槲皮素对人肝癌高转移细胞生长及侵袭能力的影响

目的 探讨槲皮素对肝癌高转移细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 以人高转移肝细胞癌细胞系HCCLM6为研究对象,倒置显微镜观察槲皮素对肝癌细胞HCCLM6细胞形态的影响,MTT法检测槲皮素对细胞增殖的影响,Transwell小室侵袭实验检测槲皮素对肝癌细胞侵袭能力的影响.结果 倒置显微镜下槲皮素组细胞密度降低,悬浮细胞增多;槲皮素组较对照组HCCLM6细胞存活率减低;槲皮素能抑制肝癌细胞在Transwell小室中的侵袭作用.结论 槲皮素能抑制肝癌高转移细胞HCCLM6的增殖和侵袭能力.     

黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响

目的探讨黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响及其机制.方法应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞,不同浓度黄芩甙处理肝癌细胞,通过Boyden小室模型测定其侵袭力、粘附力,细胞迁移实验测定细胞运动能力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞MMP2、TIMP2、integrin β1、E-cd表达的改变.结果黄芩甙能明显抑制肝癌细胞侵袭力、粘附力及运动能力(P＜0.05),随浓度提高作用增强.形态学观察发现,黄芩甙处理组细胞形态较圆,伪足数目较少.黄芩甙处理组MMP2阳性表达细胞减少,TIMP2阳性表达细胞增多,MMP2/TIMP2比值下降;integrin β1表达增加,E-cd的表达则减低(P＜0.05).结论黄芩甙能抑制肝癌BEL-7402细胞侵袭与转移,其机制可能与直接抑制细胞迁移运动,抑制细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2表达,促进TIMP2表达及抑制粘附分子E-cd的表达,促进integrin β1表达有关.     

人肝癌淋巴结高转移特性细胞株的建立

目的　从肝癌细系 HCC- 972 4(简称 H )中分离出淋巴结转移性克隆 HCC- 972 4- P(简称 P) ,比较两者异同 ,以揭示肿瘤转移的机制 .方法　采用裸鼠肝脏移植法 ,将 H原位接种于裸鼠肝脏 ,5 0 d时 ,肝内长出约 1.7cm× 0 .6 cm大小的肿瘤呈分叶状 ,质地较软 ,周围血供丰富 ,瘤组织与邻近脏器粘连 ,有明显的浸润和转移 ,取其淋巴结转移灶反复接种连续 3代 ,经体外培养后 ,克隆筛选得到淋巴结转移细胞株 P.结果　 P与 H相比 ,前者细胞周期短 ,在软琼脂内克隆形成率高 (P<0 .0 1) ,原位肝移植时 ,潜伏期短 ,瘤体大 ,形成广泛的肠系膜淋巴结转移 (P<0 .0 5 ) .结论　采用裸鼠肝原位移植法 ,经体外培养 ,克隆筛选 ,获得的 P克隆是淋巴结高转移性细胞株 .     

槲皮素对裸鼠肝癌切除术后肿瘤复发的影响及机制

目的 体内实验研究槲皮素能否抑制裸鼠肝癌切除术后的肿瘤复发, 探讨其可能的分子机制.方法建立模拟人肝癌切除术后肿瘤高复发的裸鼠模型, 实验组裸鼠槲皮素75 mg/ (kg·d) 灌胃, 观察各组裸鼠复发情况, Western-blot检测其P65、MMP-2、E-Cadherin蛋白的表达.结果 槲皮素组校对照组肝内复发肿瘤体积减小[ (25.49±9.78) mm3vs (49.75±7.53) mm3, P<0.05], 复发灶数目减少[ (1.00±0.71) vs (2.20±0.84) , P<0.05].采用Western blot检测蛋白表达, 槲皮素组校对照组E-Cadherin表达增高[ (136.24±3.03) vs (144.70±5.02) , P<0.05], MMP-2蛋白表达下降[ (169.21±5.32) vs (158.17±4.80) , P<0.05], P65蛋白表达降低[ (170.07±6.61) vs (156.26±8.60) , P<0.05].结论 槲皮素能够抑制裸鼠肝癌术后肿瘤的复发, 其机制可能与槲皮素上调E-Cadherin的表达, 下调P65蛋白和MMP-2有关.     

MTT方法测定高转移肿瘤细胞的体外粘附活性

目的：探讨高转移性人肺巨细胞癌ＰＧ细胞系体外粘附实验筛选抗肿瘤转移活性肽的基本条件。方法：ＭＴＴ微量酶反应比色法。结果：５μｇ／ｗｅｌｌ基底膜成分与ＰＧ细胞共育１小时的细胞粘附率已接近峰值。结论：１００μｇ／ｍｌ的ＲＧＤ、ＹＩＧＳＲ肽与细胞作用４８小时可对抗ＰＧ细胞对基底膜成分的粘附作用。     

高转移人肝癌细胞系转移相关因子的表达活性

目的 观察分析新建立的人肝癌转移细胞系（ＭＨＣＣ９７）转移相关因子ｍＲＮＡ和蛋白表达水平,以探讨其转移的可能机制。方法 利用裸鼠人肝癌转移模型（ＬＣＩ－Ｄ２０）的瘤组织,通过体外２获得首株高转移人肝癌细胞系,除对其基本生物学特性进行观察外,还采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和免疫组织化学技术（ＡＢＣ法）观察转移相关因子在ＭＨＣＣ９７细胞及其裸鼠肝内移植瘤和肺转移灶中的表达水平。结果 该细胞     

肝癌细胞在Ⅳ型胶原裱衬表面的粘附特性

定量描述肝癌细胞和肝细胞在Ⅳ型胶原裱衬表面的粘附特性,探讨细胞粘附力与Ⅳ型胶原裱衬浓度及Ⅳ型胶原与层粘连蛋白复裱衬时ＬＮ复合浓度的相关关系。方法采用分步裱衬的方法制作 有关裱衬表面,即依次在玻璃表面裱衬多聚赖氨酸和Ⅳ型胶原／ＬＮ,最后以牛血清白蛋白作用阻断非特异性粘附。细胞粘附力采用微管吸吮技术进行测定。     

CIK细胞对裸鼠人肝癌转移预防和治疗

目的:探讨人细胞因子杀伤(Cytokine-induced killer,CIK)细胞对裸鼠人肝癌转移模型(LCI-D20)治疗作用.方法:用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,加入细胞因子rh IFN-γ、人CD3 mAb和rhIL-2.诱导生成CIK细胞,经腹腔注射,同时应用PBS作为对照,研究其对LCI-D20肝癌治疗和预防转移作用.结果:CIK组和对照组肝癌肿块重量、血AFP含量、肝癌肝内转移率和生存期依次分别为(1.125±0.363)g和(2.682±0.526)g;(48.6±5.2)μg/L和(82.2±7.2)μg;16.7%和58.3%;(73.3±7.03)d和(52.3±5.24)d,与对照组比较均P<0.01.结论:CIK细胞可以预防LCI-D20模型肝癌发生转移,延长动物生存时间.     

三氧化二砷对人肝癌细胞周期相关基因表达的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞周期的阻滞作用及相关基因的表达.探讨As2O3抗肝癌作用的机理.方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化;通过免疫细胞化学检测cyclin D1、PCNA基因编码蛋白的表达.结果 As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G0/G1期.与对照组比较,经As2O3作用的人肝癌细胞cyclin D1、PCNA基因编码蛋白的表达减少.结论 As2O3 通过干扰细胞周期的进程,下调cyclinD1、PCNA基因编码蛋白的表达,抑制肿瘤的增殖和转移,从而具有抗肿瘤的作用.     

三羟基异黄酮对肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的探讨三羟基异黄酮（Genistein）对肝癌细胞侵袭转移能力的影响及其机制.方法以人高转移肝细胞癌细胞系HCCLM3为研究对象,用细胞基质粘附实验检测Genistein对肝癌细胞基质粘附能力的影响,Transwell小室侵袭运动实验检测Genistein对肝癌细胞侵袭、运动能力的影响.免疫细胞化学法检测肝癌细胞MMP-2蛋白表达.结果 Genistein能抑制肝癌细胞对FN和Marigel胶的粘附;Genistein能抑制肝癌细胞在Transwell小室中的侵袭运动;Genistein处理组肝癌细胞MMP-2蛋白表达较对照组降低.结论 Genistein能抑制肝癌细胞的侵袭转移,其机制之一可能在于Genistein能抑制肝癌细胞MMP-2蛋白表达.     

槲皮素对结肠癌细胞SW480体外侵袭的影响

目的观察槲皮素处理后人结肠癌SW480细胞细胞形态和结构的变化;观察槲皮素对体外培养的人结肠癌SW480细胞的生长的作用;观测槲皮素对细胞体外侵袭、黏附和运动能力的影响。方法应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态结构的变化;观测不同剂量和时间情况下槲皮素对SW480细胞的作用。采用人工重组基底膜技术观察药物对细胞侵袭、运动和黏附的影响。结果经槲皮素处理后SW480细胞的数量减少。部分细胞的体积缩小,形状不规则,细胞浆空泡形成,细胞核浓缩,染色质凝集。透射电镜观察SW480细胞超微结构的变化显示：内质网高度肿胀,核糖体减少,染色质边集,细胞核固缩,还可见凋亡小体。槲皮素处理SW480细胞后细胞数量减少并呈时间和剂量依赖性。槲皮素处理后SW480细胞的侵袭、运动及黏附能力下降,并呈时间和剂量依赖性。结论槲皮素对人结肠癌SW480细胞的生长有抑制作用,并能诱导其凋亡;槲皮素抑制SW480细胞的侵袭、运动和黏附,是在多个层面抑制肿瘤的侵袭和转移。     

ZD6474对肝癌细胞和乙肝相关肝癌细胞增殖的影响

目的:探讨ZD6474对肝癌细胞株HepG2和乙肝相关肝癌细胞株HepG2.2.15细胞增殖的影响.方法:用WST方法检测ZD6474对细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测ZD6474对细胞周期及凋亡的影响.结果:ZD6474可以显著抑制HepG2和HepG2.2.15细胞增殖,6.4 μmol/L的ZD6474可以抑制(46.86±10.32)％的HepG2和(41.24±7.35)％的HepG2.2.15细胞增殖,其抑制增殖作用随剂量增加而增强(P＜0.05).ZD6474诱导细胞产生G0/G1期阻滞,6μmol/L的ZD6474可诱导71.90％的HepG2和69.90％的HepG2.2.15细胞阻滞于G0/G1期.结论:ZD6474可以抑制HepG2和HepG2.2.15细胞增殖,其机制可能与诱导细胞周期阻滞有关.     

槲皮素对视网膜母细胞瘤细胞抑制作用的研究

目的研究槲皮素（Quercetin,Que）在体外对人视网膜母细胞瘤（Retinoblastoma,RB）Y79细胞株的生长抑制和凋亡的影响。方法体外培养Y79细胞：在体外对Y79细胞经不同浓度槲皮素处理48h、72h后进行检测,用MTT法测定半数抑制浓度（IC50）,观察槲皮素的细胞毒性作用,用Hoechst33342/Pl双荧光染色观察细胞核形态变化。结果槲皮素在一定浓度范围内能明显抑制Y79细胞的生长,并存在剂量-效应关系;应用MTT法计算不同浓度槲皮素作用48h、72h的半数抑制浓度（IC50）是148μmol/L、115μmol/L。Hoechst33342/Pl双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等,细胞凋亡的形态学改变。结论槲皮素可使视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖抑制和凋亡诱导。     

槲皮素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨槲皮素联合顺铂对HeLa细胞增殖及凋亡的影响。方法:不同浓度槲皮素及不同浓度槲皮素联合顺铂处理HeLa细胞24 h后,采用MTT检测细胞的增殖活性、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡情况、激光扫描共聚焦显微镜观察用PI荧光标记的细胞核的形态学变化。结果:槲皮素能抑制HeLa细胞增殖,且呈剂量依赖性;槲皮素联合顺铂与相同浓度顺铂单用处理HeLa细胞相比,前者对HeLa细胞的抑制作用更显著(P<0.01);不同浓度槲皮素与顺铂联合处理HeLa细胞与顺铂单用相比,前者显著提高了HeLa细胞的凋亡率(P<0.01)。结论:槲皮素可显著抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,槲皮素与顺铂联合应用具有一定的协同效应。     

槲皮素对K562细胞形态及VEGF表达的影响

目的探讨槲皮素对K562细胞的形态、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白分泌和VEGF mRNA表达的影响.方法以K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright's染色法;AnnecxinV标记检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测VEGF mRNA表达;ELISA法检测VEGF蛋白表达.结果1.经槲皮素处理后,细胞形态学上出现凋亡特征性改变;2.槲皮素处理后K562细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);3.槲皮素能下调K562细胞VEGF mRNA的表达(P＜0.05);4.槲皮素处理后K562细胞显著降低VEGF蛋白的分泌(P＜0.05).结论槲皮素在体外能抑制白血病细胞K562生长并诱导其凋亡;槲皮素可抑制白血病细胞分泌VEGF.     

D-葡萄糖对系膜细胞产生细胞外基质的时效与量效研究

目的探讨不同浓度葡萄糖在不同时间对系膜细胞产生细胞外基质（ECM）的影响。方法人系膜细胞分别在不同浓度D-葡萄糖（5．5、10、20、30mmol／L）条件下培养不同时间（6、12、24、48h）,ELISA法检测各组细胞上清液纤维连接蛋白（Fn）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）含量。结果（1）10、20、30mmol／LD-葡萄糖条件下,培养6、12、24、48h均能引起细胞上清液中的Fn、Col Ⅳ显著升高（P〈0．05）,以24h最明显（P〈0．05）。（2）在相同的时间点上,随浓度增加,5．5、10、20、30mmol／LD-葡萄糖培养均能引起细胞上清液中的Fn、Col Ⅳ显著升高（P〈0．05）,以30mmol／LD-葡萄糖组最明显（P〈0．05）。结论葡萄糖可以时间和剂量依赖的方式刺激系膜细胞Fn、Col Ⅳ产生。     

槲皮素对小鼠免疫功能影响研究

目的：研究槲皮素对小鼠免疫作用的影响。方法：将小鼠分为低、中、高3个剂量组，分别为0．23、0．46、0．69g／kg槲皮素组和空白对照组、溶剂为对照组。小鼠连续灌胃30天后开始试验，分别进行免疫指标测定。结果：各剂量组与空白组比较，小鼠淋巴器官／体重比值差异均无显著性。中、高剂量组能明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应、明显增强小鼠碳廓清能力、明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力、明显升高小鼠血清溶血素含量、明显增强抗体生成细胞能力；高剂量组能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能；各剂量组对NK细胞活性增强无显著性。结论：按照增强免疫力功能作用评价程序规定，该受试物具有增强免疫力功能作用。     

Protective Effects of Quercetin on Cadmium-induced Cytotoxicity in Primary Cultures of Rat Proximal Tubular Cells

Objective To investigate the protective effects of quercetin on cadmium-induced cytotoxicity in primary cultures of rat proximal tubular(rPT)cells.Methods Primary cultures of rPT cells undergoing exponential growth were incubated with 1.0 μg/mL quercetin and/or cadmium(2.5,5.0 μmol/L),in a serum-free medium at 37 ℃ at different time intervals.Commercial kits were used and flow cytometric analyses were performed on rPT cell cultures to assay apoptosis and oxidative stress.Results Exposure of rPT cells to cadmium acetate(2.5,5.0 μmol/L)induced a decrease in cell viability,caused an increase in apoptotic rate and apoptotic morphological changes.Simultaneously,elevation of intracellular reactive oxygen species,malondialdehyde and calcium levels,depletion of mitochondrial membrane potential and intracellular glutathione,and inhibition of Na +,K +-ATPase,Ca 2+-ATPase,glutathione peroxidase(GSH-Px),catalase(CAT),and superoxide dismutase(SOD)activities were revealed during the cadmium exposure of rPT cells.However,simultaneous supplementation with 1 μg/mL quercetin protected rPT cells against cadmium-induced cytotoxicity through inhibiting apoptosis,attenuating lipid peroxidation,renewing mitochondrial function and elevating the intracellular antioxidants(non-enzymatic and enzymic)levels.Conclusion The present study has suggested that quercetin,as a widely distributed dietary antioxidant,contributes potentially to prevent cadmium-induced cytotoxicity in rPT cells.