党参水提物对D-半乳糖致衰老小鼠肝组织microRNA表达谱的影响

目的研究党参水提物对衰老模型小鼠肝组织micro RNA(miRNA)表达谱的影响,探究中药党参抗衰老的分子机制。方法将100只昆明种小鼠,随机分为正常对照组,D-半乳糖致衰老模型组,低、中、高党参剂量干预组。连续造模42 d,随时监测模型小鼠的一般症状和体质量变化;并在造模结束后检测各组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)的值变化;利用Affymetrix miRNA 4.0微阵列芯片筛选了D-半乳糖致小鼠衰老和高剂量党参干预衰老过程中差异表达的miRNA,利用生物信息学工具对芯片结果进行聚类及信号通路分析。结果与正常对照组小鼠比较,衰老模型组小鼠血清ALT和ALP值显著升高(P0.05);与衰老模型组比较,党参干预组小鼠血清ALT和ALP值有下降趋势,其中高剂量干预组ALP下降较显著(P0.05);芯片聚类分析显示衰老模型组的miRNA表达谱与正常对照组和高剂量党参干预组明显分开,而高剂量党参干预组和正常对照组的miRNA表达谱聚在一起;D-半乳糖致衰老和党参抗衰老相关的差异表达miRNA主要都属于7个miRNA基因簇(miR-466a/b cluster、miR-297a cluster、miR-145a cluster、miR-486 cluster、miR-299a cluster、miR-127 cluster和miR-134 cluster);生物信息学分析显示致衰老过程中差异表达miRNA的靶基因功能显著富集于29条信号通路(P0.01),党参干预过程中差异表达miRNA的靶基因,参与调控的信号通路有67个(P0.01)。结论 miRNA的靶向调控作用在D-半乳糖致衰老及党参抗衰老过程中发挥着重要作用。     

交泰丸对睡眠剥夺大鼠血脑屏障P糖蛋白及下丘脑OrexinA的影响

目的探讨交泰丸拆方对睡眠剥夺大鼠模型血脑屏障P糖蛋白(P-gp)及下丘脑促觉醒神经递质orexin A的影响。方法将50只SD大鼠随机均分为5组,即空白对照组、模型组、交泰丸组(2.2g·kg-1·d-1)、黄连组(2g·kg-1·d-1)、地西泮组(0.0005g·kg-1·d-1),每组10只,空白对照组和模型组给予等量生理盐水,采用小平台水环境法建立大鼠睡眠剥夺模型,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western-blot)分别检测血脑屏障中P糖蛋白(P-gp)的mRNA和蛋白质水平的表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测下丘脑中Orexin A的含量变化。结果交泰丸组血脑屏障P-gp的mRNA水平和蛋白质表达水平,OrexinA 的含量均低于模型组(P0.05)。结论交泰丸中的黄连配伍肉桂增效可能是通过抑制血脑屏障中P-gp的表达,促进黄连主要催眠活性成分透过血脑屏障,抑制促觉醒神经递质Orexin A表达有关。     

白术提取物对IEC-6细胞迁移过程Rho GTPaes及肌球蛋白II表达的影响

目的观察白术提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移多胺介导钾通道激活信号通路指标Rho GTPaes(Rho A、Rac1和Cdc42)表达的影响,对肌球蛋白II(myosinⅡ)分布和表达的影响,以探讨益气健脾中药白术对胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法荧光定量PCR法检测Rho A、Rac1和Cdc42 mRNA表达;Western blot法检测Rho A、Rac1和Cdc42蛋白表达;免疫荧光法检测myosinⅡ蛋白分布和表达。结果白术提取物能提高细胞迁移过程Rho A、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达,逆转多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致的Rho A、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达抑制;提高细胞迁移过程myosinⅡ表达,从而增加细胞骨架应力纤维形成,改善DFMO所致的myosinⅡ蛋白表达和分布的抑制。结论白术提取物促进IEC-6细胞迁移的作用机制,与其影响多胺介导钾通道激活信号通路有关。     

新藤黄酸通过Ras/Raf/Erk信号通路诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的 从效应T细胞活化的源头Treg/Th17入手,探讨溃结灵调节Th17和Treg的平衡转化机制,揭示溃结灵治疗溃疡性结肠炎（UC）的深层次作用机理及作用靶点。方法 采用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）（25 g?L-1 TNBS+50 %的乙醇）诱导复制UC大鼠模型,并随机分为模型组,溃结灵高、中、低剂量组,阳性药柳氮磺胺吡啶（SASP）组,另取12只SD大鼠设为正常组。流式细胞术检测大鼠外周血中Treg细胞和Th17细胞占总CD4 T细胞百分比及计算Treg/Th17之比。结果 模型组Treg/Th17之比,较正常组显著降低（P＜0.01）,溃结灵高、中、低剂量组以及柳氮磺胺吡啶组Treg/Th17之比与模型组比较均有显著升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论 溃结灵对TNBS诱导的实验性溃疡性结肠炎大鼠有明显的治疗作用,其作用机制可能与提高外周血CD4 Foxp3 Treg细胞比例和降低CD4 IL-17A Th17细胞比例,进而恢复机体Treg/Th17平衡有关。     

益气活血化痰法对COPD模型大鼠细胞因子及气道重塑的干预作用

目的观察益气活血化痰法对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠细胞因子及气道重塑的影响,探讨益气活血化痰法治疗COPD的作用机理。方法通过香烟熏结合脂多糖(LPS)气管滴入法,建立COPD大鼠模型。观察益气活血化痰方药对大鼠血清中TNF-α、IL-8和肺泡灌洗液中MUC5AC的表达水平及其对各级支气管和肺组织病理变化的影响。结果益气活血化痰方药中、高剂量组可显著降低COPD大鼠血清IL-8、TNF-α及BALF中MUC5AC的表达水平,其中,高剂量组效果优于中剂量组。结论益气活血化痰方药中、高剂量组能降低COPD大鼠血清中IL-8、TNF-α和BALF中MUC5AC的表达水平,抑制气道炎性反应和缓解气道重塑,揭示益气活血化痰法临床疗效可能的作用机制,为临床治疗提供科学依据。     

丹参川芎嗪注射液对大鼠脑基底动脉的舒张作用及机制研究

目的研究丹参川芎嗪注射液对大鼠脑基底动脉的扩张及其机制。方法利用小血管张力测量系统研究丹参川芎嗪注射液对经高K~+、苯肾上腺素(PE)和血栓素受体激动剂(U46619)预收缩的血管环的扩张作用,并研究在不含钙的缓冲液中丹参川芎嗪注射液对PE、氯化钙(CaCl_2)及咖啡因收缩血管的影响。利用激光共聚焦显微镜观察丹参川芎嗪注射液对大鼠肠系膜血管平滑肌钙离子浓度的影响。结果 15~80 m L·L~(-1)丹参川芎嗪注射液可以浓度依赖性地降低经高K~+、PE和U46619预收缩的大鼠脑基底动脉;在不含钙的缓冲液中,丹参川芎嗪注射液(15,45,80 m L·L~(-1))可以抑制CaCl_2诱导的血管收缩,对PE及咖啡因诱导的血管收缩无影响;丹参川芎嗪注射液(45,60,80 m L·L~(-1))对高K~+诱导的大鼠肠系膜血管环收缩及血管壁荧光增强有不同程度的抑制作用。结论丹参川芎嗪注射液可以浓度依赖性地舒张大鼠脑基底动脉,抑制血管平滑肌钙离子通道是主要作用机制之一,主要表现为抑制细胞外的钙离子进入。     

小檗碱对NAFLD大鼠肝组织p38MAPK-STAT3信号通路mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察小檗碱对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝组织p38MAPK-STAT3信号通路相关基因及蛋白表达的调控作用,探讨小檗碱防治NAFLD的作用机制。方法 SPF 级雄性SD 大鼠24只,适应性喂养1 w后,随机分为正常组、模型组和小檗碱组,每组各8只。除正常组给予基础饲料外,其余两组均采用高脂饮食喂养建立大鼠NAFLD 模型,在施以造模因素的同时,小檗碱组灌胃盐酸小檗碱[100 mg·kg-1·d-1]进行干预,8 w后对肝组织行HE染色和油红O染色,全自动生化仪检测血清TC、TG、HDL-C 、LDL-C、AST及ALT改变,ELISA法检测血清及肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量;实时荧光定量RT-PCR法检测肝组织p38MAPK、STAT3mRNA 表达量;免疫组织化学法检测肝组织蛋白p38MAPK、STAT3及p-p38MAPK、p-STAT3表达水平。结果 8 w高脂饮食成功诱导建立了\NAFLD 实验动物模型,HE染色和油红O染色证实大鼠模型肝组织脂质蓄积严重。与正常组比较,模型组大鼠血清TG、TC含量明显升高（P<0.05）,肝组织及血清SOD活力明显降低(P<0.01),MDA水平明显升高(P<0.01),p38MAPK、STAT3mRNA及p38MAPK、p-p38MAPK、STAT3、p-STAT3蛋白的表达水平均显著升高( P<0.01,P<0.05);与模型组比较,小檗碱组大鼠血清TG、TC含量明显降低（P<0.05）,肝组织及血清SOD活力明显升高(P<0.01,P<0.05),MDA水平明显降低(P<0.05,P<0.01),p38MAPK、STAT3mRNA及p-p38MAPK、p-STAT3蛋白表达水平明显下调( P<0.05) 。结论 小檗碱可以改善NAFLD模型大鼠肝脏脂肪变性,降低其血清及肝组织氧化应激因子水平,其机制可能是通过激活肝脏p38MAPK-STAT3信号通路相关基因及其蛋白磷酸化水平,改善氧化应激而起作 用。     

茜草对人神经胶质瘤U87细胞的生长及丙酮酸代谢的影响

目的 从效应T细胞活化的源头Treg/Th17入手,探讨溃结灵调节Th17和Treg的平衡转化机制,揭示溃结灵治疗溃疡性结肠炎（UC）的深层次作用机理及作用靶点。方法 采用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）（25 g?L-1 TNBS+50 %的乙醇）诱导复制UC大鼠模型,并随机分为模型组,溃结灵高、中、低剂量组,阳性药柳氮磺胺吡啶（SASP）组,另取12只SD大鼠设为正常组。流式细胞术检测大鼠外周血中Treg细胞和Th17细胞占总CD4 T细胞百分比及计算Treg/Th17之比。结果 模型组Treg/Th17之比,较正常组显著降低（P＜0.01）,溃结灵高、中、低剂量组以及柳氮磺胺吡啶组Treg/Th17之比与模型组比较均有显著升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论 溃结灵对TNBS诱导的实验性溃疡性结肠炎大鼠有明显的治疗作用,其作用机制可能与提高外周血CD4 Foxp3 Treg细胞比例和降低CD4 IL-17A Th17细胞比例,进而恢复机体Treg/Th17平衡有关。     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠外周血Treg/Th17平衡的干预作用

目的从效应T细胞活化的源头Treg/Th17入手,探讨溃结灵调节Th17和Treg的平衡转化机制,揭示溃结灵治疗溃疡性结肠炎(UC)的深层次作用机理及作用靶点。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)(25 g·L-1TNBS+50%的乙醇)诱导复制UC大鼠模型,并随机分为模型组,溃结灵高、中、低剂量组,阳性药柳氮磺胺吡啶(SASP)组,另取12只SD大鼠设为正常组。流式细胞术检测大鼠外周血中Treg细胞和Th17细胞占总CD4+T细胞百分比及计算Treg/Th17之比。结果模型组Treg/Th17之比,较正常组显著降低(P0.01),溃结灵高、中、低剂量组以及柳氮磺胺吡啶组Treg/Th17之比与模型组比较均有显著升高(P0.05,P0.01)。结论溃结灵对TNBS诱导的实验性溃疡性结肠炎大鼠有明显的治疗作用,其作用机制可能与提高外周血CD4+Foxp3+Treg细胞比例和降低CD4+IL-17A+Th17细胞比例,进而恢复机体Treg/Th17平衡有关。     

千金子醋糊外用对豚鼠体癣模型的影响

目的探讨千金子醋糊外用对豚鼠体癣模型的影响。方法采用须癣毛癣菌接种于豚鼠皮肤创面制作体癣模型,观察千金子醋糊大、小剂量组(0.2 5,0.15 g·m L-1)外用对体癣模型豚鼠体癣症状积分、病灶皮肤逆培养、病灶局部病理变化的影响。结果大、小剂量千金子醋糊外用可显著降低体癣模型豚鼠的体癣症状积分(P0.0 1,P0.0 5);明显提高病灶皮肤逆培养转阴率(P0.0 5);显著改善体癣病灶局部病理变化(P0.0 1)。结论千金子醋糊外用对豚鼠体癣模型有较好的治疗作用。     

鼻敏感颗粒药效学实验研究

目的研究鼻敏感颗粒的抗炎、镇痛及抗过敏作用,为该药的临床运用提供科学依据。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法和大鼠棉球肉芽组织形成法观察鼻敏感颗粒的抗炎作用,采用小鼠热板法观察鼻敏感颗粒的镇痛作用,采用大鼠皮肤被动过敏实验观察鼻敏感颗粒的抗过敏作用。结果鼻敏感颗粒不仅能有效降低小鼠、大鼠急性和慢性炎症的发生(P0.01),具有良好的抗炎效果;还能有效缓解由外界热刺激引起的中枢性疼痛(P0.05,P0.01),具有良好的镇痛作用;并可抑制抗卵白蛋白血清所致的大鼠皮肤蓝斑OD值(P0.05,P0.01),具有明显的抗过敏作用。结论鼻敏感颗粒具有良好的抗炎、镇痛和抗过敏效果。     

姜黄素对血管紧张素II刺激下内皮细胞的保护作用机制研究

目的 从效应T细胞活化的源头Treg/Th17入手,探讨溃结灵调节Th17和Treg的平衡转化机制,揭示溃结灵治疗溃疡性结肠炎（UC）的深层次作用机理及作用靶点。方法 采用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）（25 g?L-1 TNBS+50 %的乙醇）诱导复制UC大鼠模型,并随机分为模型组,溃结灵高、中、低剂量组,阳性药柳氮磺胺吡啶（SASP）组,另取12只SD大鼠设为正常组。流式细胞术检测大鼠外周血中Treg细胞和Th17细胞占总CD4+T细胞百分比及计算Treg/Th17之比。结果 模型组Treg/Th17之比,较正常组显著降低（P＜0.01）,溃结灵高、中、低剂量组以及柳氮磺胺吡啶组Treg/Th17之比与模型组比较均有显著升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论 溃结灵对TNBS诱导的实验性溃疡性结肠炎大鼠有明显的治疗作用,其作用机制可能与提高外周血CD4+ Foxp3+Treg细胞比例和降低CD4+IL-17A+ Th17细胞比例,进而恢复机体Treg/Th17平衡有关。     

狼疮性肾炎不同中医证型免疫荧光病理的差异探讨

[摘要]目的：研究马鞭草经皮透过液对B16黑色素瘤细胞的作用。方法：使用MTT法测定马鞭草经皮透过液对B16细胞增殖的影响;L-Dopa氧化法测定经皮透过液对B16黑色素瘤细胞内酪氨酸酶活性的影响;NaOH裂解法测定经皮透过液对细胞内黑色素含量的影响;DAPI染色法检测细胞凋亡情况。结果：马鞭草经皮透过液对B16黑色素瘤细胞的增殖,酪氨酸酶活性以及细胞内黑色素含量均有抑制性。结论：马鞭草具有美白的功效,对开发成天然美白产品具有良好前景。     

猪苓多糖通过调节HuR介导bcl-2表达诱导T24细胞凋亡

目的 从效应T细胞活化的源头Treg/Th17入手,探讨溃结灵调节Th17和Treg的平衡转化机制,揭示溃结灵治疗溃疡性结肠炎（UC）的深层次作用机理及作用靶点。方法 采用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）（25 g?L-1 TNBS+50 %的乙醇）诱导复制UC大鼠模型,并随机分为模型组,溃结灵高、中、低剂量组,阳性药柳氮磺胺吡啶（SASP）组,另取12只SD大鼠设为正常组。流式细胞术检测大鼠外周血中Treg细胞和Th17细胞占总CD4 T细胞百分比及计算Treg/Th17之比。结果 模型组Treg/Th17之比,较正常组显著降低（P＜0.01）,溃结灵高、中、低剂量组以及柳氮磺胺吡啶组Treg/Th17之比与模型组比较均有显著升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论 溃结灵对TNBS诱导的实验性溃疡性结肠炎大鼠有明显的治疗作用,其作用机制可能与提高外周血CD4 Foxp3 Treg细胞比例和降低CD4 IL-17A Th17细胞比例,进而恢复机体Treg/Th17平衡有关。     

榄香烯联合介入治疗中晚期肝癌患者的近期疗效

目的 观察参苓白术散对高脂饲料建立的非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠脂质代谢及沉默信息调节因子1 （SIRT1）/ 解偶联蛋白2（UCP2）通路的调控机制。方法 选用SPF级SD大鼠32只,随机分为4组：正常组、模型组、参苓白术散高剂量组（ig,30.0g·kg-1·d-1）,参苓白术散低剂量组（ig,10.0g·kg-1·d-1）,每组8只。采用高脂饲料喂养大鼠16周建立NAFLD大鼠模型,各药物干预组大鼠分别灌服参苓白术散的高、低剂量进行干预,16周后取血和肝组织样本,全自动生化仪检测血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）含量;对肝组织进行油红O染色;实时荧光定量RT-PCR仪检测肝组织SIRT1、UCP2 mRNA表达水平;Western blotting检测肝组织SIRT1、UCP2蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠病理证实肝组织脂质蓄积严重,血清TG、TC含量明显升高（P＜0.01）,肝组织SIRT1 mRNA及蛋白表达均显著降低（P＜0.05）,UCP2 mRNA及蛋白表达显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,与模型组比较,参苓白术散高、低剂量组肝组织脂质蓄积明显改善,血清TG、TC含量明显下降（P＜0.05）,肝组织SIRT1 mRNA和蛋白表达均显著上调（P＜0.05,P＜0.01）,UCP2 mRNA和蛋白表达显著降低（P＜0.01）,其中参苓白术散高剂量组较低剂量组效果较好;但二者比较差异无统计学意义。结论 参苓白术散能够改善16周高脂饮食诱导的NAFLD大鼠脂肪代谢紊乱、减轻肝脏脂质蓄积,其作用机制可能与肝细胞内SIRT1/UCP2通路的激活有关。     

乌梅丸治疗糖尿病胃轻瘫寒热错杂型的临床疗效观察

目的研究参附注射液(SF)对前列腺癌PC-3细胞免疫逃逸的影响及可能机制。方法实验设立空白对照组(包括PC-3细胞组、淋巴细胞Jurkat细胞组、PC-3-Jurkat共培养组),参附注射液低、中、高(5,10,20μL·m L~(-1))剂量组。用MTT法检测PC-3细胞活性,Hoechst 33258检测PC-3细胞凋亡,Annexin V/PI染色流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡,同时用流式细胞术检测PC-3细胞表面CD95表达。结果分别与对照组比较,作用24 h后,SF中、高剂量组PC-3细胞凋亡增多(P0.05),SF低、中、高剂量组Jurkat细胞凋亡减少,同时SF低、中、高剂量组PC-3细胞表面CD95阳性表达率增高。结论 SF对PC-3-Jurkat共培养体系中淋巴细胞凋亡有抑制作用,增强PC-3细胞表面CD95表达,SF可能通过此途径阻滞前列腺癌细胞的免疫逃逸,从而发挥抗肿瘤作用。     

茜草对人神经胶质瘤U87细胞的生长及丙酮酸代谢的影响

摘要：目的 考察茜草对人神经胶质瘤U87细胞生长的影响,从抗肿瘤实验研究中常用分子机制及丙酮酸代谢角度探讨作用机理。方法 体外培养U87细胞,以MTT法考察茜草不同提取物对U87细胞的生长抑制作用;人全基因组表达谱芯片初步筛选茜草醇提物抑制U87细胞的可能机制;逆转录PCR验证部分差异表达基因;碘化丙啶（PI）单染法检测细胞周期分布;分光光度法检测细胞内H2O2含量、丙酮酸含量、乳酸含量、Caspase-3活力、丙酮酸激酶（PK）活力、乳酸脱氢酶（LDH）活力、苹果酸脱氢酶（MDH）活力、琥珀酸脱氢酶（SDH）活力;Western blot检测超氧化物歧化酶1（SOD1）、过氧化氢酶（Catalase）、p-Histone H2A.X（Ser139）、p-乳腺癌易感蛋白1（BRCA1）（Ser1524）、人mutS同源蛋白6（MSH6）、增殖细胞核抗原（PCNA）、单羧酸转运蛋白1（MCT1）的蛋白表达。结果 以不同剂量的茜草醇提物、水提物（终浓度为200,100,50,25,12.5 mg?L-1）作用于U87细胞24,48,72 h后,U87细胞生长受到明显抑制;抑制作用随时间、剂量增加而加强;醇提物优于水提物。茜草醇提物50 mg?L-1作用于U87 24 h后,表达谱芯片结果揭示其作用机制与细胞周期、凋亡、氧化—还原平衡、DNA损伤及修复、单羧酸转运等有关。茜草醇提物100,50 mg?L-1处理U87 24 h进行后续实验,逆转录PCR验证MSH6、Catalase、BAX、硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）、PCNA mRNA表达与芯片结果一致,而DNA复制解旋酶/核酸酶2（DNA2） mRNA表达仅100 mg?L-1组与芯片结果相符;茜草醇提物可使U87细胞阻滞在S期、提高Caspase-3活力;还增加了细胞内H2O2含量,而Catalase和SOD1蛋白表达减少;细胞内DNA双链断裂的标志p-Histone H2A.X（Ser139）蛋白表达增加,DNA修复相关的p-BRCA1（Ser1524）、MSH6、PCNA蛋白表达减少;药物处理后,U87细胞内丙酮酸含量减少、乳酸含量增加;PK、LDH、MDH、SDH活力增加、MCT1蛋白表达减少。结论 茜草能有效抑制人神经胶质瘤U87细胞在体外的生长活力,作用呈现一定剂量依赖和时间依赖;提取方法以乙醇提取较好。其作用机制涉及多方面,与细胞周期阻滞、Caspase-3活化、影响氧化—还原平衡、DNA损伤及修复、细胞内丙酮酸代谢有关,是一味具有开发潜力的抗肿瘤中药。