^99Tc^m-Annexin B1探测荷瘤鼠化疗后肿瘤细胞凋亡的实验观察

目的：探讨^99Tc^m-Annexin B1探测化疗后肿瘤细胞凋亡的潜力与可行性。方法：乳腺癌细胞MDA-MB-435荷瘤小鼠经大剂量（30mg／kg）紫杉醇单次化疗后，注射^99Tc^m-Annexin B1，计算化疗后不同时间（0、5、10、15、20和25h）每克肿瘤组织摄取^99Tc^m-Annexin B1的百分注射剂量率（％ID／g）。肉瘤细胞W256荷瘤大鼠经大剂量（200mg／kg）环磷酰胺单次化疗后24h注射^99Tc^m-Annexin B1，对照组荷瘤大鼠注射生理盐水；行SPECT平面显像观察肿瘤摄取情况。结果：乳腺癌荷瘤小鼠化疗后15h，肿瘤摄取^99Tc^m-Annexin B1达高峰，由0h的（0．15±0．013）％ID／g上升至（0．22±0．026）％ID／g。肿瘤对^99Tc^m-Annexin B1的摄取与肿瘤细胞凋亡指数（AI）具有相关性，r=0．88，P〈0．01。W256细胞荷瘤大鼠化疗后24h显像发现，肿瘤对^99Tc^m-Annexin B1的摄取较对照荷瘤大鼠显著升高，对照组的肿瘤与非肿瘤摄取比值（T／B）为1．39±0．21，化疗组为2．57±0．43。结论：^99Tc^m-Annexin B1对探测化疗后肿瘤细胞凋亡具有潜力与可行性。     

18F-SFB-Annexin B1探测化疗后肿瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：诱导细胞凋亡是肿瘤化疗的机制之一,分子影像能在活体内无创、动态地检测细胞凋亡,有助于药物筛选和疗效分析。本研究旨在探讨N-琥珀酰亚胺-4-氟苯甲酸酯偶联的氟-18-膜联蛋白B1(¹⁸F-SFB-AnnexinB1)显像剂早期评价化疗诱导细胞凋亡的可行性。方法：以SFB作为中间体将¹⁸F标记到AnnexinB1上。了解¹⁸F-SFB-Annexin B1在健康小鼠体内的生物分布特性。建立Walker-256荷瘤小鼠模型,随机分为两组,化疗组腹腔注射环磷酰胺(CTX 200 mg/kg,n=3),对照组注射等体积无菌0.9%的氯化钠溶液(n=3)。24 h后静脉注射1⁸F-SFB-Annexin B1,分别于注射后1、2、3、4 h进行PET/CT显像。比较肿瘤/肌肉放射性摄取率比值(T/M)与原位缺口末端标记(TUNEL)染色法测定凋亡指数(AI)的关系。结果：18F-SFBAnnexinB1放化纯度>95%,生物分布显示肾脏放射性最高,其次为肝、脾和心肌,显像剂在体内清除速率快。化疗组与对照组各时间点T/M比值分别为4.38±0.56、6.75±1.16、6.44±1.12、4.81±0.17和2.35±0.14、2.99±0.55、3.04±0.41、2.33±0.47,差异有统计学意义(F分别为23.790、16.913、14.046、77.517,P均<0.05)。TUNEL染色AI分别为(21.00±0.04)%和(8.58±0.01)%,差异有统计学意义(F=21.539,P<0.05),且T/M值与AI间有很好的相关性(r=0.91,P<0.05)。结论：¹⁸F-SFB-AnnexinB1能早期反映化疗诱导的细胞凋亡,有望用于活体细胞凋亡分子显像和早期疗效判断。     

99mTc-HYNIC-annexinⅤ活体检测单次放疗后肿瘤细胞凋亡

  目的   本研究旨在采用99mTc-HYNIC-annexinⅤ活体检测放疗后肿瘤的凋亡情况,并初步探讨凋亡与照射剂量及肿瘤敏感性的关系。   方法   将EL₄淋巴瘤和S180肉瘤细胞株分别接种于实验小鼠右腋下10 d,随机分成显像组和观察组。显像组不同剂量照射后尾静脉注射99mTc-HYNIC-annexinⅤ,2 h后SPECT显像,取组织称重后分别测量放射性计数,计算每克组织百分注射剂量率（%ID/g）及T/B、T/M放射性比值,应用TUNEL法检测肿瘤凋亡细胞数。观察组照射后观察2周。   结果   EL₄淋巴瘤随照射剂量增加显影逐渐清晰,凋亡细胞数增多,且与%ID/g呈正相关（r=0.892,P < 0.001）;S180肉瘤不明显。相同剂量（0 Gy或8 Gy）照射,EL₄淋巴瘤放射性分布及凋亡细胞数明显高于S180肉瘤。8 Gy照射后,S180肉瘤仅缩小0.1 cm,EL₄淋巴瘤完全消退。   结论   99mTc-HYNIC-annexinⅤ可早期活体检测放疗诱导的肿瘤凋亡。放射诱导的凋亡与疗效呈正相关,检测凋亡有助于判断其对放疗的敏感性,可以作为预后的指标。      

热化疗诱导荷瘤鼠肿瘤细胞凋亡的研究

目的 :探讨热化疗诱导荷瘤鼠肿瘤细胞凋亡及相关机制。方法 :Balb c纯系小白鼠 4 0只 ,随机分为 4组。于右后足底部皮下注入S180腹水型瘤细胞每只 2× 10 8mL-1。 4 8h后 ,分别给予不治疗、平阳霉素治疗、高温治疗及高温联合平阳霉素治疗 2次。切取肿瘤标本 ,TUNEL染色标记凋亡细胞 ,免疫组化S P法染色检测bcl 2和Bax蛋白表达 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 :热化疗组癌细胞凋亡明显增多 ,凋亡率明显升高 ,bcl 2蛋白表达明显降低 ,Bax蛋白表达明显升高。结论 :热化疗通过调节凋亡相关基因bcl 2和Bax的表达诱导肿瘤细胞的凋亡。     

桂枝茯苓丸对荷瘤鼠肿瘤细胞凋亡的影响

背景与目的:探讨桂枝茯苓丸方剂诱导肿瘤细胞凋亡机制,为桂枝茯苓丸(GFW)开发应用提供实验依据.材料与方法:取30只小鼠,每只鼠右侧腋下皮下注射0.2 ml的S180瘤细胞悬液,将其随机分为模型组、中药(GFW)组、环磷酰胺(CP)组,每组10只,另取10只未荷瘤小鼠作为正常对照.模型组用生理盐水灌胃,每天0.02 ml/g;中药组用GFW给小鼠灌胃,每天0.02 ml/g;环磷酰胺组于小鼠腹腔注射CP,每天20 mg/kg.各组小鼠均于接种后次日给药,每天给药1次,连续10 d后,小鼠脱颈处死,取腋下实体瘤,计算抑瘤率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,电镜观察肿瘤细胞超微结构.原位杂交法检测Survivin mRNA表达.结果:GFW抑瘤率为38.93%,流式细胞仪检测GFW组细胞凋亡率17.79%,与模型组比较差异均具有统计学意义(P均＜0.05).GFW组镜下可见瘤细胞以凋亡变化为主.内膜结构完好,核膜清晰,细胞核固缩,染色质团块状散布核内或边集核膜下,并可见凋亡小体.GFW下调肿瘤细胞Survivin mRNA表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:GFW诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin mRNA表达密切相关.     

凋亡显像剂99m Tc-HYNIC-annexin V对肿模型化疗疗效早期评价的可行性

目的 评价凋亡显像剂99mTc-HYNIC-annexin V在肿瘤动物模型中对化疗疗效早期评估的可行性.方法 人膜联蛋白V(annexin V)通过双功能螯合剂联肼尼克酰胺(HYNIC)进行99mTc标记.在正常昆明小鼠右上肢接种Ehrlich腹水癌细胞,至肿瘤生长至1 cm后,随机分为生理盐水处理组和环磷酰胺处理组(150 mg/kg),并分别于处理后1 h和24 h时注射99mTc-HYNIC-annexin V.注射后30、60、180、360 min进行双探头单光子发射计算机断层仪(SPECT)显像.图像分析采用感兴趣区(ROI)技术,计算右上肢肿瘤部位与右下肢计数比值(肿瘤/下肢).采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测肿瘤组织凋亡细胞.结果 在不同处理时间,生理盐水处理组的肿瘤部位仅有少量显像剂分布.环磷酰胺处理组在处理1 h后,肿瘤部位显像剂分布少量增加;24 h后,肿瘤部位显像剂分布明显增加,显影清晰.环磷酰胺处理24 h组的肿瘤/下肢比值(6.27±0.24)明显高于生理盐水24 h处理组(2.36±0.18)和环磷酰胺1 h处理组(4.00±0.38).环磷酰胺处理24 h后,TUNEL染色可见大量癌细胞凋亡.结论 99mTc-HYNIC-annexin V是一种可以早期监测化疗药物治疗效果的核素凋亡显像剂,在化疗药物应用24 h后就可以进行有效探测,并在注射显像剂后60 win即可获得清晰的图像.     

凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗治疗肺癌的实验研究

目的：用凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞（dendritic cells，DCs）激发肿瘤抗原特异性的细胞毒T细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）活性，观察其体内外抗肺癌的特性。方法：常规方法从健康人外周血单个核细胞中诱导DCs，采用或不采用凋亡肿瘤细胞负载DCs，并利用激发型CD40单克隆抗体（CD40mAb）诱导DCs成熟；成熟DCs与自体T细胞共育，分别获得Ag-CTL及non-Ag-CTL，流式细胞仪检测Ag-CTL细胞表型的变化；^3H-TdR掺入法测定DNA片段形成率；建立人肺癌细胞株A549荷瘤裸鼠模型，过继回输Ag-CTL和non-Ag-CTL，评价其在体内的抗肿瘤活性。结果：CD40mAb激发可使DCs上调CD1a、CD80、CD86、CD83、HLR-DR的表达；凋亡肿瘤细胞负载联合CD40mAb激发可进一步促进DCs的成熟；成熟DCs和自体的T细胞共育活化后CD8^＋T细胞明显上调；Ag—CTL对A549具有高效特异的杀伤力，明显强干Ag-CTL对肝癌细胞株HepG2的作用（P〈0．01），且Ag-CTL对A549的杀伤力明显强于non—Ag-CTL（P〈0．01），而non-Ag-CTL对A549及HepG2细胞的杀伤力无显著性差异；体内实验表明，Ag-CTL可有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长，与生理盐水组（NS组）、non-Ag-CTL组相比在统计学意义上有显著差异（P〈0．05），non-Ag-CTL组与NS组相比在统计学意义上有差异（P〈0．05）。结论：凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗激发的Ag—CTL在体内外均呈现抑制肺癌细胞的特性。     

紫杉醇诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的实验研究

目的 :研究紫杉醇 (Taxol)对肝癌细胞SMMC 772 1的生长抑制和诱导凋亡的作用。方法 :应用MTT法观察紫杉醇对SMMC 772 1的生长抑制作用 ,通过瑞氏染色、荧光显微镜、透射电镜 ,流式细胞仪和TUNEL染色研究紫杉醇对SMMC 772 1诱导凋亡的作用。结果 :紫杉醇对肝癌细胞SMMC 772 1有明显的生长抑制作用 ,其IC50 为 2 1.6nmol/L。紫杉醇作用细胞后 ,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化 ,细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧贴于核膜周边 ,核碎裂、染色质片断化、凋亡小体形成等。流式细胞仪上可见S期和G2 /M期和DNA含量增加 ,并出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。TUNEL染色显示。紫杉醇作用于SMMC 772 1后 ,随药物浓度增加和作用时间延长 ,凋亡指数增加。结论 :紫杉醇对SMMC 772 1有明显的生长抑制作用 ;紫杉醇对SMMC 772 1有诱导凋亡的作用。     

抗凋亡蛋白表达与晚期乳腺癌紫杉醇化疗敏感性的关系

目的:探讨抗凋亡蛋白Survivin在乳腺癌组织中的表达及其与晚期乳腺癌紫杉醇化疗敏感性的关系。方法:应用免疫组化方法,对40例应用紫杉醇化疗的乳腺癌患者癌组织中Survivin表达水平进行检测,分析其与紫杉醇化疗敏感性的关系。结果:乳腺癌患者Survivin表达阳性率为60·0%(24/40);紫杉醇化疗后,有效组(CR PR)患者Survivin阳性率为40·9%(9/22),无效组(NC PD)患者Survivin阳性率为83·3%(15/18),两者之间差异有统计学意义,χ2=7·424,P=0·006。结论:Survivin表达水平与乳腺癌对紫杉醇化疗敏感性呈负相关,Survivin可能作为一项筛选乳腺癌化疗药物、指导制定合理治疗方案的新指标。     

紫杉醇诱导胆管癌QBC939细胞凋亡的初步研究

目的：探讨紫杉醇对胆管癌QBC939细胞作用的敏感性并研究紫杉醇对胆管癌细胞周期及细胞凋亡率的影响,并初步探讨紫杉醇诱导胆管癌细胞发生凋亡的机制,为胆管癌的临床治疗寻找新的治疗药物。方法：体外培养胆管癌细胞QBC939,采用不同浓度紫杉醇予以干预,通过细胞形态观察和Mrrr实验,初步研究紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939的敏感性;应用流式细胞仪检测紫杉醇诱导胆管癌细胞凋亡,同时对细胞周期的变化和动力学予以检测。结果：各浓度紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939生长均有明显抑制作用;胆管癌细胞被紫杉醇明显阻滞在S期及G2／M期,且抑制作用呈剂量和时间依赖效应。结论：紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖效应;紫杉醇能诱导人胆管癌QBC939细胞发生凋亡。     

有机酸诱导肿瘤细胞凋亡研究进展

与传统的杀伤肿瘤细胞的方式相比，通过诱导肿瘤细胞凋亡进行肿瘤治疗的方法具有明显的优越性。有机酸类化合物是能够通过各种途径诱导肿瘤细胞凋亡的重要药物之一，对于寻找高效低毒的诱导肿瘤细胞凋亡的药物的研究具有重要的意义。本文就饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、含苯环的脂肪酸、维生素类酸、稠环类酸等五类有机酸诱导肿瘤细胞的凋亡以及其诱导机制的国内外研究现状进行简要综述。     

吴茱萸碱诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制研究进展

吴茱萸碱（evodiamine,Evo）是中药吴茱萸重要的生物碱成分之一,具有良好的抗肿瘤活性。目前的研究表明,吴茱萸碱抗肿瘤作用主要通过诱导肿瘤细胞发生凋亡。本文就近几年吴茱萸碱在诱导肿瘤细胞凋亡分子机制方面的最新研究进展进行简要综述。     

紫杉醇诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的分子机制

目的:探索紫杉醇对A375细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测紫杉醇对细胞增殖能力及细胞生长的影响;流式细胞仪分析及细胞形态学观察检测细胞周期和细胞凋亡;Westernblot方法检测bcl2、Bax和Caspase3蛋白表达。结果:0.001～1.000μmol/L紫杉醇以时间和剂量依赖方式抑制A375细胞生长和诱导细胞凋亡,0.000～1.000μmol/L紫杉醇作用24h时,早期细胞凋亡率由(0.5±0.1)%增至(32.4±1.1)%,P<0.05,0.100μmol/L紫杉醇作用24和48h时,早期细胞凋亡率由(20.9±0.9)%增至(52.6±1.0)%,t=28.89,P=0.001;不同浓度紫杉醇诱导A375细胞凋亡的机制不同,0.001μmol/L时不影响细胞周期,0.010μmol/L时使G0/G1期细胞含量明显减少,0.100和1.000μmol/L时使细胞发生G2/M期阻滞。紫杉醇作用24h后,Caspase3被激活,同时bcl2和Bax蛋白表达分别被下调和上调。结论:紫杉醇可诱导A375细胞凋亡,bcl2/Bax蛋白比值的下降及Caspase3的激活参与了该细胞凋亡过程,但高浓度紫杉醇通过作用微管,低浓度紫杉醇则通过尚不清楚途径实现细胞凋亡过程。     

蟾蜍制剂诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

蟾蜍制剂是我国传统中药材,具有镇痛、消炎、麻醉等作用。近年来研究表明其具有多种抗肿瘤作用,包括诱导细胞凋亡,抑制增殖,促进细胞分化,抑制肿瘤血管形成等作用。而近几年来,以研究蟾蜍制剂诱导肿瘤细胞凋亡作用机制最多,本文主要就近几年来蟾蜍制剂：华蟾素、蟾毒灵及华蟾毒精诱导细胞凋亡作用机制的研究进展做一综述。     

冷冻诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞发生凋亡的实验研究

目的:通过观察大鼠C6脑胶质瘤经冷冻后出现细胞凋亡,探讨冷冻对肿瘤的杀伤机制。方法:建立大鼠C6脑胶质瘤颅内接种模型,通过TUNEL法及流式细胞仪分别检测其冷冻后凋亡数目及凋亡率。结果:肿瘤经冷冻后,其中心出现坏死,而周边细胞呈现典型的凋亡形态学改变。TUNEL法检测冻后24、48和72h凋亡数目0.323、0.00167和0.037;流式细胞仪检测其冻后24、48和72h凋亡率与对照组相比,P值分别为0.0254、0.0064和0.031;冻后各时间点凋亡数目及凋亡率均显著高于对照组,P<0.05。其中冻后48h改变尤其明显,P<0.01,峰值时间出现在冷冻24～48h。结论:诱导细胞凋亡也是冷冻杀伤肿瘤细胞的重要机制之一,但其发生的分子机制有待于进一步深入研究。     

冷冻诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞发生凋亡的实验研究

目的：通过观察大鼠C6脑胶质瘤经冷冻后出现细胞凋亡，探讨冷冻对肿瘤的杀伤机制。方法：建立大鼠C6脑胶质瘤颅内接种模型，通过TUNEL法及流式细胞仪分别检测其冷冻后凋亡数目及凋亡率。结果：肿瘤经冷冻后，其中心出现坏死，而周边细胞呈现典型的凋亡形态学改变。TUNEL法检测冻后24、48和72h凋亡数目0．323、0．00167和0．037；流式细胞仪检测其冻后24、48和72h凋亡率与对照组相比，P值分别为0．0254、0．0064和0．031；冻后各时间点凋亡数目及凋亡率均显著高于对照组，P〈0．05。其中冻后48h改变尤其明显，P〈0．01，峰值时间出现在冷冻24～48h。结论：诱导细胞凋亡也是冷冻杀伤肿瘤细胞的重要机制之一，但其发生的分子机制有待于进一步深入研究。     

5-氮-2'-脱氧胞苷诱导膀胱癌BIU87细胞凋亡的研究

目的:研究5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-decxycytidine,5-Aza-CdR)对膀胱癌BIU87细胞凋亡的影响。方法:以不同浓度的5-氮-2'-脱氧胞苷作用于膀胱癌BIU87细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖程度,AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测凋亡率,AO荧光染色对细胞凋亡形态学观察,同时应用Western blot检测膀胱癌BIU87细胞RASSF1A蛋白表达的改变。结果:BIU87细胞加入(0.1、0.5、1.0、5.0)nmol/L的5-Aza-CdR后与对照组相比各组BIU87细胞增长速度减慢。不同浓度的5-Aza-CdR可以显著降低BIU87细胞的存活率,与对照相组比差异显著(P<0.05)。BIU87细胞的凋亡率逐渐增高且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系(P<0.05)。荧光显微镜下见典型的凋亡形态学改变,随5-Aza-CdR浓度的升高BIU87细胞RASSF1A蛋白的表达也升高。结论:5-Aza-CdR可能通过对RASSF1A基因的再表达而抑制肿瘤细胞的生长,从而诱导膀胱癌BIU87细胞凋亡的增加。