骨形成蛋白-2与转化生长因子-β_3对牙髓干细胞成骨向分化的对比研究

目的探讨转化生长因子-β_3(transforming growth factor-β_3,TGF-β_3)、骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化的影响。方法健康新西兰幼兔4只,取牙髓组织采用酶解组织块法分离培养获得DPSCs,镜下观察细胞形态及生长状况。将培养的第3代DPSCs分为BMP-2组和TGF-β_3组,分别加入浓度为80μg/L的BMP-2、TGF-β_3的完全培养液,采用免疫组织化学法于诱导第3、7天检测Ⅰ型胶原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)表达,于第7、14天检测骨钙素(osteocalcin,OC)表达;诱导第7、14天,对BMP-2组、TGF-β_3组行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色后,倒置显微镜下观察ALP活性染色结果。结果兔DPSCs分离、培养48h,组织块周围有细胞游出、贴壁生长,培养的第3代兔DPSCs大多为长梭形,也可为多角形,呈巢式或集落生长;TGF-β_3组诱导第3天COL-1表达的累计吸光度(integrated optiacal density,IOD)值(159 676.79±63 959.56)高于BMP-2组(44 047.33±15 853.65)(P0.05),诱导第7天COL-1表达的IOD值(245 378.26±60 084.60)与BMP-2组(223 294.43±80 266.72)比较差异无统计学意义(P0.05);TGF-β_3组诱导第7天OC表达的IOD值(109 568.82±14 079.88)高于BMP-2组(55 168.57±1 694.93)(P0.05),诱导第14天OC表达的IOD值(411 544.95±82 803.24)与BMP-2组(360 103.54±20 835.36)比较差异无统计学意义(P0.05);BMP-2组、TGF-β_3组诱导第7天出现少量淡蓝色ALP阳性区,诱导第14天蓝色ALP阳性区增大且蓝染颜色加重,镜下观察2组无明显差异。结论与BMP-2比较,TGF-β_3对早期兔DPSCs向成骨细胞分化有较明显的促进作用。     

转化生长因子-β_3对兔牙髓干细胞增殖及骨向分化的影响

目的探讨转化生长因子-β_3(transforming growth factor-β_3,TGF-β_3)对体外培养的兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)增殖和分化的影响。方法采用酶解组织块法将兔DPSCs分离培养获得DPSCs,光镜下行形态学观察;将体外培养的第3代DPSCs分为5组,分别为对照组、20μg/L TGF-β_3组、40μg/L TGF-β_3组、80μg/L TGF-β_3组和100μg/L TGF-β_3组,分别加入0、20、40、80、100μg/L TGF-β_3;采用MTT法检测5组DPSCs A490值,采用免疫细胞化学法检测成骨细胞标记物骨钙素(osteocalcin,OC)、Ⅰ型胶原酶(collagenⅠ,Col-Ⅰ)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)表达情况,采用茜素红染色检测出现矿化结节情况,并进行比较。结果兔DPSCs呈集落状生长,在体外有一定克隆形成能力;对照组及20、40、80、100μg/L TGF-β_3组兔DPSCs A490值分别为0.34±0.55、0.34±0.19、0.33±0.47、0.33±0.30、0.34±0.47,各组间两两比较差异均无统计学意义(P0.05);80、100μg/L TGF-β_3组诱导后第3天出现Col-Ⅰ阳性表达,第7天开始消失,第5~7天出现BSP阳性表达,第7~14天出现OC阳性表达,第7天出现矿化结节;40μg/L TGF-β_3组第5~7天均有Col-Ⅰ阳性表达,第7天出现BSP阳性表达,第14天出现OC阳性表达,第14天出现矿化结节;20μg/L组第7天出现Col-Ⅰ阳性表达,第14天消失,第14天出现BSP阳性表达,第21天出现OC阳性表达,第21天出现矿化结节;对照组Col-Ⅰ、BSP和OC均为阴性,未出现矿化结节。结论TGF-β_3对体外培养的兔DPSCs增殖无影响,但对兔DPSCs向成骨细胞分化能力有一定促进作用,并在一定范围内呈浓度依赖关系。     

外源性转化生长因子-β_3联合兔牙髓干细胞对兔骨缺损处成骨细胞转化生长因子-β_3表达的影响

目的探讨转化生长因子-β_3(transforming growth factor-β_3,TGF-β3)联合体外培养的兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)对兔骨缺损处成骨细胞TGF-β_3表达的影响。方法 37只新西兰大白兔,取其中1只兔牙髓组织采用酶解组织块法分离培养获得DPSCs,体外培养,光镜下行细胞形态学观察,将DPSCs传代至第3代,冷冻储存待用。余36只新西兰大白兔随机分为PBS组、DPSCs组、TGF-β_3+DPSCs组,每组12只。在兔下颌前牙及磨牙区颊侧随机人工制备约8mm×2mm×3mm骨缺损区域,PBS组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+PBS 20μL,DPSCs组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+1×108/L DPSCs 20μL,TGF-β3+DPSCs组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+1×108/L DPSCs20μL+80ng/L TGF-β320μL。术后第4、8周3组分别处死6只兔,在骨缺损处行锥形束CT检查观察牙槽骨长度、宽度和高度丧失情况,采用茜素红染色观察骨缺损处骨愈合情况,采用免疫组织化学法观察种植体骨缺损处成骨细胞TGF-β_3表达水平。结果原代培养的兔DPSCs呈集落生长,多呈梭形,少数呈多角形或纺锤形;术后4周TGF-β_3+DPSCs组茜素红染色较PBS组、DPSCs组出现更多红色钙化结节,术后8周钙化结节进一步增多;术后4、8周,TGF-β_3+DPSCs组牙槽骨长度、宽度和高度丧失均少于DPSCs组和PBS组,DPSCs组少于PBS组(P0.05);术后4周,TGF-β_3+DPSCs组成骨细胞TGF-β_3表达水平(0.33±0.02)明显高于DPSCs组(0.15±0.01)和PBS组(0.09±0.03)(P0.05),DPSCs组与PBS组比较差异无统计学意义(P0.05);术后8周,TGF-β_3+DPSCs组成骨细胞TGF-β_3表达水平(0.46±0.01)明显高于PBS组(0.29±0.02)(P0.05),与DPSCs组(0.38±0.04)比较差异无统计学意义(P0.05),DPSCs组与PBS组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 DPSCs具有高度增殖的生物学特性,并具有成骨向分化潜能;外源性TGF-β_3联合DPSCs可增强内源性TGF-β_3的表达。     

转化生长因子-β_3和牙髓干细胞在兔面神经损伤修复中作用

目的探讨再生室内联合应用牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)和转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)修复兔面神经横断性损伤的可行性,比较各时间段不同药物干预后面神经的恢复情况。方法健康成年新西兰大白兔36只,随机分为DPSCs+TGF-β3组(实验组)、TGF-β3组和PBS组,每组各12只,3组均于兔左面颊部分离面神经上颊支并切断,利用硅胶管作为再生室桥接离断的神经上颊支,建立面神经上颊支横断伤模型。实验组在再生室内加入100ng/μL TGF-β3液和1×108/LDPSCs悬液0.1mL,TGF-β3组加入等量100ng/μL TGF-β3液,PBS组加入等量PBS液,术后4、12周比较3组兔面神经修复再生情况。结果4、12周时实验组神经纤维数[(1 034.58±94.28)、(1 425.92±188.98)根]和纤维直径[(2.05±0.14)、(7.18±0.40)μm]高于TGF-β3组[(935.00±44.60)、(1 053.42±135.26)根,(1.56±0.12)、(6.21±0.47)μm]和PBS组[(555.50±80.20)、(694.36±24.11)根,(1.26±0.08)、(3.64±0.56)μm](P0.05);12周时3组再生神经纤维总数和纤维直径均高于4周时(P0.05)。结论 TGF-β3与DPSCs联合应用可有效促进面神经再生,二者联合应用较单用TGF-β3修复效果好;DPSCs可作为种子细胞应用于面神经组织工程。     

不同方法提取兔牙髓干细胞对其生物学特征的影响

目的采用不同方法提取兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs),比较其生物学特征差异。方法健康新西兰幼兔6只,随机分为观察组和对照组各3只,观察组采用下颌骨下缘根尖孔途径法、对照组采用劈牙冠取牙髓法取牙髓组织,记录2组提取牙髓组织所需时间。2组牙髓组织DPSCs接种至DMEM培养基中培养、传代,显微镜下观察细胞形态。取第1代DPSCs,锥虫蓝染色后计数存活细胞和死亡细胞,计算存活细胞率;姬姆萨染色后显微镜下观察细胞克隆数;第1代DPSCs培养第1、3、5、7、9天,采用血细胞计数器行细胞计数计算增殖细胞数;取第3代DPSCs,茜素红染色后观察钙化结节数。结果观察组提取牙髓组织所需时间[(72.3±5.6)s]较对照组[(283.0±15.1)s]少(P0.05);与对照组比较,观察组DPSCs较致密,细胞间杂质相对较少;观察组第1代DPSCs细胞存活率[(95.5±6.2)%]、克隆团形成数[(19.00±0.82)个]高于对照组[(93.0±5.8)%、(16.00±1.15)个](P0.05);培养第1天,观察组增殖细胞数[(41 000±221)个]较对照组[(43 929±215)个]少(P0.05),培养第3、5、7、9天,观察组增殖细胞数[(70 000±236)、(120 286±216)、(167 943±164)、(177 729±103)个]与对照组[(70 043±231)、(120 457±225)、(167 914±257)、(177 900±110)个]比较差异均无统计学意义(P0.05);培养14d,观察组第3代细胞钙化结节数[(6.70±0.75)个]与对照组[(6.43±0.53)个]比较差异无统计学意义(P0.05)。结论下颌骨下缘根尖孔途径法提取DPSCs较简便、省时,所提取的DPSCs中杂质少,具有细胞存活率高、细胞克隆团形成能力强、增殖能力强等优势。     

雌激素调控Notch1信号通路对卵巢去势大鼠血管钙化的影响

目的探讨雌激素对去势大鼠血管组织Notch1信号通路的调控作用及对血管钙化严重程度的影响。方法 45只接受卵巢去势手术的SD大鼠,随机分为对照组、血管钙化模型组、雌激素干预组,每组15只,血管钙化模型组和雌激素干预组采用肌内注射维生素D_3和尼古丁灌胃诱导建立血管钙化模型,雌激素干预组皮下注射17-β雌二醇40μg/kg进行干预,1次/d,连续8周;对照组不进行药物干预处理。8周后,对3组大鼠主动脉进行Von Kossa染色,采用实时定量PCR法检测3组大鼠主动脉Notch1和Jagged1mRNA相对表达量,采用比色法测定主动脉碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性及钙水平。结果血管钙化模型组主动脉Notch1、Jagged1mRNA相对表达量(0.896±0.010、0.822±0.011)、ALP活性[(189.60±22.74)u/(mg·pro)]及钙水平[(71.28±7.66)μmol/g]均高于雌激素干预组[0.671±0.009、0.646±0.010、(130.48±20.33)u/(mg·pro)、(53.39±6.78)μmol/g]和对照组[0.423±0.008、0.479±0.009、(58.40±16.18)u/(mg·pro)、(20.56±4.87)μmol/g](P0.05),雌激素干预组高于对照组(P0.05)。结论补充雌激素能抑制维生素D_3和尼古丁诱导的卵巢去势大鼠血管钙化,雌激素干预Notch1信号通路表达可能是影响血管钙化形成和进展的重要机制之一。     

转化生长因子β_1对牙周膜干细胞OPG/RANKL基因表达的影响

目的探讨转化生长因子β_1(transforming growth factor β_1,TGF-β_1)对复苏后的人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)的骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)基因表达的影响。方法复苏PDLSCs并随机分为对照组和观察组,对照组和观察组分别采用含0、10μg/L TGF-β_1的成骨诱导液进行培养,2组采用茜素红染色检测成骨情况,采用免疫组织化学法检测细胞OPG、RANKL蛋白表达情况,采用实时定量PCR法检测细胞OPG、RANKL mRNA表达情况,并比较2组OPG/RANKL比值。结果 PDLSCs大部分呈长梭形;观察组PDLSCs成骨表达更好;观察组PDLSCs细胞质中OPG、RANKL蛋白均阳性表达,且OPG表达阳性结果更强,对照组细胞胞质无着色,OPG、RANKL均为阴性表达;观察组OPG、RANKL mRNA表达水平(3.156 5±0.052 8、2.196 2±0.007 2)及OPG/RANKL比值(1.446 0±0.008 0)均高于对照组(2.645 6±0.074 9、1.963 9±0.005 3、1.350 0±0.004 0)(P0.05)。结论 TGF-β_1可影响PDLSCs中OPG、RANKL表达,提高OPG/RANKL比值,可能对牙周骨组织再生有一定调控作用。     

咪唑立宾对阿霉素肾病大鼠肾小球nephrin和转化生长因子β_1蛋白表达的影响

目的探讨咪唑立宾对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞相关蛋白nephrin和转化生长因子β_1(transforming growth factorβ_1,TGF-β_1)表达的影响。方法雄性SD大鼠36只,随机分为模型组、干预组和对照组各12只;模型组和干预组大鼠经尾静脉注射阿霉素6.5mg/kg建立阿霉素肾病大鼠模型,对照组注射等量生理盐水;1周后,干预组给予咪唑立宾20mg/(kg·d)灌胃,1次/d,连续8周,对照组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。8周末,检测3组大鼠24h尿蛋白定量及血生化指标,取肾脏组织行组织病理学检查,采用免疫组织化学法检测nephrin和TGF-β_1蛋白阳性表达率,采用Western blot法检测nephrin和TGF-β_1蛋白相对表达量。结果模型组和干预组大鼠24h尿蛋白定量[(334.2±79.8)、(150.8±61.2)mg]、三酰甘油[(4.98±2.23)、(1.78±1.04)mmol/L]和总胆固醇[(6.28±2.89)、(4.99±1.98)mmol/L]水平均高于对照组[(19.4±4.2)mg、(0.28±0.12)mmol/L、(1.54±0.53)mmol/L)(P0.05),血白蛋白水平[(22.80±1.11)、(26.22±1.68)g/L]低于对照组[(32.50±0.78)g/L](P0.05),模型组24h尿蛋白定量和三酰甘油水平高于干预组(P0.05),血白蛋白水平低于干预组(P0.05),总胆固醇水平与干预组比较差异无统计学意义(P0.05);3组血清肌酐水平比较差异无统计学意义(P0.05);模型组肾小球nephrin蛋白阳性表达率和相对表达量(7%、0.11±0.02)低于干预组(24%、0.49±0.06)和对照组(43%、0.79±0.08),干预组低于对照组(P0.05);模型组肾脏TGF-β_1蛋白阳性表达率和相对表达量(94%、1.03±0.08)高于干预组(78%、0.75±0.07)和对照组(45%、0.36±0.04)(P0.05),干预组高于对照组(P0.05)。结论咪唑立宾可增加肾小球nephrin表达,从而减轻足细胞损伤,抑制TGF-β_1表达,减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白的排泄,减轻及延缓肾小球硬化。     

过表达circRNA＿079813牙髓干细胞对大鼠牙周骨缺损的影响

目的 探讨过表达circRNA＿079813的牙髓干细胞(DPSCs)对牙周骨缺损的修复作用及可能机制。方法 对数生长期大鼠DPSCs分为对照组(正常培养基培养)与成骨诱导组(成骨诱导培养基培养),过表达组(转染pcDNA3.1-circRNA＿079813过表达质粒)与空载组(转染pcDNA3.1空载质粒)。50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、DPSCs组、pcDNA-null组、pcDNA-circ组各10只。模型组、DPSCs组、pcDNA-null组、pcDNA-circ组采用低速球钻在牙槽骨骨面作小切口制作牙周骨缺损模型,分别在缺损区域注入α-MEM培养基、DPSCs、空载组DPSCs、过表达组DPSCs;假手术组仅暴露牙槽骨骨面,不作后续处理。采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测各组DPSCs和各组大鼠牙周缺损骨组织ALP活性,采用实时荧光定量PCR法检测各组DPSCs和各组大鼠牙周缺损骨组织ALP mRNA、circRNA＿079813相对表达量,采用ELISA法检测各组大鼠牙周缺损骨组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平...     

前列腺癌Gleason 3+4和Gleason 4+3经直肠超声造影参数与转化生长因子β_1相关性分析

目的探讨前列腺癌Gleason 3+4和Gleason 4+3患者超声造影参数与前列腺组织中转化生长因子-β_1(transforming growth factor-beta 1, TGF-β_1)的相关性。方法中度风险前列腺癌(Gleason=7分)患者87例,均行经直肠超声造影检查和前列腺穿刺活检组织病理检查,根据组织病理学结果分为Gleason 3+4组42例和Gleason 4+3组45例;比较2组超声造影参数及前列腺组织中TGF-β_1表达情况,分析超声造影参数与TGF-β_1的相关性,绘制ROC曲线,评估各指标区分Gleason 3+4与Gleason 4+3前列腺癌的诊断效能。结果 Gleason 4+3组超声造影病灶峰值强度[(9.60±2.81)dB]、AUC[(606.93±284.55)dBs]大于Gleason 3+4组[(7.24±2.19)dB、(412.53±164.35)dBs](P0.05),Gleason 4+3组前列腺组织TGF-β_1的高表达率(55.6%)高于Gleason 3+4组(31.0%)(P0.05);TGF-β_1与造影参数的峰值强度(r=0.537,P0.001)、平均渡越时间(r=0.281,P=0.008)、AUC(r=0.607,P0.001)、强度降半时间(r=0.380,P0.001)呈正相关,与上升时间(r=0.124,P=0.254)、上升支斜率(r=0.126、P=0.243)、达峰时间(r=-0.076,P=0.485)无相关性;当病灶峰值强度、AUC的最佳截断值分别9.19 dB、582.84 dBs以及TGF-β_1高表达时,区分前列腺癌组织学评分Gleason 3+4与Gleason 4+3的AUC分别为0.753(95%CI:0.649～0.839,P0.001)、0.730(95%CI:0.624～0.819,P0.001)、0.612(95%CI:0.501～0.750,P0.001),灵敏度、特异度分别为62.2%、85.71%,53.33%、92.86%,53.33%、69.05%。结论超声造影参数可反映前列腺癌血管灌注情况,前列腺组织TGF-β_1表达情况和超声造影参数对评估中等风险前列腺癌患者预后有一定价值。     

骨髓间充质干细胞来源的成骨细胞与血管内皮生长因子基因整合的研究

目的 大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)在药物诱导下定向分化为成骨细胞,对其进行血管内皮生长因子(VEGF)基因片段转染,观察其生物学特性的变化.方法 选择MSCs体外培养的第2代细胞诱导其向成骨细胞分化,实验分为对照组和地塞米松浓度1×10-8mol/L诱导组.对诱导分化后的成骨细胞进行碱性磷酸酶(ALP)染色和活性测定及Ⅰ型胶原的免疫组化染色、茜素红钙节结染色的鉴定.对诱导后的成骨细胞进行已构建的VEGF基因片段(ad5-h-VEGF)的人5型腺病毒载体进行转染,并进行免疫组化鉴定.结果 诱导培养第3、6、9、12天的ALP活性(A405)测定,地塞米松浓度1×10-8mol/L组测定值(A值)分别为0.1 44±0.004、0.175±0.003、0.207±0.010、0.224±0.004;对照组分别为0.101±0.003、0.124±0.016、0.133±0.005、0.139±0.005.两组在组间、不同时点以及组间和不同时点的交互作用差异均有统计学意义(P＜0.05).MSCs经地塞米松的成骨诱导剂诱导7～9天可出现碱性磷酸酶染色阳性,连续培养20天后可出现茜素红钙节结染色阳性.转染后细胞VEGF免疫组化染色阳性.结论 对骨髓间充质干细胞来源的成骨细胞作ad5-h-VEGF基因转染,可使诱导的成骨细胞胞浆中VEGF阳性表达.     

转化生长因子-β_1对人牙周膜干细胞生物学行为的影响

目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法对数生长期人PDLSCs随机分为TGF-β1组(培养液+10μg/L TGF-β1)和对照组(培养液),采用CCK-8法检测2组培养第1、2、3、4、5、6、7天细胞增殖能力;培养48h,采用Transwell小室法检测2组细胞迁移能力,Western blot法检测2组Notch1胞内段(Notch1intracellular domain,NICD)蛋白相对表达量。结果 TGF-β1组培养第1天细胞吸光度值(0.45±0.02)与对照组(0.45±0.03)比较差异无统计学意义(P0.05),培养第2、3、4、5、6、7天细胞吸光度值(0.81±0.08、1.82±0.07、2.14±0.09、2.49±0.11、2.69±0.12、2.78±0.08)均高于对照组(0.61±0.04、1.17±0.05、1.47±0.10、1.99±0.11、2.20±0.03、2.29±0.08)(P0.05);培养48h,TGF-β1组迁移细胞数目[(61.40±2.30)%]较对照组[(31.80±1.48)%]多,NICD蛋白相对表达量(0.49±0.01)较对照组(0.35±0.01)高(P0.05)。结论 TGF-β1可激活Notch1信号通路,促进人PDLSCs增殖和迁移。     

曲安奈德药物涂层可降解支架在兔胆管损伤动物模型的研究

目的观察胆管内放置曲安奈德可降解胆道支架后胆管ɑ平滑肌肌动蛋白(ɑ-SMA)及转化因子β_1(TGF-β_1)在兔胆管损伤动物模型修复期间的表达情况,研究应用曲安奈德药物覆膜的可降解胆道支架在兔胆管损伤动物模型中抑制胆管炎性狭窄的机制。方法通过兔胆管损伤动物模型将应用曲安奈德药物涂层的可降解胆道支架和无曲安奈德涂层可降解胆道支架分别放置兔肝外胆管60只,平均随机分成6组,选取放置胆道支架后第30天、60天、90天分别处死1组兔动物模型,取材兔损伤修复模型的胆管并且应用免疫组织化学的方法分别检测ɑ-SMA和TGF-β_1蛋白的表达水平。结果曲安奈德可降解胆道支架组兔胆管SMA-ɑ和TGF-β_1与无曲安奈德涂层可降解胆道支架组相比表达减弱,曲安奈德可降解胆道支架组兔胆管狭窄,发生比无曲安奈德涂层可降解胆道支架组低。曲安奈德可降解胆道支架组第30天与第90天二组有差异性统计学意义(P0.05),无曲安奈德涂层可降解胆道支架组第60天与第90天组二组有差异性统计学意义(P0.05)。结论曲安奈德药物覆膜可降解支架在兔胆管损伤动物模型修复期间胆管组织中ɑ-SMA和TGF-β_1两种蛋白表达量降低,提示曲安奈德药物覆膜可降解支架在抑制兔胆管损伤动物模型的炎性狭窄起到一定作用。     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在CIK细胞诱导中的表达及其功能

目的探讨肿瘤患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)诱导过程中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化及其功能。方法应用血细胞分离机采集22例肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC),诱导培养CIK细胞,用流式细胞仪动态监测其CD4~+CD25~+Foxp3~+表型,并分析Tregs细胞负性调控分子转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)和IL-10的表达水平,采用细胞增殖抑制试验测定Tregs细胞免疫学功能。结果诱导的CIK细胞中存在CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs,其表达量分别为第1天(0.30±0.15)%、第3天(4.48±1.72)%、第5天(3.83±2.12)%、第9天(2.37±1.17)%、第11天(1.65±0.99)%、第14天(1.04±0.76)%。诱导第14天时的Tregs细胞免疫调控负性分子TGF-β1的表达水平为(97.2±2.1)%、CTLA-4为(96.2±3.5)%、IL-10为(4.2±2.3)%。细胞增殖抑制试验中空白对照组、条件对照组以及实验组的增殖细胞表达量分别为(8.55±2.38)%、(42.66±7.32)%、(57.04±7.49)%。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs细胞可作为潜在的CIK细胞质量评价指标。     

体外循环前应用低分子肝素对行主动脉瓣置换术患者肺表面活性因子和氧化应激的影响

目的探讨低分子肝素对体外循环下行主动脉瓣置换术患者肺表面活性因子和氧化应激水平的影响。方法体外循环下行主动脉瓣置换术患者170例,随机分为观察组和对照组各85例。术前30 min观察组静脉注射3 mg/kg低分子肝素钙注射液、对照组注射3 mg/kg肝素钠注射液实施全身肝素化。采用凝固法检测注射肝素前(基础)、注射肝素后1 h活化凝血时间(activated coagulation time, ACT),计算ACT变化率;分别于麻醉诱导即刻、术后2 h采集动脉血,检测表面活性蛋白(surfactant protein, SP)-A、SP-D、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-8,并进行比较。结果观察组基础ACT[(141.20±25.90)s]、ACT变化率[(1.23±0.40)s/(u·kg)]与对照组[(149.32±30.07)s、(0.90±0.49)s/(u·kg)]比较差异无统计学意义(P0.05);观察组麻醉诱导即刻SP-A[(28.09±5.21)ng/L]、SP-D[(1 355.21±153.41)ng/L]、MDA[(6.65±1.09)mol/L]、SOD[(75.51±7.85)u/mL]、IL-6[(35.21±5.51)mmol/L]、IL-8[(33.26±4.96)mmol/L]与对照组[(25.55±4.32)ng/L、(1 294.31±130.81)ng/L、(6.50±0.87)mol/L、(74.32±8.91)u/mL、(32.12±6.46)mmol/L、(31.19±6.67)mmol/L]比较差异无统计意义(P0.05);术后2 h,观察组、对照组SP-A[(33.85±2.15)、(38.12±1.91)ng/L]、SP-D[(1 515.11±121.05)、(1 720.53±98.39)ng/L]、IL-6[(46.59±2.39)、(51.99±1.36)mmol/L]、IL-8[(41.55±2.26)、(45.26±3.52)mmol/L]均高于麻醉诱导即刻(P0.05),MDA[(3.11±1.07)、(4.49±0.79)mol/L]、SOD[(64.27±8.01)、(53.19±6.12)u/mL]水平均低于麻醉诱导即刻(P0.05);术后2 h,观察组SP-A、SP-D、MDA及血清IL-6、IL-8水平低于对照组,SOD活性明显高于对照组(P0.05)。结论行主动脉瓣置换术患者体外循环前应用低分子肝素可减轻炎性反应、减少对肺血管内皮细胞的损害。     

转化生长因子-β_1和Smad7信号通路与大鼠肝纤维化的相关性

目的探讨肝纤维化组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad7基因在信号传导通路中的作用。方法 40只Wistar大鼠随机分为对照组和模型组各20只,模型组腹腔注射质量分数10%四氯化碳注射液8周,对照组腹腔注射质量分数0.9%氯化钠注射液。2组于8周后检测血清谷草转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)和TGF-β1水平,组织病理观察肝组织炎症反应及纤维化程度,采用Western blot与RT-PCR法检测肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白和mRNA水平。结果模型组血清GPT[(178.45±24.36)u/L]、HA[(693.37±206.35)μg/L]和TGF-β1[73.94±28.37)u/L]水平明显高于对照组[(42.80±8.37)u/L、(59.35±28.12)μg/L和(20.68±17.85)u/L](P0.05);模型组肝组织TGF-β1mRNA和蛋白(0.86±0.04、3.86±0.87)、Smad3mRNA和蛋白(0.52±0.03、2.63±0.94)表达水平高于对照组(0.31±0.03、1.07±0.60,0.21±0.01、0.81±0.04)(P0.05),Smad7 mRNA和蛋白(0.33±0.02、1.20±0.53)表达水平低于对照组(0.77±0.02、2.83±1.15)(P0.05)。结论 TGF-β1、Smad7信号传导通路过度活化及血清GPT、HA和TGF-β1水平升高,可能与肝纤维化的发生和发展密切相关,TGF-β1高表达在促进肝纤维化发生中起重要作用。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞成骨分化功能的研究

目的:研究骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM M SC)成骨分化功能及其在M DS发病机制中的作用。方法:分离培养M DS患者及正常人的BMMSC,并在体外诱导其向成骨细胞分化;荧光定量PCR法检测BMMSC成骨分化转录因子Runt相关转录因子2(RUNX2)和Osterix的mRNA表达水平,以及成骨诱导分化第7、14、21天成骨相关基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨涎蛋白(Bone sialoprotein,BSP)、骨桥素(Osteopontin,OPN)和骨钙素(osteocalcin,OCN)的mRNA表达情况;碱性磷酸酶活性检测试剂盒检测成骨诱导第3、7、10天ALP活性;茜素红染色观察诱导分化第21天钙结节形成情况。结果:低危MDS组BMMSC成骨分化转录因子RUNX2和Osterix mRNA表达水平较正常对照组均明显降低(P0.05),成骨诱导分化第3天低危MDS组ALP活性水平明显低于正常对照组(P0.05),成骨诱导分化第21天茜素红染色显示,低危MDS组钙结节含量也明显少于正常对照组(P0.05)。在成骨诱导分化不同时间点成骨早期标志ALP、BSP和后期标志OPN、OCN在低危MDS组中的mRNA表达水平也显著降低(P0.05),而高危MDS组在一系列成骨分化检测指标上与正常对照组之间没有统计学差异。结论:低危MDS组BM MSC成骨分化能力明显减弱,而高危M DS组相对正常。异常的成骨分化功能可能是造成低危组M DS骨髓支持造血能力减弱的重要原因。     

胃癌区域淋巴结中CD4~+CD25~+Foxp3~+T水平与细胞因子相关性分析

目的观察胃癌区域淋巴结中CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞(Treg细胞)分布及与外周血白介素(IL)-10和转化生长因子(TGF)-β_1的关系。方法采用流式细胞术检测48例胃癌患者(淋巴结转移26例,无转移22例)区域引流淋巴结中Treg细胞频数;ELISA方法检测外周血血清TGF-β_1和IL-10水平。分析Treg细胞与TGF-β_1、IL-10相关性。结果 Treg细胞在淋巴结转移患者阳性淋巴结中水平为(18.16±2.51)%,显著高于阴性淋巴结[(13.51±2.48)%],差异有统计学意义(P0.05),且阴性淋巴结Treg细胞比例显著高于无转移患者淋巴结[(9.27±2.16)%],差异有统计学意义(P0.05)。ELISA结果提示淋巴结转移患者外周血TGF-β_1和IL-10水平显著高于无转移患者,差异有统计学意义(P0.05)。胃癌患者引流区淋巴结Treg细胞分布比例与外周血血清TGF-β_1(r=0.73,P0.01)和IL-10水平(r=0.81,P0.01)呈明显正相关。结论胃癌患者区域引流淋巴结中Treg细胞分布与淋巴结转移密切相关,Treg细胞可能通过分泌TGF-β_1和IL-10导致胃癌淋巴结微环境发生免疫抑制,是胃癌发生淋巴结转移的重要因素之一。     

维甲酸对小型猪牙周膜干细胞成骨诱导能力的比较研究

目的 分离、培养、鉴定小型猪牙周膜干细胞（PDLSCs）并使用不同浓度的维甲酸（RA）对其进行成骨方向诱导,观察各浓度RA诱导后小型猪PDLSCs的碱性磷酸酶活性、相关成骨基因表达的差异。方法 采用组织块法获得小型猪PDLCs,有限稀释法纯化小型猪PDLSCs,免疫荧光法检测STRO-1、免疫细胞化学法检测波形蛋白、角蛋白鉴定小型猪PDLSCs。分别使用0.5μm、1μm、2μm RA对小型猪PDLSCs进行成骨诱导,14 d后行ALP染色,诱导21 d后,茜素红染色检测矿化结节。诱导14 d后对比各组细胞ALP活性。Real-time PCR定量分析各组RA诱导小型猪PDLSCs第21天ALP、OPN、OCN、Col I基因表达情况。结果 纯化后小型猪PDLSCs STRO-1,波形蛋白阳性表达,角蛋白阴性表达,各组RA诱导14 d后,ALP染色阳性,诱导21 d后各诱导组细胞茜素红染色阳性。ALP活性检测显示,小型猪PDLSCs诱导至第14天,ALP活性随RA浓度增高而增高（P<0.001）。Real-time PCR分析成骨相关基因表达结果显示,ALP、OCN基因表达与RA...     

老年膝关节骨性关节炎患者血清脂联素和白细胞介素-17及转化生长因子-β_1水平变化及临床意义

目的探讨血清脂联素(adiponectin, APN)、白细胞介素-17(interleukin-17, IL-17)及转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1, TGF-β_1)水平与老年膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis, KOA)严重程度的相关性,评估其对老年KOA的诊断价值。方法 170例老年KOA患者为KOA组,70例体检健康者为对照组,采用ELISA法检测血清APN、IL-17及TGF-β_1水平,并进行2组及不同K-L分级患者间比较;绘制ROC曲线,分析APN、IL-17及TGF-β_1对老年KOA的诊断价值;采用Pearson相关性分析血清APN、IL-17、TGF-β_1水平与K-L分级等临床指标的相关性。结果 KOA组血清APN[(3 162.40±418.25)μg/L]、IL-17[(32.75±16.38)ng/L]及TGF-β_1[(54.87±13.16)μg/L]水平均高于对照组[(684.72±205.63)μg/L、(15.84±8.20)ng/L、(10.42±2.63)μg/L](P0.05),K-L分级Ⅳ级、Ⅲ级、Ⅱ患者血清APN、IL-17及TGF-β_1水平依次降低(P0.05);当血清APN、IL-17及TGF-β_1最佳截断值分别为2 483.50μg/L、27.42 ng/L、40.35μg/L时,三项联合诊断老年KOA的AUC(0.960)大于APN、IL-17、TGF-β_1单独检测的AUC(0.825、0.796、0.863),其敏感度为90.7%,特异度为83.5%;老年KOA患者血清APN、IL-17、TGF-β_1水平与K-L分级呈正相关(r=0.316,P=0.004;r=0.241,P=0.026;r=0.289,P=0.015),与年龄、性别、体质量指数无明显相关性(P0.05)。结论血清APN、IL-17及TGF-β_1水平升高与老年KOA严重程度密切相关,三项联合检测对老年KOA诊断有参考价值。