多重耐药大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶与Ⅰ类整合酶基因的研究

目的 探讨本地区临床分离多重耐药大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)的氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合子基因存在情况.方法 纸片扩散法(K-B法)测定71株大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药性,应用PCR技术对E.coli进行氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因的检测.结果 71株大肠埃希菌对庆大霉素、左氧氟沙星、头孢噻肟、头孢他啶的耐药率分别分为66.20％、63.38％、59.15％、18.31％,其中23株为多重耐药株(32.39％).氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ阳性40株(56.34％),aac(6′)-Ⅰ阳性22株(30.99％),ant(3″)-Ⅰ阳性14株(19.72％),未检出aac(6′)-Ⅱ阳性株,氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为74.65％;Ⅰ类整合酶基因(intI1)阳性53株(74.65％).多重耐药与非多重耐药大肠埃希菌中aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ、总氨基糖苷类修饰酶基因、intI1的阳性率有统计学差异(P＜0.05).结论 本地区多重耐药E.coli的氨基糖苷类修饰酶基因、Ⅰ类整合酶基因携带率高.     

我国阿米卡星耐药大肠埃希菌16S rRNA甲基化酶基因及其水平转移研究

目的研究我国临床分离阿米卡星耐药大肠埃希菌中16S rRNA甲基化酶基因及其水平转移情况。方法用PCR法检测16S rRNA甲基化酶基因(arm A、rmt A、rmt B、rmt C、rmt D、rmt E和npm A),用液体培养基传递法研究其水平转移情况。结果 183株对阿米卡星耐药大肠埃希菌中,arm A基因阳性率为12.57%,rmt B基因阳性率为53.00%,rmt B基因阳性率在2007至2008年、2009至2010年、2011至2012年这3个年度之间比较差异有统计学意义。arm A和rmt B基因均可在大肠埃希菌间水平转移。结论 16S rRNA甲基化酶基因以arm A和rmt B为主要流行型类别,后者的分离率较高且其阳性率呈显著的上升趋势。     

鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶与氨基糖苷修饰酶基因检测研究

目的了解高水平耐氨基糖苷类鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷修饰酶基因的流行情况。方法从2008年9月至2011年1月收集的110株鲍曼不动杆菌,琼脂二倍稀释法测定其对6种氨基糖苷类抗生素的药物敏感性,并筛选出对阿米卡星MIC≥256μg/mL的60株鲍曼不动杆菌,PCR法检测7种甲基化酶基因(armA、rmtA-rmtE、NpmA)和3种氨基糖苷修饰酶基因(aac(6′)-Ib、ant(3″)-Ia、aph(3′)-I)。结果鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类高水平耐药率较高(46.4%～65.4%),armA、aac(6′)-Ib、ant(3″)-Ia、aph(3′)-I的基因检出率分别为66.7%(40株)、51.7%(31株)、81,7%(49株)、58.3%(35株),其余基因未检出。结论鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素的高度耐药性与16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷修饰酶基因有关。     

肠外致病性大肠埃希菌多重耐药性及氨基糖苷类耐药基因分析

目的 检测临床分离猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌的耐药性,分析其携带的氨基糖苷类耐药基因,以指导临床用药,探究细菌对氨基糖苷类抗生素的抗性机制.方法 应用K-B法测定分离株对19种常用抗生素的耐药情况.用双纸片法检测产ESBLs菌株并进行基因分型.用PCR和测序方法检测氨基精苷类抗性基因aadA1,aadA2,strA-strB,aadB,aacC2,aac(3)-Ⅳ,aph(3')-Ⅰa,aph(3')-Ⅱa.结果 临床分离株表现多重耐药性,对头孢菌素类药物和阿米卡星的敏感性最高(63%～97%),93%的菌株耐药谱值≥10.共检测到两株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株,基因型属TEM-1+CTX-M-14.耐药菌株与相应的氨基糖苷类耐药基因符合率高(≥74%)且序列保守.结论 猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌呈多重耐药性,其对氨基糖苷类抗生素的抗性机制以产生针对该类抗生素的修饰酶为主.     

大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药谱及其产ESBLs的研究

目的了解临床分离的54株大肠埃希菌对氨基糖类苷类抗生素的耐药谱及产ESBLs情况,分析氨基糖苷类修饰酶AAC(3)-II的检出率及该酶的一些特征。方法采用MIC法测定临床分离的54株大肠埃希菌对7种氨基糖苷类抗生素的耐药谱,用NCCLS推荐的酶抑制剂增强纸片扩散法检测产ESBLs菌株,并通过聚合酶链反应、克隆测序和测定重组菌耐药谱对aac(3)-II基因进行研究。结果54株大肠埃希菌对阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、链霉素、大观霉素和奈替米星的耐药率分别为14.8%、77.8%、59.3%、66.7%、68.5%、61.1%、22.2%;共检测出产ESBLs菌株34株,占63.0%;aac(3)-II基因在54株大肠埃希菌中检出率为88.5%;质粒转化菌产ESBLs且同时检出aac(3)-II基因。重组菌BL21(DE3)/pET26::aac(3)-II对庆大霉素和卡那霉素有耐药性,对其余5种氨基糖苷类抗生素没有表现出耐药性。结论大肠埃希菌对庆大霉素的耐药率最高,对阿米卡星的耐药率最低;耐氨基糖苷类抗生素的大肠埃希菌与其产ESBLs有相关性;重组菌BL21(DE3)/pET26::aac(3)-II仅对庆大霉素和卡那霉素产生耐药。     

铜绿假单胞菌临床分离株16S rRNA甲基化酶基因研究

目的:了解临床分离铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物耐药性与16SrRNA甲基化酶基因的关系,探讨多药耐药机制。方法:收集20株铜绿假单胞菌临床标本,采用K-B法检测20株铜绿假单胞菌对卡那霉素、阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素、奈替米星的敏感性;采用PCR法检测5种(armA,rmtA,rmtB,rmtC,rmtD)16SrRNA甲基化酶基因。结果:10株铜绿假单胞菌对上述5种氨基糖苷类药物全部耐药,1株对阿米卡星敏感,对另外4种药物表现为耐药,6株对1~2种药物表现为耐药,其余3株对5种药物全部敏感。基因检测显示rmtB和armA阳性率为15%,未检测到rmtA,rmtC,rmtD基因。结论:铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物耐药情况严重,并在其中检出16SrRNA甲基化酶基因,应引起重视。     

多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因研究

目的 调查临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌中介导氨基糖苷类高水平耐药的16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB的流行情况.方法 收集台州市中心医院、台州市立医院两家多重耐药鲍曼不动杆菌128抹,用K-B法测定18种抗菌药物;采用琼脂稀释法测定4种氨基糖苷类药物MIC值;PCR检测armA、rmtA、rmtB...     

鲍曼不动杆菌老年患者分离株中发现16S rRNA甲基化酶基因新亚型

目的了解鲍曼不动杆菌老年患者分离株16SrRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因型。方法采用PCR检测20株鲍曼不动杆菌老年患者分离株12种16SrRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因。结果7株检出16SrRNA甲基化酶基因（armA），19株检出氨基糖苷类修饰酶基因[其中aac（3）-I阳性率为95％，ant（3″）-I为95％，aac（3）-II为40％，aac（δ′）-Ib为15％）]。6号株armA基因测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库（GenBank）已登录的armA氨基酸不同，为新亚型。结论本组鲍曼不动杆菌老年患者分离株95％携带16SrRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因。     

大肠埃希菌耐药机制研究进展

大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药机制相当复杂,主要包括产生灭活抗生素的酶、改变药物作用靶位、细胞外膜通透性的改变及细菌药物外排泵。近年来对其耐药机制研究较多,尤其是在质粒介导耐药性的研究上取得了一些进展。     

肺炎克雷伯菌（ESBLs）氨基糖苷类修饰酶基因的研究

目的了解临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的肺炎克雷伯菌的耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法对临床分离的35株产ESBLs肺炎克雷伯菌采用聚合酶链反应技术（PCR）检测6种氨基糖苷类修饰酶aac（3）-Ⅰ,aac（3）-Ⅱ,aac（6）-Ⅰ,age（6’）-Ⅱ,ant（3″）-Ⅰ,ant（2″）-Ⅰ。结果该35株肺炎克雷伯菌检出：aac（3）-Ⅰ阳性4株（11．8％）,aac（3）-Ⅱ阳性7株（20．6％）,aac（6’）-Ⅰ阳性13株（37．1％）,aac（6’）-Ⅱ阳性7株（20％）,ant（3″）-Ⅰ阳性11株（31．4％）,ant（2″）-Ⅰ阳性12株（34.3％）。共有26株（74．3％）检出AMEs。同一菌株可产生两种或两种以上的氨基糖苷类修饰酶基因。结论临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯茵氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。     

Diverse prevalence of 16S rRNA methylase genes armA and rmtB amongst clinical multidrug-resistant Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae isolates

In this study, 112 Escherichia coli and 55 Klebsiella pneumoniae isolates with a multidrug-resistant (MDR) phenotype were collected from 2007 to 2009. All isolates simultaneously exhibited resistance to cefotaxime (or ceftazidime), ciprofloxacin (or levofloxacin) and amikacin. Plasmid-mediated 16S rRNA methylases, including armA, rmtA, rmtB, rmtC, rmtD, rmtE and npmA, were detected by polymerase chain reaction (PCR) amplification. Common β-lactamase genes, including bla_TEM, bla_SHV, bla_CTX-M, bla_PER, bla_VEB, bla_GES and bla_OXA, as well as plasmid-mediated bla_AmpC and plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) determinants, including qnrA, qnrB, qnrS, qepA and aac(6′)-Ib-cr, were also screened. The transferable capacity of resistance plasmids was established by conjugation testing. The genetic relatedness of isolates was analysed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Only armA and rmtB genes were detected in this study. Data showed that 93.8% of MDR E. coli and 94.5% of MDR K. pneumoniae carried at least one of armA or rmtB. The armA and rmtB genes were present in 11.6% and 82.1% of MDR E. coli, respectively. In parallel, 58.2% and 40.0% of MDR K. pneumoniae were armA- and rmtB-positive, respectively. Furthermore, the qepA gene was present in 66.3% of rmtB-carrying MDR E. coli, but it was rarely detected in MDR K. pneumoniae. Approximately 71.9% of armA-positive MDR K. pneumoniae simultaneously co-carried qnrB and bla_DHA. Moreover, 78.1% and 63.6%, respectively, of armA-positive and rmtB-positive MDR K. pneumoniae strains harboured qnr alleles and 53.1% and 59.1% harboured aac(6′)-Ib-cr. In addition, MDR E. coli strains exhibited a low prevalence of qnr alleles and aac(6′)-Ib-cr. PFGE analysis revealed divergent genetic relatedness, suggesting horizontal dissemination of armA and rmtB along with common β-lactamases and PMQR determinants amongst clinical MDR E. coli and K. pneumoniae isolates.     

氨基糖苷类药物双圈耐药型鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因研究

目的 探讨在K-B法药物敏感试验中对氨基糖苷类药物双圈耐药的鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因携带状况以及药物诱导对该基因mRNA表达量的影响.方法 收集42株鲍曼不动杆菌,K-B法测定其药敏情况;PCR法扩增三种16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtB及rmtC;用RT-PCR的方法分析阿米卡星诱导前后耐药基因表达量.结果 90.4％(38/42)的菌株阿米卡星药敏纸片周围呈现双圈耐药,且均检测到armA,未检测到rmtB及rmtC,其余3株为敏感,1株为普通耐药,且PCR检测耐药基因为阴性.RT-PCR结果显示经阿米卡星诱导后细菌armA基因mRNA表达量显著上升.结论 双圈耐药现象与armA基因诱导型表达有关.     

多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶研究进展

氨基糖苷类抗生素在治疗鲍曼不动杆菌引起的感染中起着重要的作用.而鲍曼不动杆菌对该类抗生素的耐药机制主要包括产氨基糖苷修饰酶,外膜孔蛋白表达缺失,药物外排泵的表达和核糖体结合位点的改变等.质粒介导的16S rRNA甲基化酶是近年在多重耐药鲍曼不动杆菌中发现的一种新的耐药机制,可导致对氨基糖苷类抗生素的高水平耐药.本文就细菌rRNA的修饰作用、16S rRNA甲基化酶的发现、耐药与传播机制、耐药菌的流行、多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基[因的研究进展等方面作一综述.     

药品在被少量大肠杆菌污染而造成漏检的有关问题的探讨

目的:探讨药品在被少量大肠杆菌污染后,按中国药典现行方法检验是否存在漏检可能,建立了在该种情况下可行的大肠杆菌检查的方法.方法:对8个品种人为污染少量大肠杆菌后,按中国药典检查.结果:药品在被少量大肠杆菌污染后,按药典法大肠杆菌阳性检出率为0～66%,改进法为100%.结论:药品在被少量大肠杆菌污染后,按中国药典现行方法检验存在漏检可能.     

应用16SrRNA基因序列分析快速鉴定临床标本中的革兰氏阳性杆菌

目的探索一种快速鉴定临床标本中革兰氏阳性杆菌的方法。方法利用PCR技术扩增待检菌株的16SrRNA基因序列,通过分析待检菌株的16SrRNA基因序列对其进行鉴定。结果5株待检菌株的16SrRNA基因序列均成功扩增,其中4株的16SrRNA基因序列与基因库中已注册的核酸序列相似率达99．9％以上,将其鉴定到种的水平,1株的16SrRNA基因序列与基因库中雷弗森菌属的核酸序列相似率为97．09％,将其鉴定为雷弗森菌属。结论应用16SrRNA基因序列分析可快速、准确地鉴定临床标本中的革兰氏阳性杆菌。