羧甲基壳聚糖对大鼠单一心室肌细胞ATP敏感钾电流的作用

目的 研究羧甲基壳聚糖对大鼠单一心宣肌细胞ATP敏感钾电流(IkAIP)的作用.方法 急性分离大鼠心室肌细胞,利用膜片钳削技术全细胞记录法,保持电位-40mV,指令电位-100～ 50mV,步阶脉冲10mV,波宽200ms,刺激间隔6s的方波钳制方案进行刺激.结果 羧甲基壳聚糖抑制心室肌细胞IKATP,且具有剂量依赖关系.指令电位在 50mV时,3种浓度羧甲基壳聚糖(0.1%,0.2%,0.3%)可使IKATP分别降低至给药前的66.1%±9.9%,50.3%±13.3%和39.8%±9.5%(n=7).其它指令电位下的IKATP改变也符合此趋势.结论 羧甲基壳聚糖剂量依赖性地抑制大鼠单一心室肌细胞IKATP,这可能是其抗心律失常的机制之一.     

咪达唑仑对大鼠单一心室肌细胞ATP敏感性钾电流的作用

目的研究咪达唑仑对大鼠单一心室肌细胞ATP敏感性钾电流(IKATP)的作用。方法急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,利用膜片钳制技术全细胞记录法,设保持电位为-40mV,指令电位为-100～+40mV,步阶脉冲20mV,波宽200ms,刺激间隔6s的方波钳制方案进行刺激。结果咪达唑仑能够开放心室肌细胞ATP敏感性钾(KATP)通道,在一定范围内具有剂量依赖性关系。指令电位在-60mV时,咪达唑仑(0.3～10μmol/L)可使KATP通道开放率分别增加至给药前的(119±5)%,(121±4)%和(121±6)%(P<0.01,n=9)。更高浓度(50～100μmol/L)咪达唑仑使KATP通道开放率略有下降,其他指令电位下的IKATP改变也符合此趋势。结论咪达唑仑对大鼠单一心室肌细胞KATP通道具有开放作用,这可能是其发挥心脏保护的机制之一。     

大豆苷元对大鼠心室肌细胞I_(Na)的影响

目的观察大豆苷元对大鼠心室肌细胞钠通道电流(I_(Na))的影响,探讨其抗心律失常的机制。方法 MTT比色法检测大豆苷元对心室肌细胞活力的影响;单酶解法分离大鼠单个心室肌细胞;全细胞膜片钳技术观察、记录、分析大豆苷元给药前后大鼠心室肌细胞I_(Na)及其动力学特征的变化。结果 MTT实验表明,大豆苷元的IC_(50) 30～100μmol·L~(-1),由此选定用于后续实验的药物浓度为0.3～10μmol·L~(-1)。膜片钳实验结果表明,当给予终浓度为0.3、1、3、10μmol·L~(-1)大豆苷元后,药物对I_(Na)呈浓度依赖性抑制现象;大豆苷元0.3μmol·L~(-1)时对I_(Na)作用的时间过程也具有一定影响,随时间推移缓慢减小;1、3、10μmol·L~(-1)大豆苷元使I-U曲线上移;在此同等条件下,激活曲线向去极化方向移动、稳态失活曲线向超极化方向移动和失活后恢复曲线的τ值延长。结论大豆苷元对大鼠心室肌Na~+通道有明显的抑制作用,这可能是其抗心律失常的机制之一。     

海葵毒素anthopleurin—Q对豚鼠心室肌细胞钠电流的作用

目的:研究从海葵(Anthopleura xanthogrammica)提取的毒素anthopleurin-Q(AP-Q)对豚鼠心室肌钠电流(I_(Na))的作用。方法:用酶消化法分离豚鼠单个心室肌细胞,用全细胞膜片箝技术记录心室肌细胞钠电流。结果:AP-Q 3-30nmol/L浓度依赖性地增大I_(Na),EC_(50)、为104nmol/L(95％可信范围:78-130nmol/L)。AP-Q 300nmol/L使I-V曲线左移,使半数激活电压从(-36.3±2.3)mV变为(-43±23)mV(n=6,P<0.01),半数失活电压从(-75±6)mV变为(-59±5)mV(n=6,P<0.01)。AP-Q 300nmol/L使I_(Na)半数恢复时间从(114±36)ms缩短为(17±2)ms(n=6,P<0.01),并明显减慢I_(Na)的快速失活时间常数(τ_f)。结论:AP-Q对I_(Na)有促进作用并减慢其失活过程。     

羧甲基壳聚糖对豚鼠单-心室肌细胞延迟外向钾电流的作用

研究羧甲基壳聚糖对豚鼠单一心室肌细胞延迟外向钾电流 (IK)的作用 ,从离子通道角度初步探讨其作用机理。应用膜片钳全细胞记录方式 ,设保持电位为 - 50 m V,指令电位为 - 50～ 70 m V,步阶脉冲 1 0 m V,刺激频率 1 Hz,波宽 1 0 0 0 ms,刺激间隔 5s的方波钳制方案。羧甲基壳聚糖能抑制 IK,并呈浓度依赖关系。选择指令电位 70 m V时给药前后 IK 的变化进行统计 ,当浓度为 0 .1 %时 ,IK由给药前的 1 .1 6± 0 .30 n A减少至药后的 0 .96± 0 .2 7n A(n=4,P<0 .0 1 ) ,其抑制率是 1 7.70± 0 .0 5%。当浓度为 0 .2 %时 ,IK 由给药前的 1 .46±0 .62 n A减少至给药后的 1 .0 6± 0 .49n A(n=4,P<0 .0 1 ) ,抑制率是 2 8.66± 0 .0 6%。其它指令电位下的 IK 的改变也符合此趋势。羧甲基壳聚糖抑制豚鼠单一心室肌细胞延迟外向 K 电流。     

羧甲基壳聚糖对大鼠单一心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流的作用

目的　探讨羧甲基壳聚糖 (CMCS)对心血管作用的机制。方法　利用膜片钳全细胞记录方式 ,双脉冲方波刺激 ,首先给一个时程为 2 0 0ms ,保持电位 - 6 0mV ,去极化到 +30mV的条件脉冲 ,间隔 2 0ms后 ,再给予波宽 12 0 0ms的方波刺激 ,保持电位- 6 0mV ,刺激电压从 - 40mV～ +5 0mV ,步阶电压10mV。结果　CMCS抑制IKur,当其浓度为 1和 2g·L- 1时 ,指令电位 +5 0mV的电流值分别由给药前的 ( 1.8± 0 .7)和 ( 2 .0± 0 .6 )nA下降到 ( 1.6± 0 .6 )(n =12 ,P <0 .0 1)和 ( 1.5± 0 .5 )nA (n =7,P <0 .0 1)。其他指令电位下的IKur的改变也符合此趋势。增加刺激频率及指令电压IKur的变化均不显著 ,提示CMCS对IKur的抑制作用不具有电压依赖性和频率依赖性。结论　CMCS可抑制大鼠单一心房肌细胞IKur。     

甘草次酸对大鼠心室肌细胞L型钙离子电流的影响

目的观察甘草次酸（glycyrrhetic acid ，Gta）对大鼠单一心室肌细胞L型钙离子电流（ICa L）的影响。方法以Langendoff匀速灌流体外大鼠心脏，Ⅰ型胶原酶酶解分离单一大鼠心室肌细胞， 将心室肌细胞悬液放入容积为0.2～0.3 mL的浴槽内，间隔相同时间分别向浴槽内加入0.1，1.0，10.0 μmol·L^-1 Gta，应用全细胞膜片钳技术记录不同浓度Gta对单一大鼠心室肌细胞ICa-L的影响；保持电位为－30 mV、指令电位为－40～＋60 mV、步阶脉冲为10 mV、时程为300 ms、刺激频率为0.5 Hz的条件下，引出钙离子电流，取指令电位与相对应的钙离子通道电流作用结果制作不同浓度Gta下L型钙离子通道的电流-电压(I-V)关系曲线。结果Gta浓度分别为0.1，1.0， 10.0 μmo1·L^-1 时可剂量依赖性地降低ICa-L，分别使ICa-L从加入Gta前的（2.30±0.29） nA降至(1.96±0.34) ，(1.37±0.24) ，（0.66±0.20） nA（与加入Gta前比较，均P＜0.01）；Gta 0.1，1.0， 10.0 μmo1·L^-1 也可抑制L型钙离子I-V曲线，使I V曲线上移，但峰值电流不变。结论Gta通过阻滞L型钙通道抑制L型钙离子内流，这种机制可能与Gta抗心律失常作用有关。     

白花前胡甲素对豚鼠心肌细胞钙电流的影响(英文)

利用膜片钳制技术全细胞记录观察了白花前胡根中成分甲素对豚鼠单一心室肌细胞I_(Ca)的作用。表明;1,10,100μmol·L~(-1)的甲素使I_(Ca)的峰值变小,具有剂量依赖关系。给药前后I_(Ca)的翻转电位均为 60mV,实验结果提示甲素对Ca~(2 )通道有阻滞作用。     

钠-钙交换体单克隆抗体NCX-3F10对大鼠心室肌主要离子电流的影响及对缺血/再灌注诱发心律失常的抑制作用

目的观察NCX-3F10抗体对大鼠心室肌细胞主要离子电流的影响及其对缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)诱发心律失常的作用。方法(1)利用全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞Na~+/Ca~(2+)交换电流(INa/Ca)及其他主要离子电流;(2)结扎左冠状动脉建立大鼠在体及离体心脏缺血/再灌注心律失常模型,观察抗体对心律失常的影响;(3)利用Ion Optix离子影像分析系统观察抗体对单个心室肌细胞钙瞬变的影响。结果(1)5~40 mg·L~(-1)的NCX-3F10抗体对I_(Na/Ca)呈剂量依赖性抑制作用,其抑制外向和内向电流的IC_(50)分别为11.15和11.69 mg·L~(-1),最大抑制率分别达到61%、62%;该抗体对钙电流(I_(Ca-L))也有一定的抑制作用,对内向整流钾电流(I_(K1))、瞬时外向钾电流(I_(to))、钠电流(I_(Na))均无影响;(2)在离体大鼠心脏I/R组,100%大鼠发生室速,88.89%大鼠出现室颤;再灌注前5 min给予NCX-3F10抗体(10 mg·L~(-1))干预后,大鼠的室速发生率下降至44.43%,室速、室颤持续时间明显减少(P<0.05);(3)麻醉大鼠再灌注前5 min给予NCX-3F10抗体(50μg·kg-1)预处理后,大鼠室早个数、室速发生率及持续时间、室颤的发生率及持续时间均明显降低(P<0.05);(4)5~40 mg·L~(-1)的NCX-3F10抗体对心肌细胞钙瞬变幅度呈剂量依赖性抑制作用。结论 NCX-3F10抗体对大鼠离体和在体心脏缺血/再灌注诱发的心律失常有明显抑制作用,其抗心律失常效应与抑制钠-钙交换电流和L-型钙电流、减轻细胞内钙超载有关。     

N-甲基小檗胺对人心房肌细胞瞬时外向钾电流和延迟整流钾电流的作用(英文)

目的　动物实验表明N 甲基小檗胺 (NMB)通过抑制豚鼠心室肌细胞ATP敏感性钾电流和钙电流来发挥抗心律失常和抗心肌缺血作用 ,故进一步研究NMB对人心肌细胞电流的作用。方法　膜片钳制技术全细胞记录模式研究NMB对人心房肌细胞瞬时外向钾电流 (Ito)和延迟整流钾电流 (IK)的作用。结果　指令电位为 +60mV时 ,NMB 0 .1 ,1 ,1 0 μmol·L-1 分别使Ito幅值下降 (1 6± 4) % ,(2 5±4) %和 (49± 3) % ,使IK 幅值下降 (42± 6) % ,(47±7) %和(65± 3) %。结论　NMB对人心房肌细胞Ito和IK 均有抑制作用。     

醋柳黄酮对大鼠心室肌细胞瞬间外向整流钾电流的影响

目的探讨醋柳黄酮对大鼠心室肌细胞膜瞬间外向钾电流(Ito)的影响。方法用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,标准的全细胞膜片钳技术记录瞬间外向钾电流。结果①醋柳黄酮呈浓度和电压依赖性抑制Ito,在+50mV时,0.06、0.1和0.14g.L-1醋柳黄酮分别阻断Ito峰电流(18.34±0.99)%、(25.32±1.43)%和(38.88±1.96)%。②0.14g.L-1醋柳黄酮使Ito失活曲线明显左移,但对激活和复活曲线无影响。结论醋柳黄酮呈浓度和电压依赖性抑制心肌细胞Ito,这可能是其抗心律失常作用的重要机制之一。     

广枣总黄酮对大鼠心室肌细胞IC_a、I_(to)和细胞[Ca~(2+)]_i的影响

目的　观察广枣总黄酮对大鼠心室肌细胞L 型钙通道电流 (ICa)和瞬时外向钾通道电流 (Ito)以及对心肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响 ,探讨其抗心律失常作用机制。方法　全细胞膜片钳记录大鼠心室肌细胞ICa、Ito,激光共聚焦显微镜观察细胞 [Ca2 + ]i 的变化。结果　在钳制电压- 4 0mV ,实验电压 - 4 0～ +5 0mV时 ,广枣总黄酮 10 0mg·L-1对心室肌细胞ICa无显著影响 ;在钳制电压 - 6 0mV ,实验电压 - 4 0～ +5 0mV时显著抑制瞬时外向钾通道Ito(P <0 0 5 ) ;而激光共聚焦显微镜结果显示广枣总黄酮在 5 0、10 0、2 0 0mg·L-1却降低缺氧复氧心肌细胞收缩期和静息期[Ca2 + ]i 的浓度。结论　广枣总黄酮对心肌细胞ICa无显著影响 ,可显著抑制瞬时外向钾通道Ito,并可明显降低心肌细胞收缩期和静息期细胞 [Ca2 + ]i 浓度。这可能是其抗心律失常和保护缺血心肌的主要作用机制。     

双苯氟嗪对豚鼠心室肌细胞L-钙电流的影响

目的:观察双苯氟嗪(Dip)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(I_(Ca-L))的影响。方法:酶解法制备单个心室肌细胞。应用全细胞膜片箝技术记录豚鼠单个心室肌细胞钙电流。结果:在0.3-30μmol/L范围内,Dip可浓度依赖性地降低电压依赖性激活I_(Ca-L)峰值,被Dip 3μmol/L所抑制的I_(Ca-L)在冲洗5min后可得到部份恢复。但Dip对I_(Ca-L)的电压依赖特征,最大激活电压,以及I_(Ca-L)稳态激活无明显影响。在Dip3μmol/L存在下,半数激活电压(V_(0.5))和斜率参数(к)与对照组相比,差异均无显著性。V_(0.5)分别为(-12.8±1.7)mV和(-13.2±2.4)mV,к分别为(7.1±0.4)mV和(7.5±0.5)mV(P>0.05)。Dip3μmol/L可明显使钙电流稳态失活曲线左移,加速钙通道电压依赖性稳态失活。V_(0.5)分别为(-19.7±2.4)mV和(-31±6)mV,к分别为(3.6±0.3)mV和(1.8±0.2)mV(P<0.05).Dip 3μmol/L还使I_(Ca-L)从失活状态下的恢复明显减慢。结论:Dip主要作用于L-型钙通道的失活状态,加速钙通道失活,并使其从失活状态下恢复减慢,从而抑制I_(Ca-L)。     

蛋白酪氨酸磷酸化参与调控主动脉平滑肌细胞容积调节性氯通道电流

目的　探讨蛋白酪氨酸磷酸化在胚胎鼠主动脉平滑肌细胞系A10细胞容积调节性氯通道电流中的调控作用。方法　膜片钳全细胞记录技术。结果　①在A10细胞 ,低渗溶液激活一外向整流电流 ,该电流在正电位 (≥ 6 0mV)时缓慢失活。其反转电位为 (- 1 5± 3 4 )mV ,接近Cl-平衡电位 (Ecl=0mV)。降低胞外Cl-浓度其反转电位随之变化。高渗溶液可抑制该电流。②DIDS(10 0 μmol·L-1)电压依赖性抑制容积调节性氯通道电流 ,在 +80mV和 - 80mV的抑制率分别为 5 3 7%± 6 2 %和 2 9 8%± 4 9%。③酪氨酸激酶抑制剂genistein (30 μmol·L-1)抑制该电流 ,在 +80mV和 - 80mV对其抑制率分别为6 2 3%± 11 3%和 6 6 9%± 10 5 % ,其抑制作用无电压依赖性。④酪氨酸磷酸酶抑制剂sodiumorthovanadate(Na3 VO4,5 0 0 μmol·L-1)增强该电流 ,其作用无电压依赖性 ,在 +80mV和 - 80mV电流幅度分别增加了 4 4 8%±14 5 %和 4 7 1%± 13 6 %。结论　A10细胞上存在有容积调节性氯通道。蛋白酪氨酸磷酸化参与调节A10细胞容积调节性氯电流的激活     

雌二醇抑制豚鼠心室肌细胞内向整流和延迟整流钾通道电流

目的:研究雌二醇(Estradiol,Est)对心室肌细胞动作电位(AP)、内向整流钾通道电流(I_(K1))及延迟整流钾通道电流(I_K)的影响。方法:全细胞膜片箝技术。结果:EST 10μmol·L~(-1)使豚鼠心室肌细胞AP时程明显缩短,APD_(50)由给药前(474±71)ms缩短至(330±75)ms(P<0.05),Est 100μmol·L~(-1)使APD_(50)缩短至(229±67)ms(P<0.01),使APD_(90)由(587±60)ms缩短至(418±79)ms(P<0.05)。Est浓度依赖性地抑制I_K尾电流(I_K·tail),10μmol·L~(-1)浓度下,I_K·tail减少53％(P<0.05),100μmol·L~(-1)浓度下,I_K·tail减少80％(P<0.05)。10μmol·L~(-1)以上浓度Est明显抑制I_(K1),在-100mV刺激电压下,内向电流最大抑制为49％(P<0.01);在-40mV刺激电压下,外向电流最大抑制为72％(P<0.01)。同时,Est使I_(K1)翻转电位向负电位方向移位(由-70mV变为-76mV)。结论:Est对豚鼠心室肌细胞I_(K1)和I_K通道具有明显的抑制作用。     

槟榔碱对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响

目的：研究槟榔碱(Are)对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(I_(to))的影响。方法：利用全细胞膜片钳技术测定大鼠心室肌细胞的I_(to)。结果：10.0μmol·L~(-1) Are可以降低I_(to),使I_(to)幅值从(10.6±s 1.2)pA·pF~(-1)降至(6.2±0.9)pA·pF~(-1)(P＜0.01,n=20)。在1～100μmol·L~(-1)范围内Are的作用呈浓度依赖性,IC_(50)为8.2μmol·L~(-1)。10.0μmol·L~(-1)Are使稳态激活曲线右移,半激活电压(V_(1/2))从(-11.6±0.6)mV移至(-2.3±0.1)mV,但曲线斜率基本不变。Are对失活曲线影响不大,但10.0μmol·L~(-1)Are使通道失活后恢复时间常数从(88±16)ms延长为(152±24)ms(P＜0.01,n=18)。结论：Are浓度依赖地阻滞大鼠心室肌细胞的I_(to)。     

灯盏花素对豚鼠心室肌细胞I_(Ca)的影响

目的观察灯盏花素对豚鼠心室肌单细胞钙离子电流(ICa)的影响。方法采用全细胞膜片钳制技术。结果灯盏花素能使豚鼠心室肌细胞ICa减小,连续刺激后,对ICa的抑制作用加强,与给药前比较,差异显著(P<0.01);此作用具有明显的电压依赖性,在峰电流电压下作用最明显,而对其反转电位无明显影响;灯盏花素对ICa的作用随质量浓度升高而加强,在指令电压0 mV时,5、10和20 mg.L-1灯盏花素使ICa分别减小5.4%、22.9%和45.0%(P<0.01),且可以恢复;在不同的刺激频率下,灯盏花素均可使ICa减小,尤其对高频率刺激细胞产生的ICa作用更明显(P<0.05)。结论灯盏花素能抑制豚鼠心室肌细胞的Ca2+内流,此作用具有电压依赖性、质量浓度依赖性、药物使用-刺激频率依赖性和可恢复性。     

灯盏花素对豚鼠单一心室肌细胞ICa的抑制作用

目的:观察灯盏花素对豚鼠单一心室肌细胞钙离子电流(I_Ca)的影响。方法:应用全细胞膜片钳制技术。结果:灯盏花素能明显抑制心室肌细胞的Ca²⁺通道,使I_Ca减小。此作用有明显的电压依赖性,在峰电流电压下作用最明显,而对其反转电位无明显影响。在指令电位0mV时,0.5mg %灯盏花素使I_Ca减小5.4% ,1mg %灯盏花素使I_Ca减小2 2 .9% (P<0.01) ,2mg %灯盏花素使I_Ca减小4 5.0 % (P<0.01)。此作用有明显的剂量依赖性和可复性。结论:I_Ca灯盏花素能抑制豚鼠单一心室肌细胞钙离子电流I_Ca。     

卡维地洛对大鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的研究卡维地洛对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响,在离子通道水平探讨卡维地洛的抗心律失常作用机制。方法用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,标准的全细胞膜片钳技术记录钠通道电流。结果①卡维地洛呈浓度依赖性抑制钠通道电流,IC50=(6.35±0.40)μmol·L-1。②10μmol·L-1卡维地洛能使心肌细胞钠通道电流-电压关系曲线明显上移,峰电流从(17.31±1.68)pA/pF减少至(6.58±1.35)pA/pF(n=8,P<0.05),激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。③卡维地洛能使钠通道电流失活曲线明显左移。④卡维地洛对钠通道电流的激活和复活曲线无明显影响。⑤卡维地洛呈频率依赖性地抑制钠通道电流。⑥1μmol·L-1卡维地洛能明显阻断10μmol·L-1异丙肾上腺素增加钠通道电流效应。结论卡维地洛能够抑制心肌细胞钠通道电流,呈浓度依赖性和频率依赖性。     

牛磺酸镁对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响

目的研究牛磺酸镁(taurine magnesium coordination compound,TMC)对正常豚鼠心室肌细胞钾电流的影响,旨在探讨TMC抗心律失常的作用机制。方法酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录豚鼠单个心室肌细胞IK、IK1的影响。结果应用200μmol·L-1TMC使豚鼠单个心室肌细胞IK在实验电压+70mV时,从给药前(8.67±1.04)pA/pF减少到(6.31±1.16)pA/pF(n=5,P<0.01);TMC对IK1无影响。结论本实验表明TMC具有直接抑制心室肌细胞IK作用,减少IK可能会使动作电位时程(APD)和有效不应期(ERP)延长,这可能是其发挥抗心律失常作用的基础之一。