PCR-TGGE法检测p53基因突变诊断肺癌淋巴结微转移

背景与目的：转移是影响肺癌患者预后的重要因素之一,但在淋巴结内存在少量癌细胞时常规的检测方法难以发现。本研究的目的是探讨检测肺癌相关淋巴结内微转移存在的敏感方法。方法：利用温度梯度凝胶电泳(temperature gradient gel electrophoresis,TFGGE)方法,对39例原发性肺癌患者的肿瘤组织及其相关的110枚淋巴结,进行p53基因(外显子5,6,7,8)的突变检测,并对部分淋巴结采用无间隔连续切片,证实微转移存在。结果：在39例肺癌患者中,23例原发肿瘤检测出p53基因突变,在相应的67枚淋巴结中,40枚淋巴结显示p53基因突变,且与原发灶变化一致;而在常规病理组织学检查时,仅26枚淋巴结存在肿瘤转移。原发肿瘤无p53基因突变者的43枚淋巴结和10枚非瘤患者淋巴结,均无p53基因突变。对常规病理组织学检查阴性,PCR-TGGE检测有p53基因突变的14枚淋巴结,进行无间隔连续切片,在4枚淋巴结中证实有微转移存在。结论：p53基因突变的检测发现了肺癌淋巴结中微转移的存在,可以作为常规病理组织学检查的补充。     

肺癌患者淋巴结微转移灶的检测的预后价值

目的：通过免疫组化的方法检测非小细胞肺癌患术后常规病理检查阴性的淋巴结的微转移灶，研究其预后价值。方法：用免疫组化角蛋白(CK)染色的方法检测术后常规病理学检查阴性的淋巴结中的微转移灶，以此研究非小细胞肺癌患淋巴结微转移灶的检出和患生存期的关系。结果：在39例患的90枚阴性淋巴结中22例患(56．4％)的26枚淋巴结(28．89％)检出微转移灶。有无复发转移患的淋巴结微转移率有显性差异(81％vs39％，P=0．02)；有无微转移灶的患的生存期各为32个月和48个月，3年生存率各为35％和75％(P=0．0178)。结论：淋巴结微转移灶的检测可以作为非小细胞肺癌患手术后的一个重要的预后指标。     

极光激酶A p53及p21 WAF1协同表达在非小细胞肺癌预后中的价值

目的：探讨极光激酶（ Aurora A）、Ki?67、p53和p21 WAF1在行根治术非小细胞肺癌（ NSCLC）患者预后中的价值。方法采用免疫组化检测Aurora A、Ki?67、p53和p21 WAF1在58例NSCLC根治术后患者中的表达情况,分析各指标的表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果Aurora A、Ki?67、p53和p21 WAF1在NSCLC中的阳性率分别为89．7％（52／58）、53．4％（31／58）、46．6％（27／58）和34．5％（20／58）。 Aurora A高表达患者的淋巴结转移率为69．2％,高于低表达者（37．8％, P＝0．045）。 Aurora A低表达组和高表达组患者的3年生存率分别为75．0％和46．0％,差异有统计学意义（ P＝0．039）。 Aurora A高表达和p53阳性组、Aurora A高表达或p53阳性组、Aurora A低表达和p53阴性组患者的3年生存率分别为40．0％、65．0％和82．1％,差异有统计学意义（ P＝0．039）。 Cox多因素分析结果显示,Aurora A和p53联合检测为影响NSCLC患者预后的独立因素（ P＝0．015）。结论Aurora A和p53为影响 NSCLC 患者预后的不良因素,与 p53突变相关的 Aurora A 高表达为影响NSCLC患者预后的独立不良因素。     

乳腺癌复发及转移灶分子生物学指标的变化

目的:探讨分析复发转移性乳腺癌患者中原发灶和复发转移灶的肿瘤组织ER、PR、Her-2、Ki67及p53免疫组化表达变化规律及特征.方法:选取我院66例复发转移性乳腺癌患者,分别分析原发灶和复发灶、原发灶和转移灶的肿瘤组织ER、PR、Her-2、Ki67及p53免疫组化表达情况.结果:在原位复发性乳腺癌复发前后表达变化差异经x2检验后提示ER:P =0.615;PR:P =0.497;Her-2:P =0.562;Ki67:P =0.001;p53:P =0.394,仅Ki67表达在原发灶和复发灶之间的变化有统计学意义(P＜0.05).在转移性乳腺癌复发前后表达变化差异经x2检验后提示ER:P=0.711;PR:P =0.538;Her-2:P =0.664;Ki67:P=0.001;p53:P=0.447,仅Ki67表达在原发灶和转移灶之间的变化有统计学意义(P＜0.05).同时得出,复发性和转移性乳腺癌组织中由阳性转阴性比率均高于由阴性转阳性.ER、PR、Her-2、p53在复发性和转移性乳腺癌复发前后表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:复发转移性乳腺癌组织Ki67的变化主要为表达呈衰减趋势(复发转移前的高表达转为复发转移后的低表达),仅Ki67表达在原发灶和转移灶之间的变化有统计学意义,表明Ki67是一项敏感指标,对预测化疗效果有重要的指导意义.ER、PR、Her-2、p53的改变无统计学意义,但是也存在部分病例发生变化,应需对该类病例讨论或修订其后续治疗方案.     

p53突变型乳腺癌中Ki67表达水平的临床意义

目的：探讨乳腺癌组织中p53的突变情况及Ki67的表达水平,明确p53与Ki67联合作用在乳腺癌临床病理因素上的体现。方法：应用免疫组化SP法检测165例乳腺癌组织中p53、Ki67的表达,分析其与临床病理因素之间的关系。结果：p53的突变率为55.8%（92/165）,Ki67的阳性表达率为69.1% （114/165）。p53的突变情况与患者年龄、肿块大小、淋巴结转移、TNM分期、ER和PR的表达水平无关,但与HER-2的表达水平呈正相关。在总人群中Ki67的表达水平与肿块大小和淋巴结转移无关。亚组分析显示在p53突变的患者中,Ki67的表达水平与肿块的大小呈正相关（r=0.311,P=0.003）,与淋巴结转移呈正相关（r=0.342,P=0.001）。结论：在p53突变型乳腺癌中Ki67的表达与T分期及N分期均呈正相关,在p53突变人群中Ki67对乳腺癌的生物学行为和患者的预后可能有更高的预测价值,二者联合检测与解读可能更有助于判断乳腺癌患者的预后。     

前哨淋巴结阳性早期乳腺癌非前哨淋巴结的组织学检测及临床意义

目的：研究早期乳腺癌患者前哨淋巴结(SLN)阳性时非前哨淋巴结(NSN)转移的可能性及其临床意义。方法：对84例SLN阳性接受乳癌根治术的早期乳腺癌患者的NSN及HER-2免疫组化等进行检测，分析NSN转移的发生率及相关临床因素。结果：SLN阳性患者NSN转移的检出率是48．8％(41／84)，NSN转移与原发肿瘤的大小、SLN转移灶的大小及HER-2的表达状况有关，原发肿瘤直径小于1cm及SLN转移灶小于1mm时NSN无转移，NSN的阳性率随原发肿瘤及SLN转移灶直径的增大而提高，HER-2蛋白阳性者NSN转移率高。结论：原发肿瘤直径小于1cm且SLN转移灶小于1mm时的早期乳腺癌患者可免于腋窝清扫，反之亦然；HER-2阳性患者NSN转移率较高，应考虑腋窝清扫。     

免疫组化和PCR方法检测乳癌腋窝淋巴微转移的比较

目的：探讨通过不同方法检测腋窝淋巴结MUC1基因表达，以提高微转移灶诊断率。方法：收集108个常规组织学检查阴性的腋窝淋巴结，分别用免疫组化及RT－PCR法测定MUC1蛋白及MUC1mRNA的表达。结果:MUC1 mRNA阳性检出率为66％，明显高于蛋白表达检出率21％。（P＜0．05）。结论：建立起MUC1基因的RT－PR分析法，进一步提高微转移灶诊断率，较免疫组化更为敏感。     

TTF-1临床检测诊断pN0期肺腺癌淋巴结微转移

[目的]探讨检测甲状腺转录因子-1(TTF-1)对肺腺癌淋巴结微转移的诊断价值。[方法]选取54例术后常规HE诊断为N0期,且肿瘤原发灶TTF-1表达阳性的肺腺癌病例,采用免疫组化法检测TTF-1在54例患者共893枚淋巴结中的表达。选取同期明确淋巴结转移且原发灶TTF-1表达阳性的肺腺癌病例作为阳性对照,5例肺良性病变术中所取5枚肺内或纵隔淋巴结作为阴性对照。[结果]54例患者893枚淋巴结中检测出9例共21枚淋巴结阳性,阳性淋巴结检出率2.4%(21/893),微转移病例检出率16.7%(9/54)。TTF-1在阳性对照组淋巴结中均表达,在阴性对照组中无表达。[结论]采用免疫组化法检测淋巴结中TTF-1表达,可以发现并诊断肺腺癌淋巴结微转移。     

RT-PCR与免疫组化法检测宫颈癌前哨淋巴结微转移的探讨

目的:应用RT-PCR与免疫组织化学技术检测宫颈癌前哨淋巴结微转移,比较2种方法的差异.方法:选取经病理确诊的53例宫颈癌患者的110枚前哨淋巴结,进行病理切片,免疫组织化学染色与RT-PCR检测CK19的表达.结果:53例患者瘤体病灶PCR及免疫组织化学检测显示均有CK19阳性表达,阳性率100.0%.13例(24.52%)患者前哨淋巴结阳性表达,对13例患者的23枚前哨淋巴结进行PCR与免疫组织化学检测,结果有21枚(91.3%)前哨淋巴结PCR阳性;19枚(82.6%)免疫组织化学阳性.40例患者87枚前哨淋巴结阴性表达.有12例患者28枚前哨淋巴结PCR阳性,淋巴结阳性检出率为32.18%;有7例患者11枚前哨淋巴结阳性,阳性检出率为12.64%.PCR与免疫组织化学阳性表达分别为25例(47.16%)和20例(37.73%).结论:应用RT-PCR和免疫组织化学技术检测宫颈癌前哨淋巴结微转移的敏感性均高于临床病理;RT-PCR技术检测CK19基因判断宫颈癌前哨淋巴结微转移值得临床推广应用.     

Ⅰ期非小细胞肺癌病灶中nm23的表达及淋巴结微转移研究

目的探讨Ⅰ期非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)病灶中nm23的表达及淋巴结微转移情况,以便为临床诊治提供参考。方法选取2005年1月至2010年12月期间深圳市光明新区人民医院接诊的经根治性切除治疗的Ⅰ期NSCLC患者30例进行研究,检测原发癌灶石蜡标本中的nm23基因表达水平,并对常规病理检查为阴性的淋巴结以CK为标志物实施微转移检测。两种测定方式均采用免疫组化法,分析测定结果。结果 30例患者nm23阳性表达率为56.67%,阴性表达率为43.33%;常规病理检出阴性淋巴结132枚中有7例(20枚)检出淋巴结微转移,阳性率分别为23.33%、15.15%;nm23阳性组淋巴结微转移率明显低于阴性组(P0.05)。结论Ⅰ期NSCLC病灶中nm23表达与淋巴结微转移有相关性,联合检测对病理分期、预后评估等意义重大。     

Micrometastatic p53-positive cells in the lymph nodes of early stage epithelial ovarian cancer: prognostic significance

We used immunohistochemical staining of p53 protein to detect micrometastasis in regional lymph nodes that were judged tumor-free by conventional histopathological methods in 58 patients with stage I or II (pT1 or 2, N0) epithelial ovarian cancer. Overexpression of p53 protein in the primary lesions of ovarian cancer was observed in 31 patients (53%), and p53 protein-positive cells were detected in the regional lymph nodes (micrometastasis-positive) in 19 of 31 patients with p53 protein overexpression (61%). In patients with micrometastasis, the prognosis was significantly poorer than that in those without micrometastasis (p < 0.05). Detection of micrometastasis of the regional lymph nodes of ovarian cancer by immunohistochemical staining of p53 protein may be useful in predicting the prognosis of patients with stage I or II epithelial ovarian cancer.     

MAGE基因在检测非小细胞肺癌淋巴结微转移中的应用

背景与目的MAGE基因是肿瘤特异性基因,本研究检测了MAGE1、2、3、4基因mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结中的表达情况,以分析MAGE基因在检测NSCLC淋巴结微转移中的意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)方法检测53例NSCLC患者的111组淋巴结中MAGE1、2、3、4mRNA的表达。结果应用常规病理检查和应用RTPCR技术检测MAGE基因mRNA表达的淋巴结转移阳性率分别为27.9%(31/111)和41.4%(46/111),差异有显著性(P<0.05)。80组常规病理检查阴性淋巴结中至少有一种MAGE基因表达的淋巴结有19组,阳性率是23.8%(19/80)。31组常规病理检查阳性淋巴结标本中至少有一种MAGE基因表达的阳性率是87.1%(27/31)。非肺癌患者淋巴结四种MAGE基因表达均为0。结论应用RTPCR法检测非小细胞肺癌淋巴结中MAGE1、2、3、4基因mRNA的表达,有助于诊断淋巴结微转移,提高肺癌TNM分期的准确性。     

VEGF、Ki-67和P53在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的 检测VEGF、Ki-67和P53在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及临床意义。方法 采用免疫组化方法检测78例NSCLC组织中VEGF、Ki-67和P53的表达情况,并结合肺癌的临床病理特征进行分析。结果 VEGF在NSCLC中的阳性表达率为67%(52/78),Ki-67在NSCLC中的阳性表达率为71%(55/78),P53在NSCLC中的阳性表达率为50%(39/78),它们的表达情况均与肿瘤组织的分化程度及临床分期有关(P＜0.05),与肺癌的组织学分型、有无淋巴结转移及年龄无关(P＞0.05),肿瘤组织分化越差、临床分期越晚者三者表达的阳性率越高。VEGF、Ki-67和P53表达阳性者总生存时间明显差于阴性表达者(P＜0.05)。结论 VEGF、Ki-67和P53与肺癌的发生、发展有关,对于判断非小细胞肺癌的预后及指导治疗有重要的参考意义。     

Ⅰ期非小细胞肺癌淋巴结微转移的研究

目的 检测Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结微转移的情况,分析影响Ⅰ期NSCLC淋巴结微转移的主要因素,了解微转移的规律.方法 采用免疫组织化学SP法对91例Ⅰ期NSCLC清扫的肺门和隆突下淋巴结进行混合性细胞角蛋白(MCK)检测,检测其微转移的表达.另收集45例肺部良性病变手术切除的肺门淋巴结45枚和Ⅱ、Ⅲ期NSCLC常规病理检查阳性的肺门淋巴结45枚进行MCK(AE1/AE3)检测,分别作为阴性和阳性对照.结果 45例肺部良性病变的肺门淋巴结45枚MCK(AE1/AE3)表达均为阴性.Ⅱ、Ⅲ期NSCLC常规病理检查阳性的肺门淋巴结45枚MCK(AE1/AE3)表达均为阳性.91例Ⅰ期NSCLC取其肺门和隆突下淋巴结各91枚进行MCK(AE1/AE3)检测,45例阳性,总的微转移率为49%(45/91).其中,肺门淋巴结39枚阳性,隆突下淋巴结11枚阳性,二者均为阳性5例.Logistic单因素分析显示:肿瘤大小、分期和分化是影响淋巴结微转移的临床因素,其相对危险度OR值分别为8.444、6.946和14.566.多因素分析显示:肿瘤T分期和分化程度是影响淋巴结微转移的主要因素,其相对危险度OR值分别为14.509和7.028.结论 Ⅰ期NSCLC淋巴结中存在微转移;ⅠB期NSCLC微转移率明显高于ⅠA期;有必要对ⅠB期NSCLC进行术后化疗;肿瘤分期和分化程度是影响淋巴结微转移的主要因素;淋巴结微转移遵循肺门到纵隔的途径;腺癌存在跳跃式微转移现象.     

P糖蛋白在胰腺癌中的表达及其与p21^ras和p53蛋白表达的关系

为了解Ｐ糖蛋白在原发和复发胰腺癌组织中的表达及其临床意义，并分析其表达与Ｐ２１＾ｒａｓ和Ｐ５３蛋白表达的关系，采用免疫组化泽４８例原发胰腺导管癌和１５例复发胰腺癌的石蜡包埋标本进行Ｐｇｐ，ｐ２１＾ｒａｓ蛋白和ｐ５３蛋白单抗的免疫组化染色。     

Dukes′B期大肠癌微小转移及P53检测的临床意义

目的　Dukes′B期大肠癌患者手术后 5年生存率为 5 3.9%～ 84.9% ,有部分患者 5年内出现局部复发或 /和远处转移。本研究旨在探讨淋巴结微小转移灶 (lymphnodesmicrometastasisLMM)及原发灶p5 3的表达对评估经手术切除原发肿瘤及肠周淋巴结的Dukes′B期大肠癌患者预后的重要性和指导术后治疗的意义。方法　收集 5 2例Dukes′B期大肠癌患者手术切除的淋巴结及原发灶石蜡标本 ,同时获得这些病例的临床资料及随访 (生存期大于五年或死亡 )资料 ;实验方法 ;以细胞角蛋白单抗 (anti cytokerratinAE1/AE3 )为探针 ,采用免疫组化SAP(streptavidin alkalinephosphatase)法检测淋巴结中的LMM。以p5 3单抗为探针 ,采用免疫组化S -P(streptavidin peroxidase)法检测原发灶p5 3蛋白的表达。结果　检测 5 2例Dukes′B期大肠癌患者的 5年生存率为 73% ( 38/5 2 )。淋巴结中LMM +组 5年生存率 45 .5 % ( 5 /11) ,LMM 组 78.9% ( 32 /41)。原发灶中p5 3+组 5年生存率 6 2 % ( 18/2 9) ,p5 3 组 87% ( 2 0 /2 3)。同时检测LMM +p5 3+组 33% ,LMM p5 3 组 84%。X2 检验均P <0 .0 5 ,生存分析log rank检验P <0 .0 5。本实验中一般因素 (性别、年龄及肿瘤所在部位 )对检测结果的影响不明显 ;统计学处理 ,P >0 .0 5。结论　用     

Skip metastasis in nonsmall cell lung carcinoma: predictive markers and isolated tumor cells in N1 lymph nodes

BACKGROUND: Skip metastasis to mediastinal lymph nodes is a prognostic factor for patients with nonsmall cell lung carcinoma (NSCLC). Little is known about the biologic behavior of tumors with noncontinuous spread to the mediastinal lymph nodes. In patients with pN2 skip metastases, micrometastases to N1 lymph nodes, which only mimic skip metastases, have not been investigated. METHODS: In a retrospective study, the authors analyzed the primary tumor specimens from 45 patients with pN2 NSCLC (18 patients had squamous cell carcinomas, 23 had adenocarcinomas, and 4 had large cell carcinomas). They immunohistochemically evaluated the expression of p21, p53, MUC-1, Bcl-2, c-ErbB-2, and E-cadherin. Survival rates and biomarker expression levels were compared between patients with pN2 disease and infiltration of N1 lymph nodes (without skip metastasis [n = 28]) and patients with pN2 disease without N1 infiltration (with skip metastasis [n = 17]). To evaluate micrometastasis in the pN1 lymph nodes of 17 patients with skip metastases, lymph nodes were stained using the anticytokeratin antibody, AE1/AE3. RESULTS: The 5-year survival rate of patients with skip metastases was 41%, compared with 14% for patients without skip metastases (P = 0.019). In a multivariate analysis, the incidence of skip metastases did not vary significantly according to gender, age, histology, pT status, or cM status. Three skip-positive patients (17.6%) had micrometastatic tumor involvement of pN1 lymph nodes. After adding these patients to the group of patients without skip metastases, there was still a significant difference in survival between the two groups. p53, MUC-1, c-ErbB-2, and E-cadherin expression levels in primary tumor specimens were not significantly different in patients with continuous metastasis and patients with skip metastases. Patients with skip metastases expressed lower levels of p21 (P = 0.026), whereas Bcl-2 expression levels were considerably higher (P = 0.019) compared with the corresponding levels in patients without skip metastases. CONCLUSIONS: Patients with NSCLC and pN2 skip metastases have a more favorable prognosis than do patients with pN2 disease without skip metastases. Tumor specimens from these patients exhibit elevated expression of the antiapoptosis gene BCL2 and lower expression levels of p21 relative to patients with pN2 disease without skip metastases. Micrometastases occurred in 3 of 17 (17.6%) patients with pN2 disease and skip metastases diagnosed by routine histopathology.     

NSCLC外周血、区域淋巴结微转移检测对术前分期的临床价值

目的：探讨检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者术前区域淋巴结及外周血LunxmRNA表达对肺癌术前分期的临床价值。方法：采用荧光定量RT—PCR技术,检测43例初治NSCLC患者、20例肺部良性病变患者的外周血和术前经TBNA所获得的区域淋巴结,及10例健康人外周血的LunxmRNA表达。结果：NSCLC患者外周血LunxmRNA表达阳性率为51．16％（22／43）;术前获得的64枚区域淋巴结LunxmRNA阳性率为93．75％（60／64）,与病理阳性率70．31％（45／64）比较有显著差异;区域淋巴结Lunx的检出率要比常规病理和外周血Lunx的检出率高（P〈0．01）。肺癌患者外周血微转移与细胞分化程度、术前临床分期均存在密切关系（P〈0．05）。而对照组的所有标本只有1枚淋巴结检出LunxmRNA。结论：检测外周血和术前区域淋巴结LunxmRNA表达可作为诊断早期NSCLC患者微转移的参考指标,有助于完善病理C-TNM分期并指导临床综合治疗。