65例骨髓组织病理定量分析

目的：研究骨髓组织病理学定量分析在血液病中的作用。方法：对５９例病患者及６例题 骨髓组织切片进行了造血组织、脂肪组织及骨小梁等病理学定量分析；Ｍａｓｓｏｎ三色染色和Ｇｏｍｏｒｉ网状纤维染色观察。结果：与其他血液病及正常人骨髓相比，再生障碍性贫血病人骨髓的造血组织数及造血面积明显减少，脂肪组织数及脂及组织面积明显增多，骨小梁数及骨小梁面积明显减少。Ｍａｓｓｏｎ胶原纤维在血液病中均有不同程度的阳性，其     

肿瘤化疗辅助G－csf治疗对Tc－99放射性同位素骨扫描影像和周围骨髓造血活性的影响

肿瘤化疗辅助Ｇ－ｃｓｆ治疗对Ｔｃ－９９放射性同位素骨扫描影像和周围骨髓造血活性的影响湖南医科大学湘雅医院肿瘤科（４１０００８）黄俊辉编译刘绍华审校粒细胞克隆刺激因子（Ｇ－ｃｓｆ，Ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）是一种造血干细胞生长因子，目前广泛用于治疗或预防化...     

造血干细胞与β-地贫的基因治疗

造血干细胞 (ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ ,ＨＳＣｓ)是外周血中所有细胞成分的唯一来源。ＨＳＣｓ在体内的含量稀少 ,约占骨髓有核细胞总数的 0 .5 % ;主要存在于造血组织中 ,也有少量循环于外周血[1] 。实验证明 ,哺乳动物每天所需的大量成熟血细胞就是由其体内少量的ＨＳＣｓ产生的。ＨＳＣｓ是一种多能造血细胞 ,能分化出红系细胞、血小板、粒系细胞、单核血细胞和淋巴系细胞。ＨＳＣｓ可自我更新而不发生分化 ,并通过产生各系祖细胞来形成各种成熟的血细胞[2 -5] 。ＨＳＣｓ的特性可应用于移植方面 ,即把少量ＨＳＣ…     

造血生长因子促进RV介导LacZ-NeoR基因在人骨髓造血细胞中转染的机制

目的：本文探索了不同组合的造血生长因子ＳＣＦ、ＩＬ３及ＩＬ６对逆转录病毒（ＲＶ）介导的ＬａｃＺ－ＮｅｏＲ双标志基因转染人骨髓造血细胞转染效率、表达水平的影响及其相关机理。方法：采用ＲＶ转染人骨髓非粘附造血细胞（ＮＡＢＭＣ）及经ＳＣＦ、ＩＬ３及ＩＬ６不同组合预激４８ｈ后的ＮＡＢＭＣ。经荧光素二－β－Ｄ－半乳糖呋喃苷脂（ＦＤＧ）标记的半乳糖苷酶、Ｇ４１８ＲＣＦＵ－ＧＭ及ＰＣＲ／Ｓｏｕｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测ＮｅｏＲ和ＬａｃＺ基因的表达。结果：早期造血生长因子（ＨＧＦｓ）的预激明显改善了ＲＶ介导的ＬａｃＺ－ＮｅｏＲ基因在人骨髓造血细胞中的转染效率与表达水平,ＳＣＦ＋ＩＬ３＋ＩＬ６＞ＳＣＦ＋ＩＬ３＞ＩＬ３＋ＩＬ６＞ＳＣＦ＋ＩＬ６。氚标记脱氧胸苷（３Ｈ－ＴｄＲ）自杀及５－溴脱氧尿苷－碘化丙啶（ＢｒｄＵ－ＰＩ）双标流式细胞仪（ＦＣＭ）检测显示,ＨＧＦｓ预激后人骨髓造血细胞及ＣＦＵ－ＧＭ的Ｓ期比例显著提高。结论：ＳＣＦ＋ＩＬ３＋ＩＬ６的联合预激可显著改善ＲＶ介导的外源基因在人骨髓造血细胞中的转染效率与表达水平,这可能与ＨＧＦｓ预激后明显提高人骨髓造血细胞及ＣＦＵ－ＧＭ的Ｓ期比例密切相关     

山羊心脏中心纤维体内的骨髓组织

目的 探讨山羊心脏中心纤维体的组织结构。方法 用石蜡切片,ＨＥ、Ｍａｓｓｏｎ和苏木素－美蓝－天青－伊红染色,光镜观察。结果 山羊中心纤维体为骨组织,其中有骨小梁和典型的骨髓组织。结论 山羊中心纤维体可能具有造血功能。     

少量多次异基因骨髓移植的实验研究

目的：探讨少量多次异基因骨髓移植的ＧＶＨＤ反应。方法：采用不同少量异基因骨髓细胞的多次尾静脉注射。观察大小便，皮毛，体位及死亡率等ＧＶＨＤ反应一般表现。移植后不同天数进行体内混合淋巴细胞反应及嵌合体测定。外周血象及骨髓有核细胞按常规方法计数。半固体琼脂法进行骨髓ＣＦＵ－ＧＭ测定。肝、脾、小肠及皮肤病理学检查判断ＧＶＨＤ反应程度。外周血Ｌ６１５细胞及脾脏Ｌ６１５细胞比例判断ＧＶＬ作用。结果：一次性大剂量组ＧＭＨＤ反应表现明显，单纯多次异基因骨髓细胞移植的ＧＶＨＤ反应不明显，而少量多次骨髓移植组则ＧＶＨＤ反应强度界于两者之间，并且具有较好的造血恢复作用。在ＧＶＬ作用方面，一次性大剂量骨髓移植组产生较强的近期抗白血病作用，但多死于ＧＶＨＤ反应。少量多次骨髓移植１×１０６骨髓细胞及 １×１０６脾单个核细胞组抗白血病作用较强，３０ ｄ生存率达 ６０％，死亡原因主要为白血病。结论：少量多次骨髓移植可以减轻ＧＶＨＤ反应，保留部分ＧＶＬ作用。     

抑制白血病细胞增殖的骨髓基质细胞分泌因子的研究

骨髓基质细胞在分泌造血所需刺激因子的同时也分泌负性调节因子。我们从人骨髓成纤维细胞克隆亚系 (ＨＦＣＬ - 1 )条件培养液中发现新的能抑制ＨＬ - 60细胞增殖的活性组分。　　 1 采用中空纤维柱超滤浓缩、ＤＥＡＥｃｅｌｌｕｌｏｓｅ - 52、ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ、Ｐｏｌｙｂｕｆｆｅｒｅｘｃｈａｎｇｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｆｏｃｕｓ ｉｎｇ、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ - 1 0 0、Ｐｒｅｐ -ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ等程序 ,从ＨＦＣＬ - 1细胞条件培养液中纯化出 9个具有明显抑制ＨＬ - 60细胞增殖的活性组分。其ｐＩ值在 4～ 6之间 ,…     

小儿血液病骨髓针刺活检临床病理学分析

目的：探讨小儿骨髓活检特点及其病理诊断意义。方法：对比分析３６１例有血液病临床表现的患儿骨髓针刺抽吸涂片和活组织检查结果。结果：比较两种检查方法，在判断增生程度时存在显著差别。活检可以提高再生障碍性贫血、血小板减少性紫癜、骨髓异常增生综合征和转移性恶性肿瘤的诊断率。结论：骨髓活检对造血系疾病诊断可提供有力证据。     

人类造血干细胞:具有不同增殖和自我更新能力的异质性群体

利用骨髓、外周血或脐带血来源的造血干细胞作过继免疫治疗 (ＡＩＴ)是一种行之有效的临床治疗手段。ＡＩＴ成功的关键有赖于大量的输注细胞 ,而大量细胞的获得与造血干细胞 (ＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ,ＨＳＣｓ)密切相关。加拿大多伦多大学肿瘤 血液基因治疗小组的科学家古恩奇利用基因示踪法对输注的造血干细胞作了研究。ＨＳＣｓ经逆转录病毒转染后 ,移植到非肥胖型糖尿病性严重联合免疫缺陷小鼠 (ＮＯＤ ＳＣＩＤ)上 ,此种细胞称为ＳＣＩＤ细胞系重建细胞 (ＳＲＣｓ) ,分别在 3、6、12周取其骨髓 ,提取其ＤＮＡ ,…     

良性增生前列腺组织及上皮和间质细胞中r—GT活性及GSH含量…

本文报道测定正常人和良性腺增生症（ＢＰＨ）患者前列腺组织匀浆、上皮及间质细胞中ｒ－谷氨酰转肽酶（ｒ－ＧＴ）活性及其底物还原型谷脱甘肽（ＧＳＨ）的含量。结果显示：①ＢＰＨ组织匀浆、上皮及间质细胞中ｒ－ＧＴ活性显著升高，分别为正常前列腺相应组分的４．５、３．２和４．１倍，而ＧＳＨ含量则明显降低；②正常及ＢＰＨ组织上皮细胞中ｒ－ＧＴ活性均显著高于相应间质细胞，而ＧＳＨ含量则低于间质细胞。提示ｒ－ＧＴ活性     

Argyrophilic nucleolar organiser region (AgNOR) staining in normal bone marrow cells.

Fifteen normal bone marrow aspirates were stained with the agyrophilic nucleolar organiser region (AgNOR) method. The results of the specific staining AgNORs as well as nuclear and cytoplasmic staining were analysed. A system was devised to characterise precisely the AgNORs present in the nuclei of bone marrow cells. Particular types of bone marrow cells had a characteristic AgNOR and non-AgNOR staining pattern. The bone marrow cells were identified easily and reliably with AgNOR staining and the method was especially useful for lymphocytes, plasma cells, erythroid cells, basophils/mast cells, monocytes and cells containing haemosiderin. The immature haemopoietic cells exhibited more and larger AgNORs than the more mature cells. It is concluded that AgNOR staining can be used to study bone marrow cells by providing additional information when used in conjunction with conventional stains.     

骨形态发生蛋白2体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景：目前研究者尝试使用各种细胞因子、中药单体和组织裂解液等诱导剂作用于其分化过程,用以修复梗死的心肌组织。 目的：探索骨形态发生蛋白2在大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞过程中的作用。 方法：分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞。应用含有骨形态发生蛋白2的培养基定向诱导培养(对照组为普通培养基培养) 72 h,其后换用普通培养基继续培养4周。 结果与结论：初分离的细胞经纯化培养后,显示CD29阳性、CD34阴性,符合骨髓间充质干细胞的特征,生长曲线显示各代细胞生长规律相近。经骨形态发生蛋白2体外诱导培养后,细胞形态狭长,排列紧密、方向一致。分化后的细胞均阳性表达C-TnI、C-TnT 、desmin、α-sarcomeric actin和P38MAPK。空白对照组则基本不表达以上蛋白。提示骨形态发生蛋白2可以诱导大鼠骨髓间充质干细胞体外定向分化为心肌样细胞,是骨髓间充质干细胞体外心肌分化的一种新的有效诱导剂。     

Use of monoclonal anti-actin as a megakaryocyte marker in paraffin wax embedded bone marrow biopsy specimens.

Monoclonal anti-actin was used as a marker of megakaryocytes in Zenker's fixed, paraffin wax embedded bone marrow tissue, using an immunoperoxidase staining method. Twenty bone marrow samples were studied, including controls, and different myeloproliferative and myelodysplastic syndromes. The results were compared with those obtained using factor VIII related antigen (F VIII RAg) immunolabelling. Anti-actin is as good a marker for megakaryocytes as anti-FVIIIRAg and is potentially clinically useful when morphological identification is difficult, when bone marrow aspiration is unsuccessful, or when quantitative evaluation of tissue sections is required.     

酪蛋白激酶2相互作用蛋白1调控骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的成骨能力北大核心

背景:目前对酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)分子机制的体外研究主要集中在基因敲除小鼠来源成骨细胞或骨髓间充质干细胞,鲜见报道骨质疏松模型大鼠来源骨髓间充质干细胞中CKIP-1表达的研究。目的:探讨下调CKIP-1基因前后骨质疏松状态骨髓间充质干细胞成骨分化能力的变化。方法:用维甲酸诱导雌性SD大鼠骨质疏松模型,采用全骨髓贴壁法体外培养骨质疏松组、正常组大鼠骨髓间充质干细胞。成骨诱导后进行茜素红染色、碱性磷酸酶染色及实时定量RT-PCR检测骨桥蛋白、Runx2 mRNA的相对表达,实时定量RT-PCR检测成骨诱导过程中2组细胞中CKIP-1的动态表达;通过基因转染沉默CKIP-1基因,成骨诱导后进行茜素红染色、碱性磷酸酶染色及实时定量RT-PCR检测骨桥蛋白、Runx2 mRNA的相对表达。结果与结论:①与正常组相比,骨质疏松组骨髓间充质干细胞茜素红染色钙结节定量、碱性磷酸酶活性及骨桥蛋白、Runx2的mRNA水平降低(P<0.05),骨质疏松组骨髓间充质干细胞中CKIP-1基因动态表达水平总体偏高;②与未下调CKIP-1的骨质疏松组骨髓间充质干细胞相比,下调CKIP-1基因表达后,骨质疏松组骨髓间充质干细胞茜素红染色钙结节定量、碱性磷酸酶活性及骨桥蛋白、Runx2的mRNA水平明显升高(P<0.05);③结果表明,维甲酸诱导的骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成骨能力降低,下调CKIP-1基因可以部分提高其成骨分化能力。     

组织工程软骨与柚皮苷联合修复兔膝关节软骨缺损的组织学证实

背景：目前临床上虽有多种方法用于治疗软骨缺损,但没有从根本上解决关节软骨缺损修复问题。 目的：通过组织学研究进一步评价柚皮苷结合组织工程软骨修复兔关节软骨缺损的效果。 方法：取兔骨髓间充质干细胞体外增殖后,复合于改建后的脱细胞真皮基质载体上,制成组织工程软骨,植入到兔膝关节软骨缺损,并以柚皮苷汤灌胃,于 4,8周后分别对修复组织进行苏木精-伊红、Masson三色染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原染色、Ⅹ型胶原染色等组织学检查。 结果与结论：术后8周, 柚皮苷结合干细胞复合体组缺损处修复组织变成乳白色,半透明光滑组织,缺损修复组织与周围正常软骨已基本难区分,表面光滑。组织学检查发现修复缺损处基本为新生软骨填充。结果证实,柚皮苷结合组织工程软骨能提高家兔膝关节软骨缺损的修复质量。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

体外构建组织工程骨-软骨复合组织

背景：设计一体化、具有过渡结构的双层支架材料,复合软骨细胞、骨髓间充质细胞,有利于新生的骨与软骨组织之间形成良好界面。 目的：模仿自然骨-软骨基质构建复合支架,以软骨细胞和骨髓间充质干细胞为种子细胞,体外观察复合组织的成软骨及成骨能力。 方法：制备明胶-硫酸软骨素-透明质酸及明胶-陶瓷化骨多孔复合支架,构建自然骨-软骨基质复合支架,复合兔软骨细胞与骨髓间充质干细胞,分未成骨诱导与成骨诱导两组培养,并进行MTT、糖胺多糖含量、碱性磷酸酶活性检测,以及苏木精-伊红染色检测。 结果与结论：未成骨诱导与成骨诱导两组骨髓间充质干细胞增殖及糖胺多糖含量差异无显著性意义。未成骨诱导组碱性磷酸酶活性缓慢上升,成骨诱导组诱导后碱性磷酸酶活性迅速上升,14 d时达到稳定状态。两组苏木精-伊红染色结果无明显区别,均已形成含有双层组织的类似骨-软骨样组织,其间可见未降解支架形态,但由于基质形成不完善及支架未完全降解,此种结构不成熟,细胞分布不均匀,支架内部可见散在无细胞区域。证实采用两种细胞与双层结构的支架经体外分层复合能够形成组织工程骨软骨复合组织。     

骨髓间充质干细胞移植治疗肢体缺血的机制

背景：骨髓间充质干细胞移植治疗下肢缺血疾病已取得较好的效果,但其作用机制尚无定论。 目的：探讨骨髓间充质干细胞移植治疗SD大鼠后肢缺血的机制。 方法：结扎肾动脉下腹主动脉、腰动脉和髂腰动脉制备雌性SD大鼠后肢缺血模型。将扩增、纯化的雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞注射入大鼠缺血的右后肢股直肌中,对照组右后肢注射等量生理盐水。移植后2,4,6周,制备大鼠右股直肌切片行苏木精-伊红染色、血管内皮生长因子免疫组织化学染色、SRY基因免疫组织化学染色。 结果与结论：移植后2,4,6周移植组右股直肌毛细血管计数、血管内皮生长因子免疫组织化学染色阳性细胞计数均明显高于对照组(P < 0.01)。移植组股直肌切片中SRY免疫组织化学染色阳性细胞出现于毛细血管壁,并散在分布于肌组织中。结果表明局部注射移植骨髓间充质干细胞能促进缺血组织迅速生成大量毛细血管,改善大鼠缺血下肢的血供。骨髓间充质干细胞作为旁分泌细胞,通过增加血管内皮生长因子的分泌,促使大鼠缺血肢体的血管新生。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

骨髓间充质干细胞移植治疗重症急性胰腺炎肺损伤

BACKGROUND:A large number of studies have confirmed that bone marrow mesenchymal stem cells can couple with the circulation of the blood to other organs, promote pancreatic tissue repair injury and reduce pulmonary fibrosis, which have certain therapeutic effects on pancreas and lung injuries. OBJECTIVE:To study the therapeutic effect on severe acute pancreatitis-associated lung injury in rats after the transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells. METHODS:Animal models of severe acute pancreatitis-associated lung injury were prepared in rats via retrograde injection of 4% sodium taurocholate. Sprague-Dawley rats were randomized into three groups and received bone marrow mesencnymal stem cell injection via the tail vein in transplantation group, the same volume of normal saline in control group, or no treatment in normal groups. All the treatments in each group were performed 24 hours after modeling. Twenty-four hours after transplantation, hematoxylin-eosin staining of the pancreatic and lung tissues was performed. mRNA expressions of tumor necrosis factor-α and interleukin-1β in pancreatic and lung tissues were detected. ELISA kit was used to detect levels of serum C-reactive protein and tumor necrosis factor-α. RESULTS AND CONCLUSION:After modeling, under hematoxylin-eosin staining, there were a large number of inflammatory cells infiltrating in the damaged pancreatic tissues, accompanied by incomplete acinar structures, seriously destroyed lobular structures, alveolar fusion in the lung tissues, thickening of the alveolar walls, and a large amount of inflammatory cells infiltrating in the alveoli. These findings indicated successful modeling of severe acute pancreatitis-associated lung injury in rats. After cell transplantation, the number of infiltrated inflammatory cells in the damaged pancreatic tissue was reduced, with clear lobular structures and no bleeding from the acini; the structure of lung tissues was clear, with complete alveolar walls, and the width of alveolar space was reduced. Immunohistochemical results showed that transplanted DAPI-labeled bone marrow mesenchymal stem cells were aggregated in the pancreas and lung tissue, and uneven distributed in the damaged area. No DAPI expression in the pancreas and lung tissue was found in the control group, indicating transplanted bone marrow mesenchymal stem cells migrated into the damaged pancreas and lung tissue through the blood circulation, to further repair the damage area. RT-PCR test results showed that compared with the control group, bone marrow mesenchymal stem cell transplantation significantly reduced the levels of tumor necrosis factor-α and interleukin-1β in the pancreatic and lung tissues (P < 0.05). Higher levels of C-reactive protein and tumor necrosis factor-α were found in the control group compared with the normal group (P < 0.01), while the lower levels were obtained in the control group (P < 0.05). To conclude, our findings suggest that bone marrow mesenchymal stem cell transplantation is an effective therapy for severe acute pancreatitis-associated lung injury, and its mechanism may be associated with the reduction of inflammatory reactions and translation into the pancreas and lung tissue.     

骨髓间充质干细胞自体移植促进缺血肢体血管生成的实验研究

目的探索骨髓间充质干细胞在血管生成中的作用,为临床建立一种简便安全的下肢动脉缺血性疾病的治疗途径。方法24只新西兰兔分为实验组(12只)和对照组(12只),分离培养实验组兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),Brdu标记,建立兔后肢缺血动物模型,将取于自体的骨髓间充质干细胞制成悬液注射于实验组兔缺血部位,对照组注射等量生理盐水。2周后行实验组和对照组兔股动脉的二维及彩色多普勒超声检测,观察移植前后的血管内径,血流峰值速度,血流加速时间等;取缺血部位肌肉组织,免疫荧光染色观察移植细胞分布及血管生成情况。结果细胞移植后2周,实验组的股动脉内径,血流峰值速度,加速时间均大于对照组,有显著性差异(P<0.01);免疫荧光染色结果显示移植部位有移植细胞存在,移植组血管生成情况明显优于未移植组。结论骨髓间充质干细胞具有促进血管生成的作用,自体移植可望成为一种简单的、有效的治疗下肢缺血的方法。     

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定

背景：骨髓间充质干细胞在骨髓中含量极低,体外培养难度较大。体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的间充质干细胞,对组织工程及细胞的体内、体外实验显得至关重要。 目的：建立大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化方法,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。 方法：通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,进行形态学观察,绘制生长曲线,细胞周期分析,流式细胞仪检测细胞表面标记物,分别向成骨、成脂方向诱导分化。 结果与结论：大鼠骨髓间充质干细胞生长以梭形细胞为主,呈放射状排列的细胞集落,细胞生长旺盛,可连续稳定传代10代以上。生长曲线及细胞周期显示骨髓间充质干细胞符合正常细胞生长特征且生长活跃。第3代骨髓间充质干细胞CD44,CD90,CD105均呈阳性表达,而CD34,CD45呈阴性表达。成脂、成骨诱导后,油红O染色、碱性磷酸酶染色、von Kossa法染色和茜素红染色均呈阳性。全骨髓贴壁培养法操作简单,可大量分离、纯化、扩增骨髓间充质干细胞,所获细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能。实验所用的全骨髓贴壁法法为组织工程提供充足的种子细胞来源具有重要的现实意义。