氨甲酰胆碱引起的促钠排泄反应和下丘脑室旁核胆碱乙酰转移酶免疫阳性反应变化

本研究选用清醒SD雄性大鼠,通过在体实验和免疫组化方法,观察大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱(carbachol)0.5μg后,肾钠排泄量变化与室旁核胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达的变化。结果显示侧脑室注射氨甲酰胆碱后40min,肾钠排泄量显著增加,室旁核的ChAT免疫反应阳性神经元数目明显增多(P<0.05),免疫染色强度明显增强(P<0.05);阿托品预处理后钠排泄量显著减少,下丘脑室旁核的ChAT免疫阳性反应(ChATIR)明显下降(P<0.05)。上述结果提示,侧脑室注射氨甲酰胆碱后,促钠排泄反应增强,下丘脑室旁核胆碱能神经元活性增强,阻断胆碱能受体后可下调氨甲酰胆碱诱导的上述变化。     

侧脑室注射肾上腺髓质素激活大鼠脑内儿茶酚胺神经元

利用Fos蛋白和酪氨酸羟化酶(TH)的双重免疫组化方法,观察侧脑室注射肾上腺髓质素(ADM)对大鼠心血管相关核团中儿茶酚胺神经元c-fos表达的影响,以探讨ADM的中枢效应是否通过激活脑内儿茶酚胺能神经元而诱发。侧脑室注射ADM引起最后区(AP)、孤束核(NTS)、巨细胞旁外侧核(PGL)和蓝斑核(LC)内Fos-TH双标神经元明显增加;降钙素基因相关肽受体拮抗剂CGRP8-37(30nmol/kg)可明显减弱ADM的效应。结果表明,ADM可兴奋脑内多个心血管相关核团的神经元,其中枢效应通过激活儿茶酚胺能神经元而诱发,降钙素基因相关肽受体可能介导这一效应。     

纳米二氧化锰对大鼠腹侧中脑的损伤作用

目的:探讨纳米二氧化锰(nano-MnO2)对大鼠腹侧中脑的损伤作用。方法:大鼠在脑立体定位下,实验组脑内注射nano-MnO2,对照组脑内注射生理盐水(NS),各组分别于注射1周后用免疫组织化学方法检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达变化。结果:免疫组织化学染色结果显示,实验组大鼠注射1周后,腹侧中脑损毁侧与对侧相比,TH阳性细胞明显减少(P<0.05),GFAP及iNOS阳性细胞明显增多(P<0.05);对照组大鼠注射1周后,腹侧中脑损毁侧与对侧相比,TH、GFAP和iNOS免疫反应阳性细胞均无明显变化(P>0.05)。结论:脑内注射nano-MnO2能引起大鼠中脑多巴胺能神经元的破坏,GFAP和iNOS的表达增加。     

侧脑室注射192-IgG-saporin致痴呆动物模型的实验研究

建立老年性痴呆模型大鼠,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元数目的变化。在成年SD大鼠左侧侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),3周后行Y迷宫检测其学习和记忆能力;4周后处死大鼠,采用免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑ChAT阳性神经元数目的变化。结果显示:模型组大鼠的学习记忆能力与正常组相比明显下降(P<0.01);模型组基底前脑的内侧隔核(MS)和斜角带垂直部(VDB)胆碱能神经元数目分别减少至正常组的9.70%和14.09%,与正常组相比均明显下降(P<0.01);学习、记忆能力与基底前脑胆碱能神经元数目密切相关。上述结果表明应用192-IgG-saporin免疫毒素能成功建立AD大鼠动物模型,该模型可用于抗痴呆药物的筛选及药效的评价。     

大鼠多重脑震荡后多巴胺能与胆碱能神经元的变化

目的:观察大鼠多重脑震荡(MCC)后中枢神经系统内多巴胺能神经纤维与胆碱能神经元的变化。方法:用金属单摆打击装置复制MCC大鼠模型,随机分为对照组和伤后1、2、4、8、16、24 d多个损伤组,用免疫组织化学双标技术检测大鼠脑内多巴胺能神经纤维中酪氨酸羟化酶(TH)和胆碱能神经元中胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达变化。结果:TH阳性表达在伤后1 d开始上升,8 d达高峰,24 d组基本恢复;ChAT阳性表达在MCC后均呈现下调改变。结论:多重脑震荡后多巴胺能神经纤维和胆碱能神经元的变化可能与中枢神经系统的认知功能障碍有关。     

强迫游泳大鼠脑内信号分子ERK1/2磷酸化水平的变化

通过观察强迫游泳时大鼠脑内不同核团内ERK1/2磷酸化水平变化,探讨与负性心理应激有关的脑内环路。将大鼠置于高60cm、水深约30cm的玻璃缸内,先预游15min,24h后进行5min的强迫游泳,观察大鼠游泳过程中的不动时间。游泳完毕后将大鼠灌流处死,对全脑组织进行磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的免疫组织化学染色及其与酪氨酸羟化酶(TH)在部分核团内的免疫荧光双标细胞。强迫游泳后前额叶皮质、外侧隔区、下丘脑室旁核、海马CA13区、杏仁内侧亚核和皮质亚核、孤束核等脑区/核团中pERK1/2阳性细胞数显著增多;而杏仁中央亚核、下丘脑视上核内的磷酸化ERK1/2蛋白水平下降,阳性细胞数明显减少。免疫荧光双标结果表明,孤束核内部分pERK1/2阳性细胞呈TH免疫反应阳性。上述结果表明,以上脑区/核团内的神经元可能和负性心理应激的中枢调控有关,ERK1/2信号通路参与了其调控过程。此外,孤束核中的儿茶酚胺能神经元可能参与了心理应激的脑内活动。     

大鼠孤束核内传递内脏伤害性信息的儿茶酚胺能神经元向臂旁核的投射

应用四甲基罗达明 ( TMR)逆行追踪结合胃肠道福尔马林溶液刺激和免疫荧光技术 ,在激光扫描共聚焦显微镜下对孤束核内向臂旁核投射的表达 FOS的儿茶酚胺能神经元进行了观察。将 TMR注入一侧外侧臂旁核后 ,孤束核尾段的背内侧、胶质、内侧、小细胞、中间内侧等亚核和连合亚核内出现较多的逆标神经元。上述各亚核内可见到 TMR,酪氨酸羟化酶 ( TH)和 F OS阳性神经元重叠分布 ,部分神经元为 TMR/ FOS,TMR/ TH和 FOS/ TH双重阳性及 TMR/ F OS/ TH三重阳性神经元。其中 TH样阳性神经元数量最多 ,TMR/ TH、FOS/ TH双重阳性和 TMR/ FOS/ TH三重阳性神经元数量占 NTS内 TH样阳性神经元总数的百分比分别为 44.2 % ( 6 8/ 15 4)、2 6 .6 % ( 4 1/ 15 4)和 12 .3% ( 19/ 15 4)。本研究结果提示 ,对大鼠胃肠道进行伤害性刺激后孤束核内表达 FOS的儿茶酚胺能神经元向臂旁核投射 ,它可能参与内脏伤害性信息的传递     

乙酰胆碱对大鼠体液免疫应答的影响

本文利用神经药理学的方法分别改变大鼠中枢和外周乙酰胆碱(Ach)的含量,以及阻断中枢M或N型的胆碱能受体,观察大鼠的初次体液免疫应答的变化,从而探讨Ach对体液免疫功能的影响及其影响机制。结果表明;(1)侧脑室注射Ach的合成阻断剂密胆碱后,体液免疫应答增强;侧脑室注射Ach酯酶的抑制剂新斯的明后,免疫应答减弱;(2)腹腔给予密胆碱或新斯的明,免疫应答都无明显改变;(3)侧脑室注射M型胆碱能受体拮抗剂阿托品,使体液免疫应答增强;注射N型胆碱能受体拮抗剂六烃季胺则抑制了免疫应答。以上结果提示:中枢神经系统内的Ach可影响体液免疫功能,可能具有免疫抑制效应;外周Ach可能不参与体液免疫功能的调节。中枢Ach的免疫调节作用是通过相应的胆碱能受体实现的。     

大鼠孤束核内儿茶酚胺能神经元接受面口部深层组织伤害性信息并向臂旁核投射的形态学研究

为了探讨孤束核(NTS)内儿茶酚胺能神经元是否与面口部深层组织的伤害性信息有关并向臂旁核投射,本研究运用荧光金(FG))逆行追踪,福尔马林刺激咬肌和免疫荧光技术相结合的三重标记方法,在荧光显微镜下观察了大鼠NTS内酪氨酸羟化酶(TH)阳性并表达FOS蛋白的神经元向臂旁核的投射。将2％FG注入一侧臂旁外侧核后,向同侧咬肌内注射2％福尔马林溶液,并行TH和FOS免疫荧光组织化学染色,荧光显微镜下在同侧NTS内的连合、内侧、中间内侧和腹侧亚核中可见重叠分布的FG、FOS、TH单标神经元以及FG／TH、FOS／TH、FOS／FG双标和FG／FOS／TH三标神经元。FG／TH和FOS／TH双标神经元分别占同侧NTS内TH阳性神经元总数的28.6％和34.8％;FOS／FG双标神经元占同侧FG逆标神经元总数的26.4％;FG／FOS／TH三标神经元分别占同侧TH阳性神经元和FG逆标神经元总数的23.7％和8.4％。本结果提示大鼠NTS中的部分儿茶酚胺能神经元接受面口部深层组织的伤害性信息并向臂旁外侧核传递。     

免疫毒素192-IgG-saporin侧脑室注射建立阿尔茨海默病动物模型的实验研究

目的建立大鼠阿尔茨海默病(Alzheimer′sdisease,AD)动物模型,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元改变。方法采用SD大鼠侧脑室注射192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),21d后行Y迷宫检测,28d后处死大鼠,免疫组化观察基底前脑神经生长因子受体(NGFR)阳性神经元细胞数的变化。结果Y迷宫检测显示模型组大鼠的学习次数、记忆能力(107.38±9.34、3.75±0.71)较正常组明显下降(P<0.01)。免疫组化显示模型组损伤侧在内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)的NGFR阳性神经元细胞数(7.50±1.77、15.00±2.27)与正常组对应侧比较分别减少81.96%和84.23%(P<0.01),MS和VDB的NGFR阳性神经元面积和周长降低(P<0.05),灰度值升高(P<0.05)。结论免疫毒素192-IgG-saporin侧脑室注射可以模拟AD行为学改变和部分病理学特征。     

SOM和NOS样神经元在大鼠孤束核咽肌前运动神经元中的共存──PRV、SOM、NOS三标记研究

用PRV、SOM及NOS三标记方法研究了SOM和NOS样神经元在孤束核咽肌前运动神经元中的共存。将PRV注射于大鼠咽肌后，先进行PRV和SOM免疫荧光双标记，再进行NADPH司反应。结果在孤束核的中介亚核和中间亚核中观察到有少数细胞呈PRV、SOM和NOS三重标记。SOM和NOS在孤束核咽肌前运动神经元中共存的意义还不清楚，推测可能和咽肌运动的精细调节有关。     

腹腔注射顺氯氨铂后大鼠中枢神经系统内Fos蛋白的表达

为了研究非呕吐动物大鼠是否存在与呕吐动物相似的呕吐反应区,以及二者之间的异同,给予大鼠腹腔催吐剂-顺氯氨铂后,应用免疫组织化学方法,观察Fos阳性神经元在脑和脊髓内呕吐相关区域的分布。结果发现,在脑干的最后区、孤束核、外侧臂旁核和下丘脑的视上核、室旁核、弓状核有大量的Fos阳性神经元,实验组和对照组有显著性差异(P<0.05)。结论催吐剂的刺激可使大鼠脑内Fos阳性神经元数量增加,除了与呕吐运动相关的部分区域外,其余分布区域均与呕吐动物一致,提示大鼠脑内也存在类似的、与恶心相关的神经化学通路。     

大鼠三叉神经脊束间质核内接受内脏伤害性信息的含CB神经元向孤束核的投射

目的 探讨大鼠三叉神经脊束间质核(INV)内接受内脏伤害性信息的含calbindin D-28K(CB)神经元与孤束核(NTS)的投射联系。方法 用福尔马林刺激上消化道，应用荧光金(FG)逆行束路追踪结合Fos和CB的免疫荧光组织化学三重标记法。结果 INV的背侧边缘旁核(PaMd)和三叉旁核(PaV)内可见到大量FG逆标细胞，以注射FG的同侧为主。大部分FG逆标细胞(约71.2％)为CB免疫反应阳性。部分FG和CB双标记神经元(约31．5％)同时呈Fos免疫反应阳性的三重标记。结论 INV内部分接受内脏伤害性刺激的CB神经元可直接投射至NTS，含CB的神经元在内脏伤害性信息经INV向NTS的传导通路中，可能发挥重要作用.     

大鼠下丘脑内神经激肽B受体阳性神经元向孤束核的直接投射

为了研究神经激可能的升压途径，用免疫荧光组织化学方法结合荧光金逆行追踪技术 下丘脑内神经激肽Ｂ受体阳性神经元向孤束核的投射。     

孤束核内生长抑素mRNA分布的原位杂交组化研究

用原位杂交法对孤束核尾侧部内生长抑素ｍＲＮＡ（ＳＯＭｍＲＶＡ）的分布进行了研究。ＳＯＭｍＲＮＡ位于不同平面孤束核内的神经元胞体和近端树突中，从ＳＯＭｍＲＮＡ阳性神经元一般为中小型细胞，呈圆形或椭圆形，分布于孤束核的内侧亚核、背侧亚核、背外侧亚核、连合亚核、中间亚核、腹侧亚枝和腹外侧亚核，其中以最后区上段及其吻侧平面的孤束核的内侧亚核、连合亚核、背侧亚核和背外侧亚核最为多见。结果提示ＳＯＭｍＲＮＡ阳性神经元在该核尾侧部各亚核内的广泛分布可能与该核参与对血压、心血管、呼吸、胃肠道等内脏活动的中枢控制有密切关系。生长抑素作为一种神经调制物可能在上述孤束核参与的植物性神经复杂整合功能中起着重要的作用。     

大鼠孤束核中P物质和亮氨酸-脑啡肽样神经元对咽肌运动神经元的调控——PRV和SP及L-ENK免疫荧光双标记法研究

用PRV和SP或L-ENK免疫荧光双标记法研究了大鼠孤束核中SP及L-ENK样神经元对咽肌运动神经元的调控.PRV注射大鼠咽肌后,在孤束核的中介亚核和中间亚核中可见少量PRV和SP或L-ENK双标记.首次证明了大鼠孤束核中的SP及L-ENK样神经元对咽肌运动元的调控.推测孤束核中的SP及L-ENK可能对咽肌运动的精确调控有关.     

妊高征大鼠脑内室旁核、视上核及孤束核内血管紧张素Ⅱ1型受体的表达

目的观察妊娠高血压大鼠(PIH)与正常妊娠大鼠下丘脑室旁核(PVN)、视上核(SON)及孤束核(NTS)内血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)免疫阳性神经元的分布。方法用免疫荧光染色技术对PIH大鼠AT1分布的神经元进行了研究,并与正常大鼠进行比较。结果两组大鼠PVN、SON、NTS内AT1免疫阳性神经元的分布与形态基本类似。数据经统计学处理,结果表明,PIH组大鼠PVN和NTS内AT1阳性细胞数目较对照组多,而两组大鼠SON内AT1的表达无明显差异。结论实验结果提示AT1在下丘脑PVN和NTS内的血压神经内分泌调节活动中起着重要的介导作用,中枢AT1受体的异常增加可能与母体妊高征的发病有关。