浓缩剂-聚丙烯酰胺凝胶颗粒的研究

目的 研制一种新型微小蛋白质浓缩凝胶颗粒,应用于医学免疫试验中待检样品的浓缩,间接提高检验试剂的灵敏度.方法 研究聚丙烯酰胺凝胶颗粒制备原理,以丙烯酰胺(ACR)为原料,采用自定工艺制备流程,通过化学聚合方法,进行聚丙烯酰胺凝胶颗粒的聚合、切割、干燥、成粒;不同交联度胶粒吸附蛋白质、吸水试验;胶粒吸水吸血清性能、速度试验;低含量HBsAg定值参考水样品、血清样品浓缩试验.结果 研制7mm×2mm×2mm长方体脱水干燥的聚丙烯酰胺凝胶颗粒.每粒平均重量0.05克,吸水倍率7.66倍、吸血清倍率6.33倍.浓缩HBsAg定值参考水样品及血清样品后经酶联免疫法检测灵敏度达0.025 ng/ml、0.04 ng/ml,大于目前检测HBsAg ELISA试剂盒灵敏度为0.5 ng/ml水平.结论 聚丙烯酰胺凝胶颗粒,具有使用简单、方便、快速、成本低廉等特点.通过对样品浓缩,能够提高检验试剂的灵敏度,为医学检验提供了一种新的蛋白质浓缩手段.     

医用聚丙烯酰胺凝胶颗粒的制备

目的 研制一种医用聚丙烯酰胺凝胶颗粒.方法 采用有机玻璃板、钢丝材料,通过切割、粘合、固定制成一种凝胶颗粒制备工具,工具由条形凝胶模具、方形凝胶器、切割器、凝胶造粒器、推进柄五部分构成,确立了医用凝胶颗粒制备方法.结果 制备的聚丙烯酰胺凝胶颗粒,适合医学实验室中对检测样本的浓缩,提高检测灵敏度.结论 聚丙烯酰胺凝胶颗粒,根据凝胶特性设计,结构简单,制作成本低廉,使用方法简便.     

胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原的应用评估

目的 对胶体金免疫层析法(GICA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的特异性、灵敏度、重复性、试条渗透性、固相膜均匀性等技术参数进行试验比较和评价,为此技术应用提供可靠的依据.方法 采用GICA和酶联免疫吸附试验法(ELISA)对定值的HBsAg质控品和520份血清标本同时测定,再结合物理试验,并对结果进行评价.结果 GICA检测HBsAg的灵敏度为2ng/ml,ELISA为0.5ng/ml;GICA对HBsAg的检出率为ELISA的98%,两种方法间差异无显著性(P＞0.05);未发现前带反应和假阳性,重复性和稳定性好.结论 GICA简便、快速、可单份测定,虽灵敏度略低于ELISA,仍是一种较好的快速初筛方法.     

60例肾脏病人的尿蛋白盘状电泳分析

现将60例肾脏病人的尿蛋白盘状电泳分析结果报道如下。基本原理丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合成三维网状结构的凝胶,具有分子筛、浓缩和电荷效应。用十二烷基硫酸钠(SDS)与尿中蛋白质反应,形成带负电的SDS-蛋白质复合物,消除了蛋白质分子间原有的电荷差异。电泳时各种蛋白质都向正极移动,通过聚丙烯酰胺的浓缩效应和分子筛作用,分子量小的迁移较快,分子量大的迁移较慢,从而将蛋白质按分子量大小分离开来。材料与方法根据莽克强及陈梅芳等的方法略加修改、简化。尿蛋白定量用三氯醋酸法,上样量一律用200微克,标准蛋白用牛血清白蛋白。     

某医院住院患者乙肝患病率调查

目的 了解沭阳县人民医院住院患者乙肝感染情况及检验结果模式.方法 回顾性分析201 1年7月至2013年7月我院住院患者中所有检查乙肝定量患者,用时间分辨荧光免疫测定乙肝五项,0.2 ng/ml＜HBsAg＜10 ng/ml及HBsAg和HBsAb同时阳性的检测结果用上海科华乙肝定性试剂复核.结果 共检测11 826例,HBsAg阳性者768人,阳性率6.5％; HBsAg检测结果为0.2～1.0 ng/ml、1.1～10.0 ng/ml、10.1～100.0 ng/ml、100.1～225.0 ng/ml、＞225.0 ng/ml的人数分别为10人、27人、86人、119人、526人,阳性比率分别为1.3％、3.5％、11.2％、15.5％、68.6％; HBsAg和HBsAb同时阳性者占1.3％（10/768）;HBsAg、HBeAg和HBcAb同时阳性者占15.5％（199/768）,HBsAg、HBeAb和HBcAb同时阳性者占62.8％（482/768）.结论 本次被调查者的患病率比较高,应依据感染模式做到早预防、降低感染率,提高本地区人群的健康水平.     

重组哺乳动物细胞培养中产生的含前S的HBsAg的提纯和鉴定

作者用重组技术,在小鼠细胞培养中成功地表达了富含前S蛋白的HBsAg.将分泌HBsAg的细胞悬液低速离心除去细胞碎片后超过滤浓缩10倍.用硫酸铵或聚乙二醇(PEG)沉淀蛋白质后进行凝胶过滤柱层析分离.用氯化绝或溴化钾等密度离心和蔗糖密度梯度超离心后,收集含有HBsAg颗粒的紫外监测峰区,用XM-300滤膜超过滤.在提纯过程中,用ELISA定量检测每一个步骤的HBsAg含量.用DNA斑点杂交试验测定最终提纯物     

磺达肝癸钠注射液细菌内毒素检查方法的建立

目的:建立磺达肝癸钠注射液细菌内毒素的检查方法。方法:按2010年版《中国药典》版附录细菌内毒素凝胶检查法的要求,通过干扰试验确定样品最大无干扰质量浓度,并进行方法学验证。结果:样品稀释至质量浓度0.01 mg/ml(鲎试剂标示灵敏度为0.25 EU/ml)或0.005 mg/ml(鲎试剂标示灵敏度为0.125 EU/ml)时对细菌内毒素检查无干扰作用。结论:建立的方法可用于磺达肝癸钠注射液的细菌内毒素检查。     

时间分辨荧光免疫技术检测乙肝血清标志物的临床应用评价

目的对时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）定量检测乙型肝炎病毒（HBV）五个血清学标志物进行临床评价。方法用TRFIA法和酶免法（EIA）对定值样品和355份临床标本同时测定,对两种方法的结果进行比较分析。结果TRFIA检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb的灵敏度分别为0．2ng／ml、10mIU／ml、0．05Ncu／ml、2Ncu／ml和0．2Ncu／ml;对355份临床血清测定,除HBeAg外,其余4个指标检测阳性率均大于EIA,两个高浓度HBsAg血清EIA法阴性,但TRFIA为阳性。结论TRFIA较EIA更为敏感;TRFIA在一定程度上可克服EIA法中的高剂量钩状效应。     

HBsAg金标试剂质量评价

目的　优选一种适宜于献血员HBsAg筛查的试验试剂。方法　采用HBsAg金标试纸法对卫生部临检中心HBsAg考核盘一套、质控定值血清 ,与本室留取ELISA法阴性标本、不同滴度的阳性标本等进行检测并做统计学处理。结果　四种厂家金标试剂特异性均为 10 0 % ,灵敏度分别为 90 .90 %、85 .71%、84 .5 0 %、76 .92 % ,总符合率分别为 95 .0 8% (116 / 12 2 )、92 .0 6 % (116 / 12 6 )、91.33% (116 / 12 7)、86 .5 6 % (116 / 134) ,第四种试剂与预期值差异具有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　不同厂家金标试剂质量存在明显差异 ,因此要选择具有特异性强、灵敏度高的试剂 ,以更加适宜于献血员的筛查 ,降低成品血液的报废率     

HCV抗原/抗体联合检测试剂的初步性能评价

目的  研制HCV抗原/抗体（HCV antigen/antibody,HCV-Ag/Ab）联合检测试剂,并对其性能进行初步评价。方法 制备2种HCV多表位嵌合抗原和2株抗HCV核心抗原（HCV core antigen,HCV-cAg）单克隆抗体（单抗）,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后,制成HCV双抗原夹心与双抗体夹心ELISA检测试剂。用HCV-Ag/Ab联合试剂对903份血液样品进行检测。对于检测结果与HCV-Ab诊断试剂盒不一致的样品,用MP HCV BLOT 3.0确证试剂确认。采用卡方检验对数据进行分析。结果 2种HCV嵌合抗原的相对分子质量约为45 000,与理论预测一致。2株抗HCV-cAg单抗大小正确,且纯度较高。HCV-Ag/Ab联合试剂的特异性达到100%,HCV-Ag检测灵敏度为10⁴ IU/ml,HCV-Ab检测灵敏度为0.1 国家临床单位/ml。联合试剂与HCV-Ab诊断试剂盒检测结果的差异无统计学意义（χ²=0.016 3,P>0.05）。确证试剂对2份HCV-Ab检测不一致样品的确认结果与联合试剂相同。 结论 制备的HCV-Ag/Ab联合检测试剂特异性强、灵敏度高,适用于血液筛查和临床辅助诊断。     

高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中6种青霉素类药物的残留量

目的 建立一种高效液相串联质谱法,快速测定牛奶中6种青霉素类抗生素的残留鼍.方法 样品经乙腈沉淀蛋白,正己烷脱脂,氮吹浓缩,经高效液相色谱C18柱分离,选用含0.1%甲酸的水溶液和0.1%甲酸的乙腈溶液作流动相,在22 min内梯度洗脱将6种青霉素类抗生素得以分离.结果 方法 检出限为青霉素G 0.5ng/ml、青霉素V 1.0 ng/ml、苯唑西林1.0ng/ml、氯唑西林2.0ng/ml、阿莫西林2.0 ng/ml以及双氯西林1.0 ng/ml,在0.5～20 ng/ml线性范围内,相关系数r均大于0.990,平均回收率均大于80%.结论 该方法 前处理过程快速,结果 准确可靠,灵敏度高.     

替硝唑葡萄糖注射液的细菌内毒素检查

本试验来用鲎试剂检测替硝唑葡萄糖注射液的细菌内毒素,经干扰实验表明.样品1:3倍稀释液,灵敏度为0.5Eu/ml的鲎试剂,可用于替硝唑葡萄糖注射液的细菌内毒素检查.     

青蒿琥酯细菌内毒素检查法研究

目的：建立青蒿琥酯的细菌内毒素检查方法。方法：采用凝胶法,参照《中国药典》2010年版附录ⅪE对青蒿琥酯进行细菌内毒素的方法学研究。结果：样品溶液稀释为0.4mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.025mg/ml,通过试验最终判定青蒿琥酯稀释为0.4mg/ml时对细菌内毒素无干扰作用,用灵敏度为0.25EU/ml的鲎试剂进行试验,供试品不干扰细菌内毒素检查。结论：建立的青蒿琥酯的细菌内毒素检查法可行。     

两种ELISA试剂检测献血者HBsAg结果分析

目的 探讨两种酶联免疫吸附试验ELISA试剂检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)结果的符合程度,并分析差异性的原因.方法 分别采用两种ELISA试剂(国产试剂A和进口试剂B)对HBsAg进行检测,同时采用PCR对血清HBV-DNA进行定量分析.结果 试剂A检测HBsAg阳性率为0.734％(159/21661),试剂B检测HBsAg阳性率为0.946％(205/21661),两组差异有统计学意义,两种方法阳性符合率为77.56％,均存在不同程度的漏检和假阳性.结论 进口试剂检测HBsAg灵敏度较高,国产试剂特异性较好.     

药用淀粉接枝丙烯酸系超强吸水剂的研究

目的药用淀粉接枝丙烯酸系超强吸水剂的合成。方法以药用淀粉为原料,丙烯酸为单体,过硫酸钾和N,N-亚甲基双丙烯酰胺分别为引发剂和交联剂,采用水溶液聚合法制备超强吸水剂。研究了单体与药用淀粉质量比、引发剂质量分数、交联剂质量分数、丙烯酸中和度及反应温度对产品吸水倍率的影响,并对产品进行了表征。结果与结论当丙烯酸与药用淀粉质量比为6∶1,引发剂质量分数为1.3%,交联剂质量分数为0.5%,丙烯酸中和度为75%,温度为60℃,反应时间为2.5h时,所得产品吸去离子水的倍率最高,可达715g.g-1。     

浙江省天南星族药用植物新鲜块茎的等电聚焦电泳分析

目的为天南星族药用植物的分类和鉴定提供依据.方法以聚丙烯酰胺/凝胶等电聚焦电泳(IEF)方法对天南星族植物7种4变种1变型18个样品蛋白质进行分析.结果不同属植物的电泳谱之间有明显差异.结论利用IEF谱带差异可准确地区分犁头尖属、半夏属和天南星属.     

盐酸洛美沙星注射液细菌内毒素检查方法的探讨

目的考察盐酸洛美沙星注射液细菌内毒素检查法的可行性.方法干扰试验和对比试验.结果18的样品溶液无干扰作用,与家兔法结果一致.结论将盐酸洛美沙星注射液稀释8倍可用灵敏度为0.5EU/ml的鲎试剂作细菌内毒素检查.     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法

目的建立一种操作简便、快速、灵敏度高、无毒的蛋白质电泳染色方法。方法利用考马斯亮蓝G-250(CBB G-250)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后对蛋白质条带进行染色,对不同染色条件进行探讨,并与考马斯亮蓝R-250(CBB R-250)染色法进行比较。结果 CBB G-250染色法试剂无毒,背景浅,经改良其灵敏度与CBB R-250染色法相当,达到0.1～0.5μg。结论 CBB G-250染色方法简单经济,灵敏度能够满足一般要求,适用于蛋白质电泳结果的快速分析。     

鲎法检测50批5%碳酸氢钠注射液中热原的探讨

《中国药典》1995年版将细菌内毒素检查法(以下简称鲎法)收载于附录中,药典仅有0.9%氯化钠注射液和火菌注射用水两种注射液用该法进行检验,对于葡萄糖氯化钠注射液用鲎法进行实验已有报道.5%碳酸氢钠注射液是临床上用量较大的输液之一,但其pH值较高,是否能用简便、快速、准确的鲎法进行检验,笔者对本地区药厂和医院制剂室生产的50批5%的碳酸氢钠注射液进行细菌内毒素检查,并与家兔法进行了比较.1 仪器与试剂鲎试剂:厦门鲎试剂厂的冻干品 批号:970204,现格0.1ml,灵敏度:0.5EU/ml;细菌内毒素工作标准品,厦门鲎试剂厂,批号:970308规格:50Eu/支.鲎试剂溶解水;批号970103,现格2ml/支.2 方法:2.1 样品的抑制试验:取鲎试剂4支,分别加入0.1ml样品溶解,再分别加入0.1mllEu/ml细菌内毒素工作标准品,轻轻混匀,垂直放入37℃水浴或恒温培养箱1h,轻轻取出进行观察.2.2 样品检查:按细菌内毒素检查法操作.3 鲎法与家兔法垫原检查结果比较     

正交试验法优化发酵虫草菌粉提取工艺及颐神颗粒制备工艺的研究

目的 正交试验法优化颐神颗粒中发酵虫草菌粉（Cs-4）提取工艺及制备工艺的研究。方法 通过正交试验研究发酵虫草菌粉室温浸提的最佳工艺,及颐神颗粒浓缩、干燥、整粒及混合等工艺研究,并考察连续三批中试生产以验证工艺的可行性及稳定性。结果 发酵虫草菌粉最佳提取工艺条件为：以60%乙醇为提取剂,加8倍量60%乙醇室温浸提12 h,60℃～70℃下减压浓缩至相对密度1.20～1.25(70℃～75℃)的清膏。三种清膏混合后控制干燥温度65℃～75℃进行干燥,用12目和50目双层旋涡振荡筛进行整粒。三批中试样品成品率高、各项指标检验合格且工艺稳定。结论 建立了一种可工业化制备颐神颗粒的工艺。