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组的p27基因的V/V、V/G和G/G基因型频率分布有显著性差异(P<0.05).结论 p16基因和p21基因型的多态性上皮性卵巢癌的易感性有关;p27基因的V/V纯合型可能会增加卵巢癌的发病风险,值得临床关注.     

P63和P73基因在神经胶质瘤中的表达

目的探讨p53家族新成员p63及p73在脑胶质瘤中的表达情况,以及在不同病理分级的表达变化.方法采用免疫组化S-P方法检测66例不同病理分级胶质瘤p63及p73蛋白的表达情况,与置换-抗的蛋白对照组比较,并同时进行组间对照.结果p63及p73在66例脑胶质瘤病人中明显表达,p63表达阳性率为42.42%,p73表达阳性率为31.82%.组间对照p63组Ⅱ～Ⅳ级与Ⅰ～Ⅱ级比较P＜0.01;p73组Ⅲ～Ⅳ级与Ⅰ～Ⅱ级比较P＜0.05,Ⅱ～Ⅲ级与Ⅰ～Ⅱ级比较x2=2.268,P＞0.05.结论p63及p73作为p53家族的新成员可能是候选的抑癌基因.     

p53 p63及 p73在鼻咽癌患者组织中的表达及临床意义

目的：研究 P53、P63和 P73在鼻咽癌患者组织中的表达情况及临床意义。方法：选择2012年8月至2014年8月在我院确诊的鼻咽癌患者89例为观察组。并选择同期在我院接受治疗的鼻咽黏膜慢性炎症患者50例为对照组。对比两组组织中 P53、P63和 P73表达情况,并分析其不同临床病例特征的意义。结果：观察组 P53、P63和 P73阳性率为67．4％（60／89）、87．6％（78／89）以及53．0％（48／89）,均高于对照组的28．0％（14／50）、36．0％（18／50）、20．0％（10／50）,差异均具有统计学意义（P＜0．05）。不同性别、年龄中 p53、p63和 p73表达阳性率差异均无统计学意义。在具有颈淋巴转移的鼻咽癌患者中 p53、p63表达阳性率更高、在 TNM 分期为Ⅲ～Ⅳ期的鼻咽癌患者中 p63、p73表达阳性率更高以及病理类型为非角化癌鼻咽癌患者中 p63表达阳性率更高。差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论：鼻咽癌患者组织中 P53、P63和 P73基因高表达,并且对临床分期、淋巴转移以及病理分型有显著的相关性。通过对 P53、P63和 P73在两种基因的监测,对鼻咽癌临床治疗和预后都有较好的指导作用。     

胃癌及其癌前病变中ras, c-erbB-2, p53癌基因产物的表达

目的 探讨胃癌及其癌前病变中ras,c-erbB-2,p53癌基因蛋白产物的表达分布特点及其在胃癌发生发展中的作用。方法 应用免疫组化ABC方法,对58例胃癌、31例胃粘膜上皮异型增生和11例正常胃粘膜组织中,鼠抗人mAb ras基因p21蛋白、兔抗人c-erbB-2原癌基因产物多克隆抗体p185,鼠抗人mAb p53蛋白进行了检测。结果p21在正常胃粘膜和轻、中、重度异型增生和胃癌中的表达率分别为27．3％,30．0％,46．2％,75．0％和72．4％;其表达率在重度异型增生和胃癌中显著高于正常胃粘膜和轻、中度异型增生（P＜0．05）;p185在正常胃粘膜和轻、中度异型增生中无表达,在重度异型增生和癌中的阳性表达率分别为25．0％,18．9％,各组间无显著性差异（P＞0．05）;p53仅在癌中有表达,表达率29．3％,明显高于非癌组织（P＜0．05）。胃癌中两种以上癌基因蛋白同时表达率明显高于非癌组织（P＜0．05）。结论 ras基因可能作用于胃癌发生的早期阶段,c-erbB-2,p53基因可能作用于胃癌发生的较晚期。并认为胃癌发生需要多基因协同作用。     

脑星形细胞瘤组织p73和p53蛋白的表达

目的 :探讨脑星形细胞瘤组织p73和p5 3蛋白的表达及其与星形细胞瘤的病理发生的关系。方法 :利用免疫组化方法检测了 6 3例脑星形细胞瘤组织 (I级 8例 ,II级 2 1例 ,III级 2 4例 ,IV级 10例 )及 10例正常脑组织p73、p5 3蛋白表达。结果 :17例脑星形细胞瘤组织呈p73蛋白阳性表达 ,高病理级别的星形细胞瘤组织p73蛋白阳性表达率 (III、IV级 ,38.2 % )明显高于低病理级别的星形细胞瘤组织 (I、II级 ,13.8% ) (χ2 =4.75 ,P <0 .0 5 ) ,10例正常脑组织均呈阴性表达。在 17例p73蛋白阳性表达的脑星形细胞瘤组织中 ,12例呈p5 3蛋白过度表达。结论 :野生型p73蛋白表达异常可能参与脑星形细胞瘤的病理发生 ,p5 3突变可能与p73表达异常有关。