miR-214对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:通过构建miR-214的真核表达载体,研究其对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:以A549细胞基因组DNA为模板,扩增得到miR-214前体序列,插入表达载体pcDNA3.1(+)克隆获得pcDNA3.1(+)-miR-214。将真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-214转染到A549细胞中,并采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)对其表达情况进行验证。采用MTT和transwell小室等方法分别检测转染重组质粒pcDNA3.1(+)-miR-214对A549细胞增殖能力和侵袭能力的影响。结果:成功构建了miR-214稳定过表达的真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-214;real-time PCR检测结果表明,转染pcDNA3.1(+)-miR-214后A549细胞中miR-214过表达(P<0.05)。miR-214过表达后A549细胞的增殖和侵袭能力均明显降低。结论:miR-214在A549细胞中过表达能够抑制细胞的增殖和侵袭能力,为进一步深入研究miR-214在肿瘤中的作用机制提供了实验依据。     

维生素C联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响

目的探讨维生素C（VC）联合顺铂（DDP）对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响。方法体外培养肺癌A549细胞,给予不同浓度（0.025、0.25、2.5 m M）VC联合5.0 mg·L^-1 DDP处理,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测A549细胞的增殖情况,采用Transwell实验检测A549细胞的侵袭能力,采用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测A549细胞的凋亡率。结果 VC与DDP联合用药可显著抑制A549细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,经VC与DDP联合处理的A549细胞,发生侵袭的细胞数目显著减少,细胞凋亡率显著升高。结论 VC与DDP联合用药可抑制肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

刺槐素通过调控LZTFL1表达抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨刺槐素对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法用浓度分别为4、8、16 μmol/L的刺槐素处理A549细胞,作为低、中、高浓度组,不作任何处理的细胞作为对照组;将pcDNA、pcDNA-LZTFL1转染至A549细胞中,记为pcDNA组、pcDNA-LZTFL1组;将si-NC、si-LZTFL1转染至A549细胞中再用16 μmol/L的刺槐素处理,记为刺槐素+si-NC组、刺槐素+si-LZTFL1组。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖抑制率;Western blotting法检测LZTFL1、CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测LZTFL1 mRNA表达水平。结果与对照组比较,刺槐素低、中、高浓度处理的肺癌A549细胞中细胞增殖抑制率显著升高,细胞迁移、侵袭数显著降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低,p21蛋白表达水平显著升高,LZTFL1 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。过表达LZTFL1抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。干扰LZTFL1表达逆转了刺槐素对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论刺槐素可能通过上调LZTFL1的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

丹皮酚抑制人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭及对MAPKs信号通路的影响

目的探讨中药单体丹皮酚对人肺癌A549细胞系增殖、侵袭和迁移能力以及MAPKs信号通路的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度丹皮酚对肺癌A549细胞系的抑制率,计算半数抑制浓度(IC50)。通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测丹皮酚对A549细胞迁移及侵袭能力的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测丹皮酚处理24 h后培养上清中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平。Western blot法检测A549细胞内MAPKs信号通路中p-ERK、p-JNK及p-p38等关键蛋白表达水平的变化情况。结果丹皮酚对A549细胞的增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性,对A549细胞的IC50为(54.68±3.59)μg·m L-1。丹皮酚以浓度依赖的方式抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移。ELISA检测发现丹皮酚可以抑制A549细胞分泌MMP-2、MMP-9蛋白。Western blot结果提示丹皮酚可抑制MAPKs信号通路中ERK通路磷酸化蛋白p-ERK的表达,而对p38、JNK通路的磷酸化水平无明显影响。结论在一定浓度范围内,丹皮酚可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,下调分泌蛋白MMP-2和MMP-9的表达,其机制可能与抑制MAPKs信号通路中的ERK通路有关。     

紫菀水提物对人肺癌A549细胞增殖、侵袭及裸鼠成瘤能力的影响及作用机制探讨

目的:探讨紫菀水提物对人肺癌A549细胞增殖、侵袭及裸鼠成瘤能力的影响及作用机制。方法:将体外培养MRC-5和A549细胞分别与不同浓度AWE(0、0.6、1.25、2.5、5、10、20、40、80、160、320 g·L^-1)孵育,根据MTT实验设置A549细胞为AWE 0 g·L^-1组、AWE 10·L^-1组、AWE 20·L^-1组和AWE 40·L^-1组。CCK-8法检测各组细胞增殖,Transwell法检测侵袭细胞数。采用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV939处理A549细胞,Western blot检测各组细胞Wnt-1、β-catenin、血管内皮生长因子(VEGF)和Ki-67蛋白表达。皮下种植A549细胞悬液(5×10~6个·mL^-1)0.2 mL,经AWE(灌胃5 g·kg^-1·d^-1,4周)干预后,进行移植瘤组织称重,免疫组化检测VEGF和Ki-67表达。结果:AWE对MRC-...     

Six1通过PI3K通路抑制肺癌细胞A549的增殖和迁移

目的研究Six1基因对人肺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响及其作用机制。方法将Six1的特异小干扰RNA序列转染入A549细胞中,应用Western印迹法检测Six1在A549细胞中的蛋白水平的表达情况,应用MTT法和细胞计数观察低表达Six1对A549细胞增殖的作用,应用划痕实验和transwell侵袭小室实验检测A549细胞迁移能力的变化情况,应用Western印迹法检测PI3K信号通路蛋白的表达变化。结果在A549细胞中,特异的小干扰RNA使Six1在蛋白水平表达降低,低表达Six1的A549细胞系增殖和迁移能力下降,p-AKT的蛋白表达降低。结论在A549细胞系中Six1通过PI3K通路抑制A549细胞的侵袭和转移能力。     

连翘醇提物对肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探究连翘醇提物对肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 以肺癌NCI-H226细胞为研究对象,将细胞分为对照组,连翘醇提物低、中、高浓度组（5、10、20 mg/mL）,激活剂组[10 mg/mL连翘醇提物+0.5μmol/L核因子κB(NF-κB)信号通路激活剂PMA],抑制剂组（10 mg/mL连翘醇提物+10μmol/L NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082）,阳性对照组（20μg/mL顺铂）,除对照组细胞不作干预外,其余各组细胞加入相应药物培养24 h。检测细胞增殖、迁移、侵袭情况,并计算增殖率、迁移率、侵袭细胞数;检测细胞中NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达水平。结果 与对照组比较,连翘醇提物各浓度组和阳性对照组细胞的增殖率、迁移率、侵袭细胞数以及细胞中p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）;与连翘醇提物中浓度组比较,抑制剂组细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数及细胞中上述蛋白表达水平均显著降低（P&l...     

金粉蕨素通过circ＿0136666/miR-370轴对肺癌A549细胞糖酵解、增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨金粉蕨素(ONY)对肺癌A549细胞糖酵解、增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养A549细胞,用不同浓度(5、10、20μg·mL^-1)ONY作用24 h,转染circ＿0136666的小干扰RNA至A549细胞,或将20μg·mL^-1 ONY作用于转染circ＿0136666过表达载体的A549细胞。酶联免疫吸附法检测细胞中的葡萄糖水平及细胞培养上清中的乳酸含量,CCK-8检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blotting检测Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达,RT-qPCR检测circ＿0136666和miR-370表达,双荧光素酶报告基因实验验证A549细胞中circ＿0136666和miR-370的调控关系。结果 经5、10、20μg·mL^-1 ONY干预后,A549细胞葡萄糖消耗量和乳酸产生量、细胞迁移数和侵袭数、Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及circ＿0136666表达水平明显降低(P<0.05),而细胞增殖抑制率、miR...     

西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响

目的探讨西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响。方法通过Transwell小室分析西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测西瑞香素对肺癌A549细胞迁移能力的影响;Western blotting检测西瑞香素作用于A549细胞后MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达。结果 Transwell小室实验结果提示,西瑞香素对A549细胞侵袭能力有抑制作用;划痕实验结果提示,西瑞香素对A549细胞迁移能力有抑制作用;Western blotting结果提示,西瑞香素抑制MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达。随着药物浓度增加,MMP-2、MMP-9表达减少,具有剂量依赖性。结论西瑞香素对A549细胞体外侵袭及迁移有抑制作用,这种作用与抑制MMP-2、MMP-9表达有关。     

Lipocalin-2过表达对人肺癌 A549细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的：采用基因过表达方法上调人肺癌 A549细胞 Lipocalin-2表达,观察 Lipocalin-2对细胞增殖、凋亡、细胞周期调控及侵袭力的影响。方法构建 Lipocalin-2过表达慢病毒载体,转染人肺癌 A549细胞。Real-time PCR 和 Western blot 检测转染后人肺癌 A549细胞中 Lipocalin-2表达水平。MTT 实验检测细胞增殖。流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。Transwell 小室实验检测细胞侵袭力。结果与阴性对照组和空载体对照组比较,转染组 Li-pocalin-2 mRNA 和蛋白表达水平均显著增加,差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。Lipocalin-2过表达慢病毒载体转染后,细胞增殖率和侵袭力显著增加,同时细胞凋亡率及 G0/ G1期细胞比例显著降低,S 期细胞比例显著提高,差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。结论 Lipocalin-2过表达通过调控人肺癌 A549细胞周期、抑制凋亡促进细胞的增殖,还明显提高细胞的侵袭力。     

沙利度胺对A549细胞体外增殖的影响及其作用机制

目的探讨沙利度胺对人非小细胞肺癌细胞株A549体外增殖和其对A549细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达的影响。方法体外培养A549细胞株,分为对照组和沙利度胺组,后者分别加入不同质量浓度(5,10,20,40,60 mg/L)的沙利度胺体外培养24 h。采用MTT法检测对A549细胞增殖的抑制率,采用RT-PCR和Western-blot方法分别检测各组VEGF和VEGF-C mRNA和蛋白水平的表达。结果沙利度胺体外能抑制A549细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.05)。不同浓度沙利度胺作用于A549细胞后,VEGF和VEGF-C mRNA和蛋白水平的表达均降低(P<0.05)。结论沙利度胺体外能抑制A549细胞的增殖,呈浓度依赖性,其作用机制可能与沙利度胺下调VEGF及VEGF-C的表达有关。     

Synergistic anticancer effects of andrographolide and paclitaxel against A549 NSCLC cells

Context: Paclitaxel (PTX) is widely used in chemotherapy for cancer treatment; however, it has some serious side effects. Andrographolide (Andro) is a potential cancer therapeutic agent isolated from Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees (Acanthaceae).

Objective: The objective of this study is to evaluate the effects of PTX combined with Andro against A549 cells.

Materials and methods: The effects of 24–48?h treatment with 0.48–60.75?nM PTX and 5.10–328.0?μM Andro on cellular proliferation, apoptosis, cell cycle and intracellular reactive oxygen species (ROS) were determined by sulphorhodamine B assay, Annexin V-FITC/PI apoptosis detection, PI staining and ROS assay, respectively. Synergy was determined using combination index. The antitumour efficacy of 20?mg/kg PTX with 100?mg/kg Andro was studied in a xenograft murine model.

Results: IC₅₀ value of the PTX combined with Andro against A549 cells was 0.5–7.4?nM, which was significantly lower than that of PTX (15.9?nM). PTX with 10?μM Andro caused (1.22–1.27)-fold apoptosis and 1.7-fold ROS accumulation compared with PTX alone. N-Acetylcysteine, a ROS scavenger, blocked this synergy in vitro. In contrast, G2/M phase cell cycle arrest resulting from PTX was not potentiated by Andro. Moreover, PTX in combination with Andro inhibited the growth of A549 transplanted tumours by 98%.

Discussion and conclusion: The results indicate that the combination of PTX and Andro exert significant synergistic anticancer effect on A549 cells in vitro and in vivo. The synergy may be the result of the accumulation of ROS. The combination of Andro and PTX represents a potential strategy for the treatment of A549 cells.     

虎杖苷对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及机制探讨

目的 探讨虎杖苷对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用,并探讨其机制。方法 以肺癌A549细胞为研究对象,以不同浓度虎杖苷（0、10、20、50、100、200 mg/L）处理24、48和72 h后,四氮唑盐（MTS）实验检测虎杖苷对肺癌A549细胞体外增殖的作用,以确定后续实验浓度;经不同浓度虎杖苷（0、10、20 mg/L）处理48 h后,Transwell实验检测虎杖苷对肺癌A549细胞体外侵袭的作用;Western blot和Real-time PCR检测基质金属蛋白酶2/9（MMP-2/9）、整合素β4（integrin β4）、Toll样受体3（TLR3）和分化抗原44（CD44）的表达以及丝氨酸/苏氨酸激酶磷酸化（p-AKT）水平;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养基中转化生长因子β（TGF-β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;报告基因技术检测核因子（NF）-κB启动子活性。结果 在0、10、20、50、100、200 mg/L浓度范围内,虎杖苷处理肺癌A549细胞后,细胞体外增殖率显著下调（以10 mg/L和20 mg/L处理48 h作为后续实验的药物浓度和时间）。虎杖苷处理48 h后,肿瘤细胞体外侵袭能力显著下降,TGF-β和TNF-α含量显著下调,MMP-2/9、integrin β4、TLR3、CD44、p-AKT蛋白及mRNA水平以及NF-κB启动子活性显著下调（均P＜0.05）。结论 通过调控肿瘤相关基因表达和ART/NF-κB信号通路活性,虎杖苷可显著抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭。     

麦冬皂苷B对A549细胞株体外黏附、侵袭及迁移的抑制作用及机制研究

目的探究麦冬皂苷B(ophiopogonin-B,OP-B)抑制非小细胞肺癌细胞株A549黏附、侵袭、迁移的作用及其机制。方法细胞黏附实验、Transwell小室实验分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力。通过荧光实时定量反转录PCR(qRT-PCR)检测OP-B对A549细胞中MMP-2/9 mRNA表达水平的调控,Western blot法检测细胞中MMP-2/9蛋白及其上游调控蛋白Akt及其磷酸化水平的变化。结果 10μmol·L-1浓度的OP-B能明显抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移,同时能抑制其MMP-2/9 mRNA及蛋白水平的表达,并抑制其上游p-Akt的表达。结论 OP-B有效抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移,其作用与下调MMP-2/9 mRNA和蛋白水平的表达及抑制其上游Akt的磷酸化有关。     

MAP30-PEG结合物对A549体外细胞增殖作用的研究

目的探讨苦瓜籽核糖体失活蛋白MAP30及其聚乙二醇修饰物对人肺腺癌细胞A549增殖、细胞凋亡的影响和caspase3相关凋亡途径的诱导作用。方法用MTT法测定MAP30和MAP30-PEG结合物对人肺腺癌细胞A549的抑制率;通过Hoechst33258荧光染色观察A549细胞凋亡形态,并用流式细胞术测定细胞凋亡率以及用western blot检测凋亡细胞caspase3表达。结果 MAP30和MAP30-PEG结合物均对A549有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性关系;MAP30-PEG结合物对A549细胞增值抑制率约为MAP30的60%;Hoechst33258荧光染色后均呈典型凋亡形态;流式细胞术检测显示,MAP30和MAP30-PEG结合物作用于A549细胞48 h后均可使A549细胞呈现Sub-G1凋亡峰,凋亡率分别为58.7%、42.7%;MAP30和MAP30-PEG结合物对胞内caspase3在凋亡过程中显示有激活作用。结论 MAP30和MAP30-PEG结合物均对A549增殖有明显的抑制作用;两者均能通过caspase3途径诱导细胞凋亡。     

冬凌草甲素对人肺癌A549 和 PC-9 细胞侵袭的抑制作用和机制研究

摘要： 目的 探讨天然产物衍生物冬凌草甲素对人肺癌细胞体外侵袭的抑制作用及其机制。方法 冬凌草甲素处理人肺癌细胞系 A549 和 PC-9 后, 应用细胞增殖实验 （MTS） 法检测肿瘤细胞生长, Transwell 试验检测肿瘤侵袭能力, 黏附试验检测肿瘤黏附能力, 流式细胞术检测肿瘤细胞周期, Western blotting 和 Realtime-PCR 检测细胞周期蛋白依赖性激酶 1 （CDK1）、 雷帕霉素靶蛋白 （mTOR）、 p53、 p21、 E-钙黏素 （E-cadherin）、 CD44、 β-catenin、 尿激酶型纤溶酶原激活物 （uPA）、 基质金属蛋白酶 （MMP） -2/9、 p-AKT 和磷酸化酪氨酸激酶 （p-Src） 表达, 报告基因技术考察核因子 （NF） -κB 转录活性。结果 冬凌草甲素显著抑制 A549 和 PC-9 细胞的体外增殖、 黏附和侵袭, 将细胞周期阻滞在 G2/M 期, 冬凌草甲素促进 E-cadherin、 p53 和 p21 的表达, 下调 CDK1、 mTOR、 CD44、 β-catenin、 uPA、 MMP-2/9、 p-AKT 和 p-Src 表达和 NF-κB 转录活性。结论 冬凌草甲素可抑制人肺癌细胞系 A549 和 PC-9 的体外侵袭能力,可能与其调节酪氨酸激酶活性有关。     

M3受体亚型在NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移中的作用及机制研究

目的探讨M3R在NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移中的作用及信号机制。方法 CCK-8法、划痕法和Transwell细胞侵袭实验检测M3R拮抗剂对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭的影响;钙成像观察M3R拮抗剂对卡巴胆碱诱导的内钙增加的影响;Western blot验证M3R拮抗剂对细胞增殖、迁移和细胞周期相关信号分子蛋白表达的影响。结果M3R拮抗剂1.25~80μmol·L~(-1)作用48 h后,能明显抑制NSCLC细胞增殖,抑制效果为R2-8018>达非那新(Darifenacin),H1299>H460;p-Akt、p-GSK3β、cyclin D1蛋白表达水平均随M3R拮抗剂作用时间延长明显下降,p21蛋白表达水平明显上调;R2-8018处理后,H1299细胞迁移和侵袭能力下降,MMP-2蛋白表达水平明显下降。结论拮抗M3R抑制Akt/GSK3β信号通路,抑制cyclin D1活性并上调p21,阻滞细胞周期进程,进而抑制细胞增殖;并通过下调MMP-2抑制H1299细胞的迁移和侵袭。     

不同浓度七氟醚对人前列腺癌细胞增殖与侵袭能力的影响

目的 观察不同浓度七氟醚对人前列腺癌 PC3 细胞增殖与侵袭的影响。方法 将 PC3 细胞随机分为 4 组： 对照组、 Treat1 组、 Treat2 组和 Treat3 组。对照组仅通入 O2及 CO2, Treat1～3 组在此基础上经 1.7%、 3.4%、 5.1% 七氟醚分别作用 2、 4、 6 h。MTT 检测各组细胞的增殖能力; Transwell 法检测各组细胞的侵袭能力; Western blot 检测各组细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白表达水平。结果 与处理前相比, 处理 2、 4 和 6 h 后, 人前列腺癌 PC3 细胞的增殖和侵袭能力均明显增强 （均 P＜0.05）, 细胞中 HIF-1α的蛋白表达水平明显上调 （P＜0.05）, 且 Treat3 组＞ Treat2 组＞Treat1 组（P＜0.05）。结论 七氟醚可增强人前列腺癌 PC3 细胞的增殖与侵袭能力, 且随着时间和浓度变化细胞的增殖与侵袭能力逐渐增强, 其机制可能与上调 HIF-1α的表达有关。     

The action and mechanism of myrislignan on A549 cells in vitro and in vivo

Myrislignan is a natural compound with little pharmacological study. In our investigation, we investigated the effect of myrislignan in the induction of apoptosis in A549 cells in vitro and in vivo. Myrislignan inhibited the proliferation of A549 cells in a dose- and time-dependent manner assayed by MTT. In addition, Hoechst flow cytometry showed that myrislignan significantly induced apoptosis and cell cycle arrest in A549 cells. The apoptosis and anti-cell proliferation was mediated by the activation of mitogen-activated protein kinase and the inhibition of epidermal growth factor receptor signal pathway, change of mitochondrial membrane potential, the releasing of c-Myc, the downregulation of the level of the anti-apoptotic protein Bcl-2, and the upregulation of the level of the pro-apoptotic protein Bax. In conclusion, those results reveal a potential mechanism for the anti-cancer effect of myrislignan on human lung cancer, while suggesting that myrislignan may be a promising compound for the treatment of lung cancer.