孕期被动吸烟对新生大鼠肺SP-A和SP-B mRNAs表达影响的研究

目的研究孕期被动吸烟对新生大鼠肺表面活性蛋白A、B(SP-A,SP-B)基因表达的影响,探讨产前被动吸烟对新生大鼠肺损伤的机制.方法分别将SD大鼠于妊娠第1、8和15天置于吸烟箱内每天2 h被动吸烟建立孕鼠被动吸烟动物模型,孕鼠每天置于吸烟箱内2 h不吸烟者为对照组,于妊娠第20天剖宫取胎鼠,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测新生鼠肺组织SP-A、SP-B mRNAs的表达.结果不同孕期被动吸烟SD大鼠所产新生鼠肺组织SP-A、SP-B mRNAs的表达与对照比较和组间无明显差异(P＞0.05).结论孕期被动吸烟对新生大鼠肺组织SP-A和SP-B mRNAs的表达无明显影响.     

血管内皮生长因子与地塞米松对早产鼠肺泡表面活性物质结合蛋白B表达的影响

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)以及地塞米松单独或联合应用对早产大鼠肺泡表面活性物质结合蛋白B(SP-B)mRNA表达的影响,及与肺发育的关系,为临床防治早产儿呼吸窘迫综合征(NRDS)提供新途径。方法:孕15d清洁级Wistar大鼠12只,随机分为4组,每组平均3只,试验分组:VEGF组、地塞米松组、VEGF加地塞米松组和对照组进行试验,应用RT-PCR检测早产鼠肺组织中SP-BmRNA的表达。结果:地塞米松组、VEGF加地塞米松组肺组织中SP-BmRNA表达与对照组比较,P<0.05,差异有显著性,VEGF加地塞米松组较地塞米松组SP-BmRNA表达进一步增加(P<0.05),而VEGF单独应用组与对照组比较,P>0.05,差异无显著性。结论:地塞米松能促进肺表面活性物质的合成和分泌,VEGF能协同地塞米松促进肺表面活性蛋白的分泌与合成。     

兔胎肺Ⅱ型细胞发育与表面活性物质蛋白基因表达的关系及其调节

目的　探讨兔胎肺Ⅱ细胞发育程度与表面活性物质蛋白 (surfactantproteins ,SPs)mRNA表达的关系以及地塞米松 (Dex)、TRH、EGF等药物对其的调节作用。方法　在孕兔妊娠 2 2～ 2 4d或 2 4～ 2 6d静脉分别给予生理盐水 (对照 )、Dex、EGF、TRH处理 ,于妊娠 2 5d及 2 7d取胎肺 ,通过电镜观察兔胎肺Ⅱ型细胞发育程度 ,采用RT PCR和Southernblot检测胎肺SP A、SP B及SP C的mRNA水平。结果　在妊娠 2 7d ,Dex、EGF及TRH处理组胎肺Ⅱ细胞比对照组更成熟 ,板层体数量明显多于对照组 ,糖原含量比对照组少 ,同时 ,各处理组 2 7d胎肺SP BmRNA水平显著高于对照组 ,但SP A和SP C的mRNA水平在各组间无明显差异。在妊娠 2 5d ,除Dex组胎肺的个别Ⅱ细胞内可见少量未成熟板层体外 ,对照组和其余处理组胎肺Ⅱ细胞内均未见板层体 ,相反 ,所有胎肺均可见大量糖原颗粒。此外 ,2 5d胎肺的SP BmRNA在对照组、EGF和TRH处理组均无明显表达 ,仅Dex处理组的部分胎肺可见低水平表达 ,而SP A和SP CmRNA在各组胎肺均有较高水平表达。结论　SP A、SP B和SP CmRNA在兔胎肺表达的时间并不一致 ,胎肺SP A和SP CmRNA的表达和升高早于SP BmRNA ,其水平在妊娠后期的一定时间内相对稳定。SP BmRNA的检出晚于SP A和SP CmRNA ,其在胎肺的表达和升     

子痫前期对胎鼠肺成熟的影响及其机制研究

目的 探讨子痫前期对胎鼠肺成熟的影响及其机制.方法 将孕鼠分为子痫前期早产组(preeclampsia preterm group,PPG)、非子痫前期足月产对照组(non-preeclampsia fullterm group,NPFG)与非子痫前期早产对照组(non-preeclampsia preterm group,NPPG),使用N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)建立子痫前期动物模型,无菌操作取出胎鼠肺,每组随机取胎肺用于组织切片,进行苏木精-伊红染色,镜下观察胎鼠肺气管及肺泡的发育情况;应用实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)及Western blot技术检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、表面活性蛋白B(SP-B)及表面活性蛋白C(SP-C)mRNA及蛋白水平的表达情况.结果 组织切片染色显示子痫前期早产组胎肺血管及气管发育相对于非子痫前期早产对照组更好;组织Real-time PCR及Western blot检测结果 显示:非子痫前期足月产对照组HIF-1α、VEGF、SP-B与SP-C mRNA及蛋白表达水平明显高于非子痫前期早产对照组及子痫前期早产组,差异有统计学意义(均P＜0.05);子痫前期早产组HIF-1α与VEGF mRNA及蛋白表达水平比非子痫前期早产对照组升高,差异有统计学意义(均P＜0.05);子痫前期早产组SP-C 与SP-B mRNA及蛋白表达水平与非子痫前期早产对照组差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 子痫前期能促进胎肺的结构成熟,但对肺泡功能无明显影响.     

产前地塞米松对胎鼠组织维生素A水平的影响

目的:探讨产前用地塞米松(Dexamethasone,Dex)对胎鼠肺和肝组织维生素A(Vitarain A,VA)水平的影响.方法:健康清洁级SD大鼠随机分为Dex组和生理盐水(NoHnal saline,Ns)对照组,妊娠第16、17、18d连续3d分别给予药物干预后,第19d剖宫取出胎鼠,测定肺和肝组织VA水平,观察Dex对组织VA水平的影响.结果:(1)胎鼠肺和肝单位组织VA水平Dex组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),尤以肺单位组织VA水平升高明显(P<0.01).(2)胎鼠肝组织VA总水平两组比较差异无统计学意义(P>0.05),而肺组织VA总水平Dex组仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:产前用Dex可以提高胎鼠肺和肝单位组织VA水平,同时提高胎鼠肺组织VA总水平,但对胎鼠肝组织VA总水平无显著影响.     

苦杏仁苷通过调节PI3K/Akt信号通路对先天性膈疝大鼠模型肺血管重构的影响

摘要:目的 观察苦杏仁苷对先天性膈疝(CDH)大鼠模型肺血管重构的影响,并探讨其作用机制。方法 将配种后 成功受孕的30只健康SD雌鼠随机分为对照组、模型组、苦杏仁苷低、中、高剂量组(10、20、40mg/kg)和西地那非组,5 只/组;采用100mg除草醚灌胃诱导CDH 模型;苦杏仁苷低、中、高剂量组及西地那非组于造模后给药,模型组和对照组 给予等量生理盐水。于妊娠21.5d,剖宫取胎鼠,观察 CDH 形成情况;采用 HE染色观察胎鼠肺组织病理变化并分析肺 小动脉中层血管壁厚度占肺小动脉外径的百分比(MT%)以及肺小动脉中层横截面积占总横截面积的百分比(MA%); Westernblot检测胎鼠肺组织血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、蛋 白激酶 B(Akt)、磷酸化蛋白激酶 B(p-Akt)蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组胎鼠肺小动脉 MT%、MA%均增加 (均P<0.05),肺组织 VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平上调(均P<0.05),p-Akt/Akt比值升高(P<0.05)。与模 型组比较,苦杏仁苷中、高剂量组及西地那非组胎鼠肺小动脉 MT%、MA%均降低(均P<0.05);苦杏仁苷中、高剂量组 胎仔肺组织 VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平下调(均 P<0.05),p-Akt/Akt比值降低(P<0.05)。结论 产前给 予苦杏仁苷可能通过抑制 PI3K/Akt信号通路激活从而改善 CDH 胎鼠肺血管重构。     

丙泊酚对LPS诱导的大鼠急性肺损伤状态下SP-B表达的调节作用

目的探讨丙泊酚对LPS诱导的大鼠急性肺损伤的保护作用和对肺组织肺表面活性蛋白B(SP-B)的调节作用。方法 30只雄性Wistar大鼠(SPF级)随机分为对照组(Control组)、治疗组(LPS+Propofol组)和模型组(LPS组)每组10只。通过颈静脉注射LPS建立大鼠急性肺损伤(ALI)模型。采用HE染色观察肺组织病理学改变并进行肺损伤评分;采用湿/干比(W/D)值分析肺水肿严重程度;使用RT-PCR和western blotting对肺组织中SP-B的表达进行检测。结果在给予颈静脉注射LPS后,大鼠肺组织出现明显的病理改变和较高的肺损伤评分,W/D值明显升高,同时肺组织中SP-B mRNA和蛋白水平明显降低,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。但与LPS组相比较,LPS+Propofol组大鼠肺组织病理变化较轻,肺损伤评分和W/D值较低,同时肺组织中SP-B mRNA和蛋白的表达水平较高,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。结论镇静药丙泊酚可以有效改善大鼠ALI导致的肺部炎症反应和肺水肿,同时上调肺组织中SP-B的表达水平。但仍需进一步研究揭示丙泊酚对于ALI状态下SP-B的调节作用的分子机制和相关的信号通路。     

盐酸氨溴索对胎鼠肺表面活性物质的影响

目的:探讨盐酸氨溴索(沐舒坦)对胎鼠肺表面活性物质合成的影响.方法:选择健康清洁级妊娠的SD大鼠18只,随机分为3组,沐舒坦治疗组6只,地塞米松治疗组6只,对照组6只.各组大鼠于妊娠第16、17、18天尾静脉分别注射沐舒坦75 mg/kg、地塞米松0.8 mg/kg、生理盐水2 ml/只.于妊娠第19天剖宫产,取出胎仔肺测定磷脂含量(肺表面活性物质主要成分为磷脂).结果:沐舒坦治疗组肺磷脂含量为(0.72土0.06)mmol/g湿肺,地塞米松治疗组为(0.73±0.19)mmol/g湿肺,对照组为(0.62±0.09)mmol/g湿肺,沐舒坦治疗组、地塞米松治疗组与对照组差异有显著性(P＜0.01),沐舒坦治疗组与地塞米松治疗组之间差异无显著性(P＞0.05).结论:沐舒坦能促进胎鼠肺表面活性物质合成,且与地塞米松作用效果相似,有可能成为临床上促胎肺成熟的药物.     

肺表面活性物质相关蛋白B在人胎肺发育中的表达及意义

目的 检测肺表面活性物质相关蛋白B（SP-B）在人胎肺发育过程中的表达特征,探讨其在胎肺上皮细胞发育、分化及其肺功能建立中的作用。方法 由孕妇自愿捐献的胎龄为10周～34周胎肺组织37例及生后28d的内正常肺组织2例．用免疫组织化学技术检测SP-B的表达。结果 SP-B在胎肺发育第16周已开始表达,定位于上皮细胞胞浆,发育早期主要表达于高柱状的未分化的上皮细胞,随着支气管的发育分化,由呼吸道的近端逐渐向远端迁移;到原始肺泡期稳定表达于AECⅡ及其前体细胞,其反应强度增加不明显,出生后SP-B阳性反应较出生前明显增强;纤毛细胞和AECI无表达。结论 在胎肺发育的过程中,SP-B的分泌反映着肺泡上皮细胞发育成熟,与适应出生后执行功能的需要密切相关。     

Expression of Lung Surfactant Proteins SP-B and SP-C and Their Regulatory Factors in Fetal Lung of GDM Rats

This study investigated the expression of lung surfactant proteins (SP-B and SP-C), and regulatory factors [forkhead box A2 (FOXA2) and nitrolyogenic FOXA2 (N-FOXA2)] in the fetal lung of rats with gestational diabetes mellitus (GDM) in order to study the mechanism of pulmonary dysplasia. The rat GDM model was established by using streptozotocin intraperitoneally in the first stage of pregnancy. There were 10 rats in the GDM group, and 10 healthy rats in normal control group without any treatment. Fetal lungs of two groups were taken at day 21 of pregnancy. Blood glucose levels of maternal rats and fetal rats were measured by Roche blood glucose meter. The histological changes in the fetal lung were observed under the light microscope in both groups. The SP-B, SP-C and FOXA2 were determined in the fetal lung of two groups immunohistochemically. The expression levels of SP-B, SP-C, total FOXA2, FOXA2 in nucleus (n-FOXA2), N-FOXA2 proteins were detected by Western blotting, and the relative expression levels of SP-B, SP-C, FOXA2 mRNA in the fetal lung of two groups were detected by RTPCR. The results showed that blood glucose levels of maternal rats and fetal rats in GDM group were higher than those in control group. The light microscope revealed fetal lung development retardation in GDM group. The expression of SP-B and SP-C in GDM group was significantly reduced as compared with control group (P<0.05). As compared with control group, the n-FOXA2 expression was significantly decreased in the fetal lung tissue, and N-FOXA2 was significantly increased in control group (P<0.05), but there was no significant changes in the total FOXA2 (P>0.05). It was concluded that GDM can cause fetal lung development and maturation disorders, and FOXA2 in fetal lung tissue decreases while nitrocellulose FOXA2 increases.     

呼气末正压通气对海水型呼吸窘迫综合征兔呼吸功能和肺泡表面活性蛋白表达的影响

目的 探讨呼气末正压(PEEP)通气对海水型呼吸窘迫综合征(SW-RDS)兔呼吸功能和肺泡表面活性物质相关蛋白质B(SP-B)/SP-C表达的影响.方法 健康雌性新西兰兔24只,随机分为常规通气组、PEEP通气组(PEEP组)和对照组,每组8只.均于麻醉后气管插管行常规机械通气20 min,用人工海水经气管插管灌肺法制备SW-RDS.常规通气组维持原参数通气6 h;PEEP组在原通气参数设置基础上给予PEEP(8 cm H_2O)通气治疗2 h,之后恢复原参数通气4 h;对照组模型制作成功后,撤去呼吸机,不进行任何治疗.通气过程中持续监测氧合指数和肺顺应性.机械通气结束后处死动物(对照组取自然死亡动物),收集左肺支气管肺泡灌洗液测定肺泡表面张力,取右肺组织提取RNA及蛋白,分别以实时PCR和蛋白质印迹法测定肺组织SP-B/SP-C Mrna及SP-B蛋白的表达.结果 SW-RDS建模成功后3组兔氧合指数和肺顺应性均明显下降,组间差异无统计学意义.对照组动物脱离呼吸机后15 min内全部死亡.PEEP组经PEEP通气治疗30 min氧合指数和肺顺应性即明显改善,而常规通气组无明显改善,组间差异有统计学意义(P<0.05).常规通气组肺泡最小表面张力(Mn/m,30.8±6.3)明显高于PEEP组(21.1±4.4,P<0.05)和对照组(23.6±4.6,P<0.05);SP-B/SP-C Mrna相对表达量(0.37±0.15/0.60±0.19)和SP-B蛋白相对丰度(0.38±0.17)明显低于PEEP组(0.73±0.15/0.92±0.40,0.52±0.22,均P<0.05).结论 PEEP通气能明显改善SW-RDS兔的氧合指数和肺顺应性,这不仅与其单纯机械作用有关,同时与其促进SP-B/SP-C基因转录和翻译密切相关.     

先天性肺囊性腺瘤样畸形中SP-B、TTF-1与Ki-67表达的研究

目的：探讨表面活性蛋白B（SP-B）、甲状腺转录因子-1（TTF-1）及核增殖抗原Ki-67在儿童先天性肺囊性腺瘤样畸形中的表达及其意义。方法：采用EliVision法进行免疫组织化学染色，52例先天性囊性腺瘤样畸形作为病例组，9例儿童正常肺组织作为对照组，检测SP-B、TTF-1、Ki-67在肺泡、呼吸性细支气管及囊壁组织中的表达与分布。结果：SP-B与TTF-1在正常肺组织及病例组中的表达部位、强度较一致，而在先天性肺囊性腺瘤样畸形不同组织亚型中表达强度明显不同。Ki-67在正常肺组织表达为阴性，在病例组中明显增加（P〈0．01），而在先天性肺囊性腺瘤样畸形不同组织类型中的表达强度差异无显著性（P〉0．05）。结论：SP-B、TTF-1的表达与儿童先天性肺囊性腺瘤样畸形的组织分型密切相关，对了解先天性肺囊性腺瘤样畸形的组织发生具有重要意义；Ki-67与先天性肺囊性腺瘤样畸形的形成有关。     

SP-B、SP-C对肺表面活性物质功能的影响

目的　探讨肺表面活性物质相关蛋白B、C(SP -B、SP -C)对肺表面活性物质功能影响。方法　将不含有SP -A、SP -D的肺表面活性物质脂质部分和脂质部分加入SP -B和 (或 )SP -C配制成实验液体。用气泡型表面张力计测定最小表面张力 (γmin)。向未成熟胎兔气道内注入实验液体后进行人工通气 ,测定潮气量。结果　脂质部分加入SP -B和SP -C后γmin明显下降至 (2 .1± 0 .8)mN/m ,并明显增加动物的潮气量至2 5 .3ml/kg± 3.9ml/kg。结论　SP -B、SP -C协同可增加肺表面活性物质的功能。     

高原RDS表面活性物质相关蛋白A、B、C mRNA表达的变化

目的：观察高原ＲＤＳ时ＳＰ－Ａ,ＳＰ－Ｂ和ＳＰ－Ｃ ｍＲＮＡ表达与影响因素,了解其变化情况,并探讨其在急性肺损伤中的作用机制及意义。方法：采用高原ＲＤＳ动物模型,利用分子生物学技术观察肺组织肺泡Ⅱ型上皮细胞表面活性蛋白及其基因的表达。     

复方中药丹星通络汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨复方中药丹星通络汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注脑损伤的保护作用及机制. 方法:40只大鼠随机分为4组,即对照组(假手术 生理盐水)、模型组(缺血再灌注 生理盐水)、尼莫地平组(缺血再灌注 尼莫地平)、复方丹星通络汤组(缺血再灌注 复方丹星通络汤). 每组分别连续5 d灌胃口服生理盐水、尼莫地平、复方丹星通络汤. 线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h后再灌注24 h. 检测血清乳酸脱氢酶(LDH)活力、大脑FAS细胞表达. 结果:模型组大鼠局灶性脑缺血再灌注后血清LDH活力明显高于对照组(P＜0.05), 尼莫地平组、复方丹星通络汤组血清中LDH活力明显降低(尼莫地平组vs 模型组,P＜0.01; 复方丹星通络汤组vs模型组,P＜0.05),尼莫地平组和复方丹星通络汤组间无显著性差异(P＞0.05). 模型组大脑FAS细胞表达明显高于对照,尼莫地平,复方丹星通络汤组(P＜0.01),与模型组比较,尼莫地平组、复方丹星通络汤组脑组织FAS阳性细胞数表达显著下调(P＜0.01),复方丹星通络汤组明显低于尼莫地平组(P＜0.01). 结论:复方丹星通络汤可有效地防止FAS及LDH升高, 对脑缺血再灌注脑损伤有显著保护作用.     

麦门冬汤对大鼠骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的影响

[目的]观察麦门冬汤含药血清对促进大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）向肺泡上皮细胞分化的影响。[方法]分别予麦门冬汤大鼠血清、肺纤维化模型大鼠血清、肺纤维化模型大鼠+麦门冬汤血清对绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞（GFP-BMSC）进行干预14 d,通过免疫组化、实时荧光定量聚核酶链反应（qPCR）方法,检测各组GFP-BMSC细胞肺表面活性蛋白（SP-C）、水通道蛋白-5（AQP-5）蛋白及mRNA的表达。[结果]模型组、模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5蛋白表达明显高于DMEM对照组、麦门冬汤组（P<0.01）,其中模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5表达明显高于模型组（P<0.01）。[结论]麦门冬汤在肺纤维化环境中可促进GFP-BMSC向肺泡上皮细胞分化,该作用可能是其改善肺纤维化的重要机制。     

结核杆菌耐热抗原对A549细胞分泌SP-B和凋亡的影响

目的 探讨结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)刺激诱导人肺腺癌细胞系(A549)细胞后对其肺泡表面活性物质相关蛋白B(SP-B)的分泌和凋亡的影响.方法 用不同浓度的Mtb-HAg分别刺激诱导A549细胞,相同条件分别培养24、48 h,同时设置空白对照组(对照组1和对照组2)和阳性对照组[脂多糖(LPS)组和姜黄素组].运用ELISA法检测对照组1、LPS组和实验组1(2、3μg/ml Mtb-HAg分别诱导A549细胞培养24 h和48 h)培养上清液中的SP-B表达量;使用实时荧光定量PCR法检测对照组1、LPS组和实验组1中基因SFTPB的相对表达量;采用流式细胞技术检测对照组2、姜黄素组和实验组2(2、3 μg/ml Mtb-HAg分别诱导A549细胞培养24 h)中A549细胞的凋亡率.结果 刺激诱导相同时间,实验组1的SP-B表达量低于对照组1,差异有统计学意义(P ＜0.05);相同浓度刺激诱导随时间的延长,实验组1中SP-B表达量降低的不显著.相同培养时间,随着Mtb-HAg浓度的增加实验组1表达SP-B的基因SFTPB的相对表达量显著低于对照组1,差异有统计学意义(P＜0.05);而在相同有效刺激浓度下,其相对表达量随作用时间变化不显著.姜黄素组和实验组2中的A549细胞凋亡率显著高于对照组2(P ＜0.05).结论 Mtb-HAg对A549细胞表达SP-B的抑制作用明显,并能诱导A549细胞发生凋亡.     

针刺对大鼠表皮生长因子及其基因表达的影响

本实验以大鼠颌下腺、淋巴细胞为观察标本,自制非放射活性的反义ｍＲＮＡ探针,参照Ｌａｓｓｏｎ＇ｓ技术进行原位杂交探讨针刺对大鼠表皮生长因子（ＥＧＦ）基因表达的影响,并用免疫组织化学ＰＡＰ法观察了针刺对ＬＧＦ、ＥＧＦ受体（ＥＧＦＲ）免疫反应性的影响。结果针刺组的ＥＧＦ基因表达杂交信号比对照组增强（Ｐ＜０．０５～０．０１）,并首次观察到大鼠周血淋巴细胞亦存在ＥＧＦ基因表达。颌下腺ＥＧＦ－ＩＲ在针刺组与对照组之间差异不显著（Ｐ＞０．０５）,而颌下腺及周血淋巴细胞的ＥＧＦＲ－ＩＲ针刺组均比对照组增强（Ｐ＜０．０５）。结果表明大鼠领下腺颗粒曲管及周血淋巴细胞皆有ＥＧＦ基因表达和ＥＧＦ受体,针刺可提高ＥＧＦ基因表达及ＥＧＦ受体免疫反应性。