早期乳腺癌hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞检测及其临床意义

 目的 研究早期乳腺癌hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞检测的临床意义。 方法 巢式RT PCR检测50例早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血hMAM mRNA阳性细胞,随访。24例乳腺良性疾病患者和20例健康体检志愿者作对照。 结果 早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞hMAM mRNA阳性率26.0%,与良性乳腺疾病患者（4.2%）、健康体检志愿者（0%）比较,差异有统计学意义(分别为P=0.025、P=0.012);其hMAM mRNA阳性率与癌组织HER2过表达相关（P=0.037）;13例阳性患者中8例（61.5%）随访出现复发转移（P=0.004）,中位无瘤生存期明显降低（P=0.002）。 结论 hMAM mRNA是检测乳腺癌循环肿瘤细胞较为理想的分子标记物。早期乳腺癌患者术后辅助治疗前hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞检测,可能是预测复发转移和预后不良的辅助指标。     

hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值

目的:评价hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值.方法:采用RT-PCR检测早期乳腺癌患者CK19、hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞.结果:hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞阳性率(52.0%)均高于良性乳腺疾病患者(16.7%)和健康体检者(5.0%), P值分别为0.004和0.000;阳性率与癌组织HER-2过表达相关,P=0.049.联合检测的敏感度为57.5%,特异度为88.6%.26例联合检测阳性患者,13例随访期出现转移复发,P=0.001;中位无瘤生存期明显降低,P=0.000.结论:hMAM和CK19 mRNA是一组敏感度和特异度较好的诊断早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞的基因标志,可能作为早期乳腺癌术后监测转移复发辅助指标.     

大肠癌患者外周血CK19和MUC-1 mRNA水平及其临床意义

目的 探讨大肠癌（CRC）患者外周血中角蛋白（CK）19、黏蛋白（MUC）-1 mRNA水平并分析两者与临床病理特征的关系。方法 采用巢式逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测20例健康体检者（健康组）、20例大肠良性腺瘤患者（良性疾病组）及90例CRC患者（CRC组）的外周血CK19和MUC-1 mRNA水平,并分析两者与CRC临床病理参数（Dukes分期、分化程度、远处转移及组织学类型）的关系。结果CRC组CK19 mRNA阳性率为58.9％（53／90）,均高于健康组的0和良性疾病组的5.0％（1／20）,差异有统计学意义（P＜0.05）;CRC组MUC-1 mRNA阳性率为52.2％（47／90）,与健康组的60.0％（12／20）和良性疾病组的50.0％（10／20）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;健康组和良性疾病组CK19 mRNA、MUC-1 mRNA阳性率的差异无统计学意义（P＞0.05）。CRC中CK19 mRNA和MUC-1 mRNA阳性率均与Dukes分期、分化程度及远处转移有关（P＜0.05）,但与组织学类型无关（P＞0.05）。 结论 CRC患者外周血中CK19 mRNA阳性率明显升高,且外周血中CK19mRNA、MUC-1 mRNA与Dukes分期、分化程度及远处转移有关,提示两者可能在CRC发生发展中均有重要意义。     

MUC1和CK7在乳腺癌外周血微转移检测中的应用

目的：以MUC1和CK7为基因标志物检测乳腺癌患者外周血中播散的肿瘤细胞，探讨肿瘤基因标志物在乳腺癌微转移诊断中的意义。方法：采用RT—PCR法检测乳腺癌患者外周血中有核细胞的MUC1和CK7mRNA表达。结果：1）检测15例正常人外周血MUC1、CK7mRNA表达，结果无假阳性；将乳腺癌细胞系MCF-7分别以1：10^5、1：10^6与正常外周血有核细胞混合，检测MUC1、CK7表达，结果无假阴性。2）检测35例乳腺癌患者外周血，以MUC1为标志物，外周血中肿瘤细胞检出率为30_3％（11／35）；以CK7为标志物，外周血中肿瘤细胞检出率为35．0％（12／35）。3）35例患者中有4例MUC1、CK7均表达阳性，7例仅MUC1表达阳性，8例仅CK7表达阳性，两种肿瘤标志物表达患者有交叉但不重叠。结论：以MUC1、CK7为基因标志物，采用RT—PCR方法检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞可能在乳腺癌微转移诊断及乳腺癌预后中具有意义，多种肿瘤基因标志物联合检测结果优于单一标志物检测。     

乳腺癌患者外周血CK19 mRNA表达及不同化疗方案对其影响

目的以CK19（cytokeratin-19）mRNA为基因标志检测不同乳腺癌患者外周血肿瘤细胞,检测化疗前后外周血有核细胞CK19 mRNA表达量的改变及其与临床病理因素的关系,比较不同化疗方案下外周血有核细胞CK19 mRNA表达量的变化。方法采用实时定量RT—PCR方法检测217例乳腺癌患者外周血CK19 mRNA表达（17例导管内癌、176例浸润性导管癌和24例乳腺癌远处转移）。217患者中有67例完成了化疗全过程常规取血和查血,对这些患者的化疗前后外周血CK19 mRNA拷贝数的改变及其与临床病理因素的关系进行分析。化疗方案为CEF方案（CEF组23例）、TEC方案（TEC组28例）和TP方案（TP组16例）,3组均行化疗6个周期,21d为1个周期。由于217例患者拷贝数改变值在各组中的分布均不符合正态分布,统计学分析采用非参数秩和检验。结果在导管内癌组、浸润性导管癌组和乳腺癌转移组3组间,外周血CK19 mRNA拷贝数差异有统计学意义（P=0．048）,乳腺癌远处转移组外周血CK19 mRNA拷贝中位数高于导管内癌组和浸润性导管癌组（P〈0．050）。67例患者中,化疗前后外周血CK19 mRNA拷贝数改变在临床分期组间差异有统计学意义（P=0．041）,临床Ⅳ期患者化疗前后外周血CK19 mRNA拷贝数改变的中位数高于Ⅰ～Ⅲ期患者（P〈0．050）。PCNA阳性患者化疗前后外周血CK19 mRNA拷贝数改变的中位数高于PCNA阴性患者,两组间差异有统计学意义（P=0．032）。肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级、ER、PR、以及HER-2亚组间化疗前后外周血CK19 mRNA拷贝数改变的差异均无统计学意义（P〉0．050）。3组患者化疗后外周血CK19 mRNA拷贝数均有改变,3组间差异有统计学意义（P=0．011）。结论乳腺癌患者外周血CK19 mRNA表达可以提示转移风险,TEC方案较TP和CEF方案对外周血CK19 mRNA表达量改变的影响更显著,因此可以通过检测?     

荧光定量PCR检测上皮性恶性肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA

[目的]探讨荧光定量PCR技术检测外周血CK19、CK20mRNA对上皮性恶性肿瘤微转移的临床意义.[方法]采用荧光定量PCR技术检测41例上皮性恶性肿瘤患者术前外周血CK19、CK20mRNA的表达情况.[结果]41例肿瘤患者中CK19mRNA阳性率26.82%,CK20mRNA阳性率21.95%,两者均阳性5例(12.19%).CK19、CK20mRNA阳性率与患者的性别、年龄、肿瘤发生部位、肿瘤细胞分化程度无关(P＞0.05),而与肿瘤分期相关,其差异有显著性.[结论]CK19、CK20mRNA可作为一个检测上皮性恶性肿瘤患者外周血微转移标志物,两者联合检测可提高外周血癌细胞的检出率.     

可手术乳腺癌循环肿瘤细胞与原发肿瘤临床病理特征的关系

目的探讨可手术乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞（CTCs）的阳性率及其与原发肿瘤临床病理特征的关系。方法以2010年9月至2011年5月期间南京医科大学第一附属医院收治的94例可手术乳腺癌患者为实验组,20例健康志愿者及20例乳腺良性疾病患者为对照组,抽取实验组及对照组患者的外周静脉血10ml,用密度梯度离心法富集分离单个核细胞,以多标志物（CK19、人乳腺珠蛋白、小黏蛋白）联合的实时荧光定量PCR法检测CTCs。采用皮尔逊x。检验分析可手术乳腺癌组与对照组外周血CTCs阳性率的差异,以及CTCs与原发肿瘤临床病理特征的关系。结果可手术乳腺癌组外周血CTCs阳性率显著高于对照组[56％（53／94）比5％（2／40）,X^2=30．62,P=0．00]。可手术乳腺癌患者外周血CTCs阳性率在不同的年龄、绝经状态、肿块大小、淋巴结转移、TNM分期、病理分级、病理类型、激素受体状态、HER-2表达、是否为三阴性乳腺癌、分子分型、P53表达、Ki67表达以及增殖细胞核抗原（PCNA）表达分组问差异无统计学意义（P值均〉0．05）。结论可手术乳腺癌患者外周血CTCs的阳性率较高,但其与原发肿瘤临床病理学特征无关系。     

新辅助化疗前后乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19表达变化及其临床意义

目的探讨细胞角蛋白（CK）19在乳腺癌新辅助化疗前后表达的变化及其临床意义。方法采用实时定量RT-PCR技术检测86例乳腺癌患者新辅助化疗前后外周血CK19 mRNA的表达变化,将30例乳腺良性疾病患者和20例健康体检志愿者作为对照。对非正态分布或方差不齐的数据采用Wilcoxon非参数秩和检验,用中位数±百分位数之差[M（Q_R）]表示,计数资料组间采用χ~2检验。结果新辅助化疗前乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA阳性表达率为32.56%（28/86）,与腋窝淋巴结转移、临床分期有关（分别P〈0.001）;而新辅助化疗后阳性表达率为13.95%（12/86）,化疗前后CK19mRNA表达差异具有统计学意义（P=0.004）;新辅助化疗后CK19 mRNA阳性表达的患者中,57.14%（16/28）获得临床完全缓解成部分缓解,低于CK19 mRNA阴性患者的93.10%（54/58）,差异有统计学意义（P〈0.001）,这提示CK19 mNRA表达水平变化可能与新辅助化疗疗效有关。结论 CK19可作为新辅助化疗疗效判定的早期预测指标之一。     

hMAM mRNA和CEA mRNA RT-PCR检测乳腺癌外周血微转移

目的:应用RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血中的hMAM mRNA和CEA mRNA表达情况.方法:用RT-PCR法,检测52例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA和CEA mRNA的表达情况,另抽取28例乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血标本作为对照.结果:52例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA和CEA mRNA的阳性率分别为30.8%、34.6%.28倒乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血中hMAM mRNA、CEA mRNA表达均为阴性.二者的阳性表达与患者的腋淋巴结状况、TNM分期差异均有显著性意义(P＜0.05),而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型以及激素受体状况等差异均无显著性(P＞0.05).结论:hMAM mRNA、CEA mRNA均可作为标志物来检测乳腺癌患者外周血中微转移,联合检测可增加外周血中循环肿瘤细胞的检出率.     

hMAM mRNA在检测乳腺癌外周血微小转移中的应用

目的 探讨乳腺组织特异性基因hMAM mRNA作为检测乳腺癌血道微小转移指标的可能性。方法 采用巢式PCR结合荧光定量PCR,对63例乳腺癌患者、8例乳腺增生患者、5例乳腺纤维腺瘤患者、25例其他癌患者以及31例健康志愿者的外周血进行检测。结果63例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA阳性率30．2％（19／63）,手术后阴转率为31．6％（6／19）。乳腺良性疾病、胃癌、大肠癌、食管癌、肺癌、卵巢癌患者外周血中均阴性,而31例健康献血员中有1例阳性。hMAM mRNA表达随肿瘤分期进展阳性率增高,但与肿瘤分期、ER和PR状态无关（P＞0．05）。结论 hMAM mRNA特异表达于乳腺癌患者外周血,有可能作为检测乳腺癌血道微小转移的指标。     

早期乳腺癌CEA mRNA阳性循环细胞检测及其临床意义

[目的]研究早期乳腺癌外周血中CEAmRNA阳性循环肿瘤细胞的临床意义。[方法]检测50例早期乳腺癌患者、24例乳腺良性疾病患者和20例健康志愿者外周血CEAmRNA阳性细胞。[结果]早期乳腺癌患者外周血CEAmRNA阳性率为14．0％,CEAmRNA阳性率与TNM分期（P=0．004）、肿瘤大小（P=0．027）、血清CEA（P=0．000）水平异常升高显著性相关。CEAmRNA阳性患者中位无瘤生存期为18个月,与阴性患者比较差异有统计学意义（P=0．000）。[结论]CEAmRNA阳性循环肿瘤细胞可能是早期乳腺癌患者监测复发转移的重要指标和独立的预后因素。     

Assessment of highly angiogenic and disseminated in the peripheral blood disease in breast cancer patients predicts for resistance to adjuvant chemotherapy and early relapse

The assessment of tumor molecular features in combination with the detection of occult malignant cells may provide important clinical information, beyond the standard staging of breast cancer. Using a nested RT-PCR technique, we assessed prospectively the presence of cytokeratin-19 (CK19) mRNA positive cells in the blood of 100 operated patients with breast cancer before the initiation of adjuvant chemotherapy and local radiotherapy. Tissue samples were prospectively collected and analyzed for estrogen (ER) and progesterone (PgR) receptor, c-erbB-2 overexpression, mutant-p53 and bcl-2 protein accumulation, proliferation index and microvessel density (MVD). CK-19 mRNA-positive cells were detected in the peripheral blood of 33% of patients. Simultaneous display of high intratumoral MVD and of CK-19 mRNA-positive cells, which characterized highly angiogenic and disseminated in the peripheral blood (HAD) disease was noted in 25% of patients. Detection of CK-19 positive cells was significantly associated with increased MVD (p = 0.002). In univariate analysis (median follow-up 30 months) CK19 mRNA detection and MVD were the most significant factors related to a short relapse-free survival (RFS), (p < 0.0001). In multivariate analysis, CK19 positivity, high MVD and c-erbB-2 overexpression were the only significant and independent variables associated with relapse (p = 0.0005, 0.03 and 0.04, respectively). Patients with HAD had an expected relapse rate close to 70% vs. <5% in the remaining patients irrespectively of the used chemotherapy regimen. The simultaneous presence of high MVD and CK19-positive cells in the blood of patients with early breast is linked with poor prognosis, which cannot be improved with standard chemotherapy regimens.     

Clinical significance of immunocytochemical detection of tumor cells using digital microscopy in peripheral blood and bone marrow of breast cancer patients.

PURPOSE: The presence of tumor cells in bone marrow has been reported to represent an important prognostic indicator in breast cancer, but the clinical significance of circulating cells in peripheral blood is less well known. The aim of this study was to evaluate the feasibility of identifying cytokeratin (CK)-expressing cells in peripheral blood with an automat-assisted immunohistochemical detection system and to compare it with detection of tumor cells in bone marrow samples. EXPERIMENTAL DESIGN: Cytospun Ficoll fractions of peripheral blood and bone marrow were obtained simultaneously in 114 breast cancer patients at different stages of the disease (I to IV) before treatment with chemotherapy. The pancytokeratin (CK) monoclonal antibody A45-B/B3 (anti-CKs 8, 18, and 19) was used for epithelial cell detection. Immunostained cells were detected by an automated cellular imaging system (ChromaVision Medical System). RESULTS: CK+ cells were detected in 28 (24.5%) patients in blood and in 67 (59%) patients in bone marrow. Twenty-six (93%) patients with CK-positive cells in blood also had positive bone marrow (P < 0.001). Positive cells were detected in peripheral blood in 3/39 (7.5%) operable breast cancers (stage I/II), 9 of 36 (25%) locally advanced breast cancers (stage III), and 16 of 39 (41%) patients with metastatic disease (stage IV; P = 0.017). In the subgroup of nonmetastatic patients (n = 75), prognostic factors for poor disease-free survival were: absence of estrogen receptor; presence of CK+ cells in bone marrow (P = 0.012); clinical nodal involvement; large tumor size (T4); and presence of tumor emboli. Presence of circulating CK+ cells in the peripheral blood was not statistically correlated with disease-free survival. On multivariate analysis, independent indicators for disease-free survival were: absence of estrogen receptor (P = 0.043) and presence of CK+ cells in bone marrow (P = 0.076). CONCLUSIONS: The clinical relevance of circulating epithelial cells as a prognostic factor is not supported by the present data, especially in comparison with tumor cells in the bone marrow. However, this method of detection may be useful to monitor the efficacy of treatment in advanced or metastatic breast cancer.     

CK19和hMAM及SBEM检测乳腺癌微转移价值分析

目的：探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白（smallbreastepithelialmucin,SBEM）、乳腺珠蛋白（humanmamma—globin,hMAM）和细胞角蛋白19（cytokeratin19,CK19）检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法：收集2012-04—13—2012-10—10广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科首诊的患者外周血及组织标本。采用巢式PCR技术对47例乳腺癌患者和45例乳腺良性肿瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的mRNA进行检测;采用半定量PCR技术对10例乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以及10例乳腺良性肿瘤患者组织mRMA进行检测;采用免疫组化技术对其中27例乳腺癌患者的109个淋巴结进行检测。结果：乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血SBEM表达率分别为82．98％（39／47）和62．22％（28／45）,χ2=5．005,P=0．021;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血hMAM表达率分别为65．96％（31／47）和42．22％（19／45）,差异有统计学意义,χ2=5．220,P=0．022;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血CK19表达率分别为89．36％（42／47）和80．00％（36／45）,差异无统计学意义,χ2=1．562,P=0．211。免疫组化CK19在52个转移性淋巴结中强阳性表达,在57个常规病理检查未发现的转移性淋巴结中检出5个淋巴结存在转移灶;hMAM及SBEM在转移性淋巴结中表达比CK19弱,而且阳性细胞染色不均一。结论：SBEM、hMAM和CK19作为乳腺癌外周血微转移生物学标志具有较高的灵敏性,但缺乏特异性,联合检测可以提高特异性,对发现早期乳腺癌微转移有一定临床意义;CK19可用于检测乳腺癌腋窝淋巴结的微小转移灶。