用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片

组织学观察是骨组织研究的重要手段之一[1],通常由于骨组织致密,坚硬,并含有骨胶等成分,所以要切好一张高质量的切片(和软组织相比),有一定的困难[2].近年来推出了塑料包埋等[3,4]不脱钙骨切片及染色技术,但目前尚不够成熟稳定[2].我们在教学过程中用胎儿指骨的整体切片做为观察软骨内成骨和骨组织组成及细胞结构的标本,我们在制作此标本时,用Bouin液做为固定液,用氯仿做为透明剂,不需脱钙制作出切片的组织和细胞的形态结构完整,染色鲜明、色泽深浅适当,用于教学效果良好.而连着皮肤和结缔组织等一起固定包埋制作骨切片的文献极少.现将我们的经验报道如下(图1～4).     

脱钙骨冷冻切片硫堇-苦味酸染色方法

传统制作骨切片的方法是采用骨组织经过脱钙后进行火棉胶包埋切片,硫堇-苦味酸染色.火棉胶切片存在程序繁琐、周期长、切片较厚等缺陷[1].笔者采用冷冻切片法对脱钙骨进行切片,然后硫堇-苦味酸染色.结果显示,冷冻骨切片制作染色方法操作程序简便,制作周期短,染色效果理想,适用于组织学实验教学中切片的大量制作.在与骨相关的科学研究领域也有一定的应用价值.     

Research on plastic embedding combined with tetracycline fluorescence labeling in undecalcified bone tissue

目的 探讨塑料包埋技术结合四环素荧光标记制作不脱钙骨组织切片的关键步骤及应用.方法 选取四环素荧光标记的兔股骨进行塑料包埋,Leica SP 1600切片机切片,荧光显微镜观察后用苦味酸品红染色,并与常规石蜡包埋切片相比较.结果 四环素荧光标记不脱钙骨组织经塑料包埋技术处理后,可清楚地观察类骨质形成、植入体及周围骨组织的整合程度,与常规石蜡包埋相比,染色层次分明,组织移位形变小.结论 应用塑料包埋技术制作四环素荧光标记不脱钙骨组织切片,有利于行骨形态计量分析以及植入体与骨整合的研究.     

塑料包埋技术在骨组织研究中的应用

目的 研究塑料包埋技术制作的不脱钙硬组织切片,确定制作的关键步骤及用于骨组织研究的优点.方法 选取狗胫骨节段或带有金属种植体的骨材料塑料包埋,LeicaSP1600切片机(德国)切片,用苦味酸品红染色观察,并与常规石蜡包埋相比较.结果 不脱钙骨组织经塑料包埋技术处理后,可清楚地观察类骨质形成、多孔材料及种植体周围骨组织的整合程度.与常规石蜡包埋相比,染色层次分明,组织移位形变小.结论 应用规范塑料包埋技术制作不脱钙硬组织切片,更有利于行骨形态计量分析以及材料与骨整合的研究.     

塑料包埋结合四环素荧光标记制作不脱钙骨组织切片的实验研究

目的探讨塑料包埋技术结合四环素荧光标记制作不脱钙骨组织切片的关键步骤及应用。方法选取四环素荧光标记的兔股骨进行塑料包埋,Leica SP 1600切片机切片,荧光显微镜观察后用苦味酸品红染色,并与常规石蜡包埋切片相比较。结果四环素荧光标记不脱钙骨组织经塑料包埋技术处理后,可清楚地观察类骨质形成、植入体及周围骨组织的整合程度,与常规石蜡包埋相比,染色层次分明,组织移位形变小。结论应用塑料包埋技术制作四环素荧光标记不脱钙骨组织切片,有利于行骨形态计量分析以及植入体与骨整合的研究。     

塑料包埋技术在骨组织研究中的应用

目的研究塑料包埋技术制作的不脱钙硬组织切片,确定制作的关键步骤及用于骨组织研究的优点。方法选取狗胫骨节段或带有金属种植体的骨材料塑料包埋,LeicaSP1600切片机（德国）切片,用苦味酸品红染色观察,并与常规石蜡包埋相比较。结果不脱钙骨组织经塑料包埋技术处理后,可清楚地观察类骨质形成、多孔材料及种植体周围骨组织的整合程度。与常规石蜡包埋相比,染色层次分明,组织移位形变小。结论应用规范塑料包埋技术制作不脱钙硬组织切片,更有利于行骨形态计量分析以及材料与骨整合的研究。     

EDTA脱钙在骨组织大切片制片中的应用效果

骨肿瘤病理大切片可以观察组织全貌,准确评估病灶大小、侵袭范围以及手术切缘,对于确定骨肿瘤的边界和临床预后非常重要。但骨组织中丰富的钙盐导致完整制片困难,尤其是大切片的制作。普通酸性脱钙液因破坏细胞及组织结构,影响染色、镜下观察和分子检测,已不适用于日常工作,而EDTA脱钙液性质温和,能有效保护组织内的核酸和组织抗原,日益成为骨标本处理的首选[1-2]。本科室将EDTA脱钙液应用于骨组织大切片制片及染色过程,总结了骨组织大切片的制作方法,以期在临床骨病变标本的处理中推广应用。     

一种应用冷冻切片显示骨细胞的Schmorl氏硫堇-苦味酸染色法

骨组织切片制作方法可分为硬骨磨片、石蜡包埋切片、冷冻切片等几种方法[1].硬骨磨片由于骨质坚硬,磨制费时,不适宜大量制作教学切片,石蜡包埋切片,该法存在过程复杂、费时(1个月左右),而且切片染色背景深浅不一,从而影响结果的观察和分析.     

介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用

骨、含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织很坚硬,将其制成几微米切片相当困难,常用的方法是先经脱钙处理,使其变软后再切片,所以脱钙是这类组织制作病理切片的关键技术.脱钙液和脱钙方法很多,传统方法脱钙一般用硝酸,其效果不稳定,骨组织脱钙不足,切片破碎甚至切不成片且极易脱片;骨组织脱钙过度,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,造成细胞核不着色或着色很浅,从而影响对病变组织的病理诊断.已有学者对此进行了改进[1~4], 但目前尚无公认的理想方法.为此我们在工作中反复摸索,结合Plank-Rycho脱钙液总结出一套改良的脱钙液并获得了满意效果,现将此方法介绍如下.     

实验动物骨折模型不脱钙切片的制作

实验动物骨折模型不脱钙切片的制作魏典，于顺禄我们在动物骨折愈合过程的骨计量学研究中，采用了甲基丙烯酸甲丁酯进行了骨标本不脱钙包埋、切片，从而保存了骨原有矿物质及标记的四环素。因而能在荧光显微镜下进行骨组织形态计量学观察与光镜下组织学观察。１材料和方法...     

骨组织不脱钙大切片制作技术

正骨组织制片是常规病理学技术制片中的难点。骨组织富含钙盐和无机盐,必须先进行组织脱钙才能进行石蜡包埋、切片。并且脱钙过程中经常存在脱钙不彻底或过分脱钙的情况,导致无法制片或常规染色不佳。骨组织在制片过程中原有组织形态通常会发生改变,不能准确的评价骨的动态重建过程[1],如新骨的形成、骨样组织的矿化等。常规人体股骨头大标本制片,只是切取病变部位,无法整体观察骨小梁生长的结构、方向性等构筑学参数。为解决上述问题,本     

塑料不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡法对骨组织切片的比较

骨组织内含有大量的钙盐和无机盐,如不脱钙切片,常给骨组织切片和染色造成非常大的困难,直接影响实验结果。作者根据研究的需要,对塑料包埋不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡３种方法切片及染色进行比较,以便找出一种最佳切片方法。１　材料与方法１－１　塑料包埋组　所用材料是我所研究生课题实验材料。新西兰大耳白兔１０只,体重２－２～２－５ｋｇ,♀、♂不限。取双侧尺桡骨１－５ｃｍ保留周围少量肌肉。１０％中性福尔马林固定。梯度乙醇脱水。甲液：甲基丙稀酸甲酯（ＭＭＡ）７５ｍｌ,邻苯二甲酸二丁酯（ＤＢＰ）２５ｍｌ。乙液：Ｍ…     

一种简便快捷的骨及钙化组织脱钙液

脱钙是骨组织制片染色技术的关键步骤.在实践工作中以硝酸、盐酸为主配制的脱钙液,脱钙迅速,但对组织破坏程度大,影响以后染色.螯合剂是一种缓慢的脱钙剂,脱钙后染色分化仍佳,酶也不受破坏,但脱钙需花费2周至几个月时间,不能满足病理科日常工作的需求[1].现介绍一种混合脱钙液,它既对组织损害小,又简便快捷.它可促进脱钙并加快脱钙速度,同时又防止纤维性组织过度膨胀,减少对组织的破坏及对染色的影响.经此脱钙液制成的组织切片薄厚均匀,平坦完整,组织形态和细胞清晰,着色鲜艳.     

简易骨切片制作法

脱灰骨切片的制作,一般采用火棉胶切片或冰冻切片,用特殊方法染色,在切片制作上都比较麻烦,而骨磨片是将未脱钙的骨,经过仔细研磨制成不染色的较薄磨片,用空气封闭法封片或用特殊染色法染色均能显示骨陷窝及骨小管.这种方法在磨片过程中比较困难,费时费力.作者从以上两种方法得到启发,用脱钙骨切片,并用空气封闭法封片,显示骨陷窝及骨小管,此法操作简便,易掌握,结果优良,与骨磨片相一致.1 材料与方法取人的新鲜肱骨一块,用10%福尔马林固定1周左右,中间换几次固定液,然后锯成1～2mm厚的骨片.流水冲洗24小时,进入100%酒精充分脱脂后,再浸入100%酒精数次,将最后一次酒精倒出50%于水中,与水充分混合,若无脂类悬浮物存在,说明脱脂充分,蒸馏水洗.入下列脱钙液快速脱钙:7.5%硝酸3小时,10%盐酸3小时,5%蚁酸5小时,三氯醋酸3小时     

复合配方脱钙液处理兔股骨髁标本

背景：兔骨缺损修复模型被广泛应用于骨替代材料的研究中,在实验过程中经常需要对兔股骨髁标本进行脱钙制作病理切片,但普遍存在脱钙困难的问题。 目的：尝试应用一种复合脱钙液实现软骨覆盖兔股骨髁有效脱钙。 方法：取兔股骨髁标本12个,分为2组,分别用自制复合脱钙液和普通甲酸脱钙液进行常温条件下的脱钙处理,复合脱钙液的组成比例如下：盐酸8 mL,甲酸10 mL,醋酸5 mL,中性甲醛固定液100 mL。在经过1周的常规脱钙过程之后,进行标准化的脱水、包埋、切片和染色程序。统计切片的完整率,观察苏木精-伊红染色后切片的质量和细微结构,并对两种脱钙液的经济性进行比较。 结果与结论：复合脱钙液组的切片完整率显著高于甲酸组,差异有显著性意义(74% vs18%,P < 0.05)。复合脱钙液组的切片着色优良,背景清亮,微观结构清晰,细微结构保存完整,不同组织染色对比鲜明。该复合脱钙液的应用成本较常用的甲酸脱钙液降低65%。提示自制复合脱钙液可有效解决兔骨缺损修复模型实验中的脱钙困难问题,且复合脱钙液配置简便,成本低。     

骨和牙切片的甲酸氯化铝脱钙液及脱钙方法

骨和牙体组织非常坚硬,将其制成几微米薄切片难度较大。常用的方法是先脱钙,使组织变软后再切片,所以脱钙是非常关键的技术。脱钙不好切片破碎甚至切不成片,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,染色不佳甚至染不上色,无法进行观察和研究。脱钙液和脱钙方法虽然很多,但目前尚无公认的理想方法,为此我们在骨和口腔疾病诊断及在大骨节病、氟中毒骨病和很多口腔疾病实验研究中,证明甲酸氯化铝脱钙液及脱钙方法效果优良。     

骨组织脱钙及其脱钙后染色的研究

近年来为配合白血病、淋巴瘤等疾病的诊断而开展了骨髓穿刺活体组织病理检查,特别是2003年以来,为了配合“非典”患者治疗后期相继出现股骨头坏死等病症的科研工作,我科先后为中国医学科学院实验动物研究所及中国人民解放军军事医学科学院等科研单位制作了大量实验动物的骨组织标本的病理学切片。在制作这些骨组织病理切片的“脱钙-染色过程中”遇到了一些问题：骨组织脱钙不足（脱钙液浓度过低、时间过短）造成组织太硬,不易切片且极易脱片;骨组织脱钙过度（脱钙液浓度过高,时间过长）严重影响骨髓组织细胞染色效果,造成细胞核无法正常着色,要么细胞核不着色或着色很浅亦或被伊红染成红色,从而影响对病变组织的病理诊断及实验动物的研究工作。为解决出现的上述问题,我们在工作中认真仔细地分析研究了骨组织的特点,经过反复实验,摸索总结出一套适用于骨穿组织及实验动物骨组织的“脱钙-染色方法”,并获得了满意的结果,现将将此方法作一简单介绍以供读者参考。     

骨切片染色方法的研究

<正>骨主要由骨组织、骨膜及骨髓构成骨组织(osseous tissue)是骨的结构主体,含有大量骨盐沉[1]积为坚硬的结缔组织。对于骨组织微细结构的了解一般通过骨磨片观察认识,在组织学实验教学中,能够观察到形态完整,结构清晰的各种骨细胞,选择良好的骨切片标本脱蜡,染色方法十分重要。笔者结合教学实践,经过长期实验探索,认为采用纸压吸附法脱蜡,Schmorl氏硫堇-苦味酸染色法制作教学骨切片,效果较为满意。     

四种脱钙液对骨和骨髓组织及结构影响的比较

背景：由于骨和骨髓组织结构非常特殊,在常规的病理制片过程中,要同时显示坚韧质硬的骨组织和含有多种幼稚娇嫩造血细胞的骨髓组织是非常困难的。目的：选择一种既能完全除去骨组织中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞结构不受破坏的最佳脱钙液。方法：将含骨髓组织的犬长骨组织随机分4组,同等条件下,14%硝酸甲醛生理盐水溶液;14%硝酸水溶液;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液和20%甲盐酸水溶液4种不同脱钙液脱钙,记录脱钙时间,常规脱水、切片、苏木精-伊红染色,镜下观察,对比4种脱钙液对骨和骨髓组织常规病理切片质量和其苏木精-伊红染色效果。结果与结论：14%硝酸甲醛生理盐水溶液组脱钙能力最强,脱钙最均匀,耗时最短,既能有效完全除去骨皮质中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞的形态完好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果最佳;14%硝酸水溶液组脱钙液,使骨组织疏松发泡,组织变黄,对组织的损伤大,脱钙不均匀,组织切片不完整,制片质量和苏木精-伊红染色的效果最差;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组对组织的脱钙能力、损伤程度、制片质量和苏木精-伊红染色效果都比14%硝酸甲醛生理盐水溶液组稍差;20%甲盐酸水溶液组对骨和骨髓组织的损伤小,脱钙效果好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果佳,介于20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组和14%硝酸水溶液组之间。结果表明,4种脱钙液对骨和骨髓组织都具有良好的脱钙能力,制片质量及苏木精-伊红染色效果比较,14%硝酸甲醛生理盐水溶液> 20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液> 20%甲盐酸水溶液> 14%硝酸水溶液;14%硝酸甲醛生理盐水溶液最适用于临床常规病理制片中骨和骨髓组织的脱钙。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

几种半薄切片染色法的比较与改进

半薄切片是超薄切片前的一个重要步骤。光镜检查半薄切片,可确定电镜观察部位,判断组织固定和包埋的质量。半薄切片染色法很多,我们对几种常用方法进行了一些比较和改进,现将实践中的体会介绍如下,供参考。一、方法及结果:用Epon812包埋的组织块切成1微米或1.5微米厚的半薄切片,捞到滴有蒸馏水的载片上,在烘箱内烤干,待染色。1.甲苯胺兰染色法:将染液滴于切片上,在酒精灯上加热数秒钟,勿煮沸,流水冲洗,自然干燥,树胶封固后观察。不必经酒精及二甲苯,免切片皱缩不平。如染色适度,组织染成兰色,结构清楚,而树脂无色。2.苏木精—伊红染色法:锇酸固定、树脂包埋的组织,用此法难于着色,一般须先用氢氧化钾溶液脱去树脂,然后染色.为避免氢氧化钾液对组织可能产生的损伤,我们参考Chang法改用2.5%高碘酸处理切片,并用滴