变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因特异片段的分子克隆

目的：克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白Ｃ基因（ｇｂｐＣ）编码序列的特异片段。方法：根据文献报道的ｇｂｐＣ序列设计并合成一对寡核苷酸引物,ＰＣＲ扩增位于ｇｂｐＣ编码序列１１０５～１５５４ｂｐ间的一段牧民片段,扩增产物经回收、酶切后,定向插入克隆载体ｐｕｃ１８中,连接产物转化感受态大肠杆菌ＤＨ５α,挑选阳性克隆,鉴定后进行序列测定。结果：测序结果与Ｓａｔｏ等报道的序列一致。结论：成功克隆了ｇｂｐＣ基因片段     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因特异片段的克隆和在大肠杆菌中的表达

目的：克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因（Glucan-binding protein C gene,gbpC）编码序列的特异片段,并在大肠杆菌中实现原核表达。方法：根据gbpC序列设计并合成一对寡核苷酸引物,PCR扩增位于gbpC编码序列1342bp～1794bp间的一段特异片段,扩增产物经回收、酶切后,定向插入克隆载体puc18中,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5a,挑选阳性克隆,鉴定后进行序列测定。将克隆获得的约0．45kb的gbpC基因特异片段经EcoRI／SalI双酶切后,定向插入pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1／gbpCE原核融合表达载体,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,酶切及PCR鉴定后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（Isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG）诱导表达融合蛋白GST-GbpC^E,SDS-PAGE检测表达产物。结果：测序结果与Sato等报道的序列一致;原核表达后,在SDS-PAGE凝胶上出现一条新生蛋白条带,其相对分子量约43000,与预计大小相符合。结论：成功克隆并表达gbpC特异片段,获得了融合蛋白GST-GbpC^E,为制备GbpC抗体打下了基础。     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因特异片段在大肠杆菌中的表达

目的原核表达变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因(glucan-bindingproteinCgene,gbpC)特异片段。方法将克隆获得的约0.45kb的gbpC基因特异片段经EcoRⅠ/SalⅠ双酶切后,定向插入pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1/gbpCE原核融合表达载体,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,酶切及PCR鉴定后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropy1-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达融合蛋白GST-GbpCE,SDS-PAGE检测表达产物。结果在SDS-PAGE凝胶上出现一条新生蛋白质条带,其相对分子质量约为43000,与预计大小相符合。结论成功表达gbpC特异片段,获得了融合蛋白GST-GbpCE,可用于制备GbpC抗体。     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白B的纯化

目的：从变形链球菌S.mutans Ingbritt(serotype c)培养液上清中纯化葡聚糖结合蛋白B。方法：Sephadx G-200凝胶（α-1,6键葡聚糖）亲和层析和Q－SephroseFF离子交换层析。结果：纯化出约10μg具有葡聚糖结合特性的GbpB蛋白。结论：通过Sephadx G-200凝胶（α-1,6键葡聚糖）亲和层析和Q－Sephrose FF离子交换层析纯化出变链菌葡聚糖结合蛋白B。     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白B功能区片段的分子克隆及表达

目的 :克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白B(GbpB)功能区的基因片段 ,并在大肠杆菌中表达。方法 :通过PCR技术克隆GbpB功能区的基因片段并通过蛋白重组融合表达技术使其在大肠杆菌中表达。 结果 :成功克隆了GbpB功能区的基因片段 ,并在大肠杆菌中得到其融合蛋白的表达。 结论 :利用分子生物学技术能够成功克隆GbpB功能区基因并获得其融合蛋白的表达 ,为后续研究奠定了基础     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的 :在大肠杆菌中表达变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因 (glucanbindingproteinB ,gbpB) ,并对重组蛋白进行初步纯化 ,为下一步制备多抗和进行相关的研究奠定基础。方法 :将克隆到的gbpB全长编码区基因克隆到表达载体 pPROEXTMHTb ,构建表达质粒 pPROEXTMHTb - gbpB ,以大肠杆菌E .coliBL2 1(DE3)为宿主菌进行诱导表达 ,表达产物经镍 -次氮基三乙酸 (Ni-NTA)柱进行亲和层析纯化。结果 :工程菌经IPTG诱导 3h后 ,在SDS -PAGE上出现一条新的蛋白条带 ,相对分子量 (Mr)为 4 .5～ 5 .0× 10 3 ,以可溶形式存在 ,经Ni-NTA柱纯化后获得纯度较高的重组葡聚糖结合蛋白B。结论 :获得Mr为 4 .5～ 5 .0× 10 3 的重组葡聚糖结合蛋白B     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因防龋疫苗的构建及其在哺乳动物细胞中的表达

目的：观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白B(gbpB)真核表达质粒pcDNA3．1( )-gbpB在哺乳动物细胞COS-7的表达情况，方法：通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3．1( )-gbpB，通过脂质体转染法将其转染车COS-7细胞，通过免疫组化SABC法检洲其在COS-7细胞的表达结果：pcDNA3．1( )-gjhB质粒转染的细胞胞浆中呈棕黄色染色，胞核中无着色，pcDAN3．1( )空载体转染的细咆咆浆及胞核无着色，空白对照组也无着色结论：质粒pcDNA3．1( )-ghpB转染COS-7后能够住细胞内翻译、表达，表达的蛋白质位于胞浆中．可与抗GbpB抗体特异性结合，具存抗原性，可作为基因疫苗。     

变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD的分子克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的：克隆变形链gbpA的葡聚糖结合区GBD的基因片段，并使其在大肠杆菌中获得表达。方法：PCR技术克隆GBD片段及蛋白重组融合表达技术获得其在大肠杆菌中的表达。结果：成功克隆变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD的基因片段，并在大肠杆菌中得到表达。结论：利用分子生物学技术能够成功克隆目的基因并获得融合蛋白的表达。     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白的研究进展

本文介绍了一类对牙菌斑的发育,结构和致龋力具有重要意义的变形链球菌表面蛋白－葡聚糖结合蛋白,阐述了其作用,种类及分子结构等。     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白D(gbpD)基因失活菌株体外黏附能力的实验研究

目的:体外观察gbpD基因失活菌株在羟基磷灰石表面的黏附能力,为明确GbpD在变形链球菌黏附过程中的作用提供实验依据。方法:荧光标记gbpD失活菌和野生菌,与唾液包被的羟基磷灰石粉末共同孵育后,测定羟基磷灰石沉淀的荧光值,比较粘附率的差异。结果:发现gbpD失活菌的黏附率(19.7%±0.91)低于野生菌(29.5%±2.9),差异有显著性(P<0.05);当加入抗GbpD抗体后,变形链球菌UA159的黏附率低于未加抗体组(P<0.05)。结论:GbpD的缺失严重影响了变形链球菌与唾液包被羟基磷灰石的粘附,抗GbpD抗体对这种粘附有一定的抑制作用,表明GbpD与变形链球菌的粘附能力有关。     

模拟微重力对变异链球菌gtfs mRNA表达的影响

目的：观察变异链球菌在模拟微重力环境下形态学的变化,及对其葡糖基转移酶基因(gtfs)mRNA表达的影响。方法：采用旋转培养系统(rotary cell culture system,RCCS)建立模拟微重力细菌培养模型,将变异链球菌分为模拟微重力组和对照组。在37℃厌氧环境(80％N2,20％CO2)下培养24h,收集模拟微重力组及对照组菌体,通过扫描电镜、透射电镜观察细菌的形态学变化;并通过Q-PCR方法检测模拟微重力对变异链球菌gtfB,gtfC,gtfD mRNA表达的影响。结果：扫描电镜图片显示,模拟微重力组细菌之间的不定形胶冻样物质明显少于对照组;透射电镜观察显示模拟微重力组细菌的荚膜部分减少,分裂状态下的细菌两极不对称。模拟微重力条件下变异链球菌gtfB、gtfC、gtfD mRNA表达水平呈下降趋势,与对照组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论：模拟微重力环境下变异链球菌的超微结构有显著改变,对其gtfB、gtfC、gtfD mRNA表达有明显的抑制作用。     

Biological functions of glucan-binding protein B of Streptococcus mutans

INTRODUCTION: Streptococcus mutans has been implicated as a major causative agent of dental caries in humans. Bacterial components associated with the adhesion phase of S. mutans include glucosyltransferases, protein antigen C and proteins that bind glucan. At least four glucan-binding proteins (Gbp) have been identified; GbpA, GbpB, GbpC and GbpD. METHODS: In our previous study, the contributions of GbpA and GbpC to the virulence of S. mutans were investigated; however, the biological function of GbpB and its role in the virulence of S. mutans remain to be elucidated. Using a GbpB-deficient mutant strain (BD1), we demonstrated in the present study that GbpB has a role in the biology of S. mutans. RESULTS: The growth rate of BD1 was lower than that of other strains, while it was also shown to be less susceptible to phagocytosis and to form longer chains than the parental strain MT8148. In addition, electron microscope observations of the cell surfaces of BD1 showed that the cell-wall layers were obscure. CONCLUSION: These results suggest that GbpB may have an important role in cell-wall construction and be involved in cell separation and cell maintenance.     

变形链球菌、远缘链球菌耐氟菌株与亲代菌株基因组REA的比较分析

目的：利用限制性核酸内切酶(REA)技术，对变形链球菌、远缘链球菌及耐氟菌株的基因组进行比较，判定变形链球菌、远缘链球菌耐氟突变后，遗传型是否发生改变。方法：采用REA技术，经多次实验自行确立REA反应体系，对变形链球菌、远缘链球菌及耐氟菌株的基因组进行比较。结果：变形链球菌、远缘链球菌耐氟菌株的基因组已发生改变。结论：变形链球菌、远缘链球菌耐氟突变后，已具有自身的遗传特性。     

表面活性剂Zonyl FSC对变形链球菌合成变聚糖的影响

目的：为探讨表面活性剂ＺｏｎｙｌＦＳＣ抗菌斑的机理，而研究ＺｏｎｙｌＦＳＣ对变形链球菌合成变聚糖的影响。方法：用蒽酮法测定变聚糖的含量，用考马斯亮蓝法测定菌体蛋白含量，以“每单位重量细菌蛋白的变聚糖量”为指标来评估ＺｏｎｙｌＦＳＣ对变聚糖产生的影响，结果：随着ＺｏｎｙｌＦＳＣ浓度的升高，变聚糖量有降低的趋势。结论：ＺｏｎｙｌＦＳＣ对变形链球菌变聚糖的合成有抑制作用。     

大蒜素对变形链球菌抑制作用的体外研究

目的探讨大蒜素对变形链球菌的抑制作用。方法在含变形链球菌的液体培养基中,分别加入大蒜素、头孢拉定和乙酰螺旋霉素,培养后用分光光度计测定浊度,计算各组相对增殖率和抑菌率,进行比较。结果与对照组相比,大蒜素、头孢拉定与乙酰螺旋霉素对变形链球菌均有较强的抑制作用(P<0.01)。三组间的抑菌效能无显著性差异(P>0.05)。结论大蒜素对变形链球菌有较强的抑制作用,与其他抗生素作用类似,且不良反应少,可以替代抗生素。     

牙齿漂白及再矿化对变形链球菌在釉质表面粘附的影响

目的 :探讨牙齿漂白及漂白后再矿化对变形链球菌在釉质表面粘附定植的影响。方法 :选用因正畸减数的前磨牙分别进行离体牙和活髓牙漂白。离体牙漂白后分别应用生理盐水、人工唾液和再矿化液处理 ,活髓牙漂白后分别给予盐水和再矿化液含漱 ,分别分离培养变形链球菌并计数。结果 :离体牙和活髓牙漂白后釉质表面粘附的变形链球菌均明显增多 ,并且变形链球菌在牙齿漂白后应用再矿化液处理 ,釉质表面的粘附能力低于对照组。结论 :漂白后变形链球菌在釉质表面的粘附能力增强 ,应用再矿化液有助于减少变形链球菌在漂白后釉质表面的粘附。