调心方对氧化损伤型类AD模型大鼠"有害网络"作用的研究

研究调心方(主药：党参、桂枝、茯苓、菖蒲、远志)防治阿尔茨海默病(AD)的作用机理。SD雄性大鼠采用二羟延胡索酸(DHF) FeCl3 ADP左侧脑室注射法建立氧化损伤型类AD模型。造模前1周开始以调心方灌胃，连续4周，并与西药Donepezil比较。治疗期间及之后，观察大鼠空间学习记忆能力、大脑皮质细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基(COⅡ)mRNA表达、大脑皮质和海马APP mRNA表达、大脑皮质Aβ沉积及脑组织Ca^2 含量等指标的变化。结果：与正常组比较，氧化损伤型类AD模型大鼠上述各项指标呈现不同程度的异常变化，调心方具有明显的纠正作用，且效果优于西药。结论：调心方可以阻断AD鼠的“有害网络”的形成，由此起到防治AD的效果。     

调心方有效部位TX0201对类AD模型大鼠学习记忆和细胞凋亡相关基因的影响

目的：观察调心方有效部位TX0201对Aβ1-40双侧杏仁核注射所致的类阿尔茨海默病(AD)大鼠模型学习记忆和皮层、海马细胞凋亡相关基因的影响。方法：应用β-淀粉样蛋白1-40片段(Aβ_1-40)注射入大鼠双侧杏仁核建立类AD的动物模型；实验设正常对照组、类AD模型组、TX0201组、调心方组、阳性药安理申组,均采用灌胃给药20 d；用Morris水迷宫法测试大鼠学习记忆能力；RT-PCR法检测大鼠脑部皮层和海马的细胞凋亡相关基因Bax mRNA,Bcl-2 mRNA。结果：TX0201、调心方和安理申均能够改善类AD大鼠的学习记忆能力,调心方能全面改善模型鼠脑部皮层和海马异常表达的Bax mRNA和Bcl-2 mRNA,TX0201可改善模型鼠皮层和海马异常表达的Bax mRNA,安理申组改善模型鼠皮层异常表达的Bax mRNA。结论：TX0201可通过改善模型鼠脑内的Bax mRNA来抑制细胞凋亡,从而改善模型鼠的学习记忆。     

调心方有效部位和EGb761对Aβ双侧杏仁核注射致痴呆大鼠APPmRNA、Aβ阳性神经元和乙酰胆碱脂酶作用比较

[目的]研究调心方有效部位(TX0201)和达纳康(EGb761)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)所致类老年性痴呆(AD)模型大鼠胆碱能系统作用的异同。[方法]采用双侧杏仁核注射Aβ25-35造成类AD大鼠模型,观察大鼠Morris水迷宫空间记忆能力、乙酰胆碱(AchE)活性,并分别通过逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法研究类AD大鼠淀粉样前体蛋白(APP)mRNA表达和Aβ阳性神经元。[结果]1)类AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,海马AchE含量降低,皮层、海马APPmRNA的表达上调,Aβ阳性神经元增加;2)TX020和EGb7611可以改善类AD大鼠空间记忆能力;下调海马APPmRNA的表达。[结论]TX0201和EGb761显著改善Aβ诱导的痴呆模型大鼠学习记忆障碍,可能是通过降低海马APPmRNA表达发挥作用。     

补阳还五汤对 AD大鼠海马区 NF-κBp65 mRNA基因表达的影响

目的：本课题紧紧围绕着NF-κB/IκB-α通路观察补阳还五汤对AD模型大鼠神经细胞的保护作用,从分子水平探讨补阳还五汤对AD的神经细胞作用机制。方法：将70只Wistar雄性大鼠分为7组：补阳还五汤高、中、低剂量组、阳性对照组、空白组、假手术组以及模型组,每组10只。采用大鼠单侧海马区定向注射Aβ1-40复制AD动物模型,通过实时荧光定量PCR技术观察NF -κBp65mRNA、IκB-αmRNA和 BACE1 mRNA 基因表达的影响。结果：补阳还五汤能升高 AD 大鼠海马区 IκB -αmRNA基因的表达,减少NF-κBp65 mRNA及BACE1 mRNA基因的表达。结论：补阳还五汤对AD大鼠的神经元具有保护作用,其机理可能是通过减少AD大鼠的核转录因子NF-κBp65的表达,同时抑制BACE1的转录和翻译而实现的。     

调心方对Aβ所致AD大鼠"有害网络"作用的实验研究

目的：观察调心方对Aβ所致“AD”模型大鼠氧化损伤、能量代谢受抑和钙稳态失衡等多因素构成的“有害网络”作用的影响。方法：采用Aβ1-40片段左侧脑室注射法建立Aβ沉积型“AD”大鼠模型；Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力：Clark氧电极法观察线粒体呼吸链琥珀酸脱氢酶、NADH脱氢酶和细胞色素氧化酶活性；Fura2／AM-荧光法测定脑神经元胞浆内Ca^2 含量；分光光度法检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化脂质产物——丙二醛(MDA)和活性氧类(ROS)含量；电子显微镜观察脑皮层和海马线粒体超微结构；以及调心方时AD大鼠上述指标变化的影响。结果：与正常组比较，AD模型大鼠上述各项指标呈现不同程度的异常变化，调心方具有明显的纠正作用。结论：调心方可以通过纠正上述各项指标的异常变化，防治AD的发生与发展。     

还脑益聪方对老年大鼠脑组织炎症因子及海马核因子-κB表达的影响

目的:观察还脑益聪方对老年认知障碍大鼠学习记忆能力、脑组织炎性因子含量和海马组织核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:采用自然衰老大鼠模型,应用Morris水迷宫检测,以青年组大鼠平均逃避潜伏期95%和99%正常值范围上限值为界,筛选认知障碍老年大鼠40只。随机分为还脑益聪方大剂量(13.68g生药/kg)组、小剂量(6.84g生药/kg)组、阳性药物对照(盐酸多奈哌齐,0.45mg/kg)组和老年认知障碍大鼠(模型)组,并设立学习记忆正常的青年大鼠10只、正常老年大鼠10只为空白对照组。灌胃给药8周后,观察大鼠学习记忆能力及脑组织白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,免疫组织化学方法检测海马组织NF-κB的表达。结果:与老年认知障碍大鼠比较,盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方组大鼠首次穿越中心的时间显著缩短(P<0.05、P<0.01),在中心区域的寻找平台时间显著加长(P<0.05)。同时,还脑益聪方可以显著降低认知障碍大鼠的IL-6、TNF-α水平(P<0.05,P<0.01),抑制脑组织NF-κB的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:还脑益聪方可通过抑制老年认知障碍大鼠的海马组织NF-κB表达,降低脑组织中的炎症因子水平,减轻海马区神经元损伤,达到改善认知障碍大鼠的学习记忆能力。     

调心方对AD大鼠脑组织抗氧化能力的影响

目的：观察调心方对AD大鼠脑组织SOD、GSH—PX活性和MDA含量以及空间学习记忆能力等的影响。方法：采用二羟延胡索酸(DHF)加FeCl3-ADP左侧脑室注射法，复制氧化损伤型类AD大鼠模型：Morris水迷宫法检测大鼠空间记忆能力的变化；分光光度法测定大鼠脑组织SOD、GSH—PX活性和MDA含量；电镜观察大鼠脑线粒体超微结构变化，以及调心方对上述各项指标的作用。结果：调心方能明显改善模型大鼠低下的空间学习记忆能力，显著提高模型大鼠脑SOD，GSH—PX酶活性及降低MDA含量，而且调心方能明显改善模型大鼠线粒体超微结构的异常变化。结论：调心方能够通过提高脑内抗氧化酶(SOD、GSH—PX)活性，降低MDA含量，防止AD大鼠遭受活性氧损伤，从而保护线粒体结构免遭受损，改善能量代谢,进而防治AD的发生与发展。     

调心方对氧化损伤型类AD大鼠空间记忆能力和神经元钙稳态的影响

目的：探讨调心方对氧化损伤型类AD大鼠空间学习记忆能力、脑神经元钙稳态的影响。方法：采用二羟延胡索酸（DHF）加FeCl3-ADP左侧脑室注射,造成大鼠氧化损伤型类AD大鼠模型;Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力;荧光分光光度法测皮质和海马胞浆钙离子浓度。结果：与对照组比较,模型鼠空间学习记忆能力显下降,皮层、海马胞浆钙稳态失衡,调心方对此有明显改善作用。结论：调心方具有改善氧化损伤型类AD大鼠空间学习记忆障碍、恢复钙稳态的作用。     

调心方有效部位对类老年痴呆大鼠的影响

目的研究调心方有效部位(TX0201)对β-淀粉样蛋白(Aβ)25-35所致类老年性痴呆(AD)模型大鼠神经免疫调节的作用机制。方法采用双侧杏仁核注射Aβ25-35造成类AD大鼠模型,观察大鼠Morris水迷宫空间记忆能力,并分别通过免疫组化和RT-PCR方法研究类AD大鼠大脑组织中的原纤维酸性蛋白(GFAP)、APPmRNA表达和炎性细胞因子白细胞介素-1β、白细胞介素-6的变化以及TX0201的影响。结果类AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,皮层、海马APPmRNA的表达上调;海马、皮层GFAP阳性胶质细胞和白细胞介素-6mRNA以及海马白细胞介素-1βmRNA表达增高。TX0201能有效控制以上病理变化。结论TX0201能显著改善Aβ诱导的痴呆模型大鼠学习记忆障碍,降低海马APPmRNA表达,减轻神经细胞的炎症和免疫联级反应。提示有效控制AD患者脑内Aβ免疫联级反应是TX0201的重要作用机制之一。     

调心方有效部位和达纳康对类AD大鼠脑组织IL-1β IL-6和APPmRNA表达的影响

目的:研究调心方有效部位(TX0201)和达纳康(EGb761)对Aβ25-35所致类AD模型大鼠神经免疫调节作用机制的异同。方法:采用双侧杏仁核注射Aβ25-35造成类AD大鼠模型,观察大鼠Morris水迷宫空间记忆能力,并分别通过免疫组化和RT-PCR方法研究类AD大鼠神经元胶质细胞(GFAP)APPmRNA表达;炎性细胞因子IL-1β,IL-6的变化以及TX0201和EGb761的影响。结果:类AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,皮层、海马APPmRNA的表达上调;海马、皮层GFAPP阳性胶质细胞和IL-6mRNA以及海马IL-1βmRNA表达增高。TX0201和EGb761能有效控制以上病理变化。结论:TX0201和EGb761均能显著改善Aβ诱导的痴呆模型大鼠学习记忆障碍,降低海马APPmRNA表达,减轻神经细胞的炎症和免疫联级反应。提示有效控制AD患者脑内Aβ免疫联级反应是TX0201和EGb761的重要作用机制之一。     

夹脊电针不同时间点干预对ALS-SOD1G93A小鼠腰髓TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的：观察通督调神针法对APP/PS1小鼠学习记忆行为及海马Aβ淀粉样沉积、炎症因子TNF-α的影响,探讨通督调神针法治疗AD的作用机制。方法：4月龄APP/PS1小鼠共16只,随机数字表达法分组,模型组8只,电针组8只。同龄野生型小鼠8只为对照组,以“百会”“印堂”“人中”三穴进行电针干预,每次30min,每天1次,共4周。水迷宫实验检测各组小鼠干预前的学习记忆功能情况,干预后,新物体识别实验的偏好指数检测各组小鼠学习记忆功能的表现,Western blot法测定海马区淀粉样蛋白(Aβ)、核因子激活的B细胞的κ-轻链增强(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α蛋白(TNF-α)表达水平。结果：干预前,与对照组相比,在训练的第三、四天,模型组逃避潜伏期明显增加(P<0.01, P<0.05),穿越第三象限次数减少(P<0.01)；各组小鼠的游泳速度无统计学差异。与对照组相比,实验第三、四天时,干预前电针组逃避潜伏期明显增长(P<0.01, P<0.01),穿越第三象限次数减少(P<0.01)。而模型组与电针组之间没有差异。干预后与模型组相比,电针组对新物体偏好指数增加(P<0.05, P<0.05),脑内海马Aβ表达水平降低(P<0.01),海马中TNF-α和NF-κB分别显著降低(P<0.01, P<0.05)。结论：通督调神针法可通过抑制NF-κB通路,减少炎症因子TNF-α蛋白表达,减少Aβ沉积,提高学习记忆,从而延缓AD的发展。     

调心方对氧化损伤型类AD大鼠空间记忆能力和脑线粒体呼吸功能的影响

目的：探讨调心方对氧化损伤型类AD大鼠空间学习记忆能力，脑线粒体呼吸功能及其酶活性的影响。方法：采用二羟延胡索酸（DHF）加FeCl3-ADP左侧脑室注射，造成大鼠氧化损伤型类AD大鼠模型；Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力；Clark氧电极法测定脑线粒体呼吸功能各项指标，包括R3、R4、RCR、P／O、OPR及琥珀酸脱氢酶、NADH脱氢酶，CytC氧化酶活性变化及调心方的作用。结果：与对照组比较，模型鼠空间学习记忆能力，脑线粒体呼吸功能和CytC氧化酶活性显著下降，调心方对模型鼠上述指标有明显改善作用。结论：调心方具有改善氧化损伤型类AD大鼠空间学习记忆障碍提高脑线粒体呼吸功能和呼吸链复合酶活性作用。可能与其对抗自由基氧化损伤作用有关。     

铁皮石斛多糖对癫痫大鼠海马NF-κB和IL-10表达的影响

目的:从NF-κB信号传导通路研究铁皮石斛多糖对癫痫大鼠海马组织中核转录因子κB(NF-κB)和白细胞介素-10(IL-10)表达的影响。方法:通过腹腔注射亚惊厥量的戊四氮(PTZ)来建立癫痫大鼠模型,并将大鼠分为模型组、铁皮石斛多糖干预组和生理盐水对照组。实验7、14、21、28 d分别取大鼠海马组织检测,用实时荧光定量PCR检测癫痫大鼠海马组织中NF-κB和IL-10mRNA的表达,用ELISA检测海马组织中IL-10蛋白的表达。结果:随着给药时间的延长,与对照组比较,PTZ模型组海马组织中NF-κB和IL-10 mRNA的表达量持续增高,差异具有统计学意义(P0.01);经铁皮石斛多糖干预后,NF-κB mRNA的表达在21 d和28 d时明显低于模型组,差异具有统计学意义(P0.01),IL-10 mRNA的表达在14、21、28 d也明显低于模型组(P0.01)。ELISA检测海马组织内IL-10蛋白的表达变化趋势与IL-10 mRNA结果一致。结论:铁皮石斛多糖能对PZT诱导的癫痫大鼠脑神经元起到保护作用,推测其作用机制是抑制NF-κB信号通路的激活,从而下调相关炎症因子表达水平,降低炎症反应的发生,最终减轻癫痫的发作程度。     

调心方对D—半乳糖合鹅膏覃酸致痴呆大鼠学习记忆、脑磷酸化tau蛋白水平的影响

目的:探讨调心方对D—半乳糖合鹅膏覃酸所致痴呆大鼠学习记忆及脑磷酸化tau蛋白水平的影响。方法:用D—半乳糖皮下注射和鹅膏覃酸脑组织定向注射相结合诱导AD大鼠模型,设立空白对照和西药THA对照。分别用Y—电迷路、免疫组化方法,检测实验大鼠学习记忆、大脑磷酸化tau蛋白水平的变化及调心方对其影响。结果:造模大鼠学习记忆下降,脑组织磷酸化tau蛋白水平增高;调心方能够改善造模大鼠学习记忆障碍,对脑组织磷酸化tau蛋白水平有下调作用;THA仅能改善AD大鼠学习记忆障碍,对脑组织磷酸化tau蛋白作用不明显。结论:调心方能改善AD大鼠学习记忆障碍,降低脑组织磷酸化tau蛋白水平。     

山茱萸提取物对脑梗死大鼠大脑皮层一氧化氮与核转录因子-κB表达的影响

目的:观察光化学法诱导脑梗死大鼠大脑皮层一氧化氮(NO)与核转录因子-κB(NF-κB)含量的变化,以及中药山茱萸提取物(主要成分为环烯醚萜苷)对其的影响.方法:大鼠预先灌胃给药7 d后,制作光化学致脑梗死模型,采用分光光度法检测脑组织中NO和一氧化氮合酶(NOS)的变化,免疫组织化学方法检测NF-κB阳性细胞数量的变化.结果:模型组与对照组相比,出现了明显的梗死灶,脑皮层NO含量与NOS活性增加,NF-κB阳性细胞数量增多.与模型组相比,山茱萸提取物能明显减小脑梗死面积,降低脑皮层NO含量和NOS活性,并显著减少NF-κB阳性细胞数量.结论:山茱萸环烯醚萜苷可通过影响脑内NO,NF-κB的水平发挥对脑梗死的治疗作用.     

麝香酮处理后CIRI模型大鼠海马组织中S100β、NF-κB表达变化研究

目的:对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型老年SD大鼠腹腔预先灌注麝香酮,检测实验后大鼠海马组织中S100β、NF-κB p65活性值,了解麝香酮对脑组织核转录因子NF-κB(NF-κB)信号传导的影响。方法:采用健康SD老年大鼠60只。随机分为缺血再灌注组(CIRI),麝香酮组(SXT)和生理盐水对照组(CON)。腹腔灌注麝香酮,造缺血再灌注动物模型,处死大鼠后取海马区脑组织,采用凝胶电泳迁移分析法测定海马组织中S100β、NF-κB p65活性值。实验分两次完成,每次完成30只大鼠实验。结果:CON、SXT与CIRI比较,S100β、NF-κB p65都有明显下降,SXT与CON比较S100β的变化有明显差别,而NF-κB p65的变化无明显差别。结论:麝香酮抗CIRI的作用可能与减少S100β蛋白释放,减少NF-κB蛋白表达,减轻兴奋性氨基酸毒性有关。     

扶肾颗粒对慢性肾衰透析大鼠肾脑组织中NF-KB表达的影响及意义

目的:通过观察扶肾颗粒对慢性肾衰腹膜透析大鼠肾组织及脑组织中核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨慢性肾衰腹膜透析大鼠中枢神经系统损伤的机制及其与肾组织损伤之间的关系。方法:健康雄性SD大鼠38只,采用5/6肾切除法建立慢性肾衰大鼠模型,随机分为4组:正常对照组(A组),1.5%PDS组(B组),1.5%PDS+扶肾颗粒组(C组),4.25%PDS组(D组)。喂养4周后,HE染色观察各组大鼠脑组织病理改变情况,采用Western blot方法检测各组大鼠脑组织及肾组织NF-κB表达情况。结果:与正常对照组(A组)相比,模型组(B、D组)及扶肾颗粒干预组(C组)中脑组织NF-κB的表达水平均显著升高(P0.05),且扶肾颗粒干预组与模型组相比肾组织及脑组织中NF-κB表达水平明显降低(P0.05)。HE染色结果显示:与正常对照组相比模型组及扶肾颗粒干预组大鼠海马区神经元细胞均有不同程度的核固缩、染色质变深等细胞凋亡表现,同时可见不同程度的炎细胞浸润及微血管管腔狭窄。结论:扶肾颗粒可通过下调腹膜透析大鼠肾脑组织中NF-κB蛋白的表达,减轻腹膜透析大鼠中枢神经系统损伤,且腹膜透析大鼠中枢神经系统损伤与肾组织损伤之间存在一定相关性。     

肾炎宁方对IgA肾病模型大鼠肾脏组织核转录因子-κB表达的影响

目的:探讨肾炎宁方治疗IgA 肾病的作用机理.方法:采用口服牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素B 感染的复合方法,复制大鼠IgA 肾病模型,并给予肾炎宁方治疗,检测大鼠肾组织核转录因子-κB(NF-κB)含量及其mRNA 表达.结果:肾炎宁方可明显抑制IgA 肾病模型大鼠肾组织中NF-κB的分泌及其mRNA 表达.结论:肾炎宁方抑制IgA 肾病模型大鼠肾组织NF-κB的分泌作用可能是其治疗IgA 肾病的作用机理之一.     

温阳化瘀方对5/6肾切除大鼠Sirt/NF-κB炎症通路的调节作用

目的:探讨温阳化瘀方对5/6肾切除大鼠Sirt/NF-κB炎症通路的调节作用。方法:SD大鼠32只,随机分为假手术组、模型组、温阳化瘀方组、西药组,每组8只。温阳化瘀方组予以温阳化瘀方水煎液15. 1 g/(kg·d)灌胃,西药组予以洛汀新1mg/(kg·d)灌胃,连续灌胃4周;全自动生化仪检测各组大鼠血SCr、尿NAG、24 h尿蛋白水平,ELISA检测血清核因子κB(NF-κB)和人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,qRT-PCR检测大鼠肾组织沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1) mRNA表达。结果:与模型组比较,温阳化瘀方组、西药组大鼠血SCr、尿NAG水平均显著降低(P 0. 01),NF-κB和MCP-1水平均显著降低(P 0. 01);温阳化瘀方组SIRT1mRNA表达上升(P 0. 05),西药组SIRT1mRNA表达差异无统计学意义(P0. 05)。结论:温阳化瘀方能上调SIRT水平,抑制NF-κB和MCP-1表达,改善肾功能。