葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响

目的观察葛根素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响。方法分别采用CCK-8法、碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色测定葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、成骨分化、矿化作用的影响。流式细胞术检测葛根素对MC3T3-E1细胞周期及细胞内钙离子浓度的影响。RT-PCR检测葛根素对TRPM3基因m RNA表达的影响。结果 0.1、1、10μmol·L~(-1)葛根素能明显促进MC3T3-E1细胞增殖,使G1期细胞比例减少,G_2+S期细胞比例增加,其中0.1μmol·L~(-1)浓度效果最为明显;与正常对照组相比较,0.1μmol·L~(-1)葛根素组细胞的ALP活性和矿化结节面积均明显提高;0.1μmol·L~(-1)葛根素组细胞的TRPM3 m RNA表达水平和细胞内钙离子浓度明显降低。结论葛根素可促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化和矿化,可降低TRPM3 mRNA表达水平和细胞内钙离子浓度。     

芫花素对于MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化的影响

目的探索芫花素对于MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化的影响。方法采用芫花素1、5、10、15μmol/L处理MC3T3-E1细胞14 d,采用MTS法检测芫花素对MC3T3-E1细胞增殖的抑制作用;实时定量PCR和Western blotting法检测测芫花素对MC3T3-E1细胞中ALP、HDAC1和Runx2 m RNA和蛋白表达的影响。结果芫花素5、10、15μmol/L可以显著促进MC3T3-E1细胞中ALP、Runx2 m RNA和蛋白表达水平的提高(P0.05),HDAC1 m RNA和蛋白表达水平的下调(P0.05),表明芫花素可以促进MC3T3-E1向成骨细胞分化。结论芫花素具有促进MC3T3-E1细胞可以促进成骨细胞分化,对成骨细胞的分化过程有一定的调节作用。     

鹿茸胶原酶解物对地塞米松诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡的保护作用

目的研究鹿茸胶原酶解物(VCH)作为治疗药物对地塞米松(DEX)所致MC3T3-E1细胞损伤的影响,探究VCH对糖皮质激素性骨质疏松的保护作用。方法分别用不同浓度的VCH处理成骨细胞MC3T3-E1,MTT法测定细胞活力,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,实时PCR及Western印迹检测MC3T3-E1细胞分化相关因子的m RNA及蛋白表达水平。结果 VCH 0.3 g·L~(-1)作用于MC3T3-E1细胞48 h以后能显著促进MC3T3-E1细胞的增殖;VCH可促进骨细胞的活性,可上调成骨细胞分化的标志蛋白ALP的表达和转录,可明显减少DEX所诱导的MC3T3-E1细胞凋亡(P<0.05)。结论 VCH抑制糖皮质激素引起成骨细胞凋亡,促进骨形成,为骨质疏松症的防治提供理论依据。     

异槲皮苷对MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响作用

目的研究异槲皮苷对体外培养MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化的影响作用。方法以细胞矿化结节染色鉴定MC3T3-E1成骨细胞株骨矿化功能,以MTT法测定成骨细胞的增殖率,以试剂盒法测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果在终浓度为1.08×10-6mol·L-1、1.08×10-7mol·L-1、1.08×10-8mol·L-1时,异槲皮苷能极显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖(P<0.01);终浓度为1.08×10-6mol·L-1时,异槲皮苷作用96h后能极显著提高细胞内ALP的活性(P<0.01)。结论一定浓度的异槲皮苷能够显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖和分化。     

地黄活性成分梓醇对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

目的检测地黄活性成分梓醇对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法制备不同浓度地黄活性成分梓醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型;用MTT法测定不同浓度的梓醇溶液的促细胞增殖作用;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度的梓醇溶液的促细胞分化作用;以Vonkos-sa钙化染色法了解不同浓度的梓醇溶液的促细胞钙化作用。结果梓醇在1×10-7～1×10-9mol·L-1浓度范围内培养24及48h促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-148及72h提高成骨细胞株MC3T3-E1细胞内碱性磷酸酶的活性。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养8及12d时能明显促进成骨细胞MC3T3-E1骨钙素合成和分泌。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养19d时成骨细胞株MC3T3-E1细胞的矿化结节(mineralized bone nodular structure,MBNS)数目增多。结论梓醇可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖和分化能力,梓醇可能是地黄治疗骨质疏松作用的活性成分之一。     

罗格列酮对体外培养小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1生长与分化的影响研究

目的:研究罗格列酮对体外培养小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1生长与分化的影响。方法:以小鼠MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型,分别加入1、2、5、10μmo·lL-1罗格列酮干预,MTT法测定细胞活性并计算生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫组化法分析细胞中促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达;测定细胞中分化指标碱性磷酸酶(ALP)的活性。设立只加入培养基处理的空白对照组。结果:与空白对照组比较,罗格列酮各浓度组生长抑制率、细胞凋亡率升高(P均<0.05),Bax表达增强、Bcl-2表达减弱、ALP活性下降(P均<0.05),且呈浓度依赖性。结论:罗格列酮可抑制MC3T3-E1细胞生长及分化,并诱导其凋亡;而Bax/Bcl-2可能参与凋亡的发生,并可能起关键调控作用。     

白藜芦醇对LPS诱导的MC3T3-E1成骨细胞的骨保护作用

目的探讨白藜芦醇对脂多糖(LPS)诱导的MC3T3-E1成骨细胞的骨保护作用。方法采用CCK-8法检测白藜芦醇不同浓度下MC3T3-E1成骨细胞的细胞增殖活性,对硝基苯磷酸盐法检测白藜芦醇不同浓度下MC3T3-E1成骨细胞ALP活性。将MC3T3-E1成骨细胞分为空白组(基础培养基)、对照组(LPS 2μg/mL)和实验组(LPS 2μg/mL+白藜芦醇20μmol/L)。采用qRT-PCR检测三组成骨相关基因Runx2、ALP、骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN) mRNA表达,Western blot法检测三组细胞沉默调节蛋白1(SIRT1)蛋白表达。结果白藜芦醇20μmol/L是MC3T3-E1成骨细胞最适成骨浓度(P<0.05)。与空白组比较,实验组成骨相关基因Runx2、ALP、OCN和OPN mRNA表达水平和SIRT1蛋白表达水平均降低(P<0.05);与对照组相比,实验组成骨相关基因Runx2、ALP、OCN和OPN mRNA表达水平和SIRT1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论白藜芦醇能够通过提高Runx2、ALP、OCN、OPN和SIRT1相关...     

左旋肉毒碱对MC3T3-E1成骨细胞及OPG表达的作用

目的探讨左旋肉毒碱对MC3T3-E1成骨细胞及OPG的表达作用,为临床预防骨质疏松提供参考。方法以小鼠骨细胞MC3T3-E1成骨细胞为研究对象,用左旋肉毒碱对其表达进行干预,最后,以免疫组化法检测左旋肉毒碱干预前后OPG蛋白质表达水平的改变,分析左旋肉毒碱对MC3T3-E1成骨细胞OPG的表达作用。结果 1 mmol/L左旋肉毒碱对小鼠成骨细胞无明显作用,10~100 mmol/L左旋肉毒碱能促进小鼠成骨细胞增殖,显著抑制人成骨细胞凋亡,增加小鼠骨密度。结论左旋肉毒碱可通过促进MC3T3-E1成骨细胞OPG的表达,促进成骨细胞增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性,并且左旋肉毒碱可抑制人成骨细胞凋亡,延长其存活时间。     

锁阳含药血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖分化及矿化的影响

目的:研究锁阳含药血清对体外培养小鼠成骨细胞的增殖、分化以及矿化的影响。方法:小鼠灌胃14天后摘眼球取血制备含药血清,分别将10%浓度的各组含药血清及对照组血清(生理盐水组血清)分别加入细胞培养液中培养成骨细胞。采用CCK8法检测成骨细胞增殖能力,钙钴法检测其碱性磷酸酶活性,0.2%茜素红染色法观察成骨细胞钙化结节情况。结果:同一时间点,与生理盐水血清组比较,锁阳含药血清各组均能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,其中,锁阳含药血清中剂量组与高剂量组在三个时间点均能够显著促进细胞增殖(p0.01);锁阳含药血清能够增强MC3T3-E1成骨细胞分泌碱性磷酸酶(ALP),且有一定的浓度依赖性;随着锁阳含药血清浓度的增加,钙化结节数量也呈现增加的趋势。结论:锁阳含药血清能够促进MC3T3-E1成骨细胞增殖分化与矿化,且在一定浓度范围内,浓度越高,促进作用愈明显。     

xy9902对MC3T3-E1细胞的增殖和分化作用

目的研究化合物xy9902对成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化的影响,并初步探讨其机制。方法采用MTT比色法测定化合物对成骨细胞MC3T3-E1的增殖作用;通过硝基苯磷酸盐法测定细胞内碱性磷酸酶(A lkaline phosphatase,ALP)活性的变化,观察化合物对细胞分化的影响;用放射性配体结合法考察化合物与雌激素受体(Estrogen ic recep-tor,ER)的亲和力。结果化合物xy9902对成骨细胞有促增殖和促分化作用,这一作用可被tamoxifen阻断;xy9902与ER有亲和力,对ERα和ERβ的IC50分别为8.45×10-6mol.L-1和1.66×10-6mol.L-1。结论化合物xy9902对成骨细胞有促增殖和促分化作用,其作用机制可能与ER激动有关。     

成骨生长肽对MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响及其可能机制

目的探讨成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)对MC3T3-E1成骨细胞的增殖的影响及其机制。方法常规培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分为OGP高、中、低剂量组(1×10-8、1×10-10、1×10-12mol/L)以及对照组,利用MTT法检测OGP作用24 h、48 h以及72 h对MC3T3-E1成骨细胞增殖作用,利用免疫化学染色法检测成骨细胞I型胶原蛋白水平,ELISA法检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)含量。结果在24 h时,各剂量OGP对MC3T3-E1的增殖无影响;作用48、72 h,OGP 10-10mol/L以及OGP 1×10-8mol/L显著促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05),其中OGP 1×10-8mol/L 48 h促进MC3T3-E1细胞增殖作用最强。作用24 h,各组成骨细胞I型胶原蛋白IOD值差异均无统计学意义;作用48 h,OGP 1×10-8mol/L组细胞I型胶原蛋白IOD值显著高于对照组(P<0.05);作用72 h,OGP 1×10-10mol/L组以及OGP 1×10-8mol/L组细胞I型胶原蛋白IOD值均显著高于对照组(P<0.05)。作用24 h,各组成骨细胞OPN OD值差异均无统计学意义;作用48 h、72 h,OGP 1×10-10mol/L组以及OGP1×10-8mol/L组细胞OPN OD值显著高于对照组(P<0.05)。结论 OGP能够明显促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖,其可能的作用机制是增加成骨细胞I型胶原蛋白的表达以及OPN的表达,且其作用与浓度密切相关,在1×10-8mol/L时,其促成骨细胞增殖作用最强。     

α-玉米赤霉醇对成骨细胞增殖、分化以及OPG和RANKL mRNA表达的影响

目的:探讨α-玉米赤霉醇(α-zearalanol,α-ZAL)对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1增殖、分化及护骨素(osteoprotegerin,OPG)和NF-кB受体活化配体(receptor activator of nuclear factor-кB ligand,RANKL)mRNA表达的影响。方法:传代培养小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1,采用不同浓度的α-ZAL作用于细胞72 h后,MTT法检测细胞增殖活性,PNPP法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,RT-PCR法检测ALP,OPG及RANKL mRNA的表达水平。结果:10-6～10-12mol·L-1的α-ZAL可显著抑制成骨细胞的增殖(P<0.05);显著增加ALP活性(P<0.05),但不同剂量间存在作用时间差异;并且可显著上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P<0.05)。结论:α-ZAL可抑制成骨细胞的增殖、促进其分化,并可通过上调OPG/RANKL mRNA表达比值抑制破骨细胞的形成,有望作为骨质疏松症的治疗药物。     

黄芪多糖缓释纤维对成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响

目的:研究黄芪多糖(AP)缓释纤维对成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响。方法:将AP分别与左旋聚乳酸(PLLA)结合制备成AP质量浓度分别为0、25、50、100μg/ml的静电纺丝缓释纤维,即PLLA、PLLA/AP1、PLLA/AP2、PLLA/AP3,以异硫氰酸荧光素为指示剂于荧光显微镜下观察MC3T3-E1细胞在上述4种缓释纤维上的黏附情况;采用紫外分光光度法在490 nm波长处测定PLLA/AP1、PLLA/AP2、PLLA/AP3中AP的含量,考察其21 d内的体外释放情况;采用MTT法检测4种缓释纤维作用24、48、72 h时MC3T3-E1细胞的增殖情况;采用酶标仪法检测4种缓释纤维对MC3T3-E1细胞作用3、5、7 d时的碱性磷酸酶(ALP)活性表达情况。结果:镜下观察PLLA纤维连续,较多空隙,表面光滑;PLLA/AP1、PLLA/AP2、PLLA/AP3纤维呈纵横交错的三维、多空网络结构,且3种AP载药量下纤维形态未见明显改变。PLLA/AP1、PLLA/AP2、PLLA/AP3能持续释放AP 21 d,且最初的24 h内释药呈突释状态。与PLLA比较,PLLA/AP2、PLLA/AP3能促进MC3T3-E1细胞的增殖,PLLA/AP1仅作用48 h时能促进MC3T3-E1细胞的增殖,差异具有统计学意义(P<0.05);PLLA/AP1、PLLA/AP2、PLLA/AP3均能增强MC3T3-E1细胞中ALP活性表达,差异具有统计学意义(P<0.05),且与AP浓度呈正相关。结论:AP缓释纤维具有一定的缓释作用,且对MC3T3-E1细胞的增殖、分化具有剂量依赖性的促进作用。     

马卡列丙中1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的 探究马卡列丙中蒽醌类成分1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法 以MC3T3-E1成骨细胞作为对象研究，设立阴性对照组(二甲基亚砜)、阳性对照组(雌二醇)和药物组，采用四甲基偶氮唑盐比色法检测不同质量浓度1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌对MC3T3-E1成骨细胞增殖活性的影响，选出增殖活性最强的浓度进行后续研究，采用碱性磷酸酶染色法测定1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-羟基蒽醌对MC3T3-E1成骨细胞的分化程度，茜素红染色评估1,6,8-三羟基2,7-二甲氧基-3-羟基蒽醌对MC3T3-E1成骨细胞矿化能力的影响。结果 药物组MC3T3-E1成骨细胞在1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌质量浓度为100 nmol/L时增殖活性最高，选用质量浓度为100 nmol/L的1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌能促进MC3T3-E1成骨细胞的分化和矿化。结论 1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌能显著促进成骨细胞增殖、分化和矿化水平，为马卡列丙的促骨折愈合作用提供了理论...     

杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对小鼠成骨样细胞系MC3T3-E1增殖和分化的影响

目的 对杜仲抗骨质疏松的药效成分进行初步筛选。方法 采用小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外培养模型, 通过MTT法测定细胞增殖, ELISA方法测定碱性磷酸酶(ALP)活性, 观察杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对成骨细胞增殖和分化的影响。结果 槲皮素促MC3T3-E1细胞增殖的有效浓度为10^-6 mmol/L, 桃叶珊瑚苷则为10^-5 mmol/L;10^-4 μmol/L京尼平苷在干预后4 d, 才逐渐显现出促进MC3T3-E1增殖作用。槲皮素(10^-5、10^-3 mmol/L)、京尼平苷(10^-3 mmol/L)和桃叶珊瑚苷(10^-3 mmol/L)可增加MC3T3-E1 ALP活性。结论 槲皮素、京尼平苷和桃叶珊瑚苷可促进成骨细胞的增殖和分化, 且作用强度具有浓度相关性和时间相关性, 可能为杜仲抗骨质疏松的药效物质基础。     

镁锌合金对成骨细胞增殖的影响

目的研究镁锌合金对前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖的影响,探讨镁锌合金成为一种新型骨科内植物材料的可行性。方法在镁锌合金金属片上接种前成骨细胞MC3T3-E1,采用MTT法及碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒等方法检测MC3T3-E1细胞在材料表面的增殖活性,用左旋聚乳酸对照组。结果培养第1,3天后,镁锌合金表面成骨细胞增殖与对照组没有差异（P〉0.05）,第5、7、9后,镁锌合金表面成骨细胞增殖明显高于对照组（P〈0.01）。结论镁锌合金能够促进MC3T3-E1细胞的增殖,可以初步认为具有良好的生物相容性。     

雌二醇通过雌激素受体α/糖原合酶激酶-3β/β联蛋白信号通路调节成骨细胞增殖

目的研究观察雌二醇对小鼠成骨细胞前体细胞增殖影响并研究经典wnt通路在其增殖过程中的作用。方法本研究利用小鼠胚胎成骨细胞前体细胞Mc3T3-E1为细胞模型,不同浓度雌二醇处理Mc3T3-E1细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖率,蛋白印迹法和免疫荧光技术检测经典Wnt信号通路信号分子表达。结果研究表明不同浓度雌二醇处理Mc3T3-E1细胞,MTT显示随着雌二醇浓度增加,Mc3T3-E1细胞增殖率增加,其中以10-7 mol/L浓度处理后细胞获得最佳增殖率。蛋白印迹法结果显示随着雌激素浓度增加,小鼠Mc3T3-E1细胞中p-GSK-3β,β联蛋白(catenin),细胞周期蛋白(Cyclin)D1的表达增加。经雌激素受体(ER)α沉默后,相对于空白对照组小鼠Mc3T3-E1细胞p-GSK-3β,β-catenin及Cyclin D1表达下降,而ERβ沉默后,同对照组相比成骨细胞中各分子表达则无明显变化。结论雌二醇可通过ERα/GSK-3β/β-catenin信号通路调节小鼠成骨细胞增殖。     

天料木中异香豆素糖苷化合物对MC3T3-E1细胞增殖、分化及OPG/RANKL/RANK信号通路的影响

目的 探讨天料木中异香豆素糖苷化合物4-hydroxy-2-{[（benzoyl） oxy]methyl}phenyl-β-D-glucopyranoside-6-benzoate （HPGB）对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1细胞活性的影响及其作用机制。方法 体外培养MC3T3-1细胞,用不同浓度的异香豆素糖苷化合物进行干预,采用MTT法测定MC3T3-1细胞增殖情况,碱性磷酸酶（ALP）测定细胞分化情况,悬液芯片技术检测、分析糖蛋白Dickkop （DKK-1）、骨保护素（OPG）、骨桥蛋白（OPN）、骨钙素（BGP）和核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）蛋白表达水平。Real-time PCR法检测、分析DKK-1、RANKL mRNA的表达水平。结果 异香豆素糖苷化合物在3~300 μmol/L可促进MC3T3-E1细胞增殖和分化能力,具有浓度相关性;与正常对照组相比,异香豆素糖苷化合物可提高MC3T3-E1的ALP活性。蛋白结果表明,异香豆素糖苷化合物可显著上调MC3T3-E1细胞中OPG、OPN的表达,DKK-1、RANKL蛋白表达无明显变化,但显著提高了OPG/RANKL值。同时,mRNA结果显示异香豆素糖苷化合物可显著上调MC3T3-E1细胞中OPG mRNA表达,显著提高OPG/RANKL值。结论 异香豆素糖苷化合物可通过上调OPG、OPN的表达、提高OPG/RANKL值,促进MC3T3-E1的增殖和分化。     

瑞香素通过PI3K/AKT和BMP/Smad信号通路保护糖皮质激素诱导的成骨细胞增殖和分化抑制研究

目的 探讨瑞香素对地塞米松诱导的成骨细胞增殖和分化抑制的作用及分子机制.方法 体外培养MC3T3-E1细胞,分为对照组、地塞米松组、地塞米松+瑞香素40μmol/L组、地塞米松+瑞香素60μmol/L组和地塞米松+瑞香素80μmol/L组;采用CCK-8试剂盒测定细胞活力;RT-PCR法测量细胞中碱性磷酸酶(Alkal...     

卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化和Ⅰ型胶原基因表达水平影响。方法在MC3T3-E1细胞中加入不同浓度的卡托普利,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、RT-PCR的方法观察卡托普利对MC3T3-E1细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。结果 10-11 mol.L-1浓度的卡托普利作用24 h能明显促进MC3T3-E1细胞增殖,作用3 d能明显促进MC3T3-E1细胞表达碱性磷酸酶。卡托普利可刺激MC3T3-E1细胞表达Ⅰ型胶原,以10-11 mol.L-1作用最强。结论卡托普利有促进MC3T3-E1细胞增殖、促进碱性磷酸酶表达和增加Ⅰ型胶原mRNA表达的作用。