实验动物皮肤病原真菌核酸鉴定方法的建立

目的选择一种快速、敏感和特异的方法来检测实验动物皮肤病原真菌.方法选取真菌CHS1基因中一段序列设计皮肤真菌通用引物和选取一种随机引物FM1,利用聚合酶链反应（PCR）扩增三种动物皮肤病原真菌标准株：须毛癣菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌.结果两种引物扩增产物片段大小在三种真菌之间有明显不同.结论本实验方法可快速特异性检测实验动物皮肤病原真菌.     

用cox1基因片段的PCR鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫

目的：用cox1基因片段的PCR技术对亚洲带绦虫和牛带绦虫的快速鉴别。方法：用亚洲带绦虫和牛带绦虫线粒体cox1基因片段的特异性引物以及带绦虫cox1基因片段的通用引物,对贵州省都匀地区和从江地区的带绦虫虫卵和节片DNA进行常规PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测和核酸序列测定,并用NC-BI Blast对扩增产物的核酸序列与NCBI数据库中带绦虫的cox1基因进行比对。结果：5株都匀带绦虫DNA样品经亚洲带绦虫cox1基因片段的特异性引物PCR,均扩增出约260 bp的产物,PCR产物的核酸序列与NCBI数据库中亚洲带绦虫线粒体cox1基因片段的同源性为100%;2株从江带绦虫的DNA样品用亚洲带绦虫特异性引物和牛带绦虫特异性引物的PCR均未见扩增产物,而通用引物PCR则扩增出约1 000 bp的产物,核酸序列与NCBI数据库中牛带绦虫线粒体cox1基因片段的同源性为99%,在牛带绦虫特异性引物的结合位点存在一个碱基差异。结论：常规PCR扩增特异性的cox1基因片段可快速鉴定亚洲带绦虫;从江牛带绦虫株的cox1基因特异性片段部分存在变异,导致与特异性引物结合能力的差异,可采用cox1基因通用引物PCR结合测序进行鉴定。     

用RAPD技术分析出血性大肠杆菌O157∶H7

目的应用RAPD技术分析肠出血性大肠杆菌O157∶H7 DNA多态性并对其分型.方法用两条10bp的随机引物对3株肠出血性大肠杆菌O157∶H7和3株其它病原性大肠艾希氏菌进行扩增,扩增产物经凝胶电泳后得到指纹图.结果共得到12个不同的DNA指纹图谱,经统计软件SPSS系统聚类分析得到两个不同的分类树状图.结论 RAPD技术方法简便、快速、分辨力高,在肠出血性大肠杆菌O157:H7分子流行病学研究中有较大的应用前景.     

用RAPD技术分析出血性大肠杆菌O157：H7

目的 应用RAPD技术分析肠出血性大肠杆菌O157：H7 DNA多态性并对其分型。方法 用两条10bp的随机引物对3株肠出血性大肠杆菌O157：H7和3株其它病原性大肠艾希氏菌进行扩增，扩增产物经凝胶电泳后得到指纹图。结果 共得到12个不同的DNA指纹图谱，经统计软件SPSS系统聚类分析得到两个不同的分类树状图。结论 RAPD技术方法简便、快速、分辨力高，在肠出血性大肠杆菌O157：H7分子流行病学研究中有较大的应用前景。     

弓形虫不同分离株α-Tubulin和β-Tubulin基因PCR-RFLP分析及其探针制备

目的 不同分离株弓形虫α-Tubulin和β-Tubulin基因的PCR-RFLP分析及其杂交探针制备。方法 PCR体外扩增α-Tubulin和β-Tubulin基因片段并进行RFLP分析；采用随机引物法用地高辛(DIG-11-dUTP)标记探针并同基因组DNA进行Southern杂交分析。结果 从5株弓形虫分离株的基因组DNA中均扩增出α-Tubdin基因的818bp片段和β-Tubulin基因的959bp片段，RFLP分析弓形虫各分离株问酶切图谱未见差异。探针的特异性和敏感性较好。结论 α-Tubulin和β-Tubulin基因在弓形虫中高度保守；α-Tubulin和β-Tubulin基因杂交探针可用于Southern杂交。     

运用限制性长度多态性和单链构象多态性技术鉴别大肠杆菌血清型

目的　扩增大肠杆菌GroEL基因并通过限制性长度多态性 (RFLP)和单链构象多态性 (SSCP)分析 ,探讨进行大肠杆菌血清型鉴定的可行性。方法　选择大肠杆菌GroEL基因作为鉴别的靶基因 ,通过设计合适的通用引物进行PCR扩增 ,并对 5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCP分析。结果　运用通用引物可以扩增出 5种不同血清型大肠杆菌的GroEL基因 ,PstI酶切产物的RFLP分析表明 ,不同血清型大肠杆菌表现出不同的RFLP图谱 ,SSCP分析表明 ,图谱变异性更大 ,有利于进行血清型鉴别甚至株间的鉴别。结论　运用PCR RFLP和PCR SSCP可以进行不同血清型大肠杆菌的鉴定诊断     

常见食源性感染致病菌属、种用PCR-RFLP及PCR-SSCP技术鉴定探讨

[目的]探讨运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性.[方法]选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因,通过设计合适的通用引物进行PCR扩增,并对13属食源性感染常见致病菌和5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCP分析.[结果]运用通用引物可以扩增出13属食源性感染常见致病菌的23S rDNA基因HpaⅡ酶切产物的RFLP分析表明,不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱,利于进行细菌属的鉴定.不同种属食源性感染常见致病菌SSCP图谱变异性更大,不利于进行种属间鉴别.对5种不同血清型大肠杆菌的23S rDNA基因扩增产物的RFLP和SSCP分析表明,不同血清型大肠杆菌表现出相似的RFLP图谱,SSCP图谱的变异性较大,这有利于进行血清型间鉴别甚至株间的鉴别.[结论]PCR-RFLP和PCR-SSCP具有应用于食源性感染常见致病菌种、属鉴别诊断的潜力.     

常见食源性感染致病菌属、种用PCR-RFLP及PCR-SSCP技术鉴定探讨

[目的]探讨运用聚合酶链反应．限制性片段长度多态性分析(IZCR-RFLP)和聚合酶链反应一单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性。[方法]选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因，通过设计合适的通用引物进行PCR扩增，并对13属食源性感染常见致病菌和5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCF，分析。[结果]运用通用引物可以扩增出13属食源性感染常见致病菌的23S rDNA基因Hpa Ⅱ酶切产物的RFLP分析表明，不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱，利于进行细菌属的鉴定。不同种属食源性感染常见致病菌SSCF，图谱变异性更大，不利于进行种属间鉴别。对5种不同血清型大肠杆菌的23S rDNA基因扩增产物的RFLP和SSCP分析表明，不同血清型大肠杆菌表现出相似的RFLP图谱，SSCP图谱的变异性较大，这有利于进行血清型间鉴别甚至株间的鉴别。[结论]PCR-RFLP和PCR-SSCP具有应用于食源性感染常见致病菌种、属鉴别诊断的潜力。     

用PCR扩增16SrRNA基因鉴定甲型副伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株

目的: 探讨甲型副伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株的检测与鉴定方法.方法:提取甲型副伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株及其亲代细菌型的染色体DNA,根据甲型副伤寒沙门菌的16SrRNA基因保守序列设计引物,进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳与分析.结果:甲型副伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株16SrRNA基因的PCR扩增产物16SrDNA,在230 bp处出现与其亲代细菌型一致的DNA条带和图谱.结论:甲型副伤寒沙门菌的细胞壁缺陷突变株虽然丧失了常规细菌学方法可检测的绝大多数表型特征,但采用聚合酶链反应方法检测该序列,有利于检测和鉴定不能自发返祖的细胞壁缺陷甲型副伤寒沙门菌.     

应用rDNA ITS测序检测海南岛条件致病性真菌

目的:应用内转录间隔区(ITS)引物建立一种较为敏感、特异检测和鉴定条件致病性真菌的方法,为进一步鉴定不同真菌的种、型的亲缘关系提供分子生物学依据。方法:用常规的真菌检验方法对76份口腔标本做初步鉴定,采用通用引物ITS1、ITS4对可疑真菌菌悬液进行PCR扩增,PCR扩增产物纯化、DNA测序,做序列比对分析。结果:ITS-PCR扩增出种特异的DNA条带,检测菌株76株,DNA测序鉴定出白假丝酵母菌53株(69.7%),其他真菌23株(30.3%)。结论:采用ITS引物测序法,可准确地检测出不同种的条件致病性真菌,并为进一步鉴定菌株的变异性,发现亚种提供基础。     

疏肝、健脾、补肾复方对慢性束缚应激大鼠行为学和免疫功能的影响

目的　研究慢性束缚应激时大鼠行为学和免疫功能的变化以及疏肝、健脾、补肾三种中药复方对其影响。方法　用特制束缚架连续束缚 2 1d(或 7d) ,每天 3h的方法制作大鼠束缚应激模型 ,观察大鼠行为学和免疫功能的变化。结果　慢性束缚应激后 ,大鼠的行为学发生了明显的变化 ,血清IL - 1β 上升 ,IL - 2和IL - 6下降 ,并且随着束缚时间的延长变化越明显。结论　逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸能改善大鼠行为学的变化 ,明显增强慢性束缚应激大鼠的免疫功能。     

BALB/c突变无毛小鼠特异性免疫功能的研究

选用9条随机引物，对Wistar,WKY,F344三个品系的近交系大鼠进行了随机扩增多态性DNA（RAPD）分析。结果显示同一品系大鼠不同个体之间的RAPD图谱都相同，表明所测的三个品系大鼠内部遗传背景均一，在不同品系大鼠之间的RAPD结果有差异。Wistar与WKY之间，Wistar与F344之间，WKY与F344之间的共享度分别为87.9%,98.5%和89.2%。RAPD方法可以作为一种检测近交系大鼠种群内的遗传变异及区分不同品系近交系鼠的遗传检测方法。     

红曲菌株的RAPD多态性分析

[目的]研究红曲分离株的遗传多样性和亲缘关系,为种质鉴定、保护和利用提供参考。[方法]用随机引物对10个红曲菌株进行RAPD分析,从中筛选出63特征性好,多态性高的RAPD图谱,用NTSYS-PC-2.1软件进行同一性和差异性分析并根据遗传距离构建系统进化树。[结果]红曲分离株间的同一性平均73.32%,表明它们的遗传背景具有很大的相似性;RAPD聚类结果与菌株的形态差异相关,表明RAPD分子标记进行菌株鉴别与传统形态分类鉴别结果基本一致,鉴别能力较强。[结论]基于RAPD多态性的遗传分析能从分子水平上揭示红曲菌的遗传背景差异,为分类鉴定、种质起源和系统进化提供辅助手段和技术依据。     

长爪沙鼠与实验大小鼠RAPD图谱比较研究

目的比较长爪沙鼠与实验大、小鼠的RAPD图谱，为实验室日常鉴别动物品种品系提供一种分子生物学方法。方法提取基因组DNA（封闭群沙鼠、近交系小鼠BALB／c和C57BL／6、封闭群小鼠KM、近交系大鼠F344和BN以及封闭群大鼠SD），用6条随机引物对其进行PCR扩增。结果在6条随机引物中，p1、p2、p3、p4和p6这5条引物扩增的条带差异较为明显，表现为不同的RAPD图谱。结论RAPD方法可用于鉴定长爪沙鼠与实验大小鼠的差异。     

幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性和基因型的同一性

目的 明确克拉霉素耐药的幽门螺杆菌(Hp)菌株耐药性和基因型的混合感染情况.方法 从16株对克拉霉素耐药的Hp混合菌落菌株中各随机挑选10个单菌落,转代扩菌后,用琼脂稀释法测定单菌落对克拉霉素的最低抑菌浓度(MIC),CTAB/NaCl方法提取单菌落的DNA,用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)检测其点突变,随机扩增的多态性DNA(RAPD)方法比较各菌落的基因型.结果 来自16个耐药Hp菌株的共160个单菌落均对克拉霉素耐药,且都存在23 S rRNA基因的点突变.来自同一患者的克拉霉素耐药菌株的10个单菌落具有相同的RAPD指纹图谱,与亲代混合菌落菌株也有相同的RAPD指纹图谱.结论 克拉霉素耐药的Hp菌株中未发现耐药性或基因型的混合感染存在.     

应用RAPD方法对近交系小鼠进行遗传检测的研究

目的　为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法　用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果　 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。结论　RAPD方法是一种有效的近交系小鼠遗传检测手段     

对5个S180克隆细胞株RAPD特征的研究

目的运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术建立S180的5个克隆细胞株的特异性图谱。方法运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S1B115个克隆细胞株的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果。结果筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物。结论5个S180克隆细胞株的RAPD特征有明显区别。     

应用RAPD引物区分小鼠品系

目的 用随机扩增多态DNA（Random amplidfed polymorphic DNA,RAPD）方法区分10个常用小鼠品系。方法 从120条随机引物中筛选出稳定性、重复性好的4条多态性引物对10个常用小鼠品系进行RAPD扩增。扩增产物在含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶中电泳,紫外透射仪上观察照相。结果 仅用这4条引物就可将10个品系小鼠完全区分开来,其中包括遗传背景或外观形态很相似的品系,如BALB／c与BALB／c-nu、KM与BALB／c也能区分出来。结论 筛选出的4条引物对实际工作具有指导意义,适用于小鼠常规遗传监测。     

ICU多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性和同源性分析

目的通过对重症监护病房（ICU）的多重耐药鲍曼不动杆菌进行同源性分析,进行院内感染的基线调查,并分析其耐药谱特征,为临床防治和控制院内感染提供依据。方法测定17种抗菌药物对62株鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度（MIC）,并采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术分析其耐药株的同源性。结果有16株鲍曼不动杆菌对头孢菌素类、氨基甙类和氟喹若酮类等抗菌素均显示出较高水平的多重耐药性;其中4株RAPD分型显示有高度同源性。结论分离自ICU的鲍曼不动杆菌多重耐药率高达21％,且大多数菌株有高度同源性。因此建立全面的药敏谱和RAPD基因分型体系,加强鲍曼不动杆菌耐药监测,为及时找到感染源头、有效控制医院感染提供依据。     

应用40条引物进行不同品系小鼠RAPD遗传检测的初步研究

目的：探讨运用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ对小鼠进行遗传检测的可能性,筛选在各品系小鼠间具有多态性的引物。方法：运用４０条引物对ＴＡ１、ＢＡＬＢ／ｃ、ＮＩＨ、ＳＣＩＤ、Ｔ７３９、ＤＢＡ／２、６１５、ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ等９个品系小鼠的ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,以琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果：４０条引物中只筛选出２条多态性引物,其它３８条引物扩增结果无品系间多态性。结论：ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法可以区分９