青蒿琥酯对U937细胞凋亡的诱导作用及其对Bcl-2、Bax、ICAD和Caspase-8表达的影响

目的：探讨青蒿琥酯对急性髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。方法：采用MTT比色法检测青蒿琥酯对U937细胞体外生长的抑制作用;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA的PI染色等观察和检测U937细胞的凋亡;Western-blot法检测U937细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase-8和ICAD蛋白表达水平的变化。结果：青蒿琥酯对U937细胞的生长有明显抑制作用,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P〈0.01）,呈浓度依赖性,48小时IC50值为24.48μg/ml;其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase-8蛋白出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导U937细胞凋亡作用,既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导U937细胞凋亡。     

龙葵碱对U251细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨龙葵碱对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法使用不同质量浓度的龙葵碱处理U251细胞,采用CCK-8法、划痕法、Transwell法、Hochest法、流式细胞术、免疫印迹法分别检测细胞增殖率、细胞迁移与侵袭、细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达。结果龙葵碱对U251细胞的48 h半数抑制浓度(IC_(50))为20.05μg/μL,其质量浓度在5～35μg/μL时,能够抑制细胞增殖(P0.05);与对照组相比,龙葵碱组抑制细胞迁移和侵袭的能力随药物质量浓度增高而增强(P0.05),同时细胞也出现明显凋亡特征,并均呈浓度依赖性;免疫印迹法显示龙葵碱可使凋亡相关蛋白Bax表达增加,Bcl-2表达降低,Bcl-2/Bax值降低。结论龙葵碱在有效剂量(5～35μg/μL)对U251细胞增殖生长具有抑制作用,并呈浓度依赖性;龙葵碱可抑制U251细胞的侵袭与迁移,可以影响凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达,使Bcl-2/Bax值降低,从而抑制U251细胞的增殖生长。     

苦参碱抑制胶质瘤U251细胞增殖作用及其凋亡机制研究

目的:研究苦参碱对胶质瘤U251细胞增殖影响,并进一步探讨其作用潜在的分子机制。方法:MTT法检测苦参碱对U251细胞增殖抑制作用;TUNEL方法及流式细胞术检测苦参碱诱导U251细胞凋亡情况;采用Western blot方法检测U251细胞上凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果:苦参碱可以抑制U251细胞增殖,差异有显著性(P0.05),呈时间和浓度依赖性;而在同条件下对人正常视网膜色素上皮RPE细胞无抑制作用,差异无显著性(P0.05);其次苦参碱能诱导U251细胞凋亡,进一步研究发现苦参碱可以影响蛋白Bcl-2、Bax表达。结论:苦参碱能抑制U251细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与下调U251细胞上抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达,同时上调促细胞凋亡Bax蛋白表达有关。     

藤黄酸对急性白血病细胞U937增殖和凋亡的影响及对核孔蛋白Nup88的调控作用

目的 观察藤黄酸对白血病细胞株U937增殖和凋亡的影响及其对核孔蛋白Nup88的调控作用,研究藤黄酸诱导凋亡作用与其调节Nup88的相互关系.方法 采用MTT比色法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI双标法及Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变,流式细胞术分析细胞周期和细胞内核孔蛋白Nup88的改变,RT-PCR检测藤黄酸对白血病细胞内Nupp88基因表达的调控作用;共聚焦显微镜观察Nup88蛋白的细胞分布情况.结果 藤黄酸能明显抑制U937细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其24 h的IC50为(1.019±0.134)mg/L;此外,藤黄酸还具有诱导U937细胞凋亡和G0/G1期阻滞的作用.核孔蛋白Nup88弥漫分布于白血病细胞的核浆之间,以细胞浆和核膜为主,经藤黄酸干预后,Nup88的蛋白和mRNA表达水平明显下降,主要集中于核膜的胞浆面,偶见胞浆中表达.结论 藤黄酸能明显抑制U937白血病细胞的增殖,并诱导其凋亡.而藤黄酸诱导的核孔蛋白Nup88的重新分布以及表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.     

白藜芦醇诱导人胶质瘤细胞U251增殖抑制与凋亡的作用研究

目的:探讨白藜芦醇对人胶质瘤细胞株U251的增殖抑制与凋亡的作用。方法:用不同浓度的白藜芦醇0、25、50、100、200μm/L处理对数生长期的U251细胞72 h,利用MTT比色法检测U251细胞增殖;流式细胞术检测U251细胞凋亡,采用逆转录聚合酶链反应法检测Wnt、β-catenin、p53、p21、Bcl-2和Bax mRNA水平。采用Western blotting检测Wnt、β-catenin、p53、p21、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果:白藜芦醇抑制U251细胞的增殖和Wnt、β-catenin、p53、p21和Bcl-2的表达,且呈浓度依赖性;促进U251细胞凋亡和Bax的表达。结论:白藜芦醇诱导U251细胞增殖抑制和凋亡与抑制Wnt/β-actin/p53信号通路激活相关。     

厚朴酚调控人小细胞肺癌H446细胞凋亡的机制研究

目的:探讨厚朴酚对人小细胞肺癌H446细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养人小细胞肺癌H446细胞,经不同浓度和不同时间的厚朴酚作用后,应用MTT法检测厚朴酚对H446细胞增殖的影响;采用流式细胞仪罗丹明123染色法检测线粒体膜电位的改变;蛋白印迹方法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:厚朴酚可呈时间剂量依赖性抑制H446细胞增殖,诱导线粒体膜电位的下降,免疫印迹结果显示Bcl-2的表达降低,Bax、Cyto.c和活化pro-caspase 9的表达增加。结论:厚朴酚可显著抑制H446细胞增殖,介导线粒体途径的细胞凋亡。     

土荆皮酸诱导卵巢癌细胞系SKOV3凋亡的实验研究

目的:研究土荆皮酸(PAB)对体外培养的SKOV3细胞的生物学效应和作用机制。方法:用MTT法、流式细胞术、电镜检测体外培养的SKOV3细胞在PAB作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测P53/Bcl-2/Bax的表达水平。结果:①PAB对SKOV3细胞的增殖抑制作用随浓度升高而明显增强,其IC50约10μmol/L。②流式细胞术证实PAB呈浓度依赖性改变细胞周期分布,一方面降低G0/G1期的细胞比例,另一方面增高G2/M期细胞的比例。③RT-PCR法显示SKOV3细胞在10μmol/LPAB作用12、24、48h均显示Bax上调和Bcl-2的下调,P53则未检测到表达。结论:在体外PAB能抑制SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与Bax的上调和Bc1-2的下调相关。     

芹菜素对U937细胞增殖凋亡及SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨芹菜素对人U937细胞株增殖和凋亡,以及对该细胞株SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因c-Myc和CCND1表达的影响。方法以不同浓度芹菜素处理对数生长期的U937细胞,倒置显微镜观察细胞形态;CCK-8法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;实时荧光定量PCR检测SALL4、c-Myc、和CCND1 mRNA表达水平;Western blot检测SALL4、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组相比,芹菜素处理组细胞碎片增多;细胞增殖受抑制,呈时间和剂量依赖性(P0.05);G2/M期细胞比例增加(P0.05);凋亡率增加(P0.05)。芹菜素处理36 h后,U937细胞的SALL4、c-Myc、和CCND1 mRNA表达下调,SALL4和Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论芹菜素对U937细胞有抑制增殖诱导凋亡的作用,其机制可能与下调SALL4和Bcl-2,活化Caspase-3,阻断Wnt/β-catenin信号通路有关。     

人参皂苷Rd抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖机制研究

目的:体外研究人参皂苷Rd(GS-Rd)抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖机制。方法:采用MTT法检测GS-Rd对U251细胞增殖情况的影响;采用流式细胞仪观察GS-Rd对U251细胞周期及凋亡影响;通过实时荧光定量PCR检测GS-Rd对U251细胞相关凋亡基因表达的影响。结果:1)GS-Rd在浓度为20~80μmol/L范围内对U251细胞均有一定的抑制作用,并且抑制强度随药物浓度的增加而增大,呈剂量依赖性;2)GS-Rd各剂量组均可诱导U251细胞凋亡。细胞周期分析显示随着给药浓度增加,越多的U251细胞被阻滞在G1/G0期,使进入S和G2/M期的细胞减少;3)与空白对照组相比,GS-Rd各剂量组Bcl-2 mRNA表达显著降低(P0.05),同时Caspase-3 mRNA表达显著提高(P0.05)。结论:人参皂苷Rd能抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,同时能诱导细胞凋亡,其抑瘤机制可能与下调Bcl-2 mRNA表达和上调Caspase-3 mRNA表达有关。     

两种卷柏属植物对人单核细胞白血病U937细胞的增殖和凋亡影响

目的:研究垫状卷柏、翠云草两种卷柏属植物对体外培养的人单核细胞白血病细胞U937细胞的增殖和凋亡的影响。方法:分别采用95%乙醇对两种植物采用冷浸和热提取两种提取方法,回收溶剂后萃取得乙酸乙酯和石油醚萃取物。采用噻唑兰比色法(MTT)检测不同浓度样品作用于U937细胞24h后的细胞增殖情况,Hoechst33342染色分析细胞形态学变化,Western Bolt检测凋亡蛋白表达情况。结果:MTT法分析表明垫状卷柏、翠云草提取物均对U937细胞的增殖抑制成剂量依赖性关系。其中垫状卷柏热提物效果最佳,其乙酸乙酯和石油醚萃取物均有良好抑制效果,乙酸乙酯萃取部位抑制作用更强; Hoechst33342染色发现随着提取物浓度升高,凋亡细胞增多; Western印记分析凋亡相关蛋白,其中Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量减少,Caspase-3和Caspase-8蛋白表达量减少。结论:两种卷柏均能有效抑制U937细胞增殖,并且热提总提物抑制效果优于冷浸总提物,其中垫状卷柏热提总提物的乙酸乙酯萃取层初步认为可能是垫状卷柏抗肿瘤的有效部位,其诱导U937细胞凋亡与Caspase依赖性线粒体途径相关。