丹参酮ⅡA抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及其机制研究

目的：观察丹参酮Ⅱ_A(tanshinone Ⅱ_A，TA)对10％胎牛血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞(RVSMC)增殖的抑制作用，并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞A7r5细胞株，以终浓度为10％的胎牛血清(FBS)作为刺激因素，用细胞计数法、噻唑蓝(MTT)比色法和5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)掺入法测定TA对细胞增殖的影响，用流式细胞术(FCM)分析细胞周期分布特征，用Western blot实验测定细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化活性，用RT-PCR测定c-fos的表达水平。结果：细胞计数、MTT比色法和BrdU掺入实验表明丹参酮Ⅱ_A能抑制10％FBS所诱导的VSMC增殖，作用强度呈剂量依赖性；细胞周期分析显示，TA处理组G₀/G₁期细胞百分比高于10％FBS组，而S期比例低于10％FBS组，表明TA可阻止10％FBS所诱导的细胞周期由G₀/G₁期向S期推进；Western blot结果显示与10％FBS组相比，TA处理组ERK1/2磷酸化活性降低；RT-PCR结果显示TA处理组c-fos表达水平降低。结论：丹参酮可抑制10％FBS诱导的体外培养大鼠动脉平滑肌细胞增殖，此作用可能与其阻止细胞周期由G₀/G₁期向S期推进，抑制MAPK信号转导通路激活，进而下调c-fos表达有关。     

大黄素对血管平滑肌细胞周期调控蛋囱Cyclin D1表达的影响

目的：观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和CyclinD1表达的影响。方法：取对数增长期的平滑肌细胞，采用MTY法观察大黄素对平滑肌细胞增殖抑制的有效浓度范围，求出IC50并干预细胞；然后分别用流式细胞仪和Westemblot法进行细胞周期对相和Cyclin D1表达的测定。结果：与对照组比较，IC50对药物组G0／G，期细胞百分比升高，S期细胞百分比下降，Cyclin D1表达高峰延迟，表达量下调，细胞周期受阻于G0/G1期。结论：大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调Cyclin D1表达，阻滞了细胞周期的进程；是一种有效的抗平滑肌细胞增殖的药物。     

升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α所致大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响。方法：建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养方法，将细胞分为空白组、模型组、升麻苷组、5-O-甲基维斯阿米醇苷组，并采用细胞计数法和免疫化学方法分别对平滑肌细胞的生长特性和纯度进行测定。用MTT法观察升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组拮抗肿瘤坏死因子（TNF—α）诱导平滑肌细胞增殖的作用，用流式细胞技术测定升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对平滑肌细胞周期的影响。结果：升麻苷（50，100，200mg·L^-1）和5-O-甲基维斯阿米醇苷（50，100，200mg·L^-1）均能明显抑制TNF—α引起的平滑肌细胞增殖，与TNF—α组相比有极显著差异（P〈0．01）。升麻苷（50，100，200mg·L^-1）和5-O-甲基维斯阿米醇苷（50，100，200nag·L^-1）均使G1／G0期细胞比例增加，S期、G2／M期细胞比例减少，与TNF—α组相比差异极显著（P〈0．01）。结论：升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α引起的平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用。     

固本化痰通脉方含药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖及细胞周期素D1的影响

目的：观察固本化痰通脉方对大鼠血管平滑肌细胞生长增殖、细胞周期及细胞周期素D1表达的影响，以探讨其作用机制。方法：血小板源生长因子BB（PDGF-BB）刺激体外培养的大鼠血管平滑肌细胞使其快速增殖生长，加入不同浓度的固本化痰通脉方含药血清作用一定时间后，通过MTT法测定其对血管平滑肌细胞生长的抑制率，流式细胞技术测定细胞周期及细胞周期素D1的表达。结果：固本化痰通脉方能明显抑制PDGF-BB刺激的血管平滑肌细胞增殖，还以浓度依赖方式减少S期细胞、阻滞细胞于G0／G1期，并下调细胞周期素D1的表达。结论：固本化痰通脉方能抑制血管平滑肌细胞的增殖生长，阻滞细胞周期的进行，因而可能具有抗动脉粥样硬化的作用，其作用机理可能与调控血管平滑肌细胞细胞周期素D1的活性有关。     

葛根素诱导血管平滑肌细胞凋亡的细胞周期调控机制研究

目的：研究葛根素对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascularsmoothmusclecell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法：建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,予不同浓度的葛根素（107mol／L,10^-6mol／L．10^-5mol／L）共同培养48h后,用MTT法检测细胞增殖能力;用流式细胞仪Annexin／PI双染法检测细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白CyclinDl和CDK4的表达。结果：葛根素可抑制HCY所诱导的VSMC增殖,抑制作用与葛根素浓度呈正相关;葛根素组G0／G1期细胞数明显增多,S期细胞数明显减少,与HCY模型组比较,差异均有非常显著性意义（P〈001）;Cychn D1和CDK4的表达量均随葛根素浓度增加而减少。结论：葛根素拮抗HCY诱导的兔VSMC增殖,主要机制之一可能与Cyclin D1及CDK4低表达所致的细胞周期抑制有关。     

稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖及其TGF-β表达影响的实验研究

目的：研究稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMs）增殖和TGF-β表达水平的影响,探讨其防治肺动脉高压的疗效及作用机制。方法：组织帖块法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,MTT法确定高、中、低剂量分组及作用时间。MTT法进行细胞计数,流式细胞仪进行细胞周期测定,ELISA法进行细胞培养夜TGF-β含量测定。结果：贴块培养的细胞经电镜鉴定为动脉平滑肌细胞;台盼蓝染色倒置显微镜观察表明细胞生长状态良好。黄酮类化合物高、中剂量组细胞计数明显减少、细胞周期G0/G1期细胞增多,S期、G2/M期细胞减少;细胞TGF-β含量明显降低,与空白对照组比较有统计学意义（P〈0.05）;低剂量组与空白对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：稳心草黄酮类化合物可抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,延缓细胞周期进程,调节细胞分泌TGF-β水平。     

绿茶多酚抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的：观察绿茶多酚对低密度脂蛋白（LDL）刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞，LDL刺激时，应用不同剂量的绿茶多酚作用24h后，采用MTS／PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态，应用流式细胞术测定细胞周期，结果：与对照组相比，LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖，绿茶多酚对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用（P＜0．05），并呈现剂量依赖性，流式细胞术检测表明，绿茶多酚可以使LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞大部分处于G0／G1期，与LDL组相比有明显差异（P＜0．05），结论：绿茶多酚可明显抑制LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝组织中NF-κB及ERK-1 mRNA表达的影响

目的：探讨核转录因子-κB（NF-κB）及细胞外信号调节激酶（ERK）mRNA在CCL致实验性肝纤维化大鼠肝组织中的表达及姜黄素（curcumin．CUR）对它们的影响。方法：建立CCh致大鼠实验性肝纤维化模型,用免疫组化法比较正常组、模型组以及CUR组的Ot平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达,用RT—PCR法比较各组肝组织NF—κB以及ERK-1mRNA的表达。结果：模型组大鼠ERK—1及NF—KBmRNA的表达均增高,而CUR组α平滑肌肌动蛋白则较模型组低,NF—κB及ERK－1mRNA的表达也降低。结论：CUR可能通过抑制α—SMA的表达,减弱NF—κB诱导的肝星状细胞的活化以及抑制ERK－1的促肝星状细胞增殖．从而产生抗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的作用。     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多,s期细胞数明显减少,与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）;CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及作用机制。方法　体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,通过3 H -TdR掺入试验 ,观察雷公藤内酯醇对血清诱导的细胞增殖的影响 ;采用流式细胞技术 ,观察该药对细胞增殖周期的影响。结果　雷公藤内酯醇在 (0 .5～ 4 )× 10 -5g/L的浓度范围内 ,以一种剂量依赖性的方式抑制了血清诱导的VSMC增殖 ;雷公藤内酯醇可显著增加细胞周期中G0 /G1期细胞百分含量 ,减少S期细胞的百分含量 ,阻断细胞由G0 /G1期向DNA合成的S期转化 ,作用呈剂量依赖性。结论　雷公藤内酯醇可能通过影响细胞周期的转化而抑制VSMC的增殖。     

珠子参抑制小鼠肝癌及诱导细胞凋亡的研究

目的：观察珠子参对小鼠H22肝癌的抑制作用及其机理。方法：建立小鼠肝癌实体瘤和腹水瘤模型，观察珠子参对荷瘤小鼠抑瘤率和生命延长率，放免法（RIA）检测实体瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量，流式细胞仪技术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡并进行周期分析。结果：珠子参能显著抑制肿瘤生长，抑瘤率达44．89％，且能明显延长荷瘤小鼠生命；珠子参组小鼠血清中TNF—α浓度高于正常对照组，而比模型对照组低（P〈0．05）；FCM分析显示，珠子参各组G0／G1期和S期细胞（%）减少，而G2／M期细胞和凋亡细胞（％）增加。结论：珠子参对H22肝癌小鼠具有良好的抑瘤作用，其作用机制可能与珠子参阻止G2／M期细胞转换而影响癌细胞在细胞周期中的进程，干扰S期DNA合成以及诱导小鼠肝癌细胞凋亡有关；此外珠子参能明显抑制荷瘤小鼠TNF—α水平的异常增高，使其维持在一定水平而发挥抗肿瘤、调节机体免疫力等作用。     

水蛭对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：探讨中药水蛭对大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）增殖的影响。方法：采用MTT比色法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果：水蛭对HBZY-1增殖有明显抑制作用，可阻止HBZY-1由G0／G1期进入S期，无诱导HBZY-1凋亡作用。结论：水蛭有效抑制HBZY-1增殖可能是其治疗肾脏疾病的机制之一。     

糖足方对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的：用血清药理学与现代分子生物学相结合的方法，探讨糖足方对糖尿病大鼠模型血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法：选择纯种新西兰家兔，灌服不同剂量的糖足方中药制剂，制备含有不同药物浓度的兔血清；用组织块种植法体外培养糖尿病大鼠模型的髂动脉平滑肌细胞并用不同浓度含药血清进行干预；用同位素液闪测定氚标记胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（3H-TDR）掺入量，检测含药血清对平滑肌细胞增殖的影响；流式细胞仪测定细胞周期。结果：糖足方含药血清诸组呈浓度依赖性地表现为3H,TDR掺入量显著减少，3个含药血清组3H-TDR掺入量均明显低于正常血清对照组（P〈0.01）；流式细胞仪测定各含药血清组处于S和G2／M期细胞百分比显著低于正常血清对照组（P〈0.01）。结论：糖足方舍药血清抑制体外培养糖尿病大鼠VSMC增殖，且抑制效应呈浓度依赖性，其部分机制可能是通过阻滞VSMC G0/G1期向S的转化有关。     

十全大补汤调整肉桂剂量对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞增殖的影响

目的从细胞分裂周期变化角度探讨十全大补汤调整肉桂剂量促进创面修复及皮肤修复的机理。方法采用体外培养成纤维细胞,造成氧化损伤成纤维细胞模型。以血清药理学方法获取大鼠血清,用以对成纤维细胞模型的干预。并运用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MMT法）及流式细胞仪检测成纤维细胞增殖及分裂周期的变化。结果MMT法结果显示2倍肉桂组和4倍肉桂组对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞具有促进增殖的作用,与模型组比较差异显著（P〈0.01）;流式细胞术结果显示经500 μmol／L的H2O2刺激30分钟的大鼠真皮成纤维细胞中GO／G1期细胞比例显著增高,S期和G2／M期细胞比例显著降低。在药物干预24小时后,四个用药组均可降低G0／G1期细胞比例,S期和G2／M期细胞比例升高;在药物干预48小时后,除了去肉桂组以外,其余三个用药组均能使G0／G1期细胞比例降低,S期和G2／M期细胞比例升高,与模型组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）,而去肉桂组对细胞周期的影响与模型组相比无明显差异。结论十全大补汤对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞具有调控成纤维细胞周期、促进增殖的作用,而适当增加肉桂剂量可以起到增效的作用。     

加味三物白散诱导人胃腺癌SGC—7901细胞凋亡及对细胞周期影响的研究

目的：观察加味三物白散对人胃腺癌SGC－7901细胞生长的抑制作用，影响细胞周期及诱导人胃腺癌SGC－7901细胞凋亡。方法：采用MTT法，,观察抑制率；应用流式细胞仪检测加味三物白散诱导人胃腺癌SGC－7901细胞凋亡和对细胞周期的影响。结果：加味三物白散对人胃腺癌SGC－7901细胞生长有抑制作用，大、中、小剂量抑制率分别是55．75％42．67％和38．63％，进一步研究发现中、大剂量组诱导细胞凋亡百分率分别为9．06％、96．32％，与阴性对照组相比有明显差异（P＜0．01）；此外与阴性对照组相比，中、大剂量组使G0－G1期细胞明显减少，G2－M期明显增高，S期明显减少；小剂量组使G0－G1期细胞明显增高，G2－M期明显减少，S期减少。结论：加味三物白散能抑制人胃腺癌SGC－7901细胞生长；其中、大剂量组可以明显诱导人胃腺癌SGC－7901细胞凋亡；并且加味三物白散对人胃腺癌SGC－7901细胞的增殖周期有影响。     

miR-145抑制VSMC增殖的作用及其相关信号通路研究

目的探讨miR-145对PDGF—BB诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞（VSMC）的作用及丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号转导途径的作用。方法体外培养大鼠原代VSMC,再将细胞分为空白对照组、miR—NC组、PDGF—BB＋miR-145组及PDGF—BB组。CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;实时RT—PCR方法检测PCNA、c—Jun及SM22a的表达水平;Western印迹方法检测ERK1／2和P—ERK1／2的表达、JNK和P—JNK的表达以及p38MAPK和P—p38MAPK的表达。结果miR-145过表达后能够抑制PDGF诱导的大鼠原代VSMC增殖,并下调VsMc增殖相关基因PCNA、c—Jun的表达、上调分化相关基因SM22a的表达;PDGF—BB诱导VSMC后,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显上调,而转染miR-145慢病毒后再加PDGF刺激,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显下调。结论miR-145能够抑制去分化型VSMC中的MAPK信号通路,进而抑制VSMC的增殖。     

稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞内Ca2+浓度的影响

目的:观察稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度影响.方法:体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,检测细胞内钙离子浓度.结果:①稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞有抑制增殖的作用,与空白对照组对比,差别有统计学意义(P＜0.05);②稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞有增加G0/G1期细胞数目,减少G2/M期、S期细胞数目的作用.③稳心草黄酮类化合物能降低细胞内钙离子浓度,细胞内钙离子浓度降低的程度与药物剂量相关.结论:稳心草黄酮类化合物可能是通过增加肺动脉平滑肌细胞G0/G1期细胞数目,减少G2/M期、S期细胞数目,抑制其增殖.此外,稳心草黄酮类化合物可能会降低胞质内游离钙离子浓度,促进肺动脉平滑肌舒张.     

补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的:观察补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:健康Wistar清洁级大鼠,分离大鼠胸主动脉,贴块法培养VSMC,抗α-actin的免疫组织化学染色鉴定细胞。无血清培养液培养静止后,以20%胎牛血清(FBS)刺激VSMC增殖。实验分为空白对照组、补肾化痰降浊方组,分别加入不同浓度的补肾化痰降浊方,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对VSMC增殖的影响,并用流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化。结果:经20%FBS刺激后,VSMC细胞增殖明显升高,加入不同浓度的补肾化痰降浊方作用24小时后,细胞增殖明显下降,并呈一定程度的剂量依赖关系。随着补肾化痰降浊方浓度加大,VSMC细胞周期分布发生变化,G0/G1期细胞比例增加,而合成增殖的S期细胞比例减少,出现G0/G1期细胞周期阻滞。结论:补肾化痰降浊方对血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,可能是其防治动脉粥样硬化(AS)及AS性疾病的部分作用机制。     

丹参不同组分对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

[目的]探讨丹参的水溶性有效成分 (总丹酚酸 )和脂溶性有效成分 (总丹参酮)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响 ,以寻找药物的作用靶点。[方法]分离大鼠主动脉中层平滑肌 ,贴壁法培养平滑肌细胞 ,无血清培养基培养静止后 ,以5 %胎牛血清(FCS)刺激VSMC增殖 ,分别加入不同浓度的总丹参酮或丹酚酸 ,以四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法观察药物对VSMC增殖的影响 ;以Bradford法检测细胞总蛋白 ;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响。[结果]与对照组相比丹参酮使VSMC增殖活性下降(P<0.05) ,细胞总蛋白合成降低 (P<0.05) ,并呈浓度依赖性,而丹酚酸组与对照组相比无显著性差异 ;此外流式细胞术检测结果显示丹参酮使VSMCG0/G1 期比例升高 ,S期比例下降 ,而丹酚酸组与对照组相比仍无显著性差异。[结论]丹参的脂溶性有效成分总丹参酮具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用 ,而丹酚酸对VSMC不具有以上作用     

丹参酮Ⅱ_A对大鼠肝癌细胞CBRH7919的抑制及凋亡诱导作用

目的:探讨丹参酮ⅡA对大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长抑制、诱导凋亡及其对细胞周期的影响。方法:体外MTT法测生长抑制率。Hochest染色观察药物作用后的细胞核形态,流式细胞术、彗星电泳技术分析药物对细胞周期、凋亡率和细胞DNA的影响。结果:丹参酮ⅡA能抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长。药物浓度12.5、25、50、100μmol/L作用72 h的抑制率分别为12.17%、31.05%、69.66%、78.61%;丹参酮ⅡA50μmol/L作用24、48、72、96 h的抑制率分别为:18.87%、23.62%、59.48%、63.64%。Hochest染色后,加药组细胞有明显的凋亡形态特征。彗星电泳显示,12.5、25、50μmol/L加药组形成拖尾,平均光密度值较阴性对照组降低,彗星尾距较阴性对照组增加,且二者改变有剂量依赖关系。流式细胞仪检测显示,丹参酮ⅡA12.5、25、50μmol/L组细胞凋亡率分别为5.02%、4.29%、6.36%,细胞周期G0/G1期细胞增加,S期细胞减少。结论:丹参酮ⅡA对大鼠肝癌细胞CBRH7919具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用。