刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化动物模型的建立

目的利用刀豆蛋白A建立昆明小鼠肝纤维化模型并探讨其机制。方法昆明小鼠210只,随机分为7组,正常A组(注射等量生理盐水),刀豆蛋白A10mg每周1～3次(分别为B、C、D组)、15mg每周1～2次(分别为E、F组)、20mg每周1次(G组),采用尾静脉注射法攻击昆明小鼠,分别在第1周、第5周、第12周和第20周处死3只小鼠,留取肝组织标本行苏木精-伊红染色、纤维Masson染色,并行Knodell HAI和Ishak肝纤维化半定量计分,最后一次留取血清标本,检测血清IL-18、TNF-α和IFN-γ。结果 15mg每周1次,10mg每周2次组实验早期肝脏组织以坏死为主;实验中期(5～12周)坏死减轻,细小纤维条索出现;实验晚期(20周)纤维间隔逐渐增宽。10mg每周1次组实验晚期(20周)纤维条索形成,纤维间隔有增宽趋势。10mg每周3次组和20mg每周1次组全部死亡前,未发现有明显的肝纤维化形成。肝组织炎症活动度半定量计分显示刀豆蛋白A注射次数和注射剂量较大组评分较高(P<0.05)。肝纤维化半定量计分显示10mg每周2次组较15mg每周1次,10mg每周1次组高(P<0.05)。各组注射刀豆蛋白A后均出现了IL-18、TNF-α和IFN-γ的升高,并且IL-18和TNF-α表现出相关性(r=0.889,P<0.05)。结论利用刀豆蛋白A建立昆明小鼠的肝纤维化模型,其形成机制与IL-18、TNF-α和IFN-γ的升高密切相关。     

刚地弓形虫棒状体蛋白17激活活化蛋白1信号抑制小鼠巨噬细胞凋亡

目的检测刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白17(rhoptry protein 17,ROP17)对γ干扰素(IFN-γ)诱导的小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)凋亡的调控作用。方法将重组质粒p3×Flag-CMV-14/Tg ROP17和p3×Flag-CMV-14空质粒(对照组)转染J774A.1细胞后,加入重组IFN-γ诱导细胞凋亡,通过流式细胞术和蛋白质印迹(Western blotting)检测ROP17对细胞凋亡的调控作用,检测c-Jun磷酸化水平及活化形式的半胱天冬酶3(Caspase 3)、Bcl-2、Bcl-x L和Bcl-3等凋亡相关蛋白的表达情况。J774A.1细胞共转染p3×FlagCMV-14/Tg ROP17和c-Jun sh RNA,加入重组IFN-γ诱导细胞凋亡,Western blotting检测ROP17对凋亡的调控作用及凋亡相关蛋白Bcl-3的表达。结果流式细胞术显示,过表达ROP17组细胞凋亡率为(3.73±0.51)%,明显低于对照组的(7.78±1.10)%(P0.05)。Western blotting结果显示,过表达ROP17组磷酸化c-Jun蛋白相对表达量为0.196±0.028,对照组为0.075±0.010(P0.05);Bcl-3相对表达量为0.461±0.063,对照组为0.108±0.013(P0.05)。活化形式的Caspase 3相对表达量为0.015±0.004,对照组为0.174±0.026(P0.05)。Bcl-2在过表达ROP17组和对照组中的相对表达量分别为0.119±0.013和0.117±0.018,Bcl-x L则分别为0.124±0.015和0.121±0.023,差异均无统计学意义(P0.05)。在c-Jun sh RNA有效抑制c-Jun及其磷酸化表达的条件下,活化形式的Caspase 3在RNA干扰组和对照组的相对表达量分别为0.147±0.024和0.087±0.010(P0.05),Bcl-3则分别为0.085±0.010和0.162±0.011(P0.05)。结论ROP17抑制IFN-γ诱导的J774A.1细胞凋亡依赖于c-Jun的磷酸化及Bcl-3的表达。     

重组刚地弓形虫抑制蛋白滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答

目的 观察不同浓度重组刚地弓形虫抑制蛋白（rTgPRF）滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答,探讨其最佳免疫剂量。方法 50只雌性BALB/c小鼠随机分为5组,免疫组分别用10、20、30 μg和40 μg rTgPRF溶于20 μl磷酸盐缓冲液（PBS）后滴鼻免疫,对照组用20 μl PBS。分别于第0、14和21 天滴鼻免疫小鼠,末次免疫后2周,颈椎脱臼处死小鼠。无菌取脾,采用CCK?8法测定脾淋巴细胞刺激指数（SI）,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定脾淋巴细胞上清液中IFN?γ、IL?2、IL?4和IL?10浓度。结果 经rTgPRF刺激,30 μg和40 μg免疫组小鼠脾淋巴细胞SI均高于对照组（P均< 0.05）,且30 μg组显著高于40 μg组（P < 0.05）。与对照组比较,所有免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN?γ含量升高（P均< 0.05）,20、30 μg和40 μg组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL?2含量增加（P均< 0.05）,其中30 μg组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN?γ（P均< 0.01）和IL?2含量最高（P均< 0.01）;所有免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL?4和IL?10含量与对照组比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）。结论 rTgPRF滴鼻免疫小鼠可诱导脾淋巴细胞增殖和Th1型细胞免疫应答,以30 μg剂量免疫效果最佳。     

刚地弓形虫感染致小鼠生殖细胞DNA损伤的作用

目的 探讨刚地弓形虫感染对小鼠睾丸细胞DNA的损伤作用.方法 选用9～10周龄雄性BALB/c小鼠20只,随机分为4组,每组5只,分为正常对照组(CG)和3个染虫组(G1,G2,G3).采用腹腔注射法建立小鼠刚地弓形虫感染的动物模型,CG组每只注射PBS 0.2 ml;染虫G1,G2,G3组注射纯化的刚地弓形虫速殖子悬液,每只注射刚地弓形虫速殖子的量依次为2.5×10 3、5×10 3、1×10 4,注射体积均为0.2 ml,应用单细胞凝胶电泳检测睾丸细胞DNA的损伤. 结果 正常对照组和染虫组的尾距分别为10.94±7.57、40.37±6.25、69.76±3.97、79.16±6.36,olive尾距分别为10.57±6.72、31.39±4.59、48.66±4.60、53.87±6.55,G1-G3组与CG组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 弓形虫感染可导致小鼠睾丸生殖细胞DNA不同程度的损伤.     

刚地弓形虫toxofilin蛋白的研究进展

Toxofilin是刚地弓形虫棒状体蛋白家族成员,但该蛋白有一定的特殊性,其结构中不存在棒状体蛋白典型丝氨酸、苏氨酸激酶区。Toxofilin分泌到宿主细胞质中,能与磷酸脂酶2C(PP2C)、肌动蛋白(actin)相互作用,形成toxofilin-actin-PP2C三聚体复合物,被酪蛋白激酶Ⅱ(CKⅡ)和PP2C激活发生磷酸化,在弓形虫入侵细胞过程中发挥重要作用。本文综述了弓形虫toxofilin的发现及其功能和免疫保护性等方面的研究进展。     

刚地弓形虫菱形体蛋白的研究进展

菱形体蛋白（rhomboid）为一类跨膜丝氨酸蛋白酶，在胞膜的脂质双分子层内发挥酶解作用。刚地弓形虫的菱形体蛋白可识别微线体蛋白的跨膜区，并对其进行蛋白水解，使微线体蛋白的N端片段释放人介质中。微线体蛋白的蛋白水解过程对于刚地弓形虫入侵宿主细胞非常重要。深入研究刚地弓形虫菱形体蛋白，将有助于理解生物体菱形体蛋白的功能及研制新的药物以防治弓形虫感染。     

刚地弓形虫热激蛋白70对宿主抗弓形虫感染的作用

感染弓形虫的小鼠在死前可检出弓形虫的热激蛋白70（TgHSP70）的表达迅速增加，表明该分子可作为弓形虫急性致死性感染的危险信号。对经口感染10个Fukaya株包囊的小鼠在感染的0、1、2、3d分别腹腔注射100、300、600和1000μg重组TgHSP70，对照组注射载体蛋白。弓形虫感染3d的小鼠腹腔注射1000μg重组TgHSP70后，在9d内全部死亡。而感染0、1、2d腹腔注射相同剂量重组TgHSP70的小鼠存活超过6个月（P〈0、01）。TgHSP70是表达在速殖子上的毒力分子，按照该毒力分子的不同，把速殖子分成2类：表达低水平TgHSP70的破坏型速殖子和表达高水平TgHSP70的毒力型速殖子。     

刚地弓形虫热激蛋白70对宿主抗弓形虫感染的作用

感染弓形虫的小鼠在死前可检出弓形虫的热激蛋白70(TgHSP70)的表达迅速增加,表明该分子可作为弓形虫急性致死性感染的危险信号。对经口感染10个Fukaya株包囊的小鼠在感染的0、1、2、3d分别腹腔注射100、300、600和1000μg重组TgHSP70,对照组注射载体蛋白。弓形虫感染3d的小鼠腹腔注射1000μg重组TgHSP70后,在9d内全部死亡。而感染0、1、2d腹腔注射相同剂量重组TgHSP70的小鼠存活超过6个月(P<0.01)。TgHSP70是表达在速殖子上的毒力分子,按照该毒力分子的不同,把速殖子分成2类:表达低水平TgHSP70的破坏型速殖子和表达高水平TgHSP7…     

槲皮素对刀豆蛋白A诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨槲皮素对刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其可能的分子机制。方法通过检测Con A注射后8 h血清转氨酶水平及肝组织病理学评估肝损伤;应用酶联免疫法(ELISA)检测TNF-α、IFN-γ、IL-4水平;定量PCR和Western blotting或免疫组织化学检测肝组织mRNA与蛋白的表达。结果与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清转氨酶水平(P0.05),且组织病理学分析表明肝脏炎症坏死程度明显减轻;与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清促炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-4的水平(P0.01);槲皮素预防组肝组织NOX4、COX-2和i NOS基因与蛋白的表达均明显低于模型组(P0.05)。结论槲皮素对Con A诱导小鼠急性肝损伤具有保护作用,其发挥有益作用的机制可能与抑制肝脏的炎症反应有关。     

刚地弓形虫重组蛋白表面抗原1与4诱导小鼠免疫保护性的比较研究

目的比较刚地弓形虫重组蛋白表面抗原1 (rSAG1)与rSAG4单独及联合诱导昆明小鼠的免疫保护性作用,为研制复合型疫苗分子提供参考。方法以弓形虫RH株基因组DNA为模板, PCR扩增SAG1和SAG4,构建重组质粒pET-28a (+)-SAG1和pET-28a (+)-SAG4;经双酶切和测序鉴定后,将序列正确的重组质粒转入BL21 (DE3)中,挑选阳性菌落,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌体,超声裂菌。在变性条件下经镍离子亲合层析柱纯化目的蛋白,采用透析逐步降低尿素浓度的方法进行目的蛋白复性; 125只昆明小鼠按照随机数字表法分为5组,每组25只,分别为r SAG1免疫组、 rSAG4免疫组、 rSAG1+rSAG4联合免疫组、PBS对照组、 PBS+佐剂对照组,首次免疫为重组蛋白100μg/鼠,与等体积完全弗氏佐剂充分乳化后进行皮下多点注射,间隔2周加强免疫1次,连续2次,加强免疫时重组蛋白为50μg/鼠,与等体积弗氏不完全佐剂乳化,对照组小鼠注射等量PBS。各组小鼠于免疫前(0周)及首次免疫后第2、 4、 6周断尾取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清特异性抗体IgG。在首次免疫后第6周,每只小鼠经腹腔注射3 000个弓形虫RH株速殖子进行攻击感染,观察小鼠生存时间,采用SPSS 16.0软件进行统计学分析。结果弓形虫RH株SAG1和SAG4基因经PCR扩增后,目的片段大小分别为780和438 bp,与理论大小一致;重组质粒pET-28a (+)-SAG1和pET-28a (+)-SAG4经双酶切和测序鉴定后,特异片段长度与SAG1和SAG4理论大小780和438 bp一致,测序结果显示,重组基因与目的基因序列完全一致; rSAG1、 rSAG4相对分子质量(Mr)为28 970、 17 720,与理论值一致,经纯化和复性后获得较纯的可溶性蛋白; rSAG1免疫组小鼠血清特异抗体IgG吸光度(A450值)为1.821±0.184,明显高于rSAG4免疫组(0.695±0.089)(P 0.05),但低于rSAG1+rSAG4联合免疫组(1.955±0.097)(P 0.05)。PBS组和PBS+佐剂组分别为0.019±0.002、 0.020±0.004, rSAG1、 rSAG4和rSAG1+r SAG4联合免疫组均高于两对照组(P 0.05);经弓形虫速殖子攻击感染后,对照组小鼠均在224 h内全部死亡, rSAG1、 rSAG4免疫组及联合免疫组分别在296、 288及320 h内全部死亡,各免疫组与各对照组之间、 rSAG4免疫组与联合免疫组之间生存时间差异有统计学意义(P 0.05)。结论 rSAG1、 rSAG4和rSAG1+rSAG4均能诱导小鼠产生抗弓形虫感染的免疫保护作用,明显延长实验小鼠的存活时间,联合免疫保护效果要略优于单抗原免疫。     

刀豆蛋白A诱导小鼠肝损伤模型的血清蛋白质差异分析

目的 研究刀豆蛋白(Con)A诱导小鼠肝损伤模型血清中蛋白质的变化,分析特异蛋白质与疾病进展的关系.方法 25只小鼠分为空白对照组,PBS对照组,ConA诱导肝损伤模型1、3、6 h组,取血清,运用ProteoExtract~(TM)白蛋白去除试剂盒纯化小鼠血清,去除白蛋白,利用双向凝胶电泳和质谱技术分析鉴定差异性表达蛋白质.结果 通过对各组双向凝胶电泳图像的比较分析发现,ConA诱导肝损伤模型6 h组有2种明显差异表达的蛋白质.经质谱鉴定,这2种蛋白质分别为血清淀粉样蛋白酶A2前体蛋白和血清淀粉样蛋白酶A1前体蛋白.结论 在ConA诱导小鼠肝损伤模型6 h时,发现血清淀粉样蛋白酶A2前体蛋白和血清淀粉样蛋白酶A1前体蛋白,可能与疾病进展有关.     

刚地弓形虫感染对小鼠外周血和脾淋巴细胞Crry和CD55表达的影响

目的 探讨刚地弓形虫急性感染对小鼠外周血细胞和脾淋巴细胞表面补体调节蛋白Crry和CD55表达的影响.方法 将30只雄性C57BL/6小鼠按完全随机分组法分为感染组(20只)和对照组(10只).感染组小鼠每只腹腔注射1.0×104个RH株刚地弓形虫速殖子,对照组注射等量生理盐水.感染组依次于感染后2d和5d采集标本,同时对对照组取材.采用流式细胞仪检测小鼠外周血红细胞、白细胞及脾淋巴细胞Crry与CD55的表达情况.结果 ①感染后2d小鼠外周血红细胞Crry和CD55阳性表达率依次为(96.17±2.86)％和(65.23±4.99)％,对照组依次为(98.24±0.83)％和(68.57±5.31)％,组间差异均无有统计学意义；感染后5d,其红细胞Crry和CD55阳性率依次为(81.77±4.51)％、(51.72±8.29)％,对照组依次为(97.94±0.95)％、(70.57±6.44)％,感染组较对照组降低(t=7.786,t=4.433,P＜0.01).②感染后2d,白细胞Crry和CD55阳性率依次为(96.74±3.76)％、(71.80±6.74)％,对照组依次为(97.25±1.16)％、(74.84±3.87)％,两组比较均无有统计学意义的差异；感染后5d,其阳性率依次为(93.46±4.38)％、(59.67±6.37)％,对照组依次为(97.47±1.56)％、(75.10±4.58)％,感染组比对照组降低(t=2.585,t=4.792,P＜0.05,P＜0.01).③感染后2d,脾淋巴细胞Crry和CD55阳性率依次为(97.74±1.55)％和(66.58±2.67)％,对照组依次为(98.20±1.19)％和(69.98±4.62)％,两组比较均无有统计学意义的差异；感染5d后,其阳性率依次为(94.71±3.59)％、(56.86±6.98)％,对照组依次为(98.24±1.63)％、(71.18±4.09)％,其中,感染组CD55阳性率较对照组降低(t=4.195,P＜0.01),而Crry阳性率较对照组无有统计学意义的差异.结论 小鼠感染刚地弓形虫RH株后,不会立刻影响外周血和脾淋巴细胞补体调节蛋白Crry、CD55表达水平；随着病情发展,刚地弓形虫感染可导致机体免疫细胞补体调节蛋白的表达水平降低,但对不同免疫细胞各补体调节蛋白影响程度并不相同.     

刚地弓形虫抑制蛋白的原核表达与免疫反应性分析

目的克隆并表达刚地弓形虫抑制蛋白(Tg PRF)基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据Tg PRF的基因编码序列设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入p ET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落。p ET30a(+)-Tg PRF转化至E.coli BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。重组蛋白经镍亲和层析法纯化后,以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析r Tg PRF蛋白的免疫反应性。结果 Tg PRF基因RT-PCR扩增产物约为492 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒p ET30a(+)-Tg PRF构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约35 000的可溶性重组蛋白。Western blotting结果显示,r Tg PRF蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论本研究克隆的Tg PRF基因序列能在原核表达系统中表达,且具有免疫反应性。     

血府逐瘀汤对刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化的干预作用

目的：观察血府逐瘀汤对刀豆蛋白A （ Con A）诱导小鼠肝纤维化的干预作用。方法： Balb/c雄性小鼠40只,随机分为正常组（8只）,模型组（16只）和治疗组（16只）。模型组和治疗组按照1.25mg/100g小鼠体重予以尾静脉注射Con A,正常组予注射相应剂量生理盐水,1次/周,共10周。治疗组于造模同时,予血府逐瘀汤药液1ml/100g小鼠体重灌胃,正常组及模型组则予以等量饮用水,1次/d。10周后,处理各组小鼠,留取血清、肝脾标本。全自动生化仪检测血清血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）和白蛋白（Alb）; HE和天狼星红染色观察肝组织炎症和胶原沉积; RT-PCR和Western Blot法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和转化生长因子β1（TGF-β1）表达。结果：模型组小鼠ALT和AST活性均较正常组明显升高（P＜0.05）;肝组织HE染色可见肝细胞坏死和大量炎性细胞浸润;天狼猩红染色可见大量胶原沉积和假小叶形成;肝组织α-SMA和TGF-β1较正常组显著升高（P＜0.01）。与模型组相比,治疗组ALT、 AST水平明显降低（P＜0.05）;肝脏炎症和胶原沉积明显改善;α-SMA和TGF-β1表达显著下调（P＜0.01）。结论：血府逐瘀汤可通过减轻肝脏炎症和抑制肝星状细胞活化而改善Con A诱导的小鼠肝纤维化。     

刚地弓形虫感染致小鼠睾丸细胞DNA的损伤作用

目的探讨刚地弓形虫感染对小鼠睾丸细胞DNA的损伤作用。方法选用9～10周龄雄性BALB/c小鼠20只,随机分为对照组(CG)和3个染虫组(G1、G2和G3)。采用腹腔注射法建立小鼠刚地弓形虫感染的动物模型,CG组注射PBS 0.2 ml/只,染虫G1、G2和G3组各注射纯化刚地弓形虫速殖子悬液0.2 ml,剂量分别为2.5×10~3个、5×10~3个和1×10~4个。应用单细胞凝胶电泳(彗星实验)检测睾丸细胞DNA的损伤。结果对照组和3个染虫组的彗星实验尾矩分别为10.94±7.57、40.37±6.25、69.76±3.97和79.16±6.36;Olive尾矩分别为10.57±6.72、31.39±4.59、48.66±4.60和53.87±6.55,对照组和实验组彗星尾矩和Olive尾矩差异有统计学意义(P<0.01)。结论弓形虫感染可致小鼠睾丸细胞DNA不同程度的损伤。对小鼠有生殖遗传毒性。     

刚地弓形虫感染对小鼠生精细胞凋亡的影响

目的探讨刚地弓形虫感染对小鼠生精细胞(单倍体、二倍体、四倍体)凋亡的影响程度,进一步阐明弓形虫致雄性不育的机制。方法选用9~10周龄雄性BALB/c小鼠60只,随机分为PBS正常对照组、刚地弓形虫纯化速殖子感染组(2.5×103、5×103、1×104、2×104)及环磷酰胺阳性对照组。采用腹腔注射法建立刚地弓形虫感染致小鼠睾丸损伤的模型,病理切片观察,流式细胞仪检测各组小鼠睾丸各倍体生精细胞的凋亡情况,免疫组化测定睾丸凋亡蛋白bcl-2、bax的变化,进行图像分析。结果正常对照组未出现明显的凋亡峰,实验组小鼠睾丸的单倍体、二倍体细胞均出现明显凋亡,尤以二倍体明显,同时四倍体细胞明显减少;睾丸细胞bcl-2的表达无明显改变,但bax的表达量随攻虫剂量增加而增加。结论弓形虫可致小鼠睾丸各级生精细胞凋亡,对二倍体细胞的影响尤为明显。     

荣肝合剂对刀豆蛋白A诱导急性免疫性肝损伤小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的:探讨荣肝合剂对刀豆蛋白A(Con A)诱导的急性免疫性肝损伤小鼠病理组织学及T淋巴细胞亚群的影响。方法:乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠60只,随机分为6组(模型组、正常组、荣肝合剂组、茵陈蒿汤组、茵陈组、联苯双酯组),每组10只,造模前14天,模型组、正常组小鼠给予生理盐水灌胃,其余组分别给予荣肝合剂、茵陈蒿汤、单味茵陈煎液、联苯双酯溶液,每日灌胃给药干预。末次灌胃给药后1h,正常组小鼠给予磷酸盐缓冲液(PBS)尾静脉注射,其余各组按照Con A3μg/g体重尾静脉注射造模。造模给药后8h处死动物取血或组织标本检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、组织病理学(光镜)及T淋巴细胞亚群等指标。结果:模型组各指标与正常组比较,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);与模型组比较,荣肝合剂组、联苯双酯组小鼠ALT、AST、TBil水平显著降低(P0.01),荣肝合剂组、茵陈蒿汤小鼠组肝细胞变性、坏死及炎细胞浸润程度较轻;各药物干预组CD4~+CD8~-T淋巴细胞所占比例均有升高,以荣肝合剂最显著,有显著性差异(P0.05);荣肝合剂组CD4~+CD8~+T淋巴细胞所占比例下降(P0.05);各中药组均可升高CD4~+/CD8~+T细胞比例(P0.05)。同时,荣肝合剂CD4~+CD8~-T淋巴细胞所占比例于其他药物干预组比较差异有显著性意义(P0.05),荣肝合剂组CD4~+CD8~+T细胞所占比例与联苯双酯组比较有显著性差异(P0.05),荣肝合剂组CD4~+/CD8~+T细胞比值与茵陈蒿汤组比较差异有显著性意义(P0.05)。结论:荣肝合剂对刀豆蛋白A所致转基因小鼠急性免疫性肝损伤具有降酶作用,同时对于肝组织有保护作用,可以减轻肝组织的炎症与坏死,其机理与调节T淋巴细胞亚群功能相关。     

EGCG对刀豆蛋白A诱导肝损伤小鼠CXCR3表达的影响

目的观察EGCG对刀豆蛋白A(Con A)诱导的肝损伤小鼠肝组织中CXCR3表达的影响。方法 C57BL/6小鼠分成4组:正常对照组、表没食子儿茶素酸酯(EGCG)对照组、Con A模型组,EGCG+Con A模型组。EGCG对照组及EGCG+Con A模型组小鼠造模前给予EGCG口服(5 mg/kg),10 d后两组模型组小鼠通过静脉注射Con A(15 mg/kg)建造肝损伤模型,采血及留取肝组织,HE法检测肝组织病理变化,ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)α,干扰素(IFN)-γ及CXCR3的水平,免疫组化法检测肝组织中CXCR3的表达。结果 Con A模型组小鼠肝损伤明显,TNF-α、IFN-γ及CXCR3的表达明显增多,与其他组比较有差异显著(P0.05);EGCG干预的模型组肝损伤减轻伴TNF-α、IFN-γ及CXCR3的表达下降,与Con A模型组比较差异明显(P0.05)。免疫组化结果同样显示Con A模型组CXCR3的表达明显增多,EGCG治疗后表达减少。结论 EGCG对Con A诱导的免疫性肝损伤小鼠有保护作用,其机制可能与调节CXCR3的表达有关。     

刚地弓形虫滑行相关蛋白的研究进展

顶复门寄生虫入侵宿主细胞的能力是其生存和致病的关键。刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是顶复门的一种专性细胞内寄生虫,无论其滑行、入侵或逸出感染细胞,都必须依靠被称为肌-动球蛋白马达(actomyosin motor,AMM)的装置提供动力。AMM主要由肌球蛋白A、1条肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC1)和2条必需轻链(essential light chain,ELC)1、2以及滑行相关蛋白(gliding-associated protein,GAP)组成。目前已经发现的GAP家族包括GAP45、GAP50、GAP80、GAP70和GAP40,它们是构成驱动寄生虫运动的滑行体的重要成分。滑行体是一个存在于寄生虫质膜与内膜复合物之间的以肌-动球蛋白为基础的动力装置。本文概述了目前对GAP构建与功能的理解以及弓形虫运动的分子基础,同时对GAP作为弓形虫病疫苗候选抗原分子作了展望。     

刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化动物模型的建立及机制探讨

目的 利用刀豆蛋白A建立昆明小鼠的肝纤维化模型并探讨其机制.方法 昆明小鼠210只,随机分为7组,正常对照A组,用刀豆蛋白A 10 mg每周1～3次(分别为B、C、D组)15 mg每周1～2次(分别为E、F组)、20 mg每周1次(G组)的不同剂量和不同注射次数,采用尾静脉注射方法攻击昆明小鼠,分别在第1周、第5周、第12周和第20周处死3只小鼠,留取肝组织标本行苏木素-伊红染色、Masson纤维染色,并行Knodell HAI和Ishak肝纤维化半定量计分,最后一次留取血清标本,检测IL-18、TNF-α和IFN-y.结果 刀豆蛋白A15 mg每周1次,10 mg每周2次组提示实验早期肝组织以坏死为主;实验中期(5～12周)坏死减轻,细小纤维条索出现;实验晚期(20周)纤维间隔逐渐增宽.10 mg每周1次组实验晚期(20周)纤维条索形成,纤维间隔有增宽趋势.10mg每周3次组和20 mg每周1次组全部死亡前,未发现有明显的肝纤维化形成.肝组织炎症活动度半定量计分显示刀豆蛋白A注射次数和注射剂量较大组评分较高(P＜0.05).肝纤维化半定量计分显示10 mg每周2次组较15mg每周1次、10mg每周1次组高(P＜0.05).各组注射刀豆蛋白A后均出现血清IL-18、TNF-α和IFN-y升高,且IL-18与TNF-α表现出相关性(r=0.889,P＜0.05).结论 利用刀豆蛋白A建立昆明小鼠的肝纤维化模型,其形成机制与IL-18、TNF-α和IFN-y的升高密切相关.