铁棒锤种子蛋白质提取及聚丙烯酰胺凝胶电泳研究

目的构建适合铁棒锤种子蛋白质研究的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)体系,为铁棒锤种子纯度检测及鉴别研究提供技术支撑。方法采用6种蛋白质提取法提取伏毛铁棒锤种子蛋白质,并筛选出最佳提取方法,在此基础上研究不同分离胶浓度、料液比、上样量对伏毛铁棒锤种子蛋白电泳分离效果的影响,并采用筛选出的蛋白质最佳提取分离方法对铁棒锤和伏毛铁棒锤种子进行鉴定。结果巯基乙醇法提取的伏毛铁棒锤种子蛋白质电泳图谱效果较佳,电泳谱带数最多(14条)、最清晰,适合于其种子纯度检测;分离胶浓度为15%、料液比为1∶10(M/V)、蛋白上样量稀释5倍时,其种子蛋白质电泳分离效果较好;铁棒锤和伏毛铁棒锤种子蛋白质电泳图谱在蛋白质谱带位置和强弱上有一定差异。结论本研究建立的铁棒锤种子蛋白样品制备方法及SDS-PAGE技术可用于铁棒锤种子纯度检测,其蛋白质图谱可作为铁棒锤与伏毛铁棒锤种子的鉴别依据。     

北细辛叶柄愈伤组织的增殖培养及器官分化研究

目的研究北细辛Asarum heterotropoides叶柄愈伤组织增殖培养、再生芽分化及不定根诱导的最适条件,建立高效的愈伤组织培养和再生体系。方法以北细辛幼嫩叶柄诱导出愈伤组织,于含不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)的增殖培养基中扩大培养,选取嫩绿致密的愈伤组织接种在不同激素浓度配比的分化培养基上诱导再生芽及不定根,经驯化后移栽。结果愈伤组织增殖较适培养基为1/2 MS+0.40 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA,在含0.40 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA的1/2 MS培养基中再生芽分化率最高,无激素添加的1/2 MS培养基适于壮苗培养,不定根诱导最适培养基为1/4 MS+0.25 mg/L IBA。结论确定北细辛愈伤组织增殖及分化的最适培养基及激素水平,建立了完善的北细辛再生体系,成功获得再生植株。     

铁棒锤快速繁殖体系的建立

目的建立铁棒锤高效快速繁殖体系。方法以铁棒锤越冬芽为外植体,用不同的培养基、激素和附加物组合培养。结果培养基MS+2,4-D 2.0 mg/L+NAA0.4 mg/L+活性炭(AC)1.5 g/L+聚乙烯吡咯烷酮(PVP)1 g/L有利愈伤组织的形成;培养基MS+6-BA2.5 mg/L+NAA0.2 mg/L+AC 1.5 g/L+PVP 1 g/L有利于成芽;培养基MS+6-BA3.5 mg/L+NAA0.1 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L+AC 1.5 g/L+PVP 1 g/L有利芽增殖;培养基1/2 MS+NAA 0.2 mg/L+AC 1.5 g/L+PVP 1.0 g/L有利于根的生成。结论以种子发芽苗为外植体进行离体培养,可以实现铁棒锤种苗的工业化快速繁殖。     

三七不定根的离体诱导与培养

目的:探讨三七不定根的诱导与体外培养方法。方法:通过从大田栽培三七外植体、再生苗外植体和愈伤组织诱导3种途径获得不定根,考察2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、吲哚-3-丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)等植物生长物质对不定根诱导的影响,比较4种不定根与其母体分离方式对其体外液体培养的影响。结果:3种方法均获得不定根,幼嫩花蕾愈伤组织是诱导不定根的理想材料;IBA诱导不定根的能力最强;采用将不定根连其母体组织一起在液体培养系统中连续培养后再分离的方法建立了液体培养体系。结论:成功诱导三七不定根并建立了液体培养体系。     

基于UV法优化铁棒锤种子生物碱提取工艺测定总碱含量

目的建立铁棒锤种子中生物碱的最佳提取方法,为铁棒锤种子生物碱的有效利用提供科学依据。方法采用生物碱显色反应、薄层色谱法对铁棒锤种子生物碱类成分进行定性鉴别;采用正交实验设计,运用紫外分光光度法进行定量分析。结果总生物碱的最佳提取工艺条件:提取时间30 min,乙醇浓度60%,料液比1:20。铁棒锤种子总生物碱含量为0.19%。结论方法简便,超声提取法提取率高,有可利用价值,可为铁棒锤种子化学成分进一步研究提供科学依据。     

不同种子处理方法对铁棒锤育苗质量的影响

目的研究不同种子处理方法对铁棒锤育苗质量的影响。方法对铁棒锤种子进行去皮、赤霉素(GA3)处理,测定不同种子处理方法对铁棒锤出苗数及苗栽质量的影响。结果搓去种皮或100 mg/L GA3处理14 h均有利于提高铁棒锤田间出苗数及苗栽质量,而以先去皮再经100 mg/L GA3处理14 h效果最好。结论本研究初步形成了铁棒锤大田育苗的技术方法。     

党参丛生芽诱导及不定根培养体系研究

目的:建立及优化党参丛生芽及不定根培养体系。方法:以山西壶关党参组培苗为实验材料,以MS为基础培养基,研究6-BA对党参丛生芽及NAA对党参不定根诱导的影响,探索党参丛生芽及不定根生长的最佳条件。结果:在固体MS培养基中6-BA浓度为0.3 mg/L时丛生芽诱导率最高,为90%,但丛生芽矮化现象严重;6-BA浓度为0.5 mg/L时,诱导率虽较低仅为62.5%,但丛生芽粗壮,生长良好;液体1/2 MS培养基中NAA浓度为0.5mg/L时,不定根生物量显著增加;采用液体培养基进行不定根继代培养,培养周期为24 d,较固体培养基的培养周期(49 d)缩短了1/2。结论:建立了党参丛生芽及不定根快繁体系,为党参的良种繁育及生物活性物质合成、分子调控机理研究奠定基础。     

当归不定根的诱导研究

目的：建立不定根诱导技术体系,为当归不定根的大规模生产奠定基础。方法：以当归种子无菌发芽小苗和休眠芽为试验材料,研究培养基种类、有机物组分及激素组合对当归不定根诱导和生长的影响。结果：最佳的不定根诱导外植体是休眠芽叶片、胚轴和根;不同VB1和VB6浓度比例对当归不定根生长的影响显著,其中VB11.0 mg·L^-1和VB60.5 mg·L^-1组合诱导效果最佳,适当提高VB1浓度可以促进当归不定根的诱导;IBA 0.5 mg·L^-1＋IAA 2.0 mg·L^-1激素组合适宜于不定根诱导。结论：建立了当归不定根诱导的技术体系。     

雷公藤不定根培养体系的建立及中试放大研究

以MS为基本培养基,进行雷公藤不定根的诱导研究时发现,不论是以雷公藤幼叶还是以幼叶诱导的愈伤组织为外植体,在添加1.0 mg·L^-1 IBA的培养基上均可以诱导出不定根并建立良好的不定根培养体系;以雷公藤愈伤组织建立的悬浮细胞在添加2.0~4.0 mg·L^-1 NAA时,也可以形成不定根并建立稳定的不定根培养体系,雷公藤不定根的3个培养体系中雷公藤甲素含量均超过自然生长的根皮中的含量,其中AR3不定根中雷公藤甲素含量最高,为根皮的5.3倍。在使用5 L发酵罐进行中试放大培养时,与250 mL摇瓶培养相比,每升培养基不定根增长量、次生代谢产物含量差异不大,这为通过组织培养生产雷公藤次生代谢产物奠定了基础。     

铁棒锤毒性研究及炮制方法

铁棒锤是我国一种传统中草药,具有多种生理活性,临床有广泛应用,但同时也是毒性药材之一.目前对铁棒锤的毒性及炮制方法研究尚不完善,难以对其质量及安全性进行控制.对铁棒锤的炮制、毒性、化学成分、药理活性、临床应用方面进行详细论述,以进一步完善对铁棒锤毒性及炮制方法的研究.     

铁棒锤质量标准研究

目的对不同产地、批次的铁棒锤药材进行分析,建立其质量标准。方法鉴别铁棒锤的植物形态、药材性状、显微特征;采用TLC法进行定性鉴别;HPLC测定苯甲酰乌头碱、8-乙氧基乌头碱的含有量。结果对铁棒锤药材的植物形态、药材性状、显微特征进行了描述;建立了铁棒锤的TLC鉴别方法,斑点清晰,分离度好,具有较好的专属性;14批铁棒锤样品中,苯甲酰乌头碱、8-乙氧基乌头碱分别在0.068~0.854、0.026~0.321 mg/m L范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.05%、98.76%,RSD(n=6)分别为0.38%、2.41%。结论该方法准确、简便、灵敏度高、无干扰而且重现好,适用于铁棒锤药材的质量评价。     

当归不定根的诱导研究

目的：建立不定根诱导技术体系,为当归不定根的大规模生产奠定基础。方法：以当归种子无菌发芽小苗和休眠芽为试验材料,研究培养基种类、有机物组分及激素组合对当归不定根诱导和生长的影响。结果：最佳的不定根诱导外植体是休眠芽叶片、胚轴和根;不同VB1和VB6浓度比例对当归不定根生长的影响显著,其中VB1 10 mg·L-1和VB6 05 mg·L-1组合诱导效果最佳,适当提高VB1浓度可以促进当归不定根的诱导;IBA 05 mg·L-1+IAA 20 mg·L-1激素组合适宜于不定根诱导。结论：建立了当归不定根诱导的技术体系。     

铁棒锤止痛涂膜的体外透皮吸收试验

目的:制备铁棒锤止痛(乌头碱)涂膜,考察透皮吸收促进剂氮酮对铁棒锤止痛涂膜中生物碱的促透作用,找到最佳促透浓度。方法:利用自制改良Franz扩散池,小鼠皮,分别用0.05%,10%,1.5%,20%的水溶性氮酮对铁棒锤生物碱进行体外透试验。结果:水溶性氮酮能增加铁棒锤生物碱的透皮吸收,水溶性氮酮最佳促透浓度为1.5%。结论:水溶性氮酮在铁棒锤止痛涂膜中对铁棒锤生物碱最佳促透浓度为1.5%。     

分子识别法提取中药伏毛铁棒锤有效成分实验研究

目的:探讨CD分子识别用于提取分离中药伏毛铁棒锤有效成分的技术方法。方法:以紫外分光光度法测定伏毛铁棒锤与CD的包合常数,预测包合可能性;分子识别提取分离伏毛铁棒锤有效成分;UV验证包合物;HPLC分析包合前后伏毛铁棒锤化学成分变化;醋酸致小鼠扭体试验筛选包合物镇痛活性。结果:UV图谱确证了伏毛铁棒锤-β-CD包合物的形成;包合物组分简单,活性成分含量显著提高;该包合物有良好的镇痛作用。结论:分子识别法用于中药伏毛铁棒锤提取分离技术可行,效果显著。     

基于药材表征和色谱技术对铁棒锤药材质量标准提升的相关研究

目的：建立铁棒锤药材表征特性和其有效成分的色谱检测方法,为铁棒锤质量标准提升提供参考。方法：运用中药鉴别手段对野生和栽培铁棒锤性状形态表征、显微特征、薄层色谱进行定性鉴别;采用紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法对其总乌头碱及乌头碱含量进行定量分析。结果：在外观形态上铁棒锤野生品比栽培品个体明显偏小,块根干瘪,而显微鉴别上两者差异较小;薄层色谱中,斑点清晰,分离度好,可用于快速鉴别;紫外分光光度法其总生物碱以乌头碱计在0.012~0.072 mg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系。高效液相色谱法在0.025~0.500 mg·mL-1与峰面积呈良好线性关系。不同批次铁棒锤中乌头碱与总乌头碱含量差异较大,野生品中的总乌头碱高于栽培品;子根中的乌头碱高于块根。结论：为确保临床用药安全,在铁棒锤入药时应区分野生品与栽培品、子根与块根。应综合考量药材各因素与品质之间的关系,建立多种有效且科学的质量评价方法。为其在质量评价中的进一步应用提供参考。     

金铁锁不定根培养研究

目的:比较不同的培养基与碳源、激素及浓度对金铁锁不定根增殖的影响,建立金铁锁不定根快速增殖体系。方法:以培养的金铁锁不定根组织块为材料,分别接种在不同的培养基中,待40 d时,对其不定根的生长及生物量的积累进行测定与分析,从而筛选金铁锁不定根较优的离体培养条件。结果:金铁锁不定根在MS培养基中生长较好且生物量增长最多;在MS+1.0 mg/L IBA、MS+1.0 mg/L KT和MS+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L KT的3种培养基中培养金铁锁不定根,其效果较优。在MS基本培养基中加入30 g/L白砂糖,金铁锁不定根生物量的积累较为理想,而加入葡萄糖的MS培养基不利于金铁锁不定根的生长。结论:试验所得不定根培养技术条件,可在短期内获得大量金铁锁不定根,可为其工厂化生产提供理论依据及实践指导。     

栽培方法对铁棒锤药材产量的影响

目的:研究不同栽培技术对铁棒锤药材产量的影响。方法:对铁棒锤进行种植密度、种苗大小、打顶等不同栽培技术处理,测定不同处理对药材产量的影响。结果:种植密度、种苗大小等对铁棒锤药材产量均有明显影响,株行距为10 cm(30 cm时药材产量最高,种苗单根重≥8. 0 g时药材产量最高,种苗冬栽及打顶处理能提高药材产量。结论:初步形成了铁棒锤规范化栽培技术。     

铁棒锤β-环糊精包合物抗炎镇痛的实验研究

目的：对铁棒锤环糊精包合物进行抗炎、镇痛的初步药效学研究。方法：用β-CD包合铁棒锤,采用小鼠醋酸扭体及二甲苯致耳廓肿胀的动物实验方法。结果：铁棒锤包合物（1∶2）组能够减少小鼠扭体次数,包合物（1∶1）组能显著减轻二甲苯所致小耳廓肿胀程度,且实验过程中未出现小鼠中毒。结论：铁棒锤包合物具有抗炎镇痛作用且毒性较小。     

栽培与野生藏药铁棒锤中活性成分乌头碱的HPLC分析

目的:对3个不同产地栽培与野生铁棒锤中乌头碱活性成分进行分析,对其做出客观评价.方法:采用高效液相色谱法(HPLC),使用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相乙腈-0.2%二乙胺水溶液(35:65);柱温30℃;流速0.8mL·min-1;检测波长240nm结果:乌头碱在0.39～1.95μg与峰面积有良好的线性关系,平均回收率为98.35%,RSD1.5%(n=6);甘肃产铁棒锤药材中乌头碱的质量分数为0.3244%;宁夏产铁棒锤药材中乌头碱为0.2144%;青海产铁棒锤药材中乌头碱为0.1397%.结论:3个不同产地铁棒锤中乌头碱含量差异较大,甘肃栽培铁棒锤中乌头碱含量最高,宁夏野生铁棒锤次之,青海野生铁棒锤含量较低.     

回药铁棒锤涂膜剂的制备工艺优化

目的：考察铁棒锤涂膜剂的制备工艺。方法：采用正交试验法对铁棒锤涂膜剂的制备工艺进行优选。结果：铁棒锤涂膜刑最佳制备工艺为：pH7、卡波姆0．2、PVA8。结论：该试验设计合理,制备工艺可靠。