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1.
目的检测临床分离猪源致病性沙门菌四环素的耐药基因,确定沙门菌四环素耐药基因类型。方法用KB法测定分离株对四环素等21种抗生素的耐药情况,用PCR方法检测四环素耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG及tetK,并对扩增产物进行测序。结果临床分离株全部对四环素耐药,33株沙门菌中有29株扩增出tetB特异性片段,基因序列与参考菌的同源性为99%,tetB检测与药敏试验阳性符合率为87.9%。结论tetB的PCR检测对四环素耐药性具有较高的特异性,tetB基因是决定本试验中临床分离株四环素耐药的主要基因,为四环素耐药性的分子流行病学监测提供了依据。  相似文献   

2.
本研究对16株猪致病性沙门氏菌的四环素耐药性进行了检测,结果表明,沙门氏菌对四环素类抗生素产生了广泛的耐药性,耐药率达100%。对四环素耐药基因tetC进行PCR扩增,结果在12株沙门氏菌的质粒上扩增出特异性产物,与药敏试验结果阳性符合率75%,具有较高的检出率;序列分析结果表明tetC的核苷酸同源率较高,达97.7%~98.7%,建立tetC基因的PCR检测技术,为沙门氏菌对四环素耐药性的分子流行病学监测提供了有效的途径。  相似文献   

3.
目的研究沙门菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性并分析其耐药基因aph(3′)-Ⅱa的序列。方法对19株致病性猪沙门菌的氨基糖苷类抗生素耐药性进行检测;对其质粒上的aph(3′)-Ⅱa基因进行PCR扩增,选取其中任意一株(WWS171)的PCR阳性产物进行耐药基因aph(3′)-Ⅱa的序列分析。结果沙门菌对氨基糖苷类抗生素产生了广泛的耐药性,耐药率达100%;耐药基因aph(3′)-Ⅱa经PCR扩增后在13株沙门菌的质粒上出现582bp的特异性产物,与药敏试验结果的阳性符合率为68.4%,具有较高的检出率;与GenBank上发表的AF078924.1、AF188331.1、AY333434.1、AY598820.1、DQ842000.1的耐药基因aph(3′)-Ⅱa的序列完全相同。结论aph(3′)-Ⅱa的PCR检测对氨基糖苷类抗生素耐药性具有较高的特异性,aph(3′)-Ⅱa基因是决定本试验中临床分离株氨基糖苷类抗生素耐药的主要基因,为氨基糖苷类抗生素耐药性的分子流行病学监测提供了依据。  相似文献   

4.
目的 研究沙门菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性并分析其耐药基因aph(3')-Ⅱa的序列.方法 对19株致病性猪沙门菌的氨基糖苷类抗生素耐药性进行检测;对其质粒上的aph(3')-Ⅱa基因进行PCR扩增.选取其中任意一株(WWS171)的PCR阳性产物进行耐药基因aph(3')-Ⅱa的序列分析.结果 沙门菌对氨基糖苷类抗生素产生了广泛的耐药性,耐药率达100%;耐药基因aph(3')-Ⅱa经PCR扩增后在13株沙门菌的质粒上出现582bp的特异性产物,与药敏试验结果的阳性符合率为68.4%,具有较高的检出率;与GenBank上发表的AF078924.1、AF188331.1、AY333434.1、AY598820.1、DQ842000.1的耐药基因aph(3')-Ⅱa的序列完全相同.结论 aph(3')-Ⅱa的PCR检测对氨基糖苷类抗生素耐药性具有较高的特异性.aph(3')-Ⅱa基因是决定本试验中Il缶床分离株氨基糖苷类抗生素耐药的主要基因,为氨基糖苷类抗生素耐药性的分子流行病学监测提供了依据.  相似文献   

5.
伤寒沙门菌主动外排多重耐药基因acrB与表达水平研究   总被引:6,自引:1,他引:6  
目的调查临床分离伤寒沙门菌对常用抗生素的耐药情况与多重耐药主动外排基因acrB的检测、序列分析及其表达水平。方法根据NCCLS推荐的琼脂二倍稀释法测定7种抗生素对伤寒沙门菌的抗菌活性,以基因库序列为参考设计引物PCR扩增acrB、测序并用RT—PCR方法检测其表达水平。结果32株伤寒沙门菌对氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、哌拉西林、氯霉素、四环素、庆大霉素的耐药率分别为0、0、0、28.13%、43.75%、40.63%和12.5%,其中多重耐药菌10株。所有细菌均检测到多重耐药外排基因acrB.测序显示与参考沙门菌序列(No.AL627267)比较,有2处碱基变异。与大肠埃希菌(No.ECU00734)比较,碱基同源性为85.51%(61/421),提示其碱基序列同源性极高。对不同种类抗生素耐药及不耐药部分伤寒沙门菌共16株进行一步法RT—PCR检测acrB表达水平,结果所测伤寒沙门菌均检测到多重耐药外排基因acrB的表达,多重耐药株主动外排的表达较其它菌株明显增强。结论伤寒沙门菌对喹诺酮类、第三代头孢菌素类耐药率低,对哌拉西林、氯霉素、四环素耐药率相对较高,且有多重耐药。伤寒沙门菌中均存在acrAB主动外排系统,acrB与大肠埃希菌同源性高,对不同结构抗生素耐药的种类越多,表达水平越高。主动外排机制可能是伤寒沙门菌多重耐药的主要原因之一。  相似文献   

6.
目的 分析人和猪来源的德尔卑沙门菌的分子同源性,为研究多重耐药性在人畜之间传播提供分子生物学技术依据.方法 药敏试验检测人和猪来源的德尔卑沙门菌多重耐药株对10种抗菌药物的敏感性;用脉冲凝胶电泳方法(PFGE)检测菌株间的分子同源性;结合实验或电转移试验获得目标质粒,质粒酶切图谱检测质粒的同源性.PCR分析染色体介导喹诺酮耐药基因gyrA和arC,质粒可介导的喹诺酮耐药基因qnrA/qnrB/qnrC/qnrS、aac(6)-Ⅰ b-cr、qepA和oqxAB.结果 共收集48株德尔卑沙门菌,经药敏试验筛选获得11株多重耐药株(MDR),人源性8株,猪源性3株.11株菌除对氨苄青霉素、氯霉素、链霉素、磺胺和四环素(R型:ACSSuT)耐药外,所有菌株也对萘啶酸和环丙沙星耐药,6株对左氧氟沙星耐药,5株对头孢曲松耐药.PFGE分析,11株菌共分为6个克隆,3株动物源性菌株与8株人源性菌株无克隆相关性.喹诺酮耐药基因分析显示,有5株和3株动物源株检测到gyrA的Ser83Leu或/和Asp87Asn突变,6株人源株和3株动物源株检测到parC的Ser80Ile或/和Thr57Ser突变.质粒电泳分析显示,所有菌株都存在1-4条质粒条带,大小介于2~180kb,其中3株人源性菌株和1株动物源性株都存在4kb左右大小的质粒;2株动物源性菌株仅存在20 kb大小质粒.用结合实验和电转移方法,分析4kb质粒结构,证实4个质粒的酶切图谱完全一致,质粒中均存在介导外排基因oqxAB和喹诺酮耐药基因aac(6')-Ⅰ b-cr.结论 人和猪来源的德尔卑沙门菌多重耐药株中质粒介导的外排基因oqxAB和喹诺酮耐药基因aac(6')-Ⅰ b-c是喹诺酮重要的耐药机制,可能在沙门菌间传递,导致对喹诺酮类高耐药性.通过人和猪的接触或间接途径,沙门菌有传播喹诺酮耐药性的风险,同一种质粒可在人和动物中转移而传播该耐药机制.  相似文献   

7.
目的 探讨携带blaNDM-1基因布氏柠檬酸杆菌的耐药特点及同源性。方法 试验菌株为从临床尿液标本中分离到的两株耐碳青霉烯类的布氏柠檬酸杆菌。采用Vitek-2全自动微生物鉴定与药敏分析系统进行鉴定及药敏试验,PCR扩增blaNDM-1基因并测序验证,质粒接合试验了解blaNDM-1基因是否可通过质粒进行水平传播,并对两菌株进行多位点序列分型(MLST)及ERIC-PCR分析。结果 两株菌对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、四环素类、喹诺酮类和碳青霉烯类均高度耐药,并携带blaNDM-1基因。接合试验成功将两株菌的blaNDM-1基因转移至大肠埃希菌EC600。MLST分型为ST171,ERIC-PCR发现扩增条带位置完全相同,即为同一基因型。结论 检出两株具有相同基因型ST171携带blaNDM-1基因的布氏柠檬酸杆菌,且菌株对碳青霉烯类在内的多种抗生素均高度耐药。  相似文献   

8.
《中国抗生素杂志》2021,45(11):1144-1147
目的 探讨携带blaNDM-1基因布氏柠檬酸杆菌的耐药特点及同源性。方法 试验菌株为从临床尿液标本中分离到的两株耐碳青霉烯类的布氏柠檬酸杆菌。采用Vitek-2全自动微生物鉴定与药敏分析系统进行鉴定及药敏试验,PCR扩增blaNDM-1基因并测序验证,质粒接合试验了解blaNDM-1基因是否可通过质粒进行水平传播,并对两菌株进行多位点序列分型(MLST)及ERIC-PCR分析。结果 两株菌对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、四环素类、喹诺酮类和碳青霉烯类均高度耐药,并携带blaNDM-1基因。接合试验成功将两株菌的blaNDM-1基因转移至大肠埃希菌EC600。MLST分型为ST171,ERIC-PCR发现扩增条带位置完全相同,即为同一基因型。结论  相似文献   

9.
目的研究志贺菌外排泵基因emrE的耐药功能及其进化。方法以志贺菌临床多重耐药株H24基因组为模板,扩增出含emrE基因的1126bp DNA片段,将所得片段与pMD18-T载体连接,转化大肠埃希菌DH5α,对阳性克隆酶切鉴定和测序;用琼脂平皿二倍稀释法对重组菌株进行药敏测定并测定泵抑制剂CCCP对MIC值的影响;通过RT-PCR从mRNA水平检测emrE的表达水平;通过Genbank数据库对基因序列进行同源性比对,建立进化树并分析同源基因之间的关系。结果含emrE基因质粒可以提高大肠埃希菌对四环素耐药性1倍,对红霉素的耐药性1倍;对emrE基因的同源分析显示H24菌株和大肠埃希菌、其它志贺菌可归为相近一族,同源性在92%以上,与同属于肠杆菌科的欧文杆菌和沙门菌的同源性分别为70%和60%;与亲缘关系较远革兰阳性菌除虫链霉菌和结核分枝杆菌的同源性仅为47%和48%。结论志贺菌耐药株H24的emrE基因与对四环素及红霉素的耐药性相关,依据现有数据进行的emrE基因同源分析未发现有明显的基因水平转移现象。  相似文献   

10.
目的 探讨大肠埃希菌耐喹诺酮类抗菌药的相关耐药基因检测及耐药机制.方法 选取我院尿液等排泄物和分泌物标本中分离出的150株大肠埃希菌株,应用纸片扩散法进行药敏试验,采用PCR技术检测qnr以及aac(6')-Ib-cr质粒基因的表达,并对PCR产物进行DNA测序分析.结果 150株大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药率均超过50%,20株菌检出阳性基因qnrB,qnrS以及aac(6')-Ib-cr的阳性率分别为12.20%、9.76%、13.41%,共有8株菌同时携带超过2种质粒基因,其对喹诺酮类药物均耐药,同时合并有其他类型抗菌药物的耐药情况,12株菌检出单个质粒基因,其中4株对喹诺酮类敏感.结论 大肠埃希菌的耐药情况十分严重,存在qnrB、qnrS、aac(6')-1b-cr流行,并存在两种及多种耐药基因共存于同一细菌中的现象,质粒介导的喹诺酮耐药基因数量与耐药种类数量呈正相关.  相似文献   

11.
目的:建立快速鉴定葡萄球菌及检测mecA基因的多重聚合酶链反应(PCR)诊断方法。方法:以葡萄球菌16SrRNA、金黄色葡萄球菌的nuc基因以及耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的mecA基因合成3对引物,采用多重PCR扩增法,快速鉴定葡萄球菌,同时判断MRS菌株。结果:107株葡萄球菌的16SrRNA基因扩增片段全部为阳性.与常规鉴定结果符合率为100%;nuc基因阳性48株。阴性59株,与金黄色葡萄球菌核酸酶试验一致;以PBP2a乳胶凝集试验结果为金标准,苯唑西林(含2%NaClMHA)及头孢西丁纸片扩散法的敏感性为98.7%和100%,特异性分别为75.0%和82.1%:PCR扩增法的敏感性和特异性均为100%。结论:多重PCR法能快速准确地从临床分离菌株中鉴别葡萄球菌,并可同步对mecA基因进行准确检测。  相似文献   

12.
摘要:目的 及时掌握辽宁地区沙门菌整合子的分布以及对常用抗菌药物的耐药情况,获取沙门菌整合子与耐药性的相关性,从而为临床用药及治疗提供指导。方法 本文对来源于食品以及病患的149株沙门菌,利用PCR扩增的方法,进行整合子类别的筛选,并将扩增的整合子基因盒进行基因测序,同时通过药敏板测定(耐药性实验)对沙门菌与15种临床常用抗菌药物的耐药相关性进行研究。结果 149株沙门菌中未发现第II类、第III类整合子,检出第I类整合子的菌株50株,I类整合子阳性率为33.6%。50株整合子阳性菌株中25株携带耐药基因盒,片段范围从1500~1800 bp。测序结果表明,其中22株整合子携带dfrA17-aadA5基因盒,2株携带dfrA12-aadA2基因盒,1株首次检出罕见耐药基因盒linG。根据整合子携带情况不同,对15种抗菌药物的耐药率进行对比分析,结果显示整合子阳性菌对9种抗菌药物的耐药率显著高于整合子阴性菌(P<0.01),分别为氨苄西林、四环素、氯霉素、头孢噻肟、头孢唑林、庆大霉素、复方磺胺甲恶唑、阿奇霉素和环丙沙星。辽宁地区沙门菌多重耐药率达50.3%。结论 I类整合子在沙门菌中分布广泛,抗性基因表型与耐药结果相一致,整合子的携带与沙门菌多重耐药率高度相关。沙门菌对亚胺培南和头孢西丁保持高敏感率,可以用于对常规抗菌药物耐药的沙门菌的治疗。  相似文献   

13.
We sought to determine the distribution of resistance and the tetracycline resistance genes among bacteria isolated from a swine confined animal feeding facility where tetracycline-containing feed had been in use for over 20 years. Samples collected from feed, hogs, hog houses, waste lagoon, soil, surface water and well water were screened for the presence of (a) resistant Escherichia coli and enterococci and (b) tetracycline-resistant strains of all species. Genomic DNA was extracted from the latter strain collection and fragments from 16S rDNA and ten tetracycline resistance genes (tetA, tetB, tetC, tetE, tetH, tetL, tetM, tetS, tetT and rumB) were polymerase chain reaction-amplified and a partial nucleotide sequence was obtained. In this environment, 77% of E. coli and 68% of enterococci isolated were tetracycline resistant. Tetracycline resistance was found in 26 different bacterial genera and in 60 species. Single resistance gene alleles (as defined by nucleotide sequence) were present in multiple species. There was evidence of gene recombination and multiple different tetracycline resistance genes were present in single bacterial isolates. These data provide further evidence for the widespread distribution of resistance genes in microbial populations in settings in which there is ongoing subtherapeutic antimicrobial use.  相似文献   

14.
A longitudinal study was conducted in cattle to determine the antimicrobial resistance phenotypes, integron elements, resistance genes and pulsed-field gel electrophoresis fingerprints among Salmonella enterica serotype Typhimurium isolates. A total of 33 strains were isolated and categorised into Groups A, B and C during the period 1989-2004. Thirty-one strains (93.9%) showed resistance to ampicillin (A) encoded by bla(OXA-1), bla(TEM) and bla(PSE-1) genes; 84.8% showed resistance to chloramphenicol (C) encoded by floR and catA1; 97.0% were resistant both to streptomycin (S) and sulfamethoxazole (Su), the former encoded by aadA1 and aadA2; 100% were resistant to oxytetracycline (T) encoded by tetA, tetB and tetG; and 42.4% were resistant to kanamycin (Km) encoded by aphA1-Iab. Multidrug resistance types observed were ACSSuT-Km (n=13), ACSSuT (n=15), ASSuT (n=3) and SSuT (n=2). Class 1 integrons ranging from 1.0 kb to 1.9 kb were detected from 54.5% of isolates (18/33). Integrons were not detected initially (1989-1992), then during the 1993-1996 interval a high frequency of 1.0 kb and 1.2kb amplicons were detected and during 2000-2004 the amplicon size increased to 1.7 kb and 1.9 kb. We report evidence of additional integration of resistance gene cassettes as shown by integrons with increased size. Finally, group B strains showed banding patterns indistinguishable from S. Typhimurium DT104 reference strain, indicating that the DT104 lineage existed on the island since 1993.  相似文献   

15.
目的 基于多重基因遗传信息表达分析系统(GeXP)技术平台,应用CY5(荧光染料)标记的特异引物代替通用引物,建立一种高通量的葡萄球菌多重耐药基因检测法。方法 设计细菌16S rDNA、耐甲氧西林相关基因(mecA、MecA LGA251)与耐大环内酯类相关基因(ermA、ermB、ermC、sat4、msrA、ereA、ereB、mefA/E)的引物,经“PCR+琼脂糖电泳”筛查2014年1月—2016年12月中山大学附属第八医院129株耐甲氧西林或者耐红霉素葡萄球菌基因,同时优化PCR。用CY5标记上游引物5'端,制作GeXP多重PCR引物。应用多重PCR扩增多重耐药基因核酸,产物经琼脂糖电泳与GeXP毛细管电泳,分析电泳图优化PCR。应用优化后的GeXP多重PCR扩增43株葡萄球菌,验证应用效果。结果 129株葡萄球菌筛出7种基因(16S rDNA、mecA、ermA、ermB、ermC、sat4和msrA)。16S rDNA、mecA、ermA、ermB、ermC和msrA引物特异性好,但不同核酸的sat4基因能扩增出两种不同大小片段。建立的GeXP多重PCR能同时检出所有靶基因。43株葡萄球菌的检测结果与表型检测(VITEKⅡ Compact System)相符;与“PCR+琼脂糖电泳”相比:sat4符合率为97.67%(42/43),无统计学差异(P>0.05);msrA符合率为95.35%(41/43),无统计学差异(P>0.05);ermA、mecA、16S rDNA、ermB和ermC符合率均为100%(43/43)。结论 采用CY5标记特异引物应用于GeXP系统检测葡萄球菌多重耐药基因的方法可行,其特异性与敏感性高,若采用更多引物,其检测通量可进一步提高。  相似文献   

16.
目的 研究中山市西北部区域沙门菌感染患者的流行病学特征、耐药特点及其相关肠毒素基因型。方法 2015年1月-2017年12月,我院从4019例腹泻患者的粪便标本中共分离出沙门菌108株,进行血清分型及药物敏感试验,同时采用PCR方法检测其肠毒素基因(spvA、spvB、rck)。结果 108株沙门菌可分为17个血清型,以鼠伤寒沙门菌和斯坦利沙门菌为主,分别占42.6%(46/108)和15.7%(17/108),2015年分别检出伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和丙型副伤寒沙门菌各一株;108株沙门菌对氨苄西林(61.11%)和氨苄西林/舒巴坦(49.07%)耐药率最高,未发现对亚胺培南及哌拉西林/三唑巴坦的耐药菌株;在108株沙门菌中,所有菌株均含有spvA基因,34株为spvB阳性,28株为rck阳性,spvB基因阳性患者其高热、便血的比率显著高于spvB阴性患者(χ2=4.185, P<0.05; χ2=6.13, P<0.05);rck基因阳性患者其高热、便血的比率显著高于rck阴性患者(χ2=5.274, P<0.05, χ2=8.887,P<0.05)。结论 本地区沙门菌感染患者以鼠伤寒沙门菌和斯坦利沙门菌为主,高发季节集中在夏秋两季,沙门菌株耐药率较高。沙门菌感染患者高热及便血的发生率与spvB基因、rck基因的检出具有明显相关性。  相似文献   

17.
目的 对上海交通大学医学院附属新华医院引起非妊娠成人患者血流感染的无乳链球菌进行毒力基因检测和 分子分型研究。方法 收集上海市某三甲医院2012—2020年分离的引起非妊娠成人患者血流感染的无乳链球菌(group B Streptococcus,GBS)临床菌株,通过病例系统收集相应患者的临床资料进行统计分析。采用MALDI-TOF MS对菌株进行鉴 定;采用Vitek-2 Compact联合纸片扩散法(K-B法)进行药物敏感试验;采用PCR方法和琼脂糖凝胶电泳方法进行与菌株黏附、 侵袭和免疫逃逸相关的毒力基因检测;采用多重PCR方法进行血清学分型;采用MLST方法进行分子分型研究,分型结果采用 Bionumeric 8.0软件分析菌株间亲缘关系。结果 2012—2020年共分离到13株符合入组条件的GBS菌株,相应患者人群以中老 年为主,占92.4%;男女比例为3.3:1,且大部分患者有心律失常、糖尿病或肝硬化等基础疾病。药敏结果提示菌株对氨苄西 林、万古霉素、利奈唑胺、青霉素、头孢曲松、替加环素等抗菌药物仍然保持高度敏感,对克林霉素耐药率最高达84.6%,其 次是四环素(61.5%)和红霉素(53.8%)。黏附作用相关基因中fbsB、pavA基因携带率100%,而菌毛编码基因gbsPC1的携带率最低 (46.15%);侵袭力相关基因中cylX、cylD、cylG、acpC、cylZ、cylA、cylB、cylE、cylF、cylI、cylJ、cfb、hylB和bca基因的携 带率100%,cylK和spb1的携带率较低分别为7.69%和38.45%,rib基因在13株菌种均未检出。免疫逃避相关基因中cpsF、cpsE、 cpsD、cpsB、neuA、neuD、neuC、neuB和pbp1A的基因携带率为100%,bac、cpsJ、cpsI、cpsG的携带率较低。菌株的血清学分 型以Ⅰb型为主,占38.5%(5/13);13株菌共分为10种ST型,同源性分析显示菌株亲缘关系较远。结论 无乳链球菌引起非妊娠 成人患者血流感染的危险因素可能为高龄、男性以及心律失常等基础疾病,菌株对克林霉素、四环素耐药率较高,且携带较多 毒力基因,血清分型以Ⅰb型为主,但ST分型较为分散,未出现暴发流行趋势。  相似文献   

18.
目的 探究呼和浩特地区住院患者分离肺炎链球菌抗生素耐药基因及携带毒力基因分布情况,了解儿童株和成人株之间的差异。方法 收集内蒙古医科大学附属医院2010年10月-2016年4月临床患者分离89株肺炎链球菌,采用PCR技术检测其携带耐药和毒力基因表达情况,分别统计分析其在儿童及成人分布不同。结果 89株肺炎链球菌耐药基因pbp2a、pacE阳性率为100%;pbp2b、pbp3、teM、ermB、gyrB和parC阳性率在90%以上;tetM、teO基因阳性率分别为51.7%、36.0%。pbp1a和tet基因在儿童分离株和成人分离株之间有差异(χ2=5.107和22.984, P=0.01)。毒力基因stkP、nanA和piaA阳性率为100%;pcsB、phtD、pneumolysin、lytA、pspA和psaA基因阳性率均在90%以上;bacteriocin和clpP基因检测率较低,分别为79.8%和68.5%;cps2A基因在儿童株和成人株之间有差异(P=0.031)。结论 肺炎链球菌儿童分离株耐药基因携带率低于成人分离株,但毒力基因携带率明显高于成人分离株,不同人群肺炎链球菌菌分离株的生物学特征差异及其机制有待进一步研究。  相似文献   

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