β淀粉样蛋白诱导U937细胞凋亡

为探讨β淀粉样蛋白对U937细胞的作用,用β淀粉样蛋白处理培养的U937细胞,以原位凋亡法、DNA琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞分析法检测细胞凋亡。结果发现,β淀粉样蛋白可引起U937细胞凋亡,表现在原位凋亡染色呈现阳性,DNA图谱呈现典型的梯形,而在流式细胞仪测得的直方图上显示出凋亡特征性的亚二倍体峰（亚G1峰）。     

可溶性β-淀粉样蛋白25-35致PC12细胞凋亡的实验研究

目的：探讨水溶性β－淀粉样蛋白25－35（Aβ25－35）致PC12细胞死亡发生的可能机制。方法：采用MTT法分析Aβ25－35对细胞活性的影响；采用电镜，DNA电泳判Aβ－25－35致PC12细胞死亡的类型，应用免疫细胞化学和蛋白杂交检测P53蛋白是否参与细胞的损伤，结果：MTT法检测显示随着Aβ25－35浓度的增加，细胞活性呈剂量依赖性降低（分别为0．91，0．75，0．65，0．58，0．54，0．41），电镜及DNA电泳显示细胞凋亡相关特征，加入Aβ25－35后免疫细胞化学和蛋白杂交示P53蛋白表达而对照组呈阴性。结论：水溶性Aβ－25－35在形成淀粉样纤维沉积前即可导致PC12细胞凋亡，P53蛋白参与细胞凋亡的发生。     

β淀粉样蛋白与早老素在细胞凋亡中的作用

阿尔茨海默病是一种多因异质性疾病,其发病机制仍在深入研究。业已证实,细胞凋亡在阿尔茨海默病的发病中起重要作用。β淀粉样蛋白及异常的早老素1、2可诱导神经细胞凋亡,从而导致神经元丢失。     

兔脾切除对血清β-淀粉样蛋白水平的影响

大量研究支持 β 淀粉样蛋白 (Ａβ)与阿尔茨海默病 (ＡＤ)发病有关 ,Ａβ在发病过程中起核心作用 ;也有证据显示免疫学因素在ＡＤ发病机制中具有重要作用。为探讨免疫与Ａβ的关联 ,我们进行了实验研究 ,发现脾切除术后对血清Ａβ水平有明显影响 ,现报道如下。1　材料与方法1 1　选材　实验动物模型制作 45只 3年老龄健康雄性大白兔 ,体重 5ｋｇ ,随机分为实验组 3 0只 ,对照组 15只 ,实验前禁食 12ｈ ,3 %戊巴比妥钠 3 0ｍｇ·ｋｇ-1自耳缘静脉注入。动物麻醉后 ,实验组行脾切除术 ,对照组仅行开腹、关腹术 ,动物苏醒后 1ｈ自由进食。1 2…     

NF-κB在β-淀粉样蛋白25-35诱导分化PC12细胞中的作用

目的探讨NF-κB在Alzheimer病（AD）中的作用。方法对AB25-35抑制PC12细胞生长的时间-效应关系和剂量-效应关系进行分析，确定Aβ25-35抑制PC12细胞生长的IC50和最大抑制效应出现的时间（X小时）。对IC50浓度的Aβ25-35作用X小时的PC12细胞和正常PC12细胞进行NF-κB P65 mRNA及其蛋白检测，其中NF-κB P65 mRNA采用RT—PCR法，NF-κB P65蛋白采用Western印迹法。结果Aβ25-35在36h对PC12细胞的生长抑制作用最强，Aβ25-35抑制PC12细胞生长的IC50约为30μmol／L；Aβ25-35能使NF-κB P65 mRNA及其蛋白表达明显增加。结论NF-κB能够促进AD中细胞凋亡的发生。     

阿尔茨海默病淀粉样β蛋白诱导神经元凋亡的研究进展

阿尔茨海默病是一种发病率高、危害极大的中枢神经系统退行性疾病，主要临床症状是智力进行性减退，特征性病理学改变是老年斑，神经元纤维缠结，以海马、皮层区域为主的神经元数目减少。淀粉样β蛋白是老年斑的主要成分。病人尸检报告提示阿尔茨海默病病人脑中一些神经元是通过凋亡机制蜕变的，故阿尔茨海默病神经元丢失的机制可能是凋亡。Yuan等。认为细胞凋亡是引起阿尔茨海默病病人脑组织中神经元数目减少的重要原因之一。     

脑室应用β-淀粉样蛋白对大鼠脑细胞凋亡的影响

目的通过脑室应用β-淀粉样蛋白(βAP)能否诱发脑细胞凋亡以探讨弥散性βAP是否具有神经毒性.方法成年大鼠随机分为两组,一组双侧脑室各注射Aβ1-42 5 μl(各30 nmol),另一组注射同体积的生理盐水,饲养1 w后,取脑组织以荧光细胞核染色技术、透射电子显微镜及TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)法观察凋亡细胞.结果βAP组大鼠脑组织凋亡细胞明显多于对照组(P<0.01).结论弥散性βAP具有神经毒性作用,脑细胞凋亡为其表现之一.     

JNK信号转导通路在β-淀粉样蛋白25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用机制

目的研究β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡的机制以及c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125的保护作用，探讨在Aβ25-35细胞毒性中JNK—c-Jun信号转导通路的可能作用机制。方法在培养的PC12细胞中加入Aβ25-35共孵育，用磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V)方法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡，用免疫印迹法检测不同时间点的JNK及c-Jun蛋白活性。结果PC12细胞经过Aβ25-35处理后发生凋亡，呈时间依赖性细胞生存率下降，免疫学方法检测显示细胞在Aβ25-35处理早期出现磷酸化JNK和磷酸化c-Jun的表达增高，且这一过程可被SP600125抑制。流式细胞仪检测显示在使用SP600125后，细胞生存率上升，差异具有统计学意义。结论体外PC12细胞培养显示Aβ25-35可诱导细胞凋亡，SP600125对Aβ25-35的细胞毒性具有保护作用，JNK—c-Jun信号转导通路可能参与了上述细胞毒作用机制。     

氯通道阻滞剂在β_(25-35)淀粉样多肽诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨氯通道阻滞剂(DIDS)对β25-35淀粉样多肽(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响。方法PC12细胞按实验不同分为对照组(DMEM培养液)、Aβ25-35组(Aβ25-35 40μmol/L)、DIDS组(Aβ25-35 40μmol/L+DIDS 50μmol/L)。MTT法测细胞存活率,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态学改变,流式细胞技术测细胞凋亡率。结果Aβ25-35组与对照组和DIDS组比较,PC12细胞的存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增高(P<0.05),不同DIDS浓度依赖性升高PC12细胞存活率,DIDS 50μmol/L能显著下调Aβ25-35诱导的细胞凋亡(P<0.05)。结论DIDS对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤有保护作用。     

β淀粉样蛋白_(25～35)对PC12细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨β淀粉样蛋白(Aβ)_(25~35)对PC12细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用不同浓度的Aβ_(25~35)与PC12细胞共孵育48 h后,用MTT法检测细胞生长活性,Hoechst33258核染色检测细胞凋亡,通过免疫细胞化学检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达。结果MTT检测显示Aβ_(25~35)抑制PC12细胞生长活性呈浓度依赖性,抑制作用随Aβ_(25~35)浓度的增大而加强;Hoechst33258染色显示Aβ_(25~35)与PC12细胞凋亡呈浓度依赖性关系;免疫细胞化学检测结果显示Bcl-2蛋白表达量随Aβ_(25~35)浓度的增大呈下降趋势,Bax、Caspase-3蛋白表达量随Aβ_(25~35)浓度的增大呈上升趋势。结论 Aβ_(25~35)可剂量依赖性诱导PC12细胞凋亡,使抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax,Caspase-3表达上调。     

血管去内皮损伤后平滑肌细胞凋亡的实验观察

目的 了解血管去内皮损伤后新内膜形成及平滑肌细胞(SMCs)凋亡的时相变化。方法用氮气干燥剥脱大鼠颈动脉内皮复制血管损伤模型,HE染色光镜形态计量内膜/中膜比(I/M),末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的荧光素d-uTP缺口末端标记(TRNEL)方法观察不同时间新内膜形成(I/M)及VSMC凋亡。结果 血管去内皮后四天,在SMCs增生形成的新内膜中有TUNEL法证实的细胞凋亡,I/M加比,凋亡指数(TUNELI)分别为0.12±0.06,2.4±1.98。在七天,内膜明显增厚(I/M为0.6±0.15,与四天比,P<0.05),TUNELI达到最大值(为9.3±3.8,与四天比,P<0.05)。到第14天,内膜明显增厚约为中膜的1.25倍(I/M比1.25±0.14,与七天比,P<0.05),TUNELI逐渐减小(为8.75±4.01;与七天比,P>0.05)。损伤后21天,内膜开始变薄(I/M比为0.98±0.41,与14天比,P<0.05),凋亡水平进一步下降(TUNELI为6.58±3.97,但差异无显著性,P=NS)。结论 血管壁对损伤刺激诱发增生反应的同时激活凋亡机制。凋亡调节血管壁细胞数和内膜增厚演变。细胞凋亡的平衡失调可能是动脉粥样硬化(AS)、再狭窄(RS)等血管疾病发生的机制之一。     

腺病毒介导的HCY2基因对血管平滑肌细胞凋亡的诱导作用

目的　观察高同型半胱氨酸诱导基因HCY2对于平滑肌细胞的作用。方法　以复制缺陷型腺病毒作为载体 ,将HCY2基因转移到平滑肌细胞中。提取平滑肌细胞的DNA ,进行凝胶电泳及ELISA ,行DNA片段化分析。用流式细胞术观察平滑肌细胞的亚二倍体。结果　转染HCY2后平滑肌细胞的DNA断裂成相差 2 0 0bp左右的片段 ,流式细胞术测定时发现 ,位于亚二倍体区的平滑肌细胞明显增多。结论　HCY2基因能引起平滑肌细胞的凋亡。     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡及c-myc基因表达的影响

目的探讨17β雌二醇(E2)对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响及其可能机制.方法应用流式细胞仪检测低、高浓度17βE2(10、100 nmol/L)对传代的VSMC凋亡率的影响,并通过细胞免疫组化方法观察对凋亡相关基因c-myc表达的影响.结果17β E2作用下VSMC凋亡率显著高于对照组(P＜0.01),伴随着VSMC凋亡率的增加,c-myc蛋白的表达亦增强,且表现明显的浓度依赖性.结论17β E2具有诱导VSMC凋亡的作用,其部分机制可能是通过上调促凋亡基因c-myc的表达有关.     

反义c-myc涂层支架对兔颈动脉细胞凋亡的影响

目的 :探讨铂 铱合金明胶蛋白涂层支架局部导入c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对兔颈动脉细胞凋亡的影响 ,寻求防治支架内再狭窄的途径。方法 :将携带c mycASODN的国产铂 铱合金明胶蛋白涂层支架置入兔颈动脉 (给药组 ,n =16 ) ,在术后 7、14、30、90d处死动物行苏木精 伊红和Weigert染色 ,图像分析测量新生内膜厚度和面积 ,c myc蛋白免疫组化染色 ,采用末端脱氧核苷酸酶介导的dUTP缺口末端标记法检测细胞凋亡 ,并与对照组 (n =16 )进行对比分析。结果 :两组支架术后 7、14d均未观察到平滑肌细胞凋亡 ,术后 30d在新生内膜中观察到明显的细胞凋亡 ,90d时显著高于 30d ;同时给药组平滑肌细胞的凋亡显著高于对照组。结论 :c mycASODN可诱导支架置入后平滑肌细胞凋亡 ,可用于防治再狭窄     

生存素表达对缺氧人肺动脉平滑肌细胞凋亡与增殖的影响

目的 探讨生存素在缺氧人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)中的表达情况及生存素的小分子抑制剂YM155对HPASMCs增殖与凋亡的影响.方法 将HPASMCs进行常氧或缺氧24 h培养并将其分为6组:常氧对照组(N组);24 h缺氧组(H组);常氧+YM155 10 nmol/L组(NY组);24 h缺氧+YM155 l nmol/L组(HY1组);24 h缺氧+YM155 10 nmol/L组(HY10组);24 h缺氧+YM155 100 nmol/L组(HY100组).采用Western blot法检测HPASMCs生存素蛋白表达,RT-PCR检测HPASMCs生存素mRNA表达.采用活细胞计数(CCK-8)法检测HPASMCs增殖活性(吸光度值,A值),原位末端标记(TUNEL)法检测HPASMCs凋亡率.结果 N组未见生存素蛋白(0.016±0.006)和mRNA表达,H组可见生存素蛋白(0.837±0.027)和生存素mRNA(17 086±1 044)表达.各剂量YM155干预组生存素蛋白、生存素mRNA含量分别为0.382±0.041、0.281 ±0.025、0.021±0.002、8 074 ±2 135、5 614±709、1 382±347,较H组显著降低(q值分别为20.26、24.77、36.36、8.59、11.14、15,53,均P＜0.05),且在一定范围内呈现浓度依赖性.N组细胞增殖活性和细胞凋亡率分别为0.99±0.07、2.68±1.36,与H组(1.44±0.12、0.61 ±0.50)比较差异有统计学意义(q值分别为6.484、3.532,均P＜0.05).各剂量YM155干预组细胞增殖活性和细胞凋亡率分别为1.32±0.07、1.17±0.07、0.84 ±0.13、5.52±1.71、6.66±1.49、7.97±1.93,与H组比较差异有统计学意义(g值分别为2.581、3.980、8.733、6.014、7、413、9.023,均P＜0.05),且在一定范围内呈现浓度依赖性.结论 生存素在缺氧性HPASMCs中表达,但在常氧性HPASMCs中不表达.生存素的小分子抑制剂YM155可以促进HPASMCs凋亡,抑制其增殖.生存素的表达异常在缺氧性肺动脉高压(HPH)的发生发展中发挥重要作用,可能成为治疗HPH的新靶点.     

白细胞介素-6对兔血管平滑肌细胞产生C反应蛋白的影响

目的:探讨白细胞介素-6(IL-6)能否诱导体外原代培养的兔血管平滑肌细胞(VSMCs)产生C反应蛋白(CRP)。方法:体外原代培养新西兰兔腹主动脉VSMCs。分别用白细胞介素(IL)-6(10 ng/ml)、IL-1β25 ng/ml或IL-6(10 ng/ml)+IL-1β(25 ng/ml)刺激VSMCs 48 h。对照组用等体积的IL-6的溶剂孵育48 h。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测培养细胞CRP mRNA和蛋白的表达情况。结果:对照组的原代VSMCs未见CRP的产生。VSMCs与IL-6单独孵育48 h后,CRP mRNA的表达量是对照组的(3.50±1.17)倍,能产生少量CRP,与对照组相比有差异。单独应用IL-1β不能诱导VSMCs产生CRP,但是在IL-1β和IL-6的联合刺激下,CRP mRNA表达量是对照组的(5.92±1.30)倍,CRP的合成亦达最大值。结论:IL-6能诱导原代培养的兔VSMCs产生CRP。尽管单独应用IL-1β不能刺激VSMCs产生CRP,但是它却能显著增强IL-6诱导CRP的表达。     

莫西沙星对大鼠气道平滑肌细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

目的 观察大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)在不同浓度的莫西沙星作用下,其线粒体膜电位（△Ψm）和半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3（Caspase-3）表达及细胞凋亡的变化,探讨莫西沙星促进ASMC凋亡的可能机制。方法体外原代培养大鼠ASMC,按随机数字表法分为空白对照组、莫西沙星40 mg/L组（M40组）、80 mg/L组（M80组）、120 mg/L组（M120组）和200 mg/L组（M200组）,均孵育48 h后,Annexin-V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率,用JC-1荧光探针在免疫荧光显微镜下检测细胞△Ψm的变化,Western blot法检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果各莫西沙星浓度组（M40组、M80组、M120组及M200组）的细胞凋亡率分别为(2.95±0.21)％、(7.39±0.63)％、(13.39±0.40)％和(21.20±1.42)％,均明显高于空白对照组的(0.94±0.05)％(均P＜0.01),并存在浓度依赖性(r=0.974,P＜0.01);荧光显微镜检测显示空白对照组以红色荧光为主,随着莫西沙星浓度增大,红色/绿色荧光强度值比率(分别为6.54±0.15、4.48±0.14、2.25±0.10和1.99±0.12)逐渐降低,与空白对照组(10.02±0.20)相比差异有统计学意义（均P＜0.01）,并存在药物浓度依赖性（r=-0.946,P＜0.01）;Western blot检测显示,空白对照组几乎无Caspase-3蛋白表达(0.31±0.03),各莫西沙星浓度组Caspase-3蛋白表达(分别为0.45±0.05、0.59±0.04、0.69±0.06和0.84±0.04)均明显高于空白对照组(0.31±0.03)（均P＜0.01）,同时也存在浓度依赖性(r=0.979,P＜0.01)。各组细胞凋亡率与△Ψm水平呈负相关（r=-0.887,P＜0.01）,与凋亡蛋白Caspase-3水平呈正相关(r=0.955,P＜0.01),各组细胞△Ψm水平与Caspase-3水平呈负相关(r=-0.951,P＜0.01)。结论 莫西沙星可能通过影响大鼠AΨm促进ASMC凋亡。     

三氧化二砷洗脱支架诱导猪损伤冠脉平滑肌细胞凋亡

目的观察三氧化二砷（As2O3）多聚左旋乳糖酸（PLLA）涂层支架对猪损伤冠脉平滑肌细胞的凋亡诱导作用及机制。方法在6头小型家猪的冠脉内随机植入裸金属支架、PLLA涂层支架、雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架,7天后处死,TUNEL法检测支架段血管平滑肌细胞凋亡率、免疫组化和Western blot法检测凋亡蛋白p53和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达,体外观察As2O3对大鼠血管平滑肌细胞的凋亡诱导作用和p53表达。结果与裸支架和PLLA涂层支架相比,雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架植入局部平滑肌细胞凋亡率以及p53表达明显增多,尤其以As2O3洗脱支架最为明显（P〈0．01）,雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架植入局部PCNA表达较裸支架和PLLA涂层支架明显减少（P〈0．01）,但二者间无显著性差异（P〉0．05）。体外细胞培养显示As2O3呈剂量依赖性的诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡和p53蛋白的表达。结论As2O3洗脱支架具有诱导猪损伤冠脉平滑肌细胞凋亡的作用,且较雷帕霉素洗脱支架更明显,其凋亡诱导作用和增加局部细胞p53表达有关。     

脂联素对气道平滑肌凋亡的作用及对AMPK活性的影响

目的 探讨脂联素对气道平滑肌细胞凋亡的影响及相关机制的研究.方法 体外培养大鼠气道平滑肌细胞株,逆转录-聚合酶链反应法检测气道平滑肌细胞脂联素受体的表达.将体外培养的大鼠气道平滑肌细胞于不间浓度的脂联素中孵育48 h,流式细胞仪测定细胞的凋亡率;Western blot法检测活性的一磷酸腺苷激活蛋白激酶(pho-AMPK)蛋白的表达.结果 脂联素能够促进气道平滑肌细胞凋亡,并存在浓度依赖性(r=0.952,P<0.01);Western blot显示随着脂联素浓度的升高pho-AMPK的表达增加(r=0.907,P<0.01).结论 脂联素可能通过激活一磷酸腺苷激活蛋白激酶进一步激活凋亡信号通路诱导气道平滑肌细胞凋亡.     

Acute cellular damage in medial smooth muscle cells following experimental coronary angioplasty in Dog. Damage of cytoskeleton and apoptosis

Summary The purpose of the present study was to investigate the responses of the cytoskeleton and the presence of apoptosis following acute damage of medial smooth muscle cells after percutaneous transluminal coronary angioplasty (PTCA). We killed 20 dogs, 4h and 4 days after PTCA (n=10 in each group). Ten dogs without PTCA were used as controls. PTCA was achieved by inflating balloon catheters two times, for 60s each time, to 150 PSI, followed by a 60-s deflation. The coronary artery obtained from each dog was fixed in 10% formalin neutral buffer solution. The response of the cytoskeleton was studied immunohistochemically, using monoclonal antibodies against α-smooth muscle actin, vimentin, and β-tubulin. Proliferation was determined by proliferating cell nuclear antigen (PCNA), and DNA fragmentation indicating apoptosis was determined by in situ nick end labeling. Four h after PTCA, endothelial denudation, microscopic mural thrombi, rupture of the internal elastic membrane, medial tear, and stretched smooth muscle cells with nuclei were found at the PTCA site. An immunohistochemical study revealed diffuse reduction or defective immunoreactivity in each cytoskeleton of medial smooth muscle cells, 4h after PTCA. The extent of positive immunoreactivity in the media decreased to 45±11% in α-smooth muscle actin (control value, 80±10%), 9±8% in vimentin (control value, 83±9%), and 10±7% in β-tubulin (control value, 75±8%). The decrease was more significant in vimentin and β-tubulin than in α-smooth muscle actin. Four days after PTCA, the features were diffuse cell death and the focal proliferation of medial cells, as well as macroscopic intramural thrombi. The extent of positive immunoreactivity in the media was 15±9% in α-smooth muscle actin, 13±7% in vimentin, and 14±11% in β-tubulin. There were no smooth muscle cells with positive PCNA (0%) in the control and 4-h groups, but 4 days after PTCA the percentage was 19±4%. In situ nick end labeling showed DNA fragmentation in the nuclei of medial smooth muscle cells at a rate of 15±5% 4h after PTCA and at 8±6% 4 days after PTCA, compared with 0% in the control. We concluded that severe damage of the cytoskeleton and medial smooth muscle cell death were induced immediately after PTCA, followed by proliferation of smooth muscle cells. Apoptosis may be partially involved in the death of smooth muscle cells, in addition to necrosis. Damage to the cytoskeleton and apoptosis may play an important role in the pathogenesis of acute lesions and the proliferation of smooth muscle cells after PTCA.