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1.
一种新型抗HCV药物筛选细胞模型建立的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 构建HCV 5'NCR调控外分泌性碱生磷酸酶(SEAP)基因表达的细胞模型。方法 用PCR技术扩增HCV 5’NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,构建HCV 5'NCR调控SEAP表达的重组质粒pdNCRSEAP。用脂质体基因转染技术,将pdNCRSEAP转染至肝细胞株Huh-7。用化学发光法检测SEAP的表达,并观察不同浓度反义寡聚核苷酸(ASODN)对SEAP表达的影响。结果 重组质粒pdNCRSEAP表达的发光强度为pSEAP2-Control的78%,5μmol和10μmol ASODN对pdNCRSEAP发光强度的抑制率分别为31.2%和48.6%,而对pSEAP2-Control的SEAP表达无显著抑制作用(P〉0.05)。结论 重组质粒pdNCRsEAP的SEAP表达受HCV 5'NCR调控,为以HCV 5'NCR为靶位点的药物筛选建立了检测方便的细胞模型。 相似文献
2.
人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide 3 protein G,APOBEC3G)是宿主的抗HIV-1(human immunodeficiency virus type Ⅰ)因子,而HIV-1辅助蛋白--病毒感染因子Vif(viral infectivity factor)可通过介导蛋白酶体途径降解APOBEC3G,因此针对APOBEC3G及HIV-1Vif进行抑制剂设计已经成为抗HIV-1药物研究新的方向之一,相应用于研究Vif-APOBEC3G相互作用的方法也越来越多,如免疫印迹、免疫杂交、脉冲追踪试验、生物发光共振能量转移检测、BIAcore检测等.作者将目前用于以Vif-APOBEC3G为靶点的药物的筛选及作用机制的研究方法进行了综述,为基于此的研究提供了策略. 相似文献
3.
目的:运用虚拟筛选技术从传统中药数据库(traditional Chinese medicine database platform,TCMSP)中寻找HIV-1整合酶的中药小分子抑制剂。方法:以整合酶与细胞因子LEDGF/P75相互作用位点为靶点,运用分子对接技术进行首轮筛选,然后运用ADME/T预测进行第二轮筛选,最后基于靶点与药物相互作用位点进行第三轮筛选。结果:以原配体(4-[(5-bromo-4-{[2,4-dioxo-3-(2-oxo-2-phenylethyl)-1,3-thiazolidin-5-ylidene]methyl}-2-ethoxyphenoxy)-methyl]-benzoic acid,D77)为阳性对照,筛选出2个类药性良好的天然小分子化合物,二者与HIV-1整合酶亲和力及相互作用基团均优于D77(新型的HIV-1整合酶抑制剂),并且确定了它们的中草药来源。结论:成功建立一整套高通量虚拟筛选HIV-1整合酶抑制剂的策略,该研究结果可促进从传统中药库中提取、设计以及实验合成新的抗艾滋病药物。 相似文献
4.
目的 利用抗氧化反应元件(ARE)调控荧光素酶(Luc)报告基因的表达水平,建立抗氧化药物筛选细胞模型.方法 构建由ARE调控Luc表达的重组质粒载体pARE-Luc-Neo,使用FuGENE@HD转染剂将重组质粒转染人胚肾上皮Hek293细胞,通过G418进行筛选,使用稀释法挑选阳性单克隆细胞,经抗氧化蛋白诱导剂TBHQ诱导,检测细胞中Luc的活性,筛选Luc高活性的单克隆细胞株.利用白藜芦醇和姜黄素评价阳性克隆的筛选效果,观察5个中药单体穿心莲内酯、隐丹参酮、水飞蓟素、苦参碱和虎杖苷在不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)时对Luc表达水平的影响.结果 通过检测Luc活性,筛选获得Hek293-ARE,该细胞中的Luc的表达水平受ARE调控,且在一定范围内与诱导剂的浓度呈相关性.穿心莲内酯、隐丹参酮与水飞蓟素有较好的诱导效果.结论 建立的抗氧化药物细胞筛选模型可有效地、高通量地用于抗氧化药物的初步筛选. 相似文献
5.
近年来发现HIV-1病毒基因调控蛋白功能和特性与HIV病毒复制、感染、细胞毒性等密切相关,相关基础研究及临床观察均显示中医药治疗艾滋病有较好疗效。我们推测中医药治疗艾滋病的作用机制可能与对HIV病毒基因中某些调控蛋白基因的干预作用有关。本文通过对39例无症状HIV感染者的HIV-1基因调控蛋白相对表达量的横断面检测分析,观察比较空白组与治疗组、治疗短期组与治疗长期组之间HIV感染者体内HIV-1病毒基因调控蛋白tat,rev,nef,vpr,vpu,vif相对表达量的差异情况,分析中医药治疗艾滋病与其干预HIV-1病毒基因调控蛋白变化情况是否有相关性,为阐明中医药体内抑制或稳定HIV-1病毒的作用机制提供一些临床基础及理论依据。 相似文献
6.
八棱丝瓜蛋白1的体外抗HIV-1活性 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研究八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-1活性。方法:通过实验株HIV-1ⅢB诱导合胞体形成抑制实验、HIV-1ⅢB和临床分离株HIV-1KM018急性感染细胞以及HIV-1ⅢB慢性感染细胞的p24抗原表达抑制实验检测八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-1活性。结果:八棱丝瓜蛋白1抑制HIV-1ⅢB诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为0.025μmol·L^-1,治疗指数为76。八棱丝瓜蛋白1抑制HIV-1ⅢB感染C8166和HIV-1KM018感染PBMC的p24抗原表达的EC50分别为0.033和0.207μmol·L^-1。八棱丝瓜蛋白1不抑制HIV-1ⅢB在慢性感染H9细胞中的复制。结论:首次发现八棱丝瓜蛋白1是一种具有抗HIV-1活性的核糖体失活蛋白。 相似文献
7.
目的研究蒲葵籽提取物的体外抗HIV-1活性,对有活性粗提物进行初步机制研究。方法采用细胞毒性、合胞体抑制、HIV-1感染细胞保护实验和HIV-1 p24抗原测定等实验对蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性进行筛选和确认;采用重组HIV-1逆转录酶和蛋白酶活性抑制实验,融合阻断实验初步探讨活性粗提物的作用机制。结果蒲葵籽的醋酸乙酯(P3)提取物具有较强的体外抗HIV-1活性,P3抑制HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为5.64μg/mL,对C8166细胞的毒性较小,CC50大于200μg/mL,治疗指数(TI)大于35.46;P3抑制HIV-1急性感染中p24抗原表达的EC50为23.04μg/mL,抑制正常C8166细胞与慢性感染细胞H9/HIV-1 B融合的EC50为8.00μg/mL;P3在质量浓度为200μg/mL时,对HIV-1逆转录酶的抑制率为28.86%;P3抑制重组HIV-1蛋白酶活性的EC50为1.77μg/mL。结论蒲葵籽的醋酸乙酯提取物(P3)具有较强的体外抗HIV-1活性,其作用机制可能主要为阻断病毒进入和抑制HIV-1蛋白酶活性。 相似文献
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9.
自从1981年美国首次报告艾滋病以来,艾滋病在全球迅速传播,已有8 000 000人感染艾滋病毒,并有700 000人患上艾滋病,我国已发现446例艾滋病毒抗体阳性者,5例确诊为艾滋病患者,因此艾滋病已成为威胁我国人民健康的重要问题,寻找有效的抗艾滋病药物已成为当务之急。 相似文献
10.
目的 综述抗骨质疏松药物细胞筛选模型的研究进展。方法 以国内外研究文献为基础,对文献资料进行分析和总结。结果与结论 抗骨质疏松药物细胞筛选可归纳三种模型,即二维模型、三维模型和组织工程化模型,其中二维模型较为常见,但因不能提供细胞正常生长发育所需的微环境,从而使筛选结果与在体模型出入较大。三维模型和组织工程化模型在细胞黏附、细胞骨架组成、细胞迁移、信号转导等方面区别于二维模型,正逐渐成为研究的热点。用于筛选抗骨质疏松类药物的组织工程化模型还处于起步阶段,但必将成为发展趋势。 相似文献
11.
目的 建立基于人孕烷X受体(human pregnane X receptor,hPXR)的UGT1A1的报告基因模型,研究中药提取物通过人孕烷X受体途径对UGT1A1的潜在诱导能力。方法 以人基因组DNA为模板扩增UGT1A1的远端和近端启动子,连接到pGL3载体上,构建pGL3-PXRE重组质粒,并与人孕烷X受体表达质粒共转染HepG2细胞,从而建立报告基因模型。运用该模型考察了9种常见中药对人孕烷X受体的激活作用,即对UGT1A1的潜在诱导作用。结果 将UGT1A1启动子片段克隆到pGL3载体上,构建了pGL3-PXRE重组质粒,成功构建了报告基因模型,并考察了多种常见中药的提取物通过人孕烷X受体途径对UGT1A1的诱导作用。结论 成功地建立了基于人孕烷X受体的UGT1A1的报告基因模型,为人孕烷X受体激活剂的体外筛选提供了一种有效的方法。 相似文献
12.
目的 利用均相时间分辨荧光(HTRF)技术建立血管内皮生长因子受体-2抑制剂高通量药物筛选模型,从化合物样品库中寻找小分子抑制剂。方法 使用20 μL检测体系,384低容量白板,采用均相时间分辨荧光技术对反应体系中的酶活性进行荧光检测,进而评价待测样品的抑制活性。模型建立的体系优化包括如下实验步骤:酶浓度及反应时间优化,ATP和底物米氏常数测定,质控实验包括反应体系信噪比实验、抑制剂SU5416的IC50测定,Z′因子的测定。在建立稳定模型检测体系之后,对本中心化合物库提供的10 560个样品进行活性筛选,并对部分活性化合物进行IC50的测定。结果 在血管内皮生长因子受体-2活性体系优化实验中求得血管内皮生长因子受体-2激酶最适反应酶浓度为0.10 ng·μL-1,最适反应时间为15 min,ATP Km=0.75 μmol·L-1,底物Km=94.90 nmol·L-1,信噪比底物:SA=2∶1,Z′值为0.85,阳性药IC50=1.03 μmol·L-1。通过部分初筛活性样品进行复筛研究,得到3个活性化合物S2-14,S2-16、S2-38 IC50分别为1.01×10-4,6.04×10-5,7.23×10-6 mol·L-1。结论 利用均相时间分辨荧光技术成功建立了血管内皮生长因子受体-2激酶高通量筛选模型,并进行了一定量的定向筛选研究,发现了若干先导化合物。本实验体系方法可靠,结果稳定,可作为抗血管新生天然产物筛选体系进行应用推广。 相似文献
13.
目的通过建立实验性近似不稳定型心绞痛的动物模型.探讨养心颗粒对近似不稳定型心绞痛家兔血清C-反应蛋白(CRP)的影响。方法以球囊一次性损伤家兔颈动脉结合高脂饮食喂养,8周末后随机分为模型对照组、养心颗粒组、硝酸异山梨酯(消心痛)组和阿托伐他汀组,每组各7只,另取7只家兔为空白对照组.于10周末进行药物触发的方法复制成近似不稳定型心绞痛动物模型。各组兔分别于实验开始后第8周、第10周末,经耳中央动脉采血,测CRP水平。结果与空白对照组相比,各组在8周末CRP的含量明显升高,差异有统计学意义(P〈0.01);10周末,与模型对照组相比,各治疗组CRP含量均有所降低,养心颗粒组和阿托伐他汀组差异有统计学意义(P〈0.01);各治疗组间比较,养心颗粒组和阿托伐他汀组疗效优于消心痛组,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论中药复方制剂养心颗粒对近似不稳定型心绞痛模型具有明确的防治作用,其机制可能与降低血清CRP水平有关。 相似文献
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中医药抗帕金森病理想的动物模型—Nurr1基因敲除小鼠 总被引:1,自引:0,他引:1
简述帕金森病(PD)动物模型研究的发展简史,对各种PD动物模型的优、缺点进行了评价。介绍Nurr1基因敲除模型、PD的修正疗法及中医药可能的神经保护作用。总结Nurr1基因敲除模型具有症状相类性、病理一致性、慢性进行性、可早期神经保护介入及药物作用的可能靶点等特点,可作为中医药抗帕金森病研究理想的动物模型。 相似文献
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目的探讨五味子醇甲(Schisandrin,SCH)对Aβ1-42诱导SH-SY5Y的RAGE/ROS/凋亡通路的影响。方法MTT法检测control组、SCH高中低剂量组的细胞活力,探讨SCH高中低剂量组对SH-SY5Y细胞的保护作用。MTT法检测control组、Aβ组、Vitamin E组及SCH高中低剂量组细胞活力、双染法观察细胞凋亡和DHE染色法检测ROS含量,探讨SCH对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y的细胞损伤的保护作用。Western-blot法检测control组、Aβ组、SCH组RAGE蛋白,探讨SCH对Aβ1-42诱导SH-SY5Y的RAGE影响。结果与control组比较,SCH各剂量组细胞活力均显著增强(P<0.01)。与Aβ组比较,各给药组细胞活力均明显增强(P<0.01)和细胞凋亡率均明显下降(P<0.01);各给药组检测ROS的荧光强度均减弱(P<0.01),SCH(5.0μg/mL)组RAGE蛋白表达降低,有显著性差异(P<0.05)。结论SCH防治阿尔茨海默病的抗氧化作用机制可能与降低ROS含量、细胞凋亡率和下调RAGE蛋白表达有关。 相似文献
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目的:研究黄连温胆汤对代谢综合征大鼠炎性因子及血管粘附因子等指标的影响,探讨其作用机制。方法:通过膳食喂养建立MS大鼠模型,将成模的MS大鼠随机分成模型组,中药高、低剂量组,格华止组,灌胃4周后,检测主动脉HE染色、炎性因子及血管粘附因子。结果:与空白组比较,模型组血清ADPN、IL-6具有统计学意义(P0.05),中药高、低剂量组及格华止组血清ADPN、IL-6水平与模型组相比,有统计学意义(P0.05),中药高、低剂量组及格华止组大鼠血管VCAM-1表达均明显降低(P0.05)。结论:黄连温胆汤可调控MS大鼠血清ADPN、IL-6水平,且可抑制VCAM-1过度表达。 相似文献
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目的:探讨电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆影响的机制。方法:将48只Wistar大鼠随机分成4组:空白组、模型组、西药组和电针组,每组12只。通过侧脑室注射链脲霉素(STZ)的方法制备动物模型。电针组选取"百会"、"大椎"、"肾俞"、"太溪"、"足三里"电针治疗。以Morris水迷宫评价各组大鼠学习记忆能力,HE染色法观察海马CA1区神经元细胞排列。结果:与空白组比,模型组海马CA1区神经元细胞排列紊乱,学习记忆能力减退(P0.01)。治疗后与治疗前相比较,电针组与西药组细胞排列较规则,学习记忆能力增强(P0.01)。结论:电针治疗可改善AD大鼠海马CA1区神经元细胞形态学变化,增强学习记忆能力。 相似文献
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目的:观察"治癌灵"穴位贴敷联合针刺对H22移植性肝癌小鼠肿瘤转移抑制基因Nm23-H1蛋白水平表达的调节作用,探讨该疗法对肿瘤的抑制作用是否与提高Nm23-H1的表达有关。方法:选取健康雄性昆明种小鼠50只,采取完全随机分组法,依照随机数字表法选取10只小鼠,设为正常组,余者造模,经正常饲养7天后,随机分为模型组、穴位贴敷组、针刺组、综合组,每组10只。于雄性昆明种小鼠前肢右腋皮下接种0.2 m L H22肿瘤细胞悬液进行造模。计算瘤重和小鼠肿瘤生长抑制率,采用免疫组化法检测瘤细胞中Nm23-H1的含量。结果:与模型组比较,各组均能抑制瘤体生长(P0.05),明显改善小鼠的生存质量,且综合组优于穴位贴敷组和针刺组(P0.05);与模型组比较,各组均能明显提高Nm23-H1蛋白表达水平(P0.01),综合组优于穴位贴敷组和针刺组(P0.05)。结论:"治癌灵"穴位贴敷及针刺均可提高H22移植性肝癌小鼠Nm23-H1蛋白表达水平,进而抑制癌细胞的生长及肿瘤侵袭转移,改善生存质量,且穴位贴敷联合针刺疗法疗效更佳。 相似文献
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痰湿方对痰湿阻络型颈椎病兔IL-1、IL-6和PGE2的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察内服痰湿方对痰湿阻络型颈椎病兔椎间盘和咽部黏膜白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)水平的影响。方法:将造模成功的32只痰湿阻络型颈椎病新西兰大白兔随机分为痰湿方组、空白对照组,每组16只,分别在用药后第1周、第2周、第3周、第4周随机处死,取椎间盘和咽部黏膜,做成匀浆,用ELISA法检测上清液IL-l、IL-6、PGE2的浓度。结果:给药后第2周、第3周、第4周的椎间盘和咽部黏膜IL-l、IL-6、PGE2含量均极显著低于给药后第1周(P0.01),空白对照组第3周、第4周的椎间盘IL-1含量显著低于给药后第1周(P0.05);组间比较,第2周痰湿方组椎间盘IL-1的含量显著低于空白对照组(P0.05),第3周、第4周痰湿方组椎间盘IL-1的含量极显著低于空白对照组(P0.01)。结论:痰湿方可用于慢性咽炎引起的颈椎病的治疗中可起到良好的治疗效果。 相似文献