尿酸性肾病大鼠肾组织中TGF-β1 CTGF mRNA的表达变化及补肾活血方对其影响

目的：观察尿酸性肾病大鼠肾脏中TGF-β1、CTGFmRNA表达情况及补肾活血方对其影响，为肾间质纤维化的防治提供依据。方法：采用酵母、腺嘌呤制作尿酸性肾病大鼠模型，采用RT—PCR法，动态观察大鼠肾脏中TGF-β1、CTGFmRNA表达情况及补肾活血方对其影响。结果：造模后，TGF-β1、CTGFmRNA在尿酸性肾病大鼠肾组织中的表达均有所增加，与正常组比较，TGF-β1 mRNA的表达在第1周末无明显变化，P〉0．05，第2周后表达明显增加，P〈0．01；CTGFmRNA的表达在第1周末即出现明显增加，P〈0．01，且维持高水平表达至第5周末。各给药组大鼠予以相应药物治疗后，TGF-β1mRNA表达有不同程度的降低。结论t尿酸性肾病的发生、发展与多种生长因子相互协同作用有关。TGF-β1和CTGF在尿酸性肾病的进展中均起了一定作用，其中CTGF不仅仅是作为TGF-β1的下游因子发挥作用，同时可能也作为平行于TGF-β1的独立因素存在，TGF-β1可能在本病进展中起了比CTGF更重要的作用，对其进行干预，是防治尿酸性肾病肾间质纤维化的重要途径之一。而补肾活血方可降低尿酸性肾病大鼠肾脏中TGF-β1 mRNA表达，可用于肾间质纤维化的防治。     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β_1、smad7蛋白表达的影响

目的:观察温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1、smad7蛋白表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:将雄性SD大鼠(120只)随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组30只。采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型(假手术组只分离但不结扎输尿管),于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦(10 mg·kg-1·d-1),温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方(9.8 g·kg-1·d-1)。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、smad7蛋白的表达。结果:造模后第14天温肾活血化湿方较模型组明显降低尿蛋白定量(P0.05),第21天温肾活血化湿方与模型组比较有极显著降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较smad7蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:温肾活血化湿方通过抑制TGF-β1,上调smad7蛋白表达,从而延缓肾间质纤维化的进程。     

软肾散对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β1及α—SMA的影响

目的：观察软肾散对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型肾间质纤维化（RIF）的影响及可能的作用机制。方法：将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利治疗组和软肾散治疗组,后3组建立UUO大鼠模型。治疗结束后测定大鼠肾功能、行HE染色观察肾组织病理变化,计算肾小管间质病理积分,用免疫组化方法测定肾TGF—β1、α-SMA的表达情况。结果：两治疗组大鼠BUN、SCr低于模型组（P〈0．01）,两治疗组组间差异无统计学意义（P〉0．05）;肾间质病理积分显示两治疗组显著低于模型组（P〈0．01）,两治疗组组间差异无统计学意义（P〉0．05）;免疫组化结果表明,两治疗组TGF—β1和α—SMA的表达均低于模型组（P〈0．01）,两治疗组组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：软肾散能一定程度上减轻UUO大鼠RIF程度,其作用机制可能与下调TGF—β1和α-SMA表达有关。     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织NF-κB表达的影响

目的:探讨温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型,将雄性SD大鼠80只随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组20只;于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予等量生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦[10 mg/(kg·d)],温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方汤剂[9.8 mg/(kg·d)]。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织NF-κB的表达。结果:第7、14、21天UUO组中NF-κB表达较假手术组高(P0.05),治疗组在第7天较UUO组低(P0.05)。结论:温肾活血化湿方可能通过抑制NF-κB的过度表达从而延缓肾间质纤维化的进程。     

补肾活血方对肾间质纤维化大鼠肾组织中血小板衍生生长因子蛋白表达的影响

目的:观察补肾活血方对实验大鼠肾间质纤维化的保护作用并探讨其作用机制。方法:实验采用单侧输尿管梗阻大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、洛汀新组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组,观察了梗阻侧肾脏组织形态学改变,并分别于单侧输尿管梗阻术后第3、7、14、21、28d采用法,观察造模大鼠肾组织中血小板衍生生长因子(PDGF-BB)蛋白表达变化。结果:造模各组与假手术组相比均呈不同程度的病理损害,肾组织PDGF-BB蛋白表达3d后开始增加,随时间延长,PDGF-BB蛋白表达逐渐增加。与模型组相比,各给药组大鼠肾功能得以改善,肾组织PDGF-BB蛋白的表达有所降低(P<0.05或P<0.01)。结论:补肾活血方可以降低肾组织中PDGF-BB蛋白的表达,防治肾间质纤维化。     

益肾活血通络法对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏缺氧诱导因子一血管内皮生长因子信号通路干预作用的实验研究

目的探讨缺氧诱导因子Or．（hypoxia-inducible factor α,HIF-α）诱导血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor α,VEGF-α）表达的作用机制及微血管损伤发生的机制及“益肾活血通络法”干预效果,为中医药治疗。肾间质纤维化提供新的依据。方法实验采用单侧输尿管梗阻（unilateral urethral obstruction,UUO）造成肾纤维化动物模型,并以益肾活血方、氯沙坦灌胃对其进行治疗性干预,分别在术后第7天、14天、21天采集肾脏标本,运用免疫组化法检测HIF-α、VEGF在肾脏中的分布、表达。结果与假手术组比较,模型组、治疗组在各时间点HIF-α、VEGF表达均显著上调（P〈0．01）;在各时间点,益肾活血方组和氯沙坦组较模型组大鼠HIF-α、VEGF表达均下调（P〈0．01）。随着干预时间的延长,模型组、治疗组HIF-α、VEGF表达都逐渐增强,但增强幅度明显下调;益肾活血方组较氯沙坦组大鼠HIF-α、VEGF下调明显,有统计学差异（P〈0．05）。结论益’肾活血方能有效地降低HIF-α及VEGF表达,改善UUO大鼠内源性低氧状态,减轻微血管损伤,发挥抗肾纤维化的作用。     

齐墩果酸、丹酚酸对 UUO 大鼠肾及肾小管功能的影响

目的观察抗行灵方的主要药用成分齐墩果酸和丹酚酸在单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠肾间质纤维化（RIF）过程中的作用及机制。方法健康雄性SPF级SD大鼠48只,随机分为4组,其中假手术组、UUP模型组、齐墩果酸组、丹酚酸组各12只。造模后第28日腹主动脉采血检测血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）,收集24h尿液,检测24h尿蛋白定量、取肾组织,HE染色比较各组。肾小管间质损伤程度。结果在UUO模型中．丹酚酸和齐墩果酸在延缓实验大鼠肾功能衰竭中的功能和侧重各有不同,除假手术外各组大鼠肾功能出现失代偿,尿微量蛋白排泄增多,肾间质纤维化加重;与假手术组、模型组相比,齐墩果酸组SCr、NAG、24h尿蛋白定量的水平显著降低;丹芬酸组BUN、NAG、α1-M、24h尿蛋白定量的水平显著降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论丹酚酸及齐墩果酸单体均能够保护肾功能,降低血肌酐和尿素氮,并在一定程度上减少尿微量蛋白的排泄。     

积雪草颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的：探讨积雪草颗粒（CTA）对肾小管间质纤维化（RIF）的防治作用,为临床应用CTA延缓慢性肾脏疾病进展提供理论依据。方法：建立SD大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型,并随机分为假手术组、模型对照组、积雪草颗粒大、中、小剂量组及福辛普利钠片对照组6组。UUO术后21d处死各组大鼠,分别用免疫组化法和RT—PCR方法检测各肾组织α-SMA的表达。结果：模型组α-SMA的表达高于假手术组,差别有统计学意义（P〈0．01）;而积雪草颗粒组和福辛普利钠片对照组的指标低于模型组,差别有统计学意义（P〈0．01）,且积雪草颗粒剂量与抑制α-SMA表达的生物学效应呈正相关;积雪草颗粒大剂量组和福辛普利钠片对照组比较,差别无统计学意义（P〉0．05）。结论：积雪草颗粒可能通过抑制肌成纤维细胞（MyoF）的增生、聚集,下调α-SMA的表达,减轻肾小管间质的损伤,从而起到防治肾间质纤维化的作用。     

银杏叶联合依那普利对单侧输尿管梗阻肾间质纤维化的影响

目的观察银杏叶联合依那普利对肾间质纤维化的防治作用及其效果。方法将75只雄性SD大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、依那普利组、银杏叶组及依那普利加银杏叶组,每组15只。除假手术组外,采用单侧输尿管梗阻（UUO）建立肾间质纤维化模型。银杏叶组、依那普利组、依那普利组加银杏叶组分别给予银杏叶300mg／（kg·d）、依那普利粉末10mg／（kg·d）及银杏叶加依那普利联合灌胃,每日1次,假手术组及模型组给予等容积0．9％氯化钠注射液灌胃治疗。于实验第3、7、14d分批处死大鼠,各组每次处死5只。留取大鼠结扎侧肾组织进行形态学和免疫组织化学观察。观察指标：肾组织经HE染色观察梗阻侧肾组织病理学的改变,用免疫组织化学SP方法检测肾组织中转化生长因子β1（TGF—β1、）、核因子KB（NF—KB）、仪平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况及肾组织中胶原蛋白与肾质量之比。结果与假手术组相比,模型组中肾间质水肿,单个核细胞浸润,肾间质纤维组织相对面积显著扩大,TGF—β1、NF—κB、α-SMA的表达及肾组织中胶原蛋白含量表达明显上调（P〈0．05）。药物干预后,上述上调指标均被显著抑制（P〈0．05）,其中依那普利组加银杏叶组与依那普利组、银杏叶组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,而依那普利组与银杏叶组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论银杏叶片能够减少UUO大鼠肾间质炎性细胞浸润,减少肾间质胶原蛋白的含量,有防止UUO大鼠肾间质纤维化的作用,银杏叶和依那普利两者合用抗RIF有协同作用。     

健脾补肾、和解泄浊法抑制肾间质纤维化的实验研究

目的 观察补肾排毒合剂对单侧输尿管梗阻（UUO）后大鼠肾间质α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）表达的影响及对肾间质纤维化的保护作用。方法 采用UUO诱导肾间质纤维化的动物模型，将48只Wistar大鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（UUO）和补肾排毒合剂治疗组（REM），每组分别于造模后3、10、20、30d各处死4只，取左肾组织行HE染色，动态观察肾脏病理学变化，评定各组肾小管间质损害程度，以免疫组化方法测定肾组织中α—SMA、Col Ⅳ。结果 与UUO组比较，REM组大鼠肾间质病变程度明显减轻，α-SMA、Col Ⅳ在肾间质中的表达也有明显降低。结论 补肾排毒合剂可通过降低α—SMA、Col Ⅳ的表达，减少肾间质细胞外基质合成，延缓肾间质纤维化的进展。     

益肾活血法对慢性肾衰竭大鼠ColⅢ、LN的影响

目的观察益。肾活血法对慢性肾衰竭大鼠Ⅲ型胶原（ColⅢ）、层粘连蛋白（LN）的影响。方法采用腺嘌呤制备慢性。肾衰竭动物模型。检测大鼠血清LN的变化，运用免疫组化法观察肾组织ColⅢ蛋白表达。结果益肾活血法能降低血清LN的含量，降低肾间质中ColⅢ蛋白的表达。结论益肾活血法通过抑制ColⅢ、LN的增生，干预肾间质纤维化，进而延缓慢性肾衰竭。     

消症散结法组方对UUO大鼠肾间质纤维化CTGF表达的影响

目的：动态观察消症散结法组方对单侧输尿管梗阻（UUO）所致肾小管间质纤维化大鼠CTGF表达的影响,探讨其作用机制。方法：111只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、对照组、消症散结法组方（肾炎防衰液）大、中、小剂量组。分别在术后第二周、第四周处死动物,采用免疫组化方法检测肾组织中CTGF蛋白表达。结果：随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾组织CTGF表达增加;与模型组各对应时间点比较,消症散结法组方（肾炎防衰液）治疗后可使肾组织中的CTGF表达明显降低（P〈0．05）。结论：消症散结法可通过抑制CTGF表达,减轻肾间质纤雏化。     

黄芪甲苷对肾间质纤维化的拮抗作用

目的:探讨黄芪甲苷对大鼠单侧输尿管梗阻模型(UUO)肾间质纤维化的影响。方法:27只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷组,每组9只。于治疗2周后,心脏采血,检测血肌酐、尿素氮;取梗阻侧肾组织,免疫组织化学染色观察TGF-β、CTGF、FN的阳性表达,并进行半定量分析。结果:与假手术组相比,模型组血肌酐、尿素氮的水平以及TGF-β、CTGF、FN的表达均显著增高。与模型组相比,黄芪甲苷组血肌酐、尿素氮水平降低,TGF-β、CTGF、FN的阳性表达显著下调。结论:黄芪甲苷可能通过降低大鼠血肌酐、尿素氮,抑制TGF-β、CTGF、FN的表达,改善肾功能作用,从而延缓肾间质纤维化病程的进展。     

益肾化瘀方对单侧输尿管结扎模型大鼠波形蛋白表达的影响

目的：动态观察单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）模型大鼠肾组织中波形蛋白（Vimentin）的表达及益肾化瘀方对其影响,探讨Vimentin在肾间质纤维化进程中的表达变化和益肾化瘀方对其影响以及防治肾间质纤维化可能的机制。方法：将清洁级雄性大鼠150只随机分为假手术组、模型组、益肾化瘀方低剂量组、益肾化瘀方高剂量组和洛汀新组,采用单侧输尿管结扎的方法建立肾间质纤维化模型（UUO模型）,分别于UUO术后第3天、第7天、第14天、第21天、第28天采用光学显微镜观察肾间质病理形态学改变,采用免疫组化（PV二步法）观察大鼠肾组织Vimentin的表达变化。结果：造模3 d后即可见肾间质水肿,随时间延长逐渐出现炎细胞浸润,部分小管消失,皮质变薄。同时,Vimentin表达增高,与时间呈相关性。用药干预后,Vimentin表达较模型组有所降低,（P〈0.01或P〈0.05）,益肾化瘀方高剂量组与洛汀新组差异不显著。结论：益肾化瘀方组可能通过降低肾组织中Vimentin表达,减轻细胞外基质沉积,从而延缓肾间质纤维化进程。     

活血健脾补肾法对MSC移植在结肠炎大鼠肠道增殖分化的影响

目的：探讨中医活血健脾补肾法对骨髓间充质干细胞（MSC）移植在结肠炎大鼠肠道增殖分化的影响。方法：雌性SD大鼠以5%2、4、6,三硝基苯磺酸（TNBs）诱导形成结肠炎模型,造模后随机分为模型对照组、MSC移植组、活血组、健脾组、补肾组,第2天将体外分离培养的雄性SD大鼠MSC经尾静脉注射到各组雌性大鼠体内。疗程结束后,取大鼠结肠组织,免疫组化法检测其肠道干细胞标记物Musashi-1、端粒酶逆转录酶（TERT）的表达。结果：免疫组化检测到MSC移植组及中药治疗各组大鼠结肠黏膜组织Musashi-1及TERT均有阳性表达,其中活血组与MSC移植组比较差异有显著性意义。结论： 活血法代表方药桃红四物汤较明显促进MSC在结肠炎大鼠肠道增殖分化。     

温莪术对大鼠肾间质纤维化的保护作用及其机制研究

目的:研究温莪术油对单侧输尿管(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化的保护作用及其机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组,莪术组和氯沙坦组。对模型组和治疗组行单侧输尿管结扎术。术后14 d处死大鼠,留取梗阻侧肾组织观察病理损害和间质纤维化程度,免疫组化检测TGF-β1、CTGF在肾组织中的表达。结果:模型组大鼠肾间质纤维化程度最明显,药物干预后肾间质纤维化程度减轻(P<0.05)。免疫组化结果表明模型组大鼠TGF-β1、CTGF表达明显增加;药物干预后TGF-β1、CTGF表达明显低于模型组(P<0.05)。温莪术组与氯沙坦组各指标比较差异均无统计学意义。结论:温莪术可能是通过减少TGF-β1的表达来抑制CTGF的分泌,进而减轻由此导致的肾间质纤维化的损伤。     

加味黑地黄汤超微饮片对UUO大鼠肾脏纤维化的影响

目的:观察加味黑地黄汤超微饮片对单侧输尿管结扎(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)大鼠肾脏纤维化的影响。方法:采用单侧输尿管结扎法复制单侧输尿管梗阻致大鼠肾间质纤维化模型,将其随机均分为空白组、假手术组、模型对照组、超微饮片组、尿毒清颗粒组,每组10只。加味黑地黄汤超微饮片组和尿毒清颗粒剂组分别予加味黑地黄汤超微饮片和尿毒清颗粒剂溶于4 mL蒸馏水灌胃,空白组、假手术组和模型组均予等体积蒸馏水灌胃。在UUO术后第14 d,将各组大鼠处死,分别取肾组织以TUNEL法检测各组大鼠肾组织细胞凋亡,并检测各组大鼠血液流变学,以及血肌酐和尿素氮。结果:经过TUNEL法检测,超微组和尿毒清颗粒组对于肾间质纤维化大鼠的肾组织细胞的凋亡均有改善作用(P0.01),且2者作用相近(P0.05);尿毒清颗粒剂对UUO大鼠血液流变学的改善优于超微饮片组(P0.05);而超微饮片组和尿毒清颗粒剂组血肌酐和尿素氮均下降,与模型组比较有统计学意义(P0.01或P0.05)。结论:加味黑地黄汤超微饮片能改善UUO大鼠肾组织的细胞凋亡和血液流变学指标,改善肾组织的纤维化。     

肾复康Ⅱ号对大鼠肾间质纤维化及转化生长因子-β1的影响

目的:观察肾复康Ⅱ号胶囊对大鼠肾间质纤维化及转化生长因子-β1的表达情况的影响。方法:采用单侧输尿管结扎的方法制造大鼠肾间质纤维化模型。90只SD大鼠随机分为假手术组(对照组)、模型组、肾复康Ⅱ号2.25g/kg组、4.5g/kg组、9g/kg组,肾复康Ⅱ号胶囊各组分别以以上剂量水溶剂灌胃,假手术组及模型组每天同时间以等体积的蒸馏水灌胃。给药7、14、21天后分别将造模大鼠的肾脏进行HE、Masson染色,观察肾间质纤维化的面积的变化;通过免疫组化的方法检测肾间质中转化生长因子-β1的表达情况。结果:模型组和肾复康Ⅱ号胶囊各组均出现肾间质纤维化病理改变,各剂量组(有效剂量2.25g/kg～9g/kg)病变程度与模型组相比较轻,具有显著性差异。肾复康Ⅱ号胶囊各组之间无显著性差异。TGF-β1表达在模型组和肾复康Ⅱ号胶囊组明显强于假手术组,肾复康Ⅱ号胶囊各组(有效剂量2.25g/kg～9g/kg)TGF-β1表达较模型组明显减少。结论:肾复康Ⅱ号胶囊可以有效抑制肾间质纤维化及转化生长因子-β1的表达,这可能是益肾散结法抗肾间质纤维化的部分途径。