非小细胞肺癌血管生成因子与耐药相关基因的关系及其临床意义

肿瘤细胞对化疗药物产生原发或继发耐药是化疗失败的主要原因之一 ,研究表明非小细胞肺癌 (ｎｏｎ ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ,ＮＳＣＬＣ)耐药不仅与耐药相关基因蛋白表达有关 ,亦涉及血管生成因子[1] 。本文应用ＲＴ ＰＣＲ和免疫组织化学技术检测ＮＳＣＬＣ中多药耐药基因 (ＭＤＲ1)、多药耐药相关蛋白(ＭＲＰ)、肺耐药蛋白 (ＬＲＰ)及血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ)、碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)的表达并探讨它们之间关系 ,以便深入理解ＮＳＣＬＣ耐药机制并指导其综合治疗。一、材料与方法1 临床资料 :96例ＮＳＣＬ…     

胰岛素受体底物—1和葡萄糖转运蛋白基因多态性与糖尿病及糖尿 …

目的 探讨胰岛素受体底物－１（ＩＲＳ－１）和葡萄糖转运蛋白（ＧＬＵＴ１）的基因多态性与糖尿病及其糖尿病肾病的关系。方法 应用ＰＣＲ－＝ＲＦＬＰ方法对１３１例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者ＩＲＳ－１和ＧＬＵＴ１基因多态性进行了观察,并结合肾脏病变、体重指数（ＢＭＩ）和胰岛素敏感指数（ＩＳＩ）进行了分析。结果ＩＲＳ＿１基因多态性在ＮＩＤＤＭ和正常人中的分布没有明显差异。ＮＩＤＤＭ患者ＧＬＵＩ１     

NIDDM发病前后中国地鼠胰岛和肝脏细胞GLUT的变化研究

用胶原酶法分离胰岛细胞、超速离心法提取中国地鼠胰岛和肝脏细胞膜蛋白，ＳＤＳ电泳、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ分离ＧＬＵＴ后，应用ＧＬＵＴ２抗体免疫结合法测定ＧＬＵＴ的含量与分子量，同时测定了动物血糖、尿糖和血浆胰岛素的含量、显微镜下直接计数了胰岛细胞总数。结果表明：ＮＩＤＤＭ发病后，自发ＮＩＤＤＭ中国地鼠胰岛细胞ＧＬＵＴ含量减少，与ＧＬＵＴ２抗体反应明显减弱，但肝脏ＧＬＵＴ无明显变化。胰岛细胞总数发病前后大体一致。而血糖、尿精及血浆胰岛素浓度明显升高。     

转化生长因子大黄酸对肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白功能的影响

目的 对人肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白－１（ＧＬＵＴ１）进行鉴定。研究ＧＬＵＴ１的作用特点,ＴＧＦ－β１对其影响以及大黄酸的干预作用。方法 分别用ＲＴ－ＰＣＲ,免疫荧光染色,流式细胞仪和［＾３Ｈ］－２脱氧葡萄糖摄入率,对系膜细胞ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ表达,蛋白质分布和功能进行鉴定。观察不同浓度ＴＧＦ－β１在加或不加大黄酸的情况下对系膜细胞葡萄糖摄入以及ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ表达的影响。结果 人类肾小球系膜     

赖氨酰氧化酶与DMBT1基因在上消化道癌组织中表达的意义

上消化道恶性肿瘤 (食管癌、贲门癌和胃癌 )一直位居我国恶性肿瘤死亡率前 4位 ,而肿瘤转移又是大多数患者的致死因素。本研究旨在观察与结缔组织成熟有关的赖氨酰氧化酶 (ｌｙｓｙｌｏｘｉｄａｓｅ ,ＬＯ) [1] 和候选抑癌基因ＤＭＢＴ1(ｄｅｌｅｔｅｄｉｎｍａｌｉｇｎａｎｔｂｒａｉｎｔｕｍｏｒｓ)基因[2 ] 在食管癌、贲门癌和胃癌组织中的表达 ,探讨ＬＯ、ＤＭＢＴ1基因表达与上消化道恶性肿瘤发生发展的关系 ,以及与肿瘤临床病理特点之间的关系。一、材料与方法1.组织标本来源 :标本来自中国医学科学院肿瘤医院1999年 1月～ 2 0 0 0年 …     

胆固醇酯转送蛋白基因缺损症家系的调查

胆固醇酯转送蛋白(ＣＥＴＰ)将高密度脂蛋白(ＨＤＬ)的胆固醇酯转送给极低密度脂蛋白(ＶＬＤＬ)、中密度脂蛋白(ＩＤＬ)和低密度脂蛋白(ＬＤＬ),同时将甘油三酯从ＶＬＤＬ、ＩＤＬ和ＬＤＬ转送给ＨＤＬ,以调节血清ＨＤＬ胆固醇(ＨＤＬＣ)浓度[1]。ＣＥＴＰ基因突变影响其调节功能。继作者发现我国首例人ＣＥＴＰ基因缺失症(Ｄ442Ｇ杂合子突变)后[2],本研究又对其家系做了调查,现报道如下。一、对象和方法1对象:为我国首例人ＣＥＴＰ基因缺血症患者的父系及子系。2血脂测定:采用空腹血清,总胆固醇(ＴＣ)、甘油三酯(ＴＧ)用酶法,ＨＤＬＣ用直…     

期刊文摘

ＯＰＧ与ＭＢＰ融合蛋白在大肠杆菌中的表达[刘继中 ,纪宗玲 ,陈苏民 ,胡蕴玉 ,李　毅 ,张晓楠 .细胞与分子免疫学杂志 ,2 0 0 2 ;18(6 ) :5 5 1 5 5 3]　　目的　克隆人骨保护素 (ＯＰＧ)成熟肽段编码区基因 ,并在大肠杆菌中表达 .方法　采用ＲＴ ＩＦＣ ,扩增人ＯＰＧ成熟肽段编码区ｃＤＮＡ ,并克隆入原核表达载体 ｐＭＡＬ ｃ2ｘ中 ,转化ＢＬ2 1(ＤＥ3)ＰｌｙｓＳ大肠杆菌感受态细胞 .经 0 .1ｍｍｏｌ·Ｌ-1ＩＰＴＧ诱导后 ,收集菌体蛋白 ,进行ＳＤＳ ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定 .结果　获得人ＯＰＧ成熟肽段编码区ｃＤＮＡ …     

肾素系基因分子变异与糖尿病肾病和高血压关系的观察

糖尿病肾病 (ＤＮ)为终末期肾功能衰竭最主要的原因 ,是导致糖尿病过高死亡率的原因之一。目前 ,对糖尿病 (ＤＭ)发病机制的探讨 ,已成为该研究领域的一个主要方向。自 1991年Ｈｕｂｅｒｔ等[1] 首次发现血管紧张素转换酶 (ＡＣＥ)基因结构以后 ,ＡＣＥ基因多肽性与糖尿病肾病关联的研究取得了许多进展。随后 ,血管紧张素原 (ＡＧＴ)基因分子变异及血管紧张素Ⅱ1型受体 (ＡＧＴＲ1)基因分子变异与高血压、冠心病、脑血管病等大血管疾病关系陆续有报道[2 ,3 ] 。国外学者对ＡＧＴ、ＡＣＥ等肾素系基因与ＤＮ的关系虽然也见报道 ,但结果尚有争…     

胰岛素受体底物-1和葡萄糖转运蛋白基因多态性与糖尿病及糖尿病肾病的关系

目的探讨胰岛素受体底物１（ＩＲＳ１）和葡萄糖转运蛋白（ＧＬＵＴ１）基因多态性与糖尿病及其糖尿病肾病的关系。方法应用ＰＣＲＲＦＬＰ方法对１３１例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者ＩＲＳ１和ＧＬＵＴ１基因多态性进行了观察，并结合肾脏病变、体重指数（ＢＭＩ）和胰岛素敏感指数（ＩＳＩ）进行了分析。结果ＩＲＳ１基因多态性在ＮＩＤＤＭ和正常人中的分布没有明显差异。ＮＩＤＤＭ患者ＧＬＵＴ１基因ＸｂａⅠ（＋／－）基因型和ＸｂａⅠ（－）等位基因的发生率明显高于正常人。ＸｂａⅠ（＋／－）基因型和ＸｂａⅠ（－）等位基因在糖尿病肾病（７５％和４４％）的发生频率明显高于不伴肾病者（４４％和２９％）和正常人（３３％和２１％），而ＧＬＵＴ１基因多态性在不伴肾病者与正常人之间无明显差异。ＩＳＩ在ＸｂａⅠ（＋／＋）、ＸｂａⅠ（＋／－）和ＸａｂⅠ（－／－）３种基因，分别为０８２、０７６和０４８；ＧＬＵＴ１基因各基因型患者间ＢＭＩ差异无显著意义。结论ＧＬＵＴ１基因ＸｂａⅠ（－）等位基因不仅与糖尿病肾病的易感性相关，而且可能还与患者胰岛素抵抗的发生有关。     

多药耐药基因多顺反子逆转录病毒载体的构建及转染人脐血CD34+细胞的研究

临床上对肿瘤的治疗多采用联合化疗 ,因此将不同耐药谱系的多个基因导入造血干 /祖细胞可对该类细胞提供多重保护 ,对防止骨髓抑制 ,提高化疗药物剂量 ,增强疗效 ,具有重要意义[1,2 ] 。六氧甲基鸟嘌呤ＤＮＡ甲基转移酶 (ＭＧＭＴ)是决定细胞对亚硝基脲药物耐受性的分子基础。我们从人肝组织克隆了ＭＧＭＴ基因 ,采用新近发展起来的多基因表达技术[3] ,将ＭＧＭＴ与ＭＤＲ1基因同时构建在含内核糖体进入位点 (ＩＲＥＳ)多顺反子逆转录病毒表达载体上 ,转导脐血ＣＤ34 细胞 ,进行 2种不同耐药基因的表达研究。一、材料和方法1 主要试剂 :ＤＮ…     

丙肝病毒非结构蛋白基因3的克隆及其体外诱导表达

目的：研究丙型病毒非结构蛋白基因３（ｎｓ３基因）在体外真核细胞中的诱导表达。方法：以ＰＣＲ方法从含ＨＣＶｎｓ３基因的重组载体ｐＢｎｓ３中扩增出ｎｓ３基因，并将其插入到克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔ中，再与表达载体ｐＭＳＧ重组，以利到重组表达载体ｐＭＳＧ－ｎｓ３。然后采用磷酸钙沉淀法将其转染哺乳动物ＣＨＯ细胞，经地塞米松（ＤＭ）诱导，采用ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技术检测ＮＳ３蛋白的表达水平。结果：     

大鼠卵巢颗粒细胞IGF-Ⅰ、TGFβ、Fas-L表达与卵泡闭锁发生的研究

为研究ＩＧＦ－Ⅰ,ＴＧＦβ和Ｆａｓ－Ｌ在维持卵泡颗粒细胞存活和介导颗粒细胞凋亡中的作用,探讨卵泡闭锁的局部分子机理,将ＳＤ大鼠卵巢石蜡切片,用ＴＵＮＥＬ法和ＰＣＮＡ免疫组化法区别闭锁和生长卵泡,用免疫组化法标记这三种因子以及它们的膜受体在卵泡内的表达。结果显示：无腔和有腔生长卵泡内大多数颗粒细胞为ＰＣＮＡ阳性;早期有腔闭锁卵泡有５个以上颗粒细胞被ＴＵＮＥＬ法标记,部分颗粒细胞为ＰＣＮＡ阳性;晚期有腔闭锁卵泡剩余颗粒细胞多数被ＴＵＮＥＬ法所标记,但为ＰＣＮＡ阴性。有腔生长卵泡颗粒细胞ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－ＩＲ、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲ、Ｆａｓ、Ｆａｓ－Ｌ均为阳性。早晚期有腔闭锁卵泡的颗粒细胞为Ｆａｓ、ＴＧＦβ和ＴＧＦβＲ阳性。结果提示：ＴＵＮＥＬ法和ＰＣＮＡ免疫组化联合运用有利于区分闭锁卵泡和生长卵泡。ＩＧＦ－Ⅰ仅对有腔生长卵泡颗粒细胞有促进增殖和维持存活的作用,其表达的下降和消失为有腔卵泡闭锁的重要诱因。ＴＧＦβ、Ｆａｓ－Ｌ和Ｆａｓ可能介导有腔卵泡颗粒细胞的凋亡,参与闭锁过程,但在有ＩＧＦ－Ⅰ存在的条件下,其介导作用可能受到抑制     

编码耐热邻苯二酚2,3—双加氧酶的pheB基因在大肠杆菌中的…

构建ｐｈｅＢ基因高表达菌株。研究酶的耐热机制。通过ＰＣＲ扩增方法，对位于质粒ｐＦＤＡ１３上ｐｈｅＢ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然后亚克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３，转化Ｅ．ｃｌｉ ＴＧ１，经４２℃诱导，获得了高表达的基因产物，表达量占细菌总蛋白的３４．６％。     

监测FasL表达评估异基因造血干细胞移植后T细胞免疫功能状态

目的评估异基因造血干细胞移植后Ｔ淋巴细胞免疫功能状态。方法采用三色荧光标记的流式细胞术,对４例异基因造血干细胞移植、２例自体干细胞移植患者移植前后的Ｔ淋巴细胞及其亚群的ＦａｓＬ表达进行监测。结果移植前Ｔ细胞的ＴａｓＬ、表达率仅（２.１３％±２.０２％）,与正常对照组无显著差异（Ｐ＞０.０５）,移植后异基因造血干细胞移植患者ＦａｓＬ表达水平升高,尤以急性ＧＶＨＤ患者表达升高显著（Ｐ<０.０５）,而自体干细胞移植患者的ＦａｓＬ表达未见明显改变。结论异基因造血干细胞移植术后部分Ｔ淋巴细胞处于激活状态; ＦａｓＬ表达可能与ａＧＶＨＤ相关;对ＦａｓＬ表达的监测可从细胞、免疫分子两个层次对Ｔ细胞免疫功能状态进行评估,该体系的完善对临床判断预后、指导治疗可能有较直接的参考价值。     

EFFECTS OF MTX AND BN_52021 ON PAF－INDUCED CHEMOTAXIS OF PMNs AND I

ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＭＴＸＡＮＤＢＮ５２０２１ＯＮＰＡＦ－ＩＮＤＵＣＥＤＣＨＥＭＯＴＡＸＩＳＯＦＰＭＮｓＡＮＤＩＮＴＲＡＥＰＩＤＥＲＭＡＬＡＣＣＵＭＵＬＡＴＩＯＮＯＦＩＮＦＬＡＭＭＡＴＯＲＹＣＥＬＬＳＩＮＧＵＩＮＥＡＰＩＧＳＬｉｕＢａｏｊｕｎ刘宝军，Ｚ...     

Fas抗原表达与慢性乙型肝炎关系的进展

细胞凋亡为近年来国内外医学界研究的热门课题 ,有其进展日新月异之感觉。研究认为 ,肝细胞凋亡和肝细胞坏死有非常密切的关系。肝内细胞毒性Ｔ细胞 (ＣＬＴ)包括ＣＤ 4及ＣＤ 8,其ＣＴＬ可以通过释放穿孔素 ,颗粒酶以及ＦａｓＬ系统引起肝细胞凋亡及坏死。国内外许多学者发现乙型肝炎患者肝细胞表达Ｆａｓ及ＦａｓＬ。肝内侵润的Ｔ细胞表达的ＦａｓＬ ,肝内Ｆａｓ及ＦａｓＬ表达程度和病情轻重程度相关。肝内表达ＦａｓＬ可以自身导致肝细胞凋亡 ,也可能做活化Ｔ细胞形成免疫耐受[1 ] 。1　Ｆａｓ系统与细胞凋亡Ｆａｓ是人体多种细胞的一种…     

抑癌基因PTEN的结构、功能、作用机制及其研究现状

人类多种肿瘤染色体的 1 0ｑ2 3及其附近存在广泛而频繁的缺失 ,而野生型的 1 0号染色体能较好地抑制如ＧＭＢ细胞在裸鼠中的致瘤性 ,提示 1 0ｑ2 3可能存在抑癌基因[1] 。 1 997年 ,不同的研究小组从 1 0ｑ2 3定位克隆到了ＰＴＥＮ/ＭＭＡＣ1 /ＴＥＰ1 ,其编码的蛋白类似于双重特异性ＰＴＰｓ ,且在胞浆中表现出双重特异性磷酸酶活性(ＤＳＰ) [2 ] ,被认为是一种抑癌基因。同时 ,ＰＴＥＮ不仅是发现的第一个ＰＴＰ超家族中以磷酸肌醇为生理底物的磷酸酶 ,而且 ,与抑癌基因表达产物大多为核调控因子不同的是 ,其表达产物的调节作用在胞浆内…     

移植静脉平滑肌细胞凋亡及相关基因表达与增殖关系的动态研究

目的 探讨移植静脉狭窄发生机制。方法 建立１００只Ｗｉｓｔａｒ大鼠自体颈静脉移植与肾下腹主动脉模型。采用透射电镜、原位ＤＮＡ片断末端标记（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学法、检测移植静脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）凋亡及相关基因ｂａｌ－２、ｂａｘ蛋白和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果 术后１￣８周,移植静脉ＴＵＮＥＬ及ＰＣＮＡ阳性ＶＳＭＣｓ多于对照静脉（Ｐ〈０．０１）;术后１￣２周为ＴＵＮＥＬ及Ｐ     

心肌细胞缺氧通过激活AMPK促进GLUT4移位和葡萄糖摄取

目的：探讨心肌缺氧时ＡＭＰ激活的蛋白激酶（ＡＭＰＫ）激活对葡萄糖转运子４（ＧＬＵＴ４）移位和葡萄糖摄取的作用。方法：大鼠心室肌经５００μｍｏｌ／Ｌ腺嘌呤－９－β－Ｄ－阿糖呋喃腺苷（ａｒａＡ）处理后,分别与胰岛素、氰化钾、５－氨基咪唑－４－氨基甲酰－１－β－Ｄ核糖呋喃腺苷（ＡＩＣＡＲ）孵育,用放射性核素分析技术测定其葡萄糖摄取量和ＡＭＰＫ活力,应用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析心肌细胞ＧＬＵＴ４含量。结果：ＡＭＰＫ特异性激活剂ＡＩＣＡＲ和氰化钾可使心肌葡萄糖摄取增加（１倍和１．５倍）,但均受ａｒａＡ抑制。ＡＩＣＡＲ增加心肌ＡＭＰＫ活力和葡萄糖摄取,而ａｒａＡ则有抑制作用。心肌细胞质膜ＧＬＵＴ４分布明显增加而细胞器膜ＧＬＵＴ４分布相应减少。结论：氰化钾所致的心肌缺氧与ＡＩＣＡＲ一样可通过ＡＭＰＫ激活途径,促进ＧＬＵＴ４移     

弓形虫两种毒力株GRA1基因的比较研究

弓形虫 (Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ)是一种专性细胞内寄生的机会性致病原虫 ,广泛寄生于所有有核细胞中。它们生存在称之为纳虫泡的囊泡内[1,2 ] 。当其进入宿主细胞时 ,纳虫泡也几乎同时形成 ,纳虫泡膜上既有宿主细胞成分又有虫体分泌的某些物质掺合与修饰。藉此弓形虫有效地逃避宿主细胞内酶的消化以及活性氧对之造成损伤 ,故能继续发育与增殖[3] 。1989年 ,Ｃｅｓｂｒｏｎ Ｄｅｌａｕｗ等首次报道弓形虫的特化细胞器致密颗粒蛋白ＧＲＡＬ基因的分子生物学特性[5] (ＧＲＡ1作为可溶性蛋白分泌进入囊腔中 ,并与纳虫泡的周边网状结构有关[1] )。研究纳虫泡膜的虫体成分对于了解弓形虫的寄生机制