重组人促红细胞生成素对3T3-L1脂肪细胞促红细胞生成素受体表达及下游信号通路的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素( rHuEPO)对正常和胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞促红细胞生成素受体(EPOR)表达及其下游信号通路的调控作用.方法 以1μmoL/L地塞米松诱导建立3T3-L1脂肪细胞胰岛索抵抗模型(模型组),以分化成熟的正常3T3-L1脂肪细胞作为对照组.采用细胞免疫荧光法和Western blotting法检测细胞EPOR的蛋白表达,采用Real-TimePCR技术检测细胞EPOR mRNA的表达.分别以rHuEPO、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂(LY294002)及信号转导和转录激活因子5( STAT5)抑制剂对模型组和对照组细胞进行干预,采用Western blotting法检测不同药物干预对EPOR蛋白的表达及其下游分子丝(苏)氨酸蛋白激酶( Akt)和STAT5磷酸化水平(p-Akt和p-STAT5蛋白的表达)的影响.结果 与对照组比较,模型组EPOR蛋白和mRNA的表达均显著下调(P＜0.05).干预实验结果显示:与相应对照组或模型组比较,rHuEPO+对照组或模型组EPOR、p-Akt和p-STAT5蛋白的相对表达量均显著上调(P＜0.05);与相应rHuEPO+对照组或模型组比较,rHuEPO+LY29400或STAT5阻断剂+对照组或模型组的p-Akt和p-STAT5蛋白的相对表达量显著下调(P＜0.05).结论 正常3T3 -L1脂肪细胞上存在EPOR,胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞EPOR蛋白和mRNA的表达下调,rHuEPO可通过EPOR介导激活PDK-Akt和JAK2 -STAT5信号通路.     

不同剂量丙种球蛋白治疗儿童吉兰-巴雷综合征的疗效比较

目的观察不同剂量丙种球蛋白（IVIG）治疗儿童吉兰-巴雷综合征（GBS）的临床疗效。方法将符合GBS诊断的141例患者分为三组,分别给予不同剂量IVIG,并对疗效进行对比观察。结果三种给药方式对轻、中、重度患者的疗效差异无统计学意义（均P〉0．05）,不同程度患者总有效率分别为95．83％、95．74％、82．85％。结论WIG治疗儿童吉兰-巴雷综合征具有良好的效果,低剂量组和大剂量组差异无统计学意义,低剂量WIG治疗儿童GBS亦有效。     

Access to recombinant erythropoietin by Medicare-entitled dialysis patients in the first year after FDA approval.

OBJECTIVE--Examine access to recombinant human erythropoietin (rHuEPO) by dialysis-dependent end-stage renal disease (ESRD) patients during the first year after FDA approval for use in clinical practice and Medicare coverage. DESIGN--Longitudinal and cross-sectional claims data analyses. SETTING--All US providers of outpatient dialysis treatment. PATIENTS--126,201 Medicare-entitled dialysis patients (approximately 93% of all US dialysis patients). OUTCOME MEASURES--Percentage of patients who received rHuEPO, odds of receiving rHuEPO according to patient characteristics, and cost of rHuEPO to Medicare. RESULTS--One year after FDA approval, 52% of all dialysis and 60% of in-center hemodialysis patients who regularly had Medicare-paid dialysis services received rHuEPO at a monthly cost to Medicare of $19 million (18% of Medicare ESRD outpatient expenditures and 6% of all ESRD program expenditures). Blacks were less likely than whites to receive rHuEPO (odds ratio, 0.88; 95% confidence interval, 0.86 to 0.91). Home peritoneal and hemodialysis patients were less likely than in-center hemodialysis patients to receive rHuEPO (odds ratios, 0.17 and 0.22, respectively; 95% confidence intervals, 0.16 to 0.17 and 0.20 to 0.24, respectively). Use of rHuEPO varied across geographic regions. The odds of receiving rHuEPO were lower for patients of male vs female sex, of ages 35 through 64 years vs less than 35 years and greater than 65 years, with a longer history of ESRD, with polycystic kidney disease vs other causes of ESRD, and receiving care in nonprofit vs for-profit facilities. First-month hematocrits were slightly higher (1.2 percentage points) for patients starting rHuEPO in the 12th month than in the first month after FDA approval. CONCLUSIONS--With prompt insurance coverage, the majority of Medicare-entitled dialysis patients received rHuEPO following widespread availability. Factors that may not be related to clinical need (race, setting of care, and geography) possibly influenced early patient access. More attention should be paid to monitoring the appropriate use of high-cost biotechnologic therapy.     

重组促红细胞生成素对脂肪肝缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡和炎症因子的影响

目的探讨重组促红细胞生成素(r HuEPO)对脂肪肝缺血再灌注损伤(HIRI)大鼠细胞凋亡和炎症因子的影响。方法高脂饲料饲养的无特定病原体(SPF)雄性SD大鼠90只,造模成功后,采用随机数表法分为假手术组、模型组和rHuEPO组,每组30只,rHuEPO组于缺血前24 h时腹腔注射rHuEPO 4 000 IU/kg,假手术组和模型组腹腔注射等容量的生理盐水,再灌注后1 h、3 h和6 h的采集血液及肝组织标本,比较各组大鼠肝细胞凋亡指数、血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1 (IL-1)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肝组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果病理观察显示:HIRI后模型组、rHuEPO组大鼠肝组织结构改变,其中模型组改变更为明显;假手术组、模型组和rHuEPO组大鼠再灌注1 h的细胞凋亡指数分别为(3.28±0.63)%、(27.86±2.87)%、(21.38±2.62)%,差异有统计学意义(P<0.05);三组大鼠再灌注3 h的细胞凋亡指数分别为(3.56±0.83)%、(37.24±3.65...     

重组人γ干扰素对人骨肉瘤细胞糖皮质激素受体的下调作用及其生物学意义

以人骨肉瘤细胞系（ＨＯＳ－８６０３）为模型，研究重组人γ干扰素（ｒｈＩＦＮ－γ）对糖皮质激素受体（ＧＲ）的调节作用及其生物学意义。方法：ＧＲ结合活性的测定采用放射配体结合分析法；ＧＲｍＲＮＡ的测定用分子杂交法。结果：极低浓度的ｒｈＩＦＮ－γ对ＧＲ具有下调作用，但对受体亲和力无明显影响；量效关系研究表明，当ｒｈＩＦＮ－γ浓度为１０ＩＵ／ｍｌ时，ＧＲ浓度已降至最低水平；时效关系研究表明，ｒｈＩＦＮ－γ作用３６ｈ后对ＧＲ的下调作用达到最大效应。用分子杂交方法研究表明，ｒｈＩＦＮγ下调ＧＲ的同时，伴有ＧＲｍＲＮＡ水平的相应降低；ｒｈＩＦＮ－γ本身虽然对ＨＯＳ－８６０３细胞的增殖分化过程无明显影响，但却可明显削弱糖皮质激素对该细胞系的增殖抑制作用和对碱性磷酸酶活性的诱导作用。结论：ｒｈＩＦＮ－γ对ＨＯＳ－８６０３细胞ＧＲ有非常明显的下调作用，且主要由ＧＲｍＲＮＡ表达减弱引起；ｒｈＩＦＮ－γ对ＧＲ的调节作用伴有受体功能活性的相应降低，表现为细胞对糖皮质激素的反应性明显减弱。     

重组人促红细胞生成素(rhEPO)在老年慢性病贫血（AcD）中治疗效果的评价及疗效的预测

 目的 在32例年龄在60岁以上的慢性病贫血(anemia of chronic disease,AcD)患者中,应用重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)治疗8周后测观察贫血改善情况,并筛选出具有较高临床意义的预测参数。方法 32名AcD老年患者应用rhEPO治疗8周,8周内血红蛋白(hemoglobin,Hb)上升20 g/L设为治疗有效。选用血清EPO水平、Hb、网状红细胞计数(reticulocyte count,Ret)、总铁结合力(total iron binding capacity,TIBC)、血清铁(serum iron,SI)、血清铁蛋白(serum ferritin serum,SF)、可溶性转铁蛋白受体(serum transferrin receptor,sTfR)作为观测指标,观察患者8周时血红球蛋白的改变并进一步统计分析其与各观测指标变化之间的关系。结果 32例老年AcD患者应用rhEPO治疗8周后Hb升高,SI、LgSF下降,sTfR升高(P<0.05)。20例患者8周时获得预期疗效,多元回归分析提示rhEPO治疗8周后Hb改变与LgEPO及基线sTfR水平呈负相关(P<0.05)。根据设定的评价方法将32例患者分为rhEPO治疗有效组及治疗无效组,绘制sTfR及LgEPO的受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)并计算曲线下面积(area under the curve,AUC),后者具有统计学意义并且AUC更大(AUC为0.81,P<0.05,95%CI：0.627~0.993),并通过最大Youden指数寻找到最佳诊断点为EPO≤58 mIU/mL。如患者EPO≤58 mIU/mL,可预测其能获得较好的治疗效果。结论 rhEPO在老年慢性病贫血中可取得较好的治疗效果,患者的EPO水平是具有较高临床意义的预测参数。     

小剂量尿激酶治疗不稳定性心绞痛的疗效和安全性临床观察

目的：观察小剂量尿激酶治疗不稳定性心绞痛（UAP）患的疗效和安全性。方法：选择UAP患50（男42,女8）例,随机分为溶栓组和对照组,对照组不应用尿激酶,余治疗与溶栓组完全相同。患于治疗前后各取肘静脉血10mL,应用自动凝血系统检测仪及发色底物法分别检测PT,APTT,Fg含量、t-PA及PAI活性。同时对治疗前后心绞痛发作频率、心电图改变、出血并发症及心血管意外发生情况等进行临床观察。结果：①溶栓组UAP患心绞痛再发率比对照组明显地降低（P＜0．05）,且显效率明显高于肝素对照组（P＜0．01）;心电图改善无效率降低（P＜0．05）,显效率升高（P＜0．05）;两组出血并发症发生率及心血管意外发生率无差异。②溶栓组UPA患溶栓后PT,APTT较溶栓前显延长（P＜0．01）,t-PA活性上升（P＜0．01）,PAI活性下降（P＜0．01）,Fg含量明显降低（P＜0．01）;对照组除PT,APTT延长外（P＜0．05）,余指标治疗前后无统计学差异;溶栓组和肝素对照组治疗后各指标比较,除PT,APTT无差异外,余指标均存在统计学意义。结论：结论：①有急性血栓形成的UAP中层得进行小剂量尿激酶溶栓治疗可以改善临床症状,且不增加恶性事件发生率,提示在特定的UAP亚组中进行合理的溶栓治疗,具有一定的可行性。②UAP患存在凝血、纤溶系统功能失调,溶栓治疗可提高其纤溶功能并降低凝血活性,从而增强溶栓效果。③UAP患溶栓后PT和APTT延长,与对照组比较无统计学差异,表明小剂量溶栓治疗不会引起出血并发症发生率的增加。     

补肾活血法对多囊卵巢综合征致不孕的Meta分析

目的:通过Meta分析探讨补肾活血法对多囊卵巢综合征致不孕的治疗情况。方法:以"补肾活血法"、"多囊卵巢综合征"、"不孕"为中文关键词或主题词,在CNKI、万方、维普等数据库中进行检索;以"Kidney-tonifying and Blood-activating Therapy"、"Stein-Leventhal syndrome"、"Infertility"为英文关键词或主题词,在PubMed数据库进行检索,检索年份为2000年～2019年,应用Review Manager5.0进行Meta分析。结果:最终筛选出符合标准的随机对照文献13篇,对照组采用常规西医治疗,观察组采用补肾活血法治疗,均提及分组方法,未提及盲法,文献质量普遍偏低。有效率Meta分析显示治疗组有效率高于对照组[Z=3.69(P<0.001),95%CI(1.77,6.42)]。周期排卵率Meta分析显示治疗组周期排卵率高于对照组[Z=2.19(P=0.03),95%CI(1.08,4.35)]。妊娠率Meta分析显示治疗组妊娠率高于对照组[Z=7.07(P<0.001),95%CI(2.27,4.24)];偏倚性分析发现文献分布存在偏倚。未破裂卵泡卵巢黄素化综合征(LUFS)发生率Meta分析显示治疗组LUFS发生率低于对照组[Z=3.25(P=0.001),95%CI(0.02,0.38)]。治疗后血清E_2水平Meta分析显示治疗组治疗后血清E_2高于对照组[Z=4.41(P<0.001),95%CI(11.01,28.64)]。结论:Meta分析显示补肾活血法对多囊卵巢综合征致不孕的疗效显著,可以改善性激素水平,提高有效率、周期排卵率、妊娠率,降低LUFS发生率,但本次纳入文献质量不高,需要进一步纳入高质量文献来证实。     

大鼠压力超负荷心肌糖蛋白130表达及贝那普利干预研究

目的 研究糖蛋白130(GP130)在腹主动脉缩窄所致大鼠压力超负荷性心肌肥大模型中的表达变化与心肌肥大的关系,以及贝那普利(Benazepril,Ben)对GP130蛋白表达及心肌肥大的影响.方法 用腹主动脉缩窄术建立大鼠压力超负荷性心肌肥厚模型,随机分为左室肥厚组(LVH,n=7)、贝那普利干预组(n=7,贝那普利1 mg·kg-1·d-1,灌胃3周),另设一假手术组(n=7)为对照.干预3周后测定血流动力学指标、左心室质量指数,应用放射免疫分析法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,免疫组化法检测心肌中GP130 蛋白水平表达.结果与假手术组比较,左室肥厚组动物的血压与左心室质量指数显著升高(P＜0.05);心肌组织AngⅡ含量(P＜0.01)和GP130蛋白表达水平明显增加(P＜0.05).贝那普利干预可显著降低血压和左心室质量指数(P＜0.05),同时降低肥厚心肌组织AngⅡ浓度(P＜0.01)与GP130蛋白表达水平(P＜0.05).结论 GP130蛋白的过度表达参与了压力超负荷性大鼠心肌肥大的发病过程;贝那普利对GP130蛋白表达及心肌肥大有抑制作用.     

人胸腺素α1真核表达重组体的构建及其转染人外周血淋巴细胞对后者免疫活性的影响

目的：构建人胸腺素α1（Tα1）真核表达重组体pBK-Tα1,并研究其转染人外周血淋巴细胞（PBL）对后者免疫活性的影响。方法：将已构建的Tα1克隆重组体pUC18-Tα1经EcoRI、HindⅢ酶切，获得Tα1片段，再将其克隆入真核细胞表达载体pBK-CMV得到pBK-Tα1重组体，pBK-Tα1以脂质体包裹的方法转染PBL细胞，作RT－PCR在mRNA水平检测pBK-Tα1在PBL细胞中的表达。用E玫瑰花环试验检测转染pBK-Tα1后的PBL细胞中T淋巴细胞表达E受体的表达情况，并以酶联免疫吸附试验检测转染pBK-Tα1后的PBL细胞培养上清中的IFN－γ和IL－2值。结果：构建成功Tα1真核细胞表达重组体pBK-Tα1；在mRNA水平证实，pBK-Tα1可在PBL细胞中得以转录；初步证实pBK-Tα1转染入PBL细胞可促进IFN－γ、IL－2的表达和T淋巴细胞表达E受体的产生。结论：pBK-Tα1在PBL细胞内的表达可能会增强PBL细胞的免疫活性。     

人IL-12在昆虫细胞中的表达及其体外生物活性的检测

目的：建立表达具有生物活性的人IL-12 的杆状病毒/昆虫细胞表达系统。方法：将p40和p35 cDNA一起构建入杆状病毒转移载体pAcUW42,然后与杆状病毒AcUW1.lacZ DNA共同转染昆虫细胞Sf9,使两者产生同源重组;随后利用病毒空斑实验筛选重组的杆状病毒,再由ELISA筛选及鉴定表达IL-12的重组病毒,并进行Western Blotting和体外生物活性的检测。结果：经病毒空斑试验、ELISA和Western Blotting逐步阳性选择的IL-12重组杆状病毒,其感染Sf9细胞的上清与IL-12标准品一样具备刺激正常人外周血T淋巴细胞增生的生物活性。结论：本研究建立了能表达具有体外生物活性的人重组IL-12的杆状病毒/昆虫表达系统。     

重组人粒细胞集落刺激因子对K562细胞凋亡和其细胞毒药物敏感？…

目的 探讨重线人粒细胞集落刺激因子（ｒｈｕ Ｇ－ＣＳＦ）对Ｋ５６２细胞凋亡和其细胞毒药物敏感性的影响。方法 采用流式细胞术和ＭＴＴ法分别测定细胞凋亡和细胞毒药物敏感性。结果 在低血清培养条件下,ｒｈｕ Ｇ－ＣＳＦ对Ｋ５６２细胞的凋亡有抑制作用,其凋亡百分率与ｒｈｕ Ｇ－ＣＳＦ浓度呈负线性样;ｒｈｕ Ｇ－ＣＳＦ可增加Ｋ５６２细胞对Ａｒａ－Ｃ的敏感性,而降低其对ＤＮＲ的敏感性,在Ａｒａ－Ｃ和ＤＮＲ联合     

重组人血管内皮抑素注射液联合GP方案治疗31例非小细胞肺癌血性胸腔积液的临床研究

目的研究重组人血管内皮抑素注射液联合吉西他滨和顺铂(GP)方案对肺癌患者血性胸腔积液的临床疗效及主要不良反应。方法收集2007年8月至2009年3月共63例伴有血性胸腔积液的非小细胞肺癌患者,随机分为治疗组及对照组。治疗组采用重组人血管内皮抑素注射液联合GP方案化疗,对照组单用GP方案,评价药物的疗效及主要不良反应。结果治疗组及对照组客观有效率(CR+PR)%分别为41.9%、18.7%,两组疗效差异有统计学意义(Z=-2.816、P=0.005)。不良反应方面,心脏毒性差异有统计学意义(P=0.022),骨髓抑制及消化道反应均差异均无统计学意义(分别P=0.262、P=0.072)。结论重组人血管内皮抑素注射液联合GP方案能明显提高肺癌患者血性胸腔积液的有效率,且不良反应临床可以耐受。     

高效液相色谱法测定人血浆中雷尼替丁的浓度及其方法学研究

目的验证高效液相色谱法对血浆中雷尼替丁浓度测定的准确性和可行性。方法采用色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm,5 m),流动相由甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾水溶液-三乙胺(12.5∶87.5∶0.06,V/V/V)组成,检测器为紫外检测器,检测波长320 nm,流速为1.2 m L/min,柱温25℃,进样量30 L,内标为10μg/mL甲硝唑的高效液相色谱仪对血浆中雷尼替丁浓度进行测定。使用标准曲线、最低定量限、回收率、批间和批内精密度、稳定性等评价参数对此方法进行验证。结果 6个不同来源的血浆中杂质不干扰样品的测定,标准曲线线性范围为50～2 500 ng/mL,线性关系良好;低、中、高三种浓度的日间和日内变异均小于10%;绝对回收率为90.2%～94.1%。定量下限浓度为50 ng/mL;血浆样品在冻融稳定性试验、8 h室温放置稳定性及24 h放置稳定性试验均未见明显降解,表明在本测定条件下,样品较稳定。结论使用高效液相色谱法测定血浆中雷尼替丁浓度,符合生物样品分析要求,该方法准确可靠。